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  • Transferencia de Material Genético II

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    En las bacterias, a pesar de ser organismos unicelulares, también es necesario regular la expresión de los genes adaptándola a las necesidades ambientales. Es un principio de economía celular el que la expresión de los genes este regulada según las circunstancias celulares. Un buen ejemplo de esta situación en bacterias es la regulación de las enzimas implicadas en el metabolismo de los azúcares. Las bacterias pueden emplear para obtener energía distintas fuentes de carbono, como la glucosa, lactosa, galactosa, maltosa, ramnosa y xilosa. Existen enzimas capaces de introducir cada uno de estos azúcares en la bacteria y enzimas capaces de romperlos para obtener energía. Lógicamente, sería un despilfarro energético producir simultáneamente todos los enzimas necesarios para metabolizar los diferentes azúcares mencionados. Por consiguiente, sería mucho más económico para la célula producir solamente las enzimas necesarias en cada momento, es decir, si en el medio en el que vive la bacteria la principal fuente de carbono es la lactosa, solamente se expresarían los genes necesarios para metabolizar la lactosa, mientras que los otros genes no se expresarían. Por tanto, es esencial que exista un mecanismo de regulación de la expresión génica, de manera que los genes se expresen cuando sea necesario. La regulación de la producción de proteínas (síntesis de proteínas) considerando el proceso en su conjunto, puede llevarse a cabo en tres niveles: Replicación Transcripción Traducción. De los tres niveles de regulación, uno de los mejor conocidos actualmente es la regulación durante la transcripción. Aunque la regulación de la transcripción en eucariontes es más compleja que en bacterias, muchos de sus aspectos son similares. Por tanto, comenzaremos por el estudio de la regulación de la transcripción en bacterias.

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    En las bacterias, a pesar de ser organismos unicelulares, también es necesario regular la expresión de los genes adaptándola a las necesidades ambientales. Es un principio de economía celular el que la expresión de los genes este regulada según las circunstancias celulares. Un buen ejemplo de esta situación en bacterias es la regulación de las enzimas implicadas en el metabolismo de los azúcares. Las bacterias pueden emplear para obtener energía distintas fuentes de carbono, como la glucosa, lactosa, galactosa, maltosa, ramnosa y xilosa. Existen enzimas capaces de introducir cada uno de estos azúcares en la bacteria y enzimas capaces de romperlos para obtener energía. Lógicamente, sería un despilfarro energético producir simultáneamente todos los enzimas necesarios para metabolizar los diferentes azúcares mencionados. Por consiguiente, sería mucho más económico para la célula producir solamente las enzimas necesarias en cada momento, es decir, si en el medio en el que vive la bacteria la principal fuente de carbono es la lactosa, solamente se expresarían los genes necesarios para metabolizar la lactosa, mientras que los otros genes no se expresarían. Por tanto, es esencial que exista un mecanismo de regulación de la expresión génica, de manera que los genes se expresen cuando sea necesario. La regulación de la producción de proteínas (síntesis de proteínas) considerando el proceso en su conjunto, puede llevarse a cabo en tres niveles: Replicación Transcripción Traducción. De los tres niveles de regulación, uno de los mejor conocidos actualmente es la regulación durante la transcripción. Aunque la regulación de la transcripción en eucariontes es más compleja que en bacterias, muchos de sus aspectos son similares. Por tanto, comenzaremos por el estudio de la regulación de la transcripción en bacterias.

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    TRANSFERENCIA DE MATERIAL GENTICO II: ENSAYOS DE RESTRICCIN DE PLSMIDO

    1. Qu parte de la molcula de DNA le confiere la carga negativa?


    Los grupos fosfato presentes en los nucletidos del DNA
    2. Cul es el papel de cada componente del amortiguador de carga, en particular de los dos
    colorantes que contiene?
    El amortiguador contiene 3 componentes:

    Azul de bromofenol, cylen xyanol, naranja de acridina, etc): Es un colorante


    azulado que permite la visualizacin del frente de corrida, para poder seguir la
    migracin del DNA con fragmentos aproximadamente de 300 bp
    Sucrosa o glicerol, lo cual da peso a la muestra para que el DNA se precipite al
    fondo de los pozos de siembra

    3. Por qu el bromuro de etidio es un reactivo mutagnico?


    Es un compuesto que crea un potencial efecto carcinognico, teratognico, con capacidad
    de cambiar el marco de lectura de los genes, causando mutaciones genticas y
    recombinaciones cromosmicas
    4. A que se le denomina topoismeros?
    Se le denomina topoisomeros las distintas formas fsicas que puede adoptar el DNA
    5. En la prctica se pudieron observar topoismeros?
    Si pudieron observarse topoisomeros en carril de DNA sin enzimas de restriccin o
    (endonucleasas)
    6. Qu peso molecular tienen los topoismeros?
    Su peso molecular o tmao se miden en pares de bases, dependiendo de su conformacin.
    Sin restriccin su tamao aparenta ser mayor a 6.2 kb ya que se encuentra sin estar
    empacado, mientras que con una conformacin sper enrollada su tamao aparente de
    6.2 kb es menor en el gel de corrida de electroforesis y se observa con un mayor
    corrimiento.

    7. Qu tipo de extremos producen las enzimas utilizadas en la prctica, romos o cohesivos?


    Fueron cohesivos ya que estas dos enzimas utilizadas en la prctica (EcoR 1 y Ndel)
    realizan este tipo de enlaces no simtricos de DNA.

    8. Cuntos fragmentos de DNA o restriccin se obtuvieron al utilizar las dos enzimas NdeI y
    BamH1?
    Se obtuvieron 2 fragmentos debido a que el plsmido es circular y al actuar las 2 enzimas
    de restriccin tenemos estos 2 cortes
    9. Cuntos fragmentos se obtuvieron al utilizar slo una de las enzimas de restriccin?
    Por qu?
    Dos fragmentos, pues cada enzima de restriccin realiza solo un corte al plsmido
    10. Cul fue el peso molecular del DNA liberado y del plsmido o vector?
    No se aisl nada de plsmido
    11. Cules son las aplicaciones de rutina de las enzimas de restriccin?

    Desarrollo de DNA recombinante y biotecnologa


    Mecanismos de regulacin y expresin gnica
    Mapeo y cartografa de genes
    Diagnstico de enfermedades genticas con cambio en la secuencia del DNA
    Desarrollo de protenas recombinantes

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