Flores Herrera O, Riveros Rosas H, Sosa Peinado A,

Vzquez Contreras E (eds). Mensaje Bioqumico, Vol

XXVIII. Depto Bioqumica, Fac Medicina, Universidad
Nacional Autnoma de Mxico. Cd Universitaria, Mxico,
DF, MXICO. (2004).
(http://bq.unam.mx/mensajebioquimico)
(ISSN-0188-137X)

LA ENSEANZA DE LA GLUCLISIS ORIENTADA A LA

INGENIERA METABLICA Y APOYADA CON IMGENES.
Gustavo Viniegra Gonzlez, Sal lvarez Zapiain
Departamento de Biotecnologa
Universidad Autnoma Metropolitana
Iztapalapa, D.F. Mxico

GLYCOLYSIS TEACHING AIMED TO THE METABOLIC ENGINEERING AND

SUPPORTED WITH ILLUSTRATIONS
Abstract.
This brief didactical essay tries to show that is possible to approach the teaching of
metabolic pathways, such as glycolysis, using the practice and teaching of basic skills such as
stoichiometric, thermodynamic and mechanistic analysis of chemical reactions, that later can be
used to tackle more complicated problems related to metabolic engineering. This essay is based
on two fundamental textbooks, written by Voet & Voet [1] and Nielsen et al., [2].
Keywords: glycolysis; metabolic engineering; didactic; teaching; problem based learning

Planteamiento del problema

Desde el punto de vista formal, una va metablica puede ser vista como una red de reacciones,
en las cuales, el Substrato (digamos la glucosa) est conectado con la formacin de diversos
productos llamados Metabolitos (por ejemplo: el glicerol, el etanol y el dixido de carbono) como
se muestra en la Figura 1. Las flechas que conectan al Substrato con los Metabolitos, tienen
compuestos intermediarios, de manera que es posible establecer balances de materia entre
ellos, si se asocia un flujo, (v) con cada flecha. Cuando las reacciones no estn ramificadas y

155

MENSAJE BIOQUMICO, Vol. XXVIII (2004)

estn en serie, los flujos de la cadena de reacciones deben ser iguales para que el sistema se
encuentre en equilibrio dinmico o estado estacionario. Si la red est ramificada, debe haber
balance entre las entradas y salidas de cada nodo. Por ejemplo, si mostramos, en la Figura 1, los
flujos de compuestos carbonados, obtenemos v1 = v2 + v3 + v4. Que no es sino una expresin
algebraica del principio de conservacin de la materia Nada se crea ni se destruye, slo se
transforma descubierto, a fines del siglo XVIII, por Antn Lavoisier.
SUBSTRATO
(GLUCOSA)

v1
v2
INTERMEDIARIO
(FOSFATO DE
GLICERALDEHIDO)

PRODUCTO 3
(GLICEROL)

v3

v4

PRODUCTO 1
(ETANOL)

PRODUCTO 2
(CO2)

Figura 1. Esquema de una va metablica

Para que los alumnos que cursan bioqumica puedan entender y aplicar ese principio a
diversos problemas de control metablico, es preciso que estn familiarizados con los llamados
balances estequiomtricos. Y adems, puedan utilizar las nociones bsicas de la fsico-qumica y
la qumica orgnica. Lamentablemente, la enseanza de la bioqumica se ha orientado, en forma
tradicional, a la memorizacin de una larga serie de compuestos orgnicos con nombres raros y
estructuras que tienen poco que ver con la experiencia cotidiana de los alumnos. Quizs por esa
razn, la bioqumica se ha vuelto una disciplina poco atractiva y difcil de comprender para
muchas generaciones de estudiantes en carreras tan diversas como las reas mdicas, las
ciencias qumicas y la ingeniera ligada a los alimentos o a la biotecnologa.
El propsito de este ensayo es utilizar un texto avanzado de bioqumica de amplia
divulgacin, como el de Voet & Voet [1], como gua. Pero, mostrando de qu forma se pueden
generar preguntas y ejercicios que motiven al estudiante para deducir la estructura de los
compuestos y la naturaleza de las reacciones que son parte de la primera va dilucidada en la
historia de la bioqumica: la gluclisis.

156

Viniegra Gonzlez y lvarez Zapiain

Otro problema didctico muy importante es el entendimiento de la estereo isomera en
las transformaciones bioqumicas. Los textos avanzados como el propio Voet & Voet [1], la
describen sucintamente, pero su comprensin requiere de apoyos visuales mejores que los
dibujos de un libro o los que pueda hacer el profesor en el pizarrn. Afortunadamente, el uso de
programas como el Power Point, permite visualizar imgenes con apariencia tridimensional y,
adems, animadas con movimientos de flechas u objetos manejados por medio de controles
manuales. De esa forma, se puede disponer de imgenes tridimensionales complejas de:
protenas, sitios activos y esquemas pro-quirales de reaccin, que puedan servir al profesor y a
sus ayudantes para apoyar el desarrollo de ejercicios manuales de construccin de modelos
moleculares, para que se entienda la importancia de la especificidad enzimtica en muchas de
las reacciones metablicas estudiadas.
Para lograr este fin, se ha recurrido a desarrollar en Power Point un conjunto de
diapositivas coloridas, con animacin controlada desde la computadora y utilizando imgenes
disponibles a travs de Internet desde el Protein Data Bank ( http://www.rcsb.org/pdb/ ). Esto,
con el propsito expreso de familiarizar al estudiante con ejemplos detallados de uno de los
conceptos fundamentales de la bioqumica, la estrecha interaccin entre la estructura y el
funcionamiento de las protenas con accin cataltica o enzimas.

Desarrollo histrico y mecanstico.

a) Vitalismos vs. Mecanicismo
En vez de plantear en forma lineal la existencia de una va metablica como la gluclisis,
se propone aqu plantear el problema histrico de su descubrimiento. En el Voet & Voet [1] se
destaca la importancia del descubrimiento de la fermentacin alcohlica abitica (sin clulas) que
realiz el cientfico alemn Eduard Buchner, quien pudo separar el citosol o jugo celular de las
clulas rotas, mediante el uso de un mortero provisto con arena fina para romper clulas de
levadura y un filtro de vidrio poroso diseado por l [3]. De esa forma se demostr que no era
necesaria la integridad celular para transformar la glucosa en etanol y dixido de carbono,
siempre que hubiese algunas sales minerales, como fosfatos, en el lquido fermentativo. La
pregunta obvia que se plantearon Buchner y otros investigadores fue la dilucidacin de la cadena
de reacciones que permitan la fermentacin del azcar.
Este descubrimiento, realizado en 1897 por Eduard Buchner (1860-1917) dio lugar a que
en 1907 se le otorgase el premio Nobel por sus investigaciones bioqumicas llevadas a cabo en
el Colegio de Agricultura de la Landwirtschafliche Hochschule de Berln. Segn se indic en el
discurso oficial del conde K.A.H. Mrner (1907), Presidente de la Real Academia de Ciencias de
Suecia, el 10 de diciembre de ese ao. El descubrimiento de Buchner permiti eliminar la idea
que los fenmenos (de los procesos qumicos que tienen lugar en los seres vivos) eran
gobernados por leyes especiales no disponibles a nosotros y controladas por la llamada fuerza
viviente [4]. Es decir, Buchner dio un paso decisivo para construir la explicacin materialista y
mecanicista de la vida, por oposicin a la creencia persistente hasta principios del siglo XX que
la vida segua leyes externas a los mecanismos de las reacciones qumicas de la materia,
corriente que se llamaba vitalismo.

157

MENSAJE BIOQUMICO, Vol. XXVIII (2004)

En las palabras del conde Mrner (1907), E. Buchner, despus de muchos aos de
trabajo, logr mostrar que la fermentacin alcohlica poda producirse por jugos extrados de
clulas de levadura, libres de las clulas vivas. El demostr de manera incontrovertible, que esta
fermentacin era debida a un fermento producido por las levaduras, de las cuales poda ser
separado. La fermentacin no es una expresin directa de la vida de las levaduras; las clulas
pueden ser muertas y destruidas, y los fermentos perduran
Este episodio de la historia puede dar lugar a que los estudiantes busquen en Internet y
en la biblioteca el origen del debate de los vitalistas apoyados por los experimentos de Pasteur
(1854 a 1864) y de los mecanicistas apoyados por Berzelius sobre la naturaleza de las
transformaciones que ocurren en la materia viva. De ah, convendra estimular a los alumnos
para que investigaran el significado de la palabra fermento y enzima que tienen la misma raz
etimolgica, el primero en latn (fermentum) y el segundo del griego () y vienen de
observaciones empricas sobre el uso de fermentos para producir el pan. Por ejemplo: los panes
zimos () son los panes o galletas hechos sin levaduras, es decir, sin fermentos y son
los que usan los judos, con el nombre de matz como penitencia durante la Cuaresma. Por
qu los panes zimos son distintos del pan con levaduras?Qu proceso ocurre durante la
incubacin de la masa con las levaduras?Cules son los substratos y los productos?Por qu
se pueden usar levaduras secas en vez de levaduras frescas?Por qu se pueden usar los
asientos del pulque, (xastle), para hacer pan de muertos, llamado pan de pulque?En qu son
similares la industria de la cerveza de la industria del pan, en cuanto a procesos qumicos?

b)

La reaccin de la aldolasa como pivote didctico de la gluclisis

Una vez planteado el problema de investigacin cules sern las reacciones qumicas
que transforman la glucosa en alcohol y dixido de carbono, viene el problema de cmo
investigarlo. Y de ah conviene destacar el uso de inhibidores metablicos como el yoduro de
acetato (I-CH2-COOH) que da lugar a la acumulacin de la Fructosa 1.6 Bifosfato. (F1,6BF) Esto
explica la observacin de la necesidad de aadir fosfatos al medio de fermentacin para que
ocurra el proceso. Tal resultado permite al profesor el uso de la estequiometra, para establecer
el balance de fosfatos en la primera parte de la gluclisis.
2HPO43- + C6H12O6

2-

O3P- C6H10O6- PO3 2- + 2H2O

El anlisis de las estructuras, tambin facilita imaginar cmo se lleva a cabo el

rompimiento, porque la adicin de NaF al medio de reaccin produce la acumulacin del 3Fosfoglicerato (3FG), el cual, al reducirse (R-COOH
R-CHO + O2) produce el
Gliceraldehido 3 Fosfato (GA3F), mostrado en la parte baja derecha de la Figura 2. Ahora, si se
compara la estructura de la Fructosa 1.6 Bifosfato. (F1,6BF) con la de 3FG, se puede deducir
que para que se forme la F1,6BF se requiere de otra molcula de tres carbonos: la Di-HidroxiAcetona 3-Fosfato (DHA3F) que tambin se muestra en la Figura 2. Para aclarar el mecanismo
de la sntesis (y de ah del rompimiento) de la F1,6BF se requiere utilizar el concepto de
condensacin aldlica.
De aqu se puede inferir que la F1,6BF se divide en dos molculas de tres carbones
cada una. La molcula que falta es la Dihidroxi Acetona 3 Fosfato. (DHA3F). Las dos triosas
pueden dar lugar a dos formas de condensacin aldlica.

158

Viniegra Gonzlez y lvarez Zapiain

O

O
1
2
3
HO

CH2 O

1
O

3
HO

CH

4
..
HC O H
..
5
HC OH
6

CH2 O

CH2 O

Dihidroxiacetona fosfato

CH
H

+
O
P

4
O
C

H
O

O
Fructosa-1,6-bisfosfato

5
HC OH
6

CH2 O

Gliceraldehdo-3-fosfato
O
P

G'= 23.8

kJ
mol

Figura 2. Esquema de la reaccin reversible de rompimiento o de sntesis de Fructosa

1,6-Bifosfato (F1,6BF) (reaccin de la enzima llamada aldolasa).

a) El ataque de un carbanin formado por uno de los dos hidrgenos del carbono 3 de
la DHA3F (Figura 2) que ataca al carbonilo del GA3F. Este ataque puede llevarse a
cabo por arriba o por abajo del plano del GA3F (Figuras 3 y 4). Si se genera un
carbanin con el hidrgeno abajo del plano del papel (lnea punteada en la Figura 3),
se dara lugar a la formacin de los azcares D-Tagatosa o D-Fructosa (Fig. 3).
b) Si el carbanin es formado con el hidrgeno en la DHA3F, arriba del plano del papel
(cua en la Figura 4) se dara lugar a la formacin de los azcares D-Psicosa y DSorbosa mostrados en la Fig. 4.
Sin embargo, en las clulas slo se forma la D-Fructosa. Esto indica que la protena
cataltica llamada aldolasa, que activa la reaccin de rompimiento reversible de la F1,6BF slo
tiene una forma de reaccin de las cuatro posibles mostradas en las Figuras. 3 y 4, e ilustra la
especificidad de las reacciones bioqumicas, frente a la relativa inespecificidad de las reacciones
de la qumica orgnica ordinaria. En este punto se ofrece la oportunidad de explicar:
a) Qu es una molcula quiral?
b) Cmo se establece la nomenclatura Cahn-Ingold-Prelog en R y S estructuras
quirales?
c) Qu significan las estructuras pro-quirales?
d) Cmo se producen los ismeros R o S, segn el ataque de un reactante sobre una
estructura pro-quiral (por ejemplo, DHA3F)?
e) Cmo se construyen modelos fsicos de los azcares, que representen la quiralidad
de cada tomo con substituyentes asimtricos?
f) Cmo se deduce el ataque correcto de la condensacin aldlica de las triosas, para
producir el bifosfato de fructosa?
g) Qu podemos aprender de la reaccin inversa (condensacin aldlica) sobre el
mecanismo de la ruptura de la F1,6BF en las dos triosas correspondientes?
h) Por qu y cmo la enzima regula en forma completa la quiralidad de las molculas
resultantes, en la reaccin inversa de condensacin?
i) Cmo ser el mecanismo de la enzima aldolasa que cataliza el rompimiento de la
F1,6BF en dos triosas?

159

MENSAJE BIOQUMICO, Vol. XXVIII (2004)

1 CH OPO 22
3

2C O
HO C

2
3

3 -

HO
5

CH 4

OH
5

CH2OPO3
6

1
3

HO
4

OH

2OPO3

OH

C H2 OPO3

2-

C H2

OPO3

2-

CH

C2

HC

D -T a g a to sa

2-

..

2-

CH

6
C

OPO3

HO

..

O
C
H 4

CH2

HC

OH

HC

OH

C H2

CH2 1

OPO3

2-

D -F r u c to sa

Figura 3. Ataque del carbanin (RHOCH-) de la DHA3F sobre el carbonilo (R-CO) del GA3F para
generar el racemato D-Tagatosa y D-Fructosa. Ntese que el hidrgeno que ha sido eliminado (-)
en la posicin 3 de la DHA3F est abajo del plano. Slo se muestra el ataque en el cual DHAF se
aproxima por arriba para generar la D-Fructosa, pero se requiere considerar el ataque simtrico
(por abajo) para generar la D-Tagatosa.

1
2CH2 OPO3
2
3 C O

1 CH OPO 22
3
2 C
HO

..

C
3

HC

HO
5

OH

CH 4
HC OH
CH2 OPO3

2-

D-Sorbosa

OH

O
C
H 4

C
5

CH2OPO3
6

2-

1
2

C
3
HC

..

3
C
C2

2-

CH2 1

2-

O
OH

HC OH
5

OH

O
OPO3

CH2 OPO3

HC OH
CH2 OPO3

2-

D-Psicosa

Figura 4. Ataque del carbanin (RHOCH-) del FDHA sobre el carbonilo (R-CO) F3GA para
generar el racemato D-Tagatosa y D-Psicosa. Ntese que el hidrgeno que ha sido eliminado (-)
en la posicin 3 de la DHA est arriba del plano. Slo se muestra el ataque en el cual FDHA se
aproxima por arriba para generar la D-Psicosa, pero se requiere considerar el ataque por abajo del
plano del carbonilo para generar la D-Sorbosa.

160

Viniegra Gonzlez y lvarez Zapiain

La ventaja de haber iniciado el estudio de la gluclisis por la condensacin aldlica de
la F1,6BF, radica en que difcilmente el alumno olvidar este paso de reaccin y por lo tanto
le ser fcil imaginar y recordar el conjunto de reacciones hacia la glucosa y hacia el
piruvato, sin tener que recurrir a un ejercicio de memorizacin mecnica.
Por ejemplo: entre la Glucosa y la F1,6BF hay slo tres reacciones, una de fosforilacin,
catalizada por la enzima hexocinasa, pues no es especfica para la Glucosa y puede fosforilar a
otras hexosas (Figura 5). Otra de isomerizacin para formar la Fructosa 6 Fosfato (F6F)
mostrada en la Figura 6. Y, la segunda fosforilacin, para formar la F1,6BF (Figura 7).
H

Adenosina

O P

O
O

CH2

O
OH
OH

OH

2+

O CH2

OH

O
Mg

:O
..

OH

Glucosa

OH

ADP

+H

OH
OH

Glucosa-6-fosfato
G' = 16.7

kJ
mol

G' = 1.7

kJ
mol

Figura 5. Reaccin catalizada por la hexocinasa.

O
O

P
O

O
O CH2

2+

Mg

OH
OH

H 2C

CH2 OH
O
HO

O
HO

OH
OH

OH
OH

Glucosa-6-fosfato

Fructosa-6-fosfato

Figura 6. Reaccin catalizada por la Glucosa-fructosa isomerasa.

O
O

H2 C

CH2 OH
O
HO

HO

OH

ATP

ADP
2+

Mg

O
O

O
O

H2 C

O
HO

OH
OH

OH
Fructosa-6-fosfato

CH2 O
O
HO

Fructosa-1,6-bisfosfato

G' = 14.2

kJ
mol

Figura 7. Fosforilacin para formar la Fructosa 1,6-Bifosfato (F 1.6 BF). Reaccin catalizada por la
Fosfofructocinasa I.

161

MENSAJE BIOQUMICO, Vol. XXVIII (2004)

De paso, se tendr que recurrir a mostrar la importancia fundamental de los
tautomerismos ceto enlicos que son claves para entender la estabilidad de los compuestos
intermediarios. El ejercicio de construir las cuatro hexosas posibles de la condensacin aldlica
de las triosas, combinado con el dato de que slo se produce en la clula a la fructosa, da
material para que se hagan ejercicios con modelos moleculares rsticos construidos con
pelotitas de estireno y palillos. De forma que los alumnos entiendan en forma dinmica y
participativa, la diferencia entre un ataque pro-R y otro pro-S,

c) La hexosa y la relacin entre la estructura de la enzima y su funcionamiento

Aqu cabe indicar la importancia de los cambios conformacionales de las cinasas, que
tienen el sitio activo protegido del acceso del agua, de forma que el ataque de los fosforilos del
ATP es preferencial sobre el ataque de los OH- del agua. De otra forma, se favorecera la
hidrlisis del ATP. Para hacerlo conviene utilizar las ligas informticas con el Protein Data Bank,
mostrando la opcin que permite ilustrar la fijacin de la glucosa a la enzima.
ATP + H2O

ADP + H3PO4

Esta propiedad se puede ejemplificar mediante el estudio de las conformaciones de la

hexocinasa libre de substrato y la que tiene el substrato. En el segundo caso, la enzima se ha
replegado como si fuese una almeja bivalva que se cierra cuando entran los dos substratos: la
Glucosa y el ATP y se abre cuando se libera el ADP y la Glucosa 6 Fosfato Lo cual, permite
ilustrar el nivel de entendimiento y de relacin entre estructura, reaccin y mecanismos de la
bioqumica contempornea.
Aqu la interaccin entre el material visual de Power Point con el ejercicio manual de los
modelos moleculares provee al estudiante una alternativa de aprendizaje que es muy superior a
la enseanza tradicional. Es muy recomendable que la exposicin terica de esta reaccin clave,
sea seguida de al menos una sesin prctica con el apoyo de un asistente o del profesor.
Muchas de las frustraciones de los estudiantes al estudiar bioqumica vienen de la dificultad de
imaginar estructuras complejas a partir de diagramas de libro.
En resumen, este es un ejemplo del proceso integrativo y constructivista para imaginar y
descubrir la naturaleza de la gluclisis que se entiende mucho mejor mediante ejemplos y
problemas que mediante proposiciones abstractas o deducciones lgicas lineales.

d) La fosforilacin a nivel del sustrato

La razn fisiolgica de ser de la gluclisis es desde luego, la formacin del ATP, a pesar
de que se han gastado 2 ATP para producir una molcula de F1,6BF. Para recuperar esta
prdida y superarla se requiere repetir 4 veces el proceso de formacin del ATP, a partir del
ADP. Y para ello las enzimas han evolucionado un complejo sistema de reacciones sucesivas
que podramos llamar el mtodo de un clavo saca a otro clavo.
En este proceso, es esencial comprender la regla fundamental de acoplamiento
termodinmico de procesos o reacciones entre s. Esta regla est sustentada en la idea de que,

162

Viniegra Gonzlez y lvarez Zapiain

en cualquier proceso espontneo, el cambio de energa libre de Gibbs (energa disponible para
hace trabajo) debe ser negativo. As, cuando hay N procesos acoplados, cada uno con un valor

Gi (i = 1, 2, , N) que puede ser negativo o positivo, la regla de composicin indica que la

suma de todos ellos, debe ser negativa. Por ejemplo: si la sntesis del ATP tiene una energa,

Go1 = 30.5 kJ/mol, para acoplar esta sntesis con la hidrlisis de otro compuesto fosforilado con
Go2 < 0, se requiere que la suma de las dos energas libres sea negativa
GoT = Go1 + Go2 < 0
Esto implica que Go2 < - 30.5 kj/mol. Y esto simplifica mucho la seleccin de candidatos
para acoplarse con la sntesis de ATP, pues basta consultar una tabla en la que estn
consignadas los valores de Go, como aparece en la Tabla I, para que podamos seleccionar al
candidato adecuado. En la nomenclatura qumica, el smbolo Go, significa el valor calculado en
el equilibrio y el G, a secas, bajo condiciones que pueden estar fuera del equilibrio. Esto puede
ocurrir en procesos dinmicos como los celulares en los cuales, los flujos bioqumicos producen
desviaciones prolongadas de las condiciones del equilibrio, debido a balances entre la
produccin y consumo de cada uno de los elementos de una cadena metablica. Pero para el fin
educativo de este escrito, por el momento podemos conformarnos con las condiciones en
equilibrio.
Por ejemplo: en la Figura 8, se muestra de manera esquemtica que el proceso de
clavar y desclavar compuestos nucleoflicos ocurre en un sitio activo que tiene un grupo RSH, es decir, en una cistena. El grupo R-SH puede ionizarse como si fuese un R-OH, generando
el nuclefilo (amante de ncleos) R-S-. Este nuclefilo puede atacar a un tomo de carbono, (un
carbonilo) R-C=O-H, que tiene una carga parcialmente positiva por el efecto electro negativo del
oxgeno. En esa figura, se indica que el carbonilo corresponde al aldehdo de la triosa. Adems,
el sitio activo de la enzima, en una posicin cercana a la cistena activa, tiene afinidad por la
coenzima NAD+ (forma oxidada) que atraer un hidrgeno del hemiacetal formado sobre la
cistena (vase Figura 8) Como el hemi-acetal es inestable, se forma un carbonilo y se libera otro
hidrgeno que sale al medio como protn. Pero da la casualidad, lograda por la evolucin
biolgica, que el NADH tiene menos afinidad por el sitio activo que el NAD+, y se presenta un
recambio que libera una coenzima reducida (NADH) al medio de reaccin, dejando el clavo de
NAD+ adentro. El otro clavo dentro del sitio, que es la triosa, debe ser eliminado por otro ataque
nucleoflico. Esa vez ser el H2PO4-, que atacar al carbonilo unido a la cistena (Figura 8) Esta
ltima reaccin regenera la configuracin original de una enzima con NAD+ y la cistena con RSH libre, lista para un nuevo ataque por otra molcula de un carbonilo.
Dicha reaccin ha permitido formar un compuesto de alta energa, el 1,3BFG (1,3 Bi
Fosfo Glicerato) cuya Go = -49.4 kJ/mol, permite acoplar la hidrlisis del fosfato en posicin 1,
con la reaccin de formacin de ATP (Go = +30.5 kJ/mol), segn se indica en la Figura 9 y en la
Tabla I. El resultado neto es una Go = -18.9 kJ/mol, la cual, siendo negativa hace factible el
acoplamiento de estas dos reacciones. Pero, examinando, la Tabla I, se puede concluir que sera
imposible acoplar la hidrlisis del 3-Fosfoglicerato (Go = -9.2 kJ/mol) con la formacin de ATP.
Si se contina el examen de la Tabla I, se puede comprobar que la hidrlisis del cido
Fosfoenolpirvico tiene un Go = -61.9 kJ/mol, de forma que esta reaccin se podra acoplar con

163

MENSAJE BIOQUMICO, Vol. XXVIII (2004)

la sntesis de ATP, lo cual explica que la gluclisis haya evolucionado para formar esta triosa a
partir del Fosfato-3-de Glicerato. Esto facilita entender las ltimas reacciones de la Gluclisis.
Primero, isomerizacin del 3-Fosfo Glicerato en el 2-Fosfo Glicerato, mostrado en la Figura 10.
Seguido de la formacin del Fosfoenolpiruvato mostrado en la Figura 11. Al final, la hidrlisis de
este ltimo compuesto se acopla con la sntesis del ATP y la formacin del cido pirvico (Figura
12).

CH2OPO3

2-

CH OH
O

CH2OPO3

HO

2-

CH2OPO3

CH OH

NAD

O
CH2OPO3

O
..

Cys

C O
+
NAD
S

NADH

NADH+H

NAD

C
HO

Pi

NADH+H

NAD

CH
CH2OPO3

HO

2-

2-

C O

G'= 6.3

CH

kJ
mol

2-

CH2OPO3
1,3-bisfosfoglicerato

Gliceraldehdo-3fosfato

CH OH

C O

Cys

Cys

CH2OPO3

2-

CH OH

CH OH

..
C OH
..

2-

Reaccin Global

Figura 8. Oxidacin y fosforilacin del Gliceraldehido 3 Fosfato (GA3F) para convertirlo en el

Bifosfato del cido Glicrico (BAG). Se destaca la participacin del grupo SH de la cistena
(Cys) del sitio activo (ver texto).

O
O
O
HO

Mg

CH
CH2OPO3

2-

O
:O

2+

HO

P O

P
O

CH
CH2OPO3

2-

Adenosina

2+

Mg
O
O

P
O

O
O

P O

Adenosina

G'= 7.5

Figura 9. Formacin del ATP a partir del ADP y del 1,3 Bi Fosfo Glicerato (BFG).

164

kJ
mol

Viniegra Gonzlez y lvarez Zapiain

El resultado neto de este proceso puede expresarse por la siguiente ecuacin qumica
C6H12O6 + 2 H3PO4 + 2 ADP + 2 NAD+

2 CH3COCOOH + 2 ATP + 2 NADH + 2H+

Tabla I .Energas libres de Gibbs standard (Go) de la hidrlisis de fosfatos orgnicos de

inters biolgico (Segn Voet & Voet, 2004)
Compuesto
Go (kJ/mol)
Fosfo-enol-piruvato
-61.9
1,3-Bifosfo-glicerato
-49.4
Fosfato de acetilo
-43.1
Fosfato de creatina
-43.1
Pirofosfato (PPi)
-33.5
ATP
AMP + PPi
-32.2
ATP
ADP + Pi
-30.5
Fosfato-1-de Glucosilo
-20.9
Fosfato-6-de Fructosilo
-13.8
Fosfato-6-de Glucosilo
-13.8
Fosfato-3-de Glicerilo
-9.2
En negritas, se indican los fosfatos orgnicos que pueden acoplarse a la sntesis de ATP.

HC
CH2

OH

P
O

3-Fosfoglicerato

Mg

2+

HC
O

O
O
O

CH2

OH
2-Fosfoglicerato

G '= 4.4

kJ
mol

Figura 10. Isomerizacin entre el 3-Fosfo Glicerato (3FG) y el 2-Fosfo Glicerato (2FG).

El factor limitante de este proceso es la cantidad de NAD disponible, porque su

concentracin es muy baja dentro de las clulas y su biosntesis, costosa. En cambio, los
fosfatos inorgnicos se pueden encontrar con facilidad en muchos medios dnde se desarrollan
los seres vivos. Por lo tanto, es necesario encontrar un proceso adicional que permita la
regeneracin del NAD, mediante el consumo del NADH, lo cual puede dar lugar a distintos tipos
de las llamadas fermentaciones.

165

MENSAJE BIOQUMICO, Vol. XXVIII (2004)

O

C
O

..
O
..

OPO3

..
O
..

2-

Mg

2+

OH

OPO3

Mg

OPO3

2-

H2 O

C
H

2+

2-

OPO3

2-

H2O

G ' = 7.5

C
H

OH

kJ
mol

Fosfoenolpiruvato

2-Fosfoglicerato

Reaccin global

Figura 11. Reaccin catalizada por la enzima enolasa que transforma el 2-Fosfo Glicerato en
el Fosfoenolpiruvato.

2+

2+

O
C

Mg

C
CH2

:O

Mg

ATP

P O

O
O

Adenosina
K

O
C

CH2

C
CH3

G ' = 31.4

kJ
mol

Figura 12. Formacin del ATP a partir del Fosfoenolpiruvato y el ADP.

e) La fermentacin lctica y el destino del NADH

La fermentacin ms sencilla es la fermentacin lctica que sigue la siguiente
estequiometra
CH3(CO)COOH + NADH + H+

CH3(HCOH)COOH + NAD

La Figura 13 ilustra esta reaccin, indicando que la parte reactiva del NADH (esquina
superior izquierda de la Figura 13) es la nicotinamida reducida, que tiene dos hidrgenos en la
posicin 4, opuesta al substituyente, R, de la citada figura. De esta manera, se puede tener un

166

Viniegra Gonzlez y lvarez Zapiain

proceso cclico, pues al sumar la ecuacin de formacin del piruvato con la de formacin del
lactato, se cancela la acumulacin del NADH.
2 CH3(CO)COOH + 2 ATP + 2 NADH + 2H+
C6H12O6 + 2H3PO4 + 2 ADP + 2 NAD
+
2CH3(HCOH)COOH + 2NAD
2CH3(CO)COOH + 2 NADH + 2 H
______________________________________________________________________
2CH3(HCOH)COOH + 2 ATP
C6H12O6 + 2H3PO4 + 2 ADP
Estos dos procesos, permiten reusar indefinidamente al NAD+, mientras haya consumo
de substrato (C6H12O6) y suministro de fosfatos.
Las Figuras 13 y 14, muestran que el ataque del NADH sobre el piruvato puede ser de
dos maneras alternativas: la forma pro R, ilustrada por el ataque por arriba del plano del piruvato
y la forma pro S, por debajo de dicho plano (no mostrada en la Fig. 13). En el primer caso se
forma el L- lactato. El caso opuesto da lugar al D-lactato.

(pro-R)
R

(pro-S)
O

OH

OH

NAD +

OH

Figura 13, Ilustracin del mecanismo de transferencia de hidrgenos en la fermentacin

lctica. Se indica la existencia de dos tomos proquirales (pro-R y pro-S) de hidrgeno en la
molcula del NADH. Uno arriba del plano y el otro debajo. La molcula del piruvato mostrada
en la esquina superior derecha de la figura, puede ser atacada por arriba o por debajo del
plano, dando lugar a las forma L- D- lactato, que corresponden a las formas S o R.

167

MENSAJE BIOQUMICO, Vol. XXVIII (2004)

NADHR+H+

O
2 C

l-lactato

C
HO H
1

CH3
3

O
C

C
CH3

1
HO

3
CH3

C
2 C
O

d-lactato
O

NADHS+H

Figura 14. Ilustracin de la formacin de los ismeros quirales del lactato.

En el cuerpo humano slo se metaboliza el L-lactato, de forma que al ingerirse un

racemato (L-D) se puede producir acidosis por la acumulacin del D-lactato. Algunos
microorganismos pueden producir selectivamente una de esas formas y por eso es posible
producir en la industria, las formas l (R) o d (S) por separado.

f)

La fermentacin alcohlica y las fermentaciones de Neuberg

Otro esquema metablico para el reciclaje del NAD, es la fermentacin alcohlica que
permite la oxidacin del acetaldehdo (CH3CHO) el cual se produce por la descarboxilacin
del piruvato.
CH3(CO)COOH

CH3CHO + CO2

A su vez, el acetaldehdo se puede reducir para producir etanol, consumiendo NADH +

+

H.
CH3CHO + NADH + H+

CH3CH2OH + NAD

Este proceso ocurre principalmente en las clulas de las levaduras y es la forma

industrial para producir alcohol.
Sin embargo, existe una forma alternativa para consumir el NADH y es la produccin del
glicerol, mediante la reduccin de la Hidroxi Acetona 3 Fosfato.
CH2OH(CO)CH2OPO32- + NADH + H+

CH2OH(HCOH)CH2OPO32- + NAD

Si se consulta la Tabla I, se ver que la reaccin de hidrlisis del Fosfato de Glicerilo,

tiene un Go = -9.2 kJ/mol. Lo cual, impedira acoplar esta reaccin con la sntesis del ATP.

168

Viniegra Gonzlez y lvarez Zapiain

Por lo tanto, el consumo del NADH para formar glicerol da lugar a la prdida neta de
ATP, que ha sido consumido para la fosforilacin de las hexosas. A diferencia del consumo de
NADH para formar etanol, que da lugar a una ganancia de ATP. Como, de acuerdo con la
segunda ley de la termodinmica, es preciso disipar energa para mantener activo cualquier
proceso, se puede deducir que el rendimiento mximo de glicerol debe ser inferior al 50% del
azcar suministrado porque, con un rendimiento del 50% sera equivalente a una mquina de
movimiento perpetuo, que trabajase sin disipacin de energa.
Una consecuencia de estos balances es la reorientacin de la fermentacin de las
levaduras segn se cambie el valor del pH del medio. Esto fue descubierto por Neuberg antes de
1920 y se explic como el efecto del pH sobre las deshidrogenasas: alcohlica que trabaja mejor
a pH 4 y del Fosfato de Glicerilo, que trabaja mejor a pH neutro. La Figura 15 muestra que al
elevarse el pH, desciende la produccin de etanol y asciende la de glicerol, en forma
completamente recproca.
Este fue quizs el primer ejemplo de manipulacin deliberada del metabolismo celular
para producir un producto industrial, el glicerol. Su uso como materia prima para la fabricacin de
la nitro-glicerina, justific en Alemania de principios del siglo XX, el costo de separacin del
etanol y de otros productos como el cido actico. Neuberg logr mayores rendimientos de
glicerol al aadir sulfito de sodio que atrapa al acetaldehdo e impide la produccin del etanol. De
esa forma, se forz an ms la produccin de glicerol que nunca lleg a ms del 30%.
Se podra decir que la ingeniera metablica se inici con las fermentaciones de
Neuberg, usando un inhibidor qumico (el sulfito de sodio) del proceso natural de produccin del
alcohol por las levaduras. Desde este temprano caso de manipulacin intencionada del
metabolismo celular, se utiliz el balance de materia y los conceptos fundamentales de la
termodinmica para estimar los rendimientos mximos y para explicar la naturaleza qumica del
proceso. Por lo tanto es un excelente ejemplo para justificar el uso de dichos balances en el
desarrollo de nuevos procesos bioqumicos manipulados por el ser humano.

Conclusiones
Se propone analizar la secuencia aparentemente interrumpida y catica del
razonamiento previo en funcin del propsito didctico de ensear la gluclisis de una manera
ms dinmica y atractiva que el mtodo tradicional, de tipo lineal y secuencial.
En este ensayo se ha procurado utilizar el procedimiento llamado constructivista, que
consiste en utilizar ejemplos e ilustraciones para deducir principios. Por ejemplo: se utiliz la
evidencia del uso de inhibidores (cido yodo actico y floruros) que bloquean la fermentacin y
facilitan el aislamiento de intermediarios. Y a partir de la estructura de esos intermediarios, de
dedujo la estructura qumica de los precursores (las hexosas como precursoras de las triosas).
A su vez, se utilizaron los mecanismos de la qumica orgnica, en este caso la
condensacin aldlica, para ilustrar la importancia de la estereo qumica y la lgica del
mecanismo de reaccin de la enzima clave en el rompimiento: la aldolasa, cuyo nombre proviene
precisamente de considerar la inversa de la condensacin aldlica.

169

MENSAJE BIOQUMICO, Vol. XXVIII (2004)

EFECTO DEL pH SOBRE LOS

PRODUCTOS DE LAS LEVADURAS
EtOH

Biomasa

Glicerol

Polinmica (EtOH)

Polinmica (Biomasa)

Polinmica (Glicerol)

0.250

0.050
0.045
0.040
0.035

0.150

0.030
0.025

0.100

0.020
0.015

0.050

% Redox (Glicerol)

% Redox (EtOH)

0.200

0.010
0.005

0.000

0.000
0

pH

Figura 15. Efecto del pH sobre el patrn de produccin de etanol y glicerol en un cultivo
de Saccharomyces cerevisiae. Las curvas punteadas fueron ajustadas por medio de un
ajuste cuadrtico de los puntos experimentales. Datos de Neish y Blackwood [5].

Este inicio heterodoxo facilita mucho la comprensin del esquema de la gluclisis. Tiene
una mitad que se traduce en la transformacin de las hexosas y otra mitad de las triosas.
Adems, facilita el entendimiento de la importancia de la isomerizacin de la glucosa en fructosa,
pues de esa forma se facilita el mecanismo de rompimiento aldlico. Cosa que sera muy difcil
con el carbonilo en el extremo de la hexosa.

170

Viniegra Gonzlez y lvarez Zapiain

El concepto de acoplamiento energtico de las reacciones tambin facilita el
entendimiento de los compuestos que dan lugar a la sntesis del ATP, pues la consulta con las
tablas de energa libre de Gibbs permite ver la necesidad de tener ciertos compuestos de alta
energa como los donadores de fosfato para sintetizar el ATP. De otra forma resulta
incomprensible la madeja de conversiones de las triosas entre s.
Finalmente, el balance redox, centrado en el par NAD, NADH, resulta un excelente
pretexto para introducir el concepto de ingeniera metablica, como la manipulacin deliberada
del metabolismo celular, por medios artificiales. En el caso de las fermentaciones de Neuberg,
mediante el uso de inhibidores de la formacin de etanol.
Un repaso sinttico (no mostrado en este texto) mediante la enumeracin de las
reacciones secuenciales de la va glucoltica resultar en la integracin del conocimiento y un
refuerzo a la memoria y a la coherencia del proceso aqu ilustrado.
El uso de imgenes de tipo tridimensional ya ha sido utilizado por los autores de los
libros modernos como el de Voet & Voet (2004) El cual, se suministra con un CD-ROM que
permite bajar imgenes de Internet acerca de las conformaciones de las protenas. Esto puede
ser ligado, sin mucha dificultad, con programas convencionales como el de Power Point y de esa
manera se reforzar el entendimiento entre estructura y funcin de las enzimas. Una discusin
detallada de esos casos queda fuera del espacio restringido de este ensayo didctico pero ya ha
sido preparado para los apuntes que pronto sern puestos en la direccin de Internet de nuestro
curso impartido en la UAM.

Referencias bsicas
1.
2.
3.
4.

5.

rd
Voet, D., Voet, J., (2004) Biochemistry, 3 Edition, John Wiley & Sons Inc. Hoboken, N.J. USA
nd
Nielsen, J., Villadsen, J. and Lidn G. (2003) Bioreaction Engineering Principles.2 Edition. Kluwer
Academic/Plenum Publishers, New York, USA.
Buchner, E. (1907) Cell free fermentation Nobel Lectures, Chemistry 1901-1921, Elsevier
Publishing Co. Amsterdam, Netherlands (1966). (http://www.nobel.se/cemistry/laureates).
Mrner KAH (1907)The Nobel Prize in Chemistry 1907 Nobel Lectures, Chemistry 1901-1921,
Elsevier
Publishing
Co.
Amsterdam,
Netherlands
(1966).
(http://www.nobel.se/cemistry/laureates).
Neish AC, Blackwood AC (1951) Dissimilation of glucose by yeast at poised hydrogen ion
concentrations Canad. J. Tech. 29(2): 123-129.

LA ENSEANZA DE LA GLUCLISIS ORIENTADA A LA INGENIERA METABLICA Y

APOYADA CON IMGENES.
Resumen.
En este breve ensayo didctico se pretende mostrar que es posible orientar la enseanza de una
va metablica muy conocida, como es la gluclisis, usando como motivacin el desarrollo de
habilidades y destrezas elementales, que despus sern usadas para atacar problemas ms
complicados como la ingeniera metablica. Como gua documental para este ensayo se han
utilizado dos textos fundamentales. El de Voet y Voet [1] y el de Nielsen et al., [2].

171

MENSAJE BIOQUMICO, Vol. XXVIII (2004)

Palabras clave: gluclisis; ingeniera metablica; didctica; enseanza; aprendizaje basado en
problemas; constructivismo.

Semblanza del Dr. Gustavo Viniegra Gonzlez.

Naci en Mxico en 1940. Obtuvo el grado de Mdico
Cirujano en la Universidad nacional Autnoma de Mxico en 1965.
Posteriormente se gradu en la Maestra en Ciencias (Bioqumica)
del CINVESTAV en 1967 y de Doctor en Biofsica en la Universidad
de California, San Francisco, en 1971. Actualmente es Profesor
Titular C del Departamento de Biotecnologa, de la Universidad
Autnoma Metropolitana, Unidad Iztapalapa (UAMI), donde fue
miembro de la Junta Directiva entre 1982 y 1990. Es miembro
Emrito del Sistema Nacional de Investigadores. Su rea de
especializacin
involucra
la
microbiologa
industrial;
las
fermentaciones de substratos slidos por hongos filamentosos; la
produccin de enzimas por cultivos de Aspergillus nger; el
aprovechamiento de los residuos agrcolas y agroindustriales; el desarrollo de modelos
matemticos del crecimiento de hongos filamentosos en substratos slidos; las estrategias para
desarrollar tecnologas agroindustriales; y la asesora a empresas agro-industriales para mejoras
de procesos de transformacin y de conservacin del medio ambiente. Ha publicado 63 artculos
internacionales; 14 artculos internacionales de revisin; 26 artculos nacionales; 20 artculos
nacionales de revisin y 4 patentes, con lo que ha recogido ms de 300 citas bibliogrficas
internacionales. Bajo su direccin se han obtenido 6 tesis de Licenciatura, 15 de Maestra y 7 de
Doctorado. Ha recibido diversos premios como: el Premio Nacional al Mrito en Ciencia y
Tecnologa de los Alimentos (1985); Profesor Distinguido de la UAM (1996); Doctor honoris
causa, Universit Aix-en-Provence, Marsella, Francia; Caballero de la Orden de las Palmas
Acadmicas otorgado por el Ministerio de Educacin, Francia; Ha pertenecido a diferentes
organizaciones: Miembro de la Academia Mexicana de Ciencias (1985); fue miembro Fundador
de la Sociedad Mexicana de Biotecnologa y Bioingeniera AC (1981) donde fue Vicepresidente
(1983-1985) y Presidente (1985-1987); Ha sido miembro del comit cientfico del International
Life Sciences Institute (ILSI) de Mxico, A.C (Biotecnologa); asesor del Centro de Investigacin
y Desarrollo del Grupo Resistol S. A (mejoras a procesos de un consorcio azucarero); asesor de
la Cmara Nacional de la Industria Azucarera (negociacin sobre los aranceles de los azcares
fructosados); asesor de la Subdireccin de Investigacin del Instituto Mexicano del Petrleo;
Directeur de Rcherche 2me degre, Institut Franais de Recherche Scientifique pour le
Dvelopement en Cooperation (ORSTOM, ahora IRD) Montpellier, France (Veranos, 1989 y
1993); Dictaminador del rea de Ingeniera y Tecnologa del Sistema Nacional de
Investigaciones (1996-1998). Adems, organiz en el Instituto de Investigaciones Biomdicas de
la UNAM entre 1972 y 1976, el primer grupo de investigacin biotecnolgica con desarrollos
aplicados a la industria; contribuy en la UAMI al arranque y organizacin del Departamento de
Biotecnologa (1976-1978), donde se han desarrollado los siguientes programas acadmicos: el
diseo de las carreras de Ingeniera Bioqumica e Ingeniera de los Alimentos (1977-1982), las
mejoras del Tronco General de Asignaturas de la Divisin de Ciencias Biolgicas y de la Salud
(1993-1995), el programa de Posgrado en Biotecnologa (1992) y el programa del Doctorado en
Ciencias Biolgicas (1993-1994). Organiz y fue el primer Jefe del rea de Microbiologa (19761984) en el Departamento de Biotecnologa de la UAM-I. Ha participado, en cooperacin con la
organizacin francesa llamada ORSTOM (ahora Institut de Rcherche pour le Dvlopement =
IRD), en la formacin de uno de los grupos de investigacin de la fermentacin en medio slido
ms citados en la bibliografa especializada.

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