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EQUIPO DE TRABAJO:
Cifuentes Paola
Guamangallo Raúl
Redrobán Karina
Solis Daniel
TEMA:
Diciembre de 2009
Dra. Blanca
Esthela Bravo
1
INDICE
Titulo................................................................................................................................2
Problema............................................................................................................................2
Antecedentes......................................................................................................................3
Justificación.......................................................................................................................4
Marco Teórico...................................................................................................................4
Objetivos:...........................................................................................................................5
6.1 Objetivo General ...................................................................................................5
6.2 Objetivos Específicos ...........................................................................................6
Marco Metodológico.........................................................................................................6
7. 1 Toma de la muestra...............................................................................................6
7.2 Procesamiento de la muestra.................................................................................6
7.2.1 Determinación de pH..................................................................................6
7.2.2 Pre enriquecimiento y Aislamiento.............................................................6
7.2.3 Caracterización Macro y Microscópica de las Colonias.............................7
7.3 Mejoramiento y Diseño de Medio ................................................................7
7.5 Determinación de actividad enzimática. Método p-nitrofenil fosfato...................8
Factibilidad........................................................................................................................8
Bibliografía........................................................................................................................9
11.1 ANEXO I. Método de Determinación de pH ...................................................11
11.2 ANEXO II. Composición del Medio de Cultivo SMRS...................................12
ANEXO III. Método de determinación de actividad Enzimática p-nitro fenil fosfato
.....................................................................................................................................13
10.3.1 Curva Patrón...................................................................................................13
11.3.2 Preparación Buffer fosfato......................................................................13
Titulo
AISLAMIENTO, PRODUCCION Y CONSERVACION DE BACTERIAS FOSFATO
SOLUBILIZADORAS A PARTIR DE SUELO PARA USO AGRICOLA DE LA
PROVINCIA DEL NAPO.
Problema
Los sustratos orgánicos que pueden ser fuente importante de fósforo y que
deben pasar a fuente disponible, pasando de fósforo orgánico a inorgánico,
por que las plantas solo pueden tomarlos como ión ortofosfato, esto se logra
mediante hidrólisis por enzimas fosfatasas ácidas, pues el fósforo soluble es
un nutriente limitado en un ecosistema natural.
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insolubles lo que provoca cambios en el pH del suelo generando
inmovilización química del fosfato por metales pesados.
Antecedentes
Localización de la zona de estudio
Investigaciones
• A través de un buen mecanismo de mineralización de la fracción
orgánica que es muy estable y que corresponde casi al 50 por ciento del
fósforo total, se podría lograr que la misma pueda estar disponible para
la planta, logrando reducir los costos de fertilización y encaminando
hacia una agricultura orgánica. Un buen programa de encalado favorece
este proceso de mineralización. 1
1
http://mail.iniap-ecuador.gov.ec/isis/view_detail.php?
mfn=5857&qtype=query&dbinfo=PADIPR&words=PAPA
2
http://www.papaslatinas.org/v14n1p51.pdf
3
http://www.elcato.org/node/1260
4
http://www.clades.cl/revistas/8/rev8art4.htm
3
• Los microorganismos en asociación con los cultivos son importantes para
el logro de cultivos de alta producción. El mejoramiento en la calidad
microbiológica de los suelos agrícolas debida a la incorporación de
organismos seleccionados para contribuir a la implantación, desarrollo y
producción de cultivos es una alternativa que contribuiría al logro de
mejores cultivos.
Algunos de estos microorganismos han sido eficientemente aislados y
multiplicados, permitiendo así la formulación de inoculantes para su
aplicación en escala de producción.
Entre los microorganismos que son evaluados por su potencial
contribución al desarrollo vegetal se encuentra la bacteria Pseudomonas
sp. conocida principalmente por su capacidad de solubilización del P
mineral y orgánico, si bien también tiene efecto sobre el pH del suelo
cercano a la raíz, aumentando la solubilidad de algunos otros nutrientes.5
Justificación
Niveles óptimos de P en el suelo son obligatorios para mantener la
productividad y promover la eficiente utilización de nitrógeno en los
cultivos. Una deficiencia de fósforo en las plantas puede llevar a
manifestaciones de signos en hojas, pero influye en el crecimiento
haciéndolo lento y retrasando la maduración, posibilidad de obtener un
menor desarrollo radicular y menor floración.
Marco Teórico
IMPORTANCIA DEL FOSFORO
5
http://www.inta.gov.ar/barrow/info/documentos/agricultura/Maiz/informe_inocul_solubiliz.pdf
4
Luego del Nitrógeno, el Fósforo es un fertilizante esencial para el desarrollo
y el crecimiento de las plantas como para microorganismos. Su principal
función fisiológica es intervenir en procesos de acumulación y liberación de
energía durante el metabolismo celular; sin embargo, el fósforo soluble es
un nutriente limitado para producción de biomasa en un ecosistema natural.
Objetivos:
6.1 Objetivo General
5
6.2 Objetivos Específicos
Marco Metodológico
7. 1 Toma de la muestra
7.2.1 Determinación de pH
El pH influye en el proceso del suelo debido a la acción que ejerce sobre los
microorganismos presentes; en los procesos el pH varia de acuerdo al
tiempo y en respuesta a los materiales que son utilizados y a los productos
y compuestos intermedios de la degradación de estos mismos
6
solubilización alrededor de las colonias, este halo se mide en cada colonia
con un criterio de selección según el índice de solubilización.
IS = A/B
Donde:
A = Diámetro total (diámetro de la colonia + diámetro del halo)
B = Diámetro de la colonia
Se escogen las placas que tienen colonias aisladas y además son menos de
40 colonias (entre 10 y 20) para realizar el recuento.
7
7.5 Determinación de actividad enzimática. Método p-
nitrofenil fosfato
Factibilidad
El laboratorio cuenta con todos los reactivos disponibles para la preparación
del medio SMRS. Para la medición del pH del suelo el potenciómetro será
facilitado por el laboratorio de Química Ambiental. Se deberá tomar muy en
cuenta que para la realizar la curva de calibración se necesitara la
disponibilidad de luz eléctrica durante todo el día puesto que se toman
lecturas cada ½ hora, 1 hora y 2 horas hasta completar las 10 horas.
Costos
Medio SMRS
Medio preparado:
8
amonio
Sulfato de 500 27.27 0.3 0.016
magnesio
Extracto de 500 24.71 0.5 0.035
levadura
KCl 500 14.87 0.2 0.005
Sulfato de hierro 500 28.27 0.004 0.00023
Total (g/l) 0.48
En las tablas se muestran los costos del medio SMRS y del medio diseñado;
para el medio SMRS la producción de un litro de este medio de cultivo tiene
un valor de $ 0.58; mientras que el valor del medio diseñado es de $ 0.48.
Lo que demuestra que el medio diseñado es factible frente al medio SMRS.
Lo que es conveniente la utilización del medio diseñado para una
producción a gran escala. La utilización del medio SMRM o de preparación
como fertilizante dependerá de los requerimientos del suelo al cual sería
aplicado.
Bibliografía
Direcciones Electrónicas
1. http://www.slideshare.net/desarrollo_sostenible/como-hacer-y-
usar-el-compost-1444481?src=related_normal&rel=1444478
2. http://www.uteq.edu.ec/u_investigacion/uict/guias/Triptico_Estudio
%20de%20Mercado_Poster.pdf
3. http://www.quito.cipotato.org/PRESENTACIONES/Resumenes/Articu
lo%20cientifico%20de%20Wilian%20Viera%20y%20Gustavo
%20Bernal.doc
9
4. http://ciat-
library.ciat.cgiar.org/Articulos_Ciat/Compostaje_Pescador.pdf
10
1. ANEXOS
pH (pasta saturado)
11
11.2 ANEXO II. Composición del Medio de Cultivo SMRS
COMPONENTE g/L
Glucosa 10
Extracto de
0.5
Levadura
Púrpura de
0.1
Bromocresol
Ca3(PO4)2 5
Agar 15
Medio base: (NH4)2SO4, 0,5; KCl, 0,2; MgSO4.H2O, 0,3; FeSO4.7H2O, 0,004; NaCl, 0,2;
COMPONENTE g/L
Glucosa 10
Extracto de
0.5
Levadura
Cloranfenicol 0.1
Agar 18
Medio base: (NH4)2SO4, 0,5 g; KCl, 0,2 g; MgSO4.H2O, 0,3 g; MnSO4.H2O, 0.004 g;
FeSO4.7H2O, 0,002 g; NaCl, 0,2 g. en 900 ml de agua destilada
NOTA: Ajustar el pH del medio a 7.2 con una solución de NaOH 0.1 N
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ANEXO III. Método de determinación de actividad Enzimática
p-nitro fenil fosfato
C1V1 = C2V2
Donde:
C1 = p – nitro fenol 1umol/ml
V1 = volumen de nitro fenol requerido
C2 = concentración en umol/ml a la que se quiere llegar
V2 = volumen de muestra en cada tubo
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