Antignes de surface en hmatologie

S Delaire
L Boumsell
R s u m . Les antignes de surface permettent de caractriser les cellules
hmatopotiques en termes dappartenance une ligne ou de stade de diffrenciation et
dactivation. Ils sont rpartis en classes de diffrenciation ou CD. Nous verrons comment la
connaissance des antignes de surface dune cellule aide ltablissement du diagnostic
dune pathologie aussi bien maligne que non maligne. Ainsi, lheure actuelle, la
dtermination des antignes de surface participe au diagnostic des leucmies aigus ou
chroniques et des lymphomes ou mylomes : les antignes utiliss sont soit des antignes
permettant de dnir la ligne hmatopotique implique, soit des antignes plus
spciques permettant dtablir un stade de diffrenciation, ou parfois caractristiques dune
pathologie. Les antignes de surface sont galement trs utiliss pour tenter didentier la
population de cellules souches hmatopotiques la plus primitive. Le premier antigne
utilis dans ce but a t CD34, mais nous verrons que de nombreux autres antignes ont t
identis qui permettent de prciser notablement le phnotype des cellules souches
hmatopotiques. Pour le moment, ces antignes de surface ne sont pas utiliss en routine
pour la purication de progniteurs CD34
+
partir du sang priphrique mais, terme, ils
pourraient tre intgrs dans les protocoles de purication.
Introduction
Les cellules hmatopotiques sont trs bien caractrises pour les marqueurs
quelles portent leur membrane : ces antignes de surface permettent de
dnir lappartenance dune cellule une ligne hmatopotique (ligne
rythrocytaire, monocytaire, lymphocytaire...) et galement son stade de
diffrenciation et dactivation. Une nomenclature permettant de classer ces
nombreux antignes a t adopte : elle consiste regrouper, dans une mme
CD, tous les anticorps monoclonaux reconnaissant une mme molcule ; par
extension, la molcule elle-mme est appele CDn. ce jour, plus de 150 CD
sont dnies
[33]
.
Nous ne prtendons pas, dans cette revue, tudier lintrt de chaque antigne
de surface dans tous les domaines de lhmatologie, mais nous souhaitons
prsenter une vision globale de lintrt que prsente la connaissance des
antignes de surface. Nous ntudierons pas les rcepteurs spciques aux
antignes, quil sagisse du rcepteur de la cellule Tou des immunoglobulines
de surface pour la cellule B
[23, 40, 52]
, nous avons galement exclu les
rcepteurs des cellules NK (natural killer)
[35]
. Nous verrons comment les
antignes de surface peuvent aider au diagnostic de diffrentes pathologies
hmatologiques en nous intressant de faon plus approfondie aux
pathologies malignes. Nous aborderons la valeur pronostique de lexpression
de certains antignes ainsi que leur utilisation dans le cadre de la dtection de
la maladie rsiduelle aprs traitement. Nous nous intresserons galement
lintrt croissant pour les antignes de surface dans un but de caractrisation
et dobtention de cellules souches hmatopotiques. Celles-ci peuvent tre
utilises dans le cadre de greffes (auto- ou allogniques) devant aboutir la
reconstitution de toutes les populations hmatopotiques chez des patients
traits par chimiothrapie, mais galement dans le cadre de la thrapie
gnique.
Stphanie Delaire : Doctorante en immunologie.
Laurence Boumsell : Directeur de recherches DR1 lInserm, U448.
Facult de mdecine de Crteil, 8, rue du Gnral-Sarrail, 94010 Crteil cedex, France.
Toute rfrence cet article doit porter la mention : Delaire S et Boumsell L. Antignes de
surface en hmatologie. Encycl Md Chir (Elsevier, Paris), Hmatologie, 13-000-M-83,
1998, 6 p.
Utilisation des antignes de surface pour
le diagnostic des pathologies hmatologiques
Cas des pathologies malignes
Utilisation dans le diagnostic
La dtermination du phnotype des cellules fait maintenant partie part
entire des tapes dans ltablissement dun diagnostic
[28, 32]
. Celui-ci rsulte
donc de la convergence de diffrentes approches qui font aussi bien appel
des analyses morphologiques ou cytogntiques qu la biologie molculaire
ou ltude du phnotype. Lexpression des antignes de surface est le plus
frquemment dtermine par la technique de cytomtrie en ux, dont nous ne
reprenons pas les principes.
Les antignes de surface permettent demble dtablir lappartenance dune
cellule une ligne hmatopotique. Ainsi, dans le cas des leucmies aigus
mylodes (LAM), les cellules expriment au moins un marqueur mylode :
CD13, CD33 ou CD11b. Les diffrents stades sont dnis par des critres
morphologiques et prsentent des antignes de surface associs divers
stades de diffrenciation (tableau I) : on observe ainsi des variations dans le
taux dexpression des marqueurs mylodes CD13, CD14, CD33 ou CD34
ainsi quune diminution de lintensit de lexpression du marqueur
dimmaturit CD117 (cf chapitre consacr aux cellules souches
hmatopotiques). Le stade de leucmie aigu mgacaryoblastique (M7) est
diagnostiqu en grande partie grce lexpression de CD61 et/ou de CD41
car aucune des techniques de routine nest discriminante. Dans le cas des
leucmies aigus lymphoblastiques (LAL), les antignes de surface
permettent de dterminer si les cellules sont de la ligne lymphocytaire T ou
B et au sein de la ligne B, de dterminer le stade de diffrenciation
[48]
. Une
difficult est due au fait que peu dantignes de surface sont restreints une
ligne ; toutefois, les antignes CD3 et CD22 ou CD79 et sont clairement
discriminants entre les lignes T et B. On parvient, en utilisant un panel
danticorps monoclonaux (AcM), dnir les LAL T pour leur expression
des antignes CD3, CD7, CD5 et/ou CD2 et les LAL B qui portent CD19 et
CD22. La distinction entre les diffrents stades de diffrenciation B repose
essentiellement sur la prsence dune immunoglobuline (Ig) de surface au
13-000-M-83
E
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,
P
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r
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s
stade B, dune Ig cytosolique au stade pr-B et sur labsence dIg au stade
pro-B. Ainsi, 60 % des LAL sont de phnotype pro-B et les lymphoblastes
expriment alors les antignes de surface HLA-DR et CD19 dans quasiment
tous les cas. Cest un antigne non spcique de lignage CD10 qui a t lun
des premiers utiliss pour la sous-classication des LAL. Son expression tait
considre comme un marqueur des LALcommunes : il fut identi en 1975
comme un antigne de surface de 100 kDa associ aux tumeurs
[22]
et dabord
baptis CALLA (common acute lymphoblastic leukemia antigen). Plus
rcemment, il est apparu que CD10 tait exprim sur les prcurseurs
lymphodes T et B, sur les blastes B et sur les granulocytes ainsi que sur des
cellules non hmatopotiques. Il sagit de lendopeptidase neutre associe
la membrane qui clive des peptides du ct aminoterminal de rsidus
hydrophobes
[59]
: son rle dans la diffrenciation et la prolifration cellulaires
nest pas clair.
En utilisant les antignes de surface, il apparat quil existe un certain nombre
de leucmies aigus dites biphnotypiques, cest--dire dont les blastes
coexpriment des antignes associs plus dun lignage
[27, 32]
. Ainsi, on trouve
des cas de LALde lenfant qui coexpriment des marqueurs mylodes (CD13,
CD33) et des cas de LAM de lenfant qui coexpriment des marqueurs
lymphodes (CD2, CD19, CD20). Dans certaines LAL, les blastes
coexpriment des marqueurs T et B (CD2
+
/CD19
+
ou CD7
+
/CD19
+
). Des
corrlations sont apparues entre la translocation t(8 ; 21) et la coexpression
de CD19 avec CD15 ou CD34, entre t(9 ; 22) et la coexpression de CD19 avec
CD34 et enn entre t(15 ; 17) et la coexpression de CD2 avec des antignes
de surface mylodes
[51]
. Ces translocations nimpliquent pas les rgions
chromosomiques codant les antignes impliqus : la relation entre ces
translocations et lexpression de certains marqueurs nest donc pas tablie.
Dans le cadre des leucmies chroniques, la dtermination des antignes de
surface est de peu dutilit pour les leucmies mylodes chroniques dont le
stade de diffrenciation est trs caractristique et dont le diagnostic est
conrm par la prsence du chromosome Philadelphie rsultant de la
translocation t(9 ; 22). Pour la leucmie lymphode chronique (LLC), qui
reprsente la plus commune des leucmies adultes en Europe de lOuest et en
Amrique du Nord, le phnotype de surface peut tre utile. Les antignes de
surface de la ligne lymphocytaire B sont typiquement exprims comme
CD19, CD20, lIg de surface (IgMou IgD), CD43, CD79avec dans tous les
cas une coexpression de CD5 (tableau II)
[32, 46, 56]
. Lantigne CD5 a t
demble identi comme marqueur commun aux lymphocytes T et aux
lymphocytes B de LLC
[8]
puis il a t identi sur une sous-population de
cellules Bnormales dans le sang de cordon ftal, la rate et les ganglions, ainsi
qu la priphrie des centres germinaux de ganglions adultes
[2]
. Lantigne
CD23 est galement exprim dans les LLC ce qui permet de les distinguer
des lymphomes cellules du manteau qui sont CD23
-
. Lantigne CD10 est
absent, CD20 et CD22 sont faibles et CD11c et CD25 sont gnralement
exprims mais faiblement. Dans les leucmies prolymphocytaires B,
gnralement plus agressives, les cellules prsentent une expression dIg de
surface plus importante et sont le plus souvent CD5
-
avec une expression plus
forte de CD22, ce qui permet de les diffrencier.
Dans lidentication des lymphomes, limmunophnotype apporte une aide
prcieuse, mais l encore, cest lexpression de tout un panel dantignes de
surface qui doit tre prise en compte. Ainsi, les lymphomes cellules du
manteau (qui reprsentent 2 8 % des lymphomes) sont des noplasmes
clonaux de cellules B exprimant les antignes de surface classiques
[20]
:
CD19, CD20, CD22 et CD43. Le rarrangement clonal touche plus
frquemment la chane k que la chane j et ces cellules expriment
relativement peu ou pas dIg leur surface ; de plus, elles sont CD5
+
, CD23
-
et CD10
-
(tableau II). Elles sont donc faciles distinguer des cellules de LLC.
Le prol dexpression des Ig de surface, associ la prsence de CD5 et
labsence de CD23, permet la distinction avec les lymphomes folliculaires.
Ces derniers sont galement caractriss par une expansion clonale B, mais
les cellules prsentent dans ce cas beaucoup dIg leur surface et nexpriment
en revanche ni CD5, ni CD43, ni CD11c. Ce dernier critre permet de les
distinguer des cellules des lymphomes marginaux. Dans ce cas, les cellules
prsentent le phnotype de cellules B de zone marginale postfolliculaire :
elles sont CD5
-
, CD10
-
, CD23
-
et le plus souvent CD11c
+
mais nexpriment
pas CD25. Ces cellules pourraient tre des cellules mmoires, ce qui
expliquerait leur association avec des maladies auto-immunes : on observe
en effet chez beaucoup de patients atteints de ce type de lymphome des
antcdents de maladie auto-immune (du type thyrodite de Hashimoto) ou
de gastrite Helicobacter.
Les leucmies tricholeucocytes sont peu communes mais trs bien
caractrises
[51]
. Les cellules tumorales expriment les antignes de surface B :
CD19, CD20, CD22, CD79 ainsi quune Ig de surface avec une restriction
clonale au niveau de la chane lgre. Ces cellules sont souvent CD21
-
, elles
expriment fortement CD11c et CD22 et plus faiblement CD25 (tableau II).
Ces caractristiques indiquent un stade de diffrenciation B plus tardif que
dans le cas des LLC. Lantigne mucosal CD103 constitue le marqueur le plus
net pour distinguer cette leucmie des autres leucmies B
[43, 69]
. Il sagit dun
antigne exprim par les lymphocytes Tintrapithliaux ainsi que par certains
lymphocytes activs ; il appartient la famille des intgrines
[39]
, dont il
constitue la chane E qui forme en gnral un htrodimre avec la chane
7 et dont le ligand est la E-cadhrine, exprime par les cellules pithliales
ce qui suggre un rle possible de CD103 dans la domiciliation et la rtention
des lymphocytes dans les pithliums.
Lutilisation des antignes de surface prsente plus de difficults dans les
autres pathologies malignes. Les mylomes multiples et autres dsordres des
plasmocytes sont difficiles valuer en cytomtrie en ux du fait de la
difficult disoler la sous-population maligne. La plupart des antignes de
surface de la ligne B sont perdus, sauf CD38 qui est fortement exprim ; de
plus, il existe des marqueurs caractristiques du stade plasmocytaire comme
lantigne CD138 (ou syndecan-1)
[70]
dont lutilisation savre extrmement
utile dans le diagnostic. Dans le cas des dsordres priphriques T
(tableau III), les cellules prsentent un phnotype de cellules Tpriphriques
bien distinct du phnotype thymique observ dans les LAL T ou les
lymphomes lymphoblastiques et se caractrisant essentiellement par la
coexpression de CD3 avec lun des marqueurs CD4 ou CD8,
exclusivement
[32]
. Dans le cas de la leucmie Tadulte associe HTLV-1, les
cellules prsentent un phnotype de cellules T actives avec une forte
expression de HLA-DR, de CD25 et galement une surexpression de CD62-L
(ou L-slectine). Dans le cas de la maladie de Hodgkin, la dtermination des
antignes de surface est difficile compte tenu du fait que la grande majorit
des cellules sont des cellules inammatoires non malignes. Toutefois, une
analyse phnotypique des cellules de Reed-Sternberg a permis de rapporter la
prsence de marqueurs T dans environ 50 % des cas alors que les marqueurs
B sont moins communs
[11, 26]
. Ces cellules expriment de faon importante
lantigne CD30 (qui a t identi la premire fois leur surface) : il sagit
dun membre de la superfamille duTNFR(rcepteur duTNF : tumor necrosis
factor) dont le ligand est CD153. Linteraction CD30-CD153 costimule la
prolifration des lymphocytes T. Dautre part, les cellules de Reed-Sternberg
surexpriment CD80 (ligand de CD28) et CD40
[17, 24]
.
Valeur pronostique des antignes de surface et utilisation
dans la dtection de la maladie rsiduelle
La valeur pronostique de lexpression de certains antignes de surface nest
pas clairement tablie ; toutefois quelques corrlations ont pu tre faites.
Tableau I. Antignes de surface dans les diffrents stades de leucmie mylode
aigu.
Antigne
desurface
Classication FAB
M0 M2 M3 M4 M5 M6 M7
CD13 +/- + + + +/- - +/-
CD14 - - - +/- +/- - -
CD15 - +/- -/+ +/- nd + -
CD19 - +/- nd nd nd nd nd
CD33 +/- +/- + + + + +/-
CD34 +/- +/- - -/+ nd nd nd
CD61 - - - - - - +
CD117 +/- +/- -/+ +/- -/+ nd nd
Les diffrentes stades sont indiqus conformment la classication FAB (franco-amricano-britannique). Pour
chaque antigne de surface, lexpression est marque : + : antigne exprim ; - : antigne non exprim ; +/- : antigne
exprim dans plus de 50 % des cas ; -/+ : antigne exprim dans moins de 50 % des cas. La notation nd indique soit
quon manque de donnes pour cet antigne, soit que son expression ne prsente pas de pertinence pour le
diagnostic.
Tableau II. Antignes de surface des lymphopathies B malignes.
Patho-
logie
Antignes de surface
Pan B sIg CD5 CD22 CD23 CD10 CD11c CD25 CD103
LLC + + + + ++ - -/+ -/+ -
LCM + ++ + + -/+ -/+ -/+ -/+ -
LPL + ++ - ++ -/+ + -/+ -/+ -
LF + +/++ - + -/+ -/+ - -/+ -
LT + +/++ - ++ - + ++ ++ +
LLC : leucmie lymphode chronique ; LCM : lymphome cellules du manteau ; LPL : leucmie prolymphocytes ;
LF : lymphome folliculaire ; LT : leucmie tricholeucocytes ; Pan B : antignes CD19 et CD20 ; sIg : immunoglobuline
de surface. Pour chaque antigne de surface, lexpression est marque : + : antigne exprim ; - : antigne non
exprim ; +/- : antigne exprim dans plus de 50 % des cas ; -/+ : antigne exprim dans moins de 50 % des cas.
ANTIGNES DE SURFACE EN HMATOLOGIE Hmatologie 13-000-M-83
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Ainsi, dans le cas des leucmies lymphoblastiques pr-B, un mauvais
pronostic est corrl labsence de CD10 et de CD34 ou de CD10 et de CD24
ou bien encore lexpression de CD13 et CD33
[28]
. Dans le cas des LAL de
lenfant, labsence de CD10 parat tre associe un pronostic dfavorable :
il semble en fait que cela soit li au fait que la frquence dune hyperplodie
avec plus de 50 chromosomes (qui constitue clairement un pronostic
favorable) soit plus grande dans les cas de LAL CD10
+
. Au contraire, la
pseudoplodie est prsente chez la majorit des patients prsentant une LAL
pr-B CD10
- [10]
. Dans un des sous-types de LAM (M2 selon la classication
FAB), lexpression de CD19 ainsi que celle, bien que moins frquente, de
CD56 sont associes avec la translocation t(8 ; 21), marqueur de pronostic
favorable chez ladulte
[45]
. En ce qui concerne la valeur pronostique de
lexpression dantignes lymphocytaires dans le cadre de LAM de lenfant,
la situation est trs controverse : pour certains, lexpression dantignes
comme CD2 et CD19 associs la ligne lymphocytaire prsage dun
pronostic plus favorable
[5]
alors que pour dautres, elle ne semble avoir
aucune valeur de cet ordre
[60]
. De faon gnrale, la valeur pronostique des
donnes immunophnotypiques dans le cadre des LAM est controverse.
Pour la dtection de la maladie rsiduelle, les mthodes conventionnelles
comme la morphologie cellulaire, la cytogntique ou lanalyse par southern
blot ont des sensibilits comprises entre 1 et 5 %. La dtection des
rarrangements par la technique de PCR(polymerase chain reaction) permet
datteindre une beaucoup plus grande sensibilit mais son utilisation nest pas
toujours possible. La dtermination dantignes de surface par des techniques
de double marquage (ou plus) en immunouorescence est un procd qui
permet de dtecter jusqu une cellule noplasique pour 10
3
10
4
cellules
normales. Cette mthode repose sur lutilisation dune combinaison
dantignes de surface la plus spcique et discriminante possible des blastes
leucmiques. Dans le cas des LLC
[54]
, on peut ainsi utiliser lexpression de
CD5 avec la monoclonalit de la chane lgre de lIg de surface pour obtenir
une sensibilit de 5 %et quand on associe lun des marqueurs CD5, CD20 ou
CD19 avec un marquage des deux chanes lgres j et k, on atteint une
sensibilit infrieure 1 %. Dans le cas des LAL de ligne B, les cellules
expriment CD19, CD10 et, pour une petite proportion de cas, CD34 : toute
combinaison de ces marqueurs associe avec un marqueur aberrant comme
CD13, CD33 ou CD15 permet didentier spciquement les cellules de LAL
parmi des cellules de moelle osseuse normale ou des cellules de sang
priphrique. On peut noter que, demble, lutilisation du caractre
quantitatif de la cytomtrie en ux permet de distinguer les prcurseurs B
normaux des prcurseurs B leucmiques ; en effet, les prcurseurs normaux
prsentent moins de molcules de CD10 et CD19 que les blastes de LAL
[19]
.
Pour les LAM, plusieurs combinaisons permettent galement une
identication sensible des blastes dans la plupart des cas
[14, 63]
. Les cellules
des leucmies tricholeucocytes sont facilement identiables, avec une
sensibilit infrieure 1 %, parmi les cellules circulantes en utilisant des
doubles marquages avec CD103 et CD22 ou CD19 et CD11c ou CD25
[53]
.
Lutilisation des antignes de surface pour la dtection de la maladie
rsiduelle constitue donc un outil intressant souvent associ la PCR, qui
permet de rvler les rarrangements caractristiques dans le cas des
prolifrations clonales.
Cas des pathologies non malignes
Beaucoup de ces pathologies ont des caractristiques tellement claires que le
diagnostic ne ncessite pas un recours la dtermination dantignes de
surface. Toutefois dans certains cas, cette approche a permis dlucider les
caractristiques dune pathologie. Lhmoglobinurie nocturne paroxystique
est une pathologie rare dont le tableau clinique tait connu depuis plusieurs
dcennies
[36]
. Cette affection rsulte dune sensibilit excessive des globules
rouges laction du complment et on a pu montrer que celle-ci est lie
labsence des protines qui rgulent ngativement le complment la surface
des rythrocytes, cest--dire CD55 et CD59
[55]
. Cest le dcit en ces deux
antignes de surface qui permet de diagnostiquer de faon claire la maladie.
Le point commun entre CD55 et CD59 est que ce sont deux protines
membranaires ancres dans la bicouche lipidique par lintermdiaire dun
pied glycophosphatidylinositol (GPI)
[64]
, dont la synthse est affecte chez
les patients atteints dhmoglobinurie nocturne paroxystique. Cette
dcience rsulte de la mutation du gne GPI-A
[42]
localis sur le
chromosome X. Diffrentes mutations ont t identies, qui se traduisent
diffremment en termes dexpression de CD59 et qui semblent intervenir
un stade relativement prcoce de la diffrenciation hmatopotique pour
engendrer un clone qui prend le dessus sur tous les autres clones. Ce clone
donne naissance toutes les lignes hmatopotiques, et on trouve ainsi chez
les malades des lymphocytes circulants prsentant un dcit en molcules
ancres par un GPI (comme CD59).
Nous avons donc vu que la dtermination des antignes de surface ports par
les cellules permet de prciser le diagnostic dans le cadre de diffrentes
pathologies. Dans le cadre des pathologies malignes, cette dtermination est
particulirement utile et permet dans certains cas de dterminer lquivalent
sain de la cellule tumorale. Elle peut galement savrer intressante pour
la dtection de la maladie rsiduelle.
Utilisation des antignes de surface
dans la caractrisation et lobtention
de cellules souches hmatopotiques
Lexistence de cellules souches hmatopotiques est connue depuis les
annes 1950. Lintrt pour elles a pris un essor particulier dans le contexte
des thrapies par greffe de cellules souches allogniques puis maintenant
autologues
[67]
. La caractrisation des cellules souches hmatopotiques nest
toutefois pas encore parfaite puisquon ne parvient pas obtenir la cellule
vritablement souche, totipotente et capable dautorenouvellement.
Nanmoins, un certain nombre de marqueurs sont connus comme tant des
marqueurs de cellules pluripotentes et capables dautorenouvellement donc
capables dassurer une reconstitution hmatologique correcte chez des
patients (tableau IV). Le premier anticorps monoclonal ayant permis
didentier et de purier les cellules souches humaines de moelle osseuse a
t MY-10, obtenu par immunisation avec une ligne mylode immature,
KG-1a
[12]
. Cet anticorps fut class lors du III
e
Atelier sur les antignes de
diffrenciation des leucocytes humains avec BI-3C5 dans le cluster CD34
[66]
.
Depuis, de nombreux anticorps dirigs contre cette molcule ont t obtenus
et ont permis de conrmer que CD34 tait un antigne de surface des cellules
souches hmatopotiques immatures mais galement des cellules dj
engages dans une ligne. Lantigne CD34 est aussi prsent sur les cellules
endothliales des petits vaisseaux et sur les broblastes embryonnaires
[34]
.
Les cellules CD34
+
de moelle osseuse ne reprsentent que 1,5 %des cellules
mononucles de la moelle et dans le sang, elles ne sont que 0,5 %. La
population exprimant fortement CD34 contient la plus grande part des
cellules prognitrices hmatopotiques immatures alors que les cellules dj
engages dans une ligne expriment moins intensment lantigne CD34 qui
est une protine transmembranaire de type I de 115 kDa fortement glycosyle,
et qui ne montre aucune homologie avec dautres protines connues mais
quelques parents sont notables. Ainsi, la rgion aminoterminale fortement
glycosyle de CD34 est similaire celle de CD43, une sialoglycoprotine
spcique des cellules hmatopotiques. Lantigne CD43 parat jouer un
rle la fois dans ladhsion et dans lactivation cellulaire bien que sa
fonction prcise soit inconnue ; CD34 prsente galement de faibles
similarits avec dautres molcules dadhsion dont CD62L et CD62E. De
faon intressante, certaines tudes rvlent que la L-slectine (CD62L) ou
une protine proche pourrait tre un ligand de CD34
[7]
ce qui pourrait
expliquer la localisation des cellules souches CD34
+
dans la moelle suite un
phnomne de homing impliquant dans un premier temps une interaction
entre CD34 et CD62Lpuis une forte interaction mettant en jeu des intgrines
au niveau du stroma ; CD34 serait alors implique dans ladhsion des
cellules hmatopotiques au stroma de la moelle osseuse. En ce qui concerne
le rle de CD34 dans la diffrenciation, les choses sont encore peu claires : il
semble toutefois que la diminution de lexpression de CD34 soit ncessaire
pour que la diffrenciation ait lieu.
Mais CD34 nest pas un antigne exclusivement associ aux cellules souches
hmatopotiques les plus immatures ; aussi, la caractrisation de ces
dernires a t amliore en identiant dautres antignes exprims leur
Tableau III. Antignes de surface des dsordres lymphoprolifratifs T.
Pathologie
Antignes de surface
CD2 CD3 CD5 CD7 CD4 CD8 CD56 CD57 DR
LPL-T + + + + +/- - - - -
LGL + + -/+ -/+ -/+ + +/- + -
MF/S + + + - + - - - -
LT + + + - + - - - ++
LLC-T + + + + + - - - -
LPL-T : leucmie prolymphocytaire T ; LGL : leucmie grands lymphocytes granuleux ; MF/S : mycosis
fongode/syndrome de Szary ; LT : leucmie T adulte ; LLC-T : leucmie lymphode chronique T ; DR : HLA-DR. Pour
chaque antigne de surface, lexpression est marque : + : antigne exprim ; - : antigne non exprim ; +/- : antigne
exprim dans plus de 50 % des cas ; -/+ : antigne exprim dans moins de 50 % des cas.
ANTIGNES DE SURFACE EN HMATOLOGIE Hmatologie 13-000-M-83
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surface. Une quipe amricaine a identi une population candidate pour tre
celle des cellules souches hmatopotiques humaines parmi des cellules de
moelle osseuse portant lantigne CD34 mais aucun des marqueurs de ligne :
ces cellules sont alors appeles Lin
- [6]
. Dautre part, les cellules exprimant le
marqueur Thy-1 avec CD34 montraient une plus grande frquence
dinitiation de cocultures long terme que les cellules sans Thy-1. Enn, il
apparaissait que cette population CD34
+
Lin- Thy-1
+
tait capable de
simplanter dans une souris SCID humanise et de gnrer des cellules de la
ligne mylode et lymphode. Un peu plus tard, une autre quipe
[15]
a
clairement tabli que Thy-1 tait exprim sur les cellules souches
hmatopotiques humaines. Ltude portait sur les cellules hmatopotiques
du foie, de la moelle osseuse et du sang de cordon ftaux : les cellules CD34
+
Thy-1
+
apparaissent comme les plus primitives du point de vue phnotypique
et fonctionnel. Lexpression de Thy-1 est relativement faible sur les cellules
CD34 et elle diminue avec lengagement dans une voie de diffrenciation.
Depuis ces travaux, Thy-1 a t rang dans la classe de diffrenciation
CD90
[13]
, qui est une protine ancre dans la membrane par un GPI. Une autre
molcule de ce type, CD109
[61]
est galement slectivement exprime par la
sous-population immature des cellules CD34
+
(tableau IV)
[62]
.
Deux autres marqueurs sont galement uitliss pour dnir la population de
cellules souches hmatopotiques : il sagit de CD38 et HLA-DR. Lantigne
de surface CD38 nest pas exprim par les cellules souches hmatopotiques.
Un enrichissement notable en progniteurs pluripotents est obtenu en
liminant des cellules CD34
+
les cellules qui coexpriment CD38
[65]
. Et
plusieurs articles tablissent clairement que cest seulement parmi la
population CD34
+
CD38
-
que se trouvent les cellules totipotentes. En ce qui
concerne lantigne de surface HLA-DR, la situation est moins claire : dans
le sang de cordon ftal, dans le foie ftal et dans la moelle osseuse ftale, les
cellules coexprimant HLA-DR avec CD34 sont enrichies en cellules
souches
[31]
. En revanche, dans la moelle adulte, les progniteurs primitifs
nexpriment pas HLA-DR. Parmi les cellules de la moelle osseuse adulte, peu
nombreuses sont celles qui sont doublement ngatives pour CD38 et HLA-
DR. On peut donc dnir deux sous-populations diffrentes : lune
CD34
+
CD38
-
et lautre CD34
+
HLA-DR
-
, toutes deux sont enrichies en
cellules souches hmatopotiques avec toutefois un plus grand
enrichissement dans la sous-population CD34
+
CD38
- [57]
.
Lutilisation des mmes marqueurs permet galement de caractriser les
cellules souches hmatopotiques mobilises dans le sang priphrique aprs
administration de facteurs de croissance. Il est ainsi apparu quil existe dans
le sang priphrique une population de cellules CD34
+
CD90
+
Lin
-
qui
montrent une activit hmatopotique long terme aussi bien in vitro quin
vivo et ayant la capacit de gnrer des cellules mylodes et des lymphocytes
T et B
[44]
.
Un autre marqueur permettant de discriminer les cellules souches
hmatopotiques est le marqueur c-kit ou CD117
[4]
. Il sagit dun rcepteur
membranaire possdant une activit tyrosine kinase intrinsque cod par le
proto-oncogne c-kit. Il est exprim sur les cellules souches de la moelle
osseuse
[3, 9]
mais il semble que les progniteurs les plus primitifs nexpriment
CD117 que faiblement leur surface (tableau IV)
[25]
. La population qui
montre une forte expression de lantigne c-kit est majoritairement celle des
cellules prognitrices engages dans la ligne granulomonocytaire ; puis, au
l de la maturation, lexpression de c-kit diminue et disparat. Le ligand de
c-kit est connu : il sagit du SCF (stem cell factor), facteur de croissance des
cellules souches. Il semble que la transduction du signal conscutive
linteraction de CD117 avec son ligand joue un rle important dans les stades
prcoces de lhmatopose. En ralit, toute une srie dantignes de surface
appartenant la mme famille de rcepteurs tyrosine kinase que CD117 ont
t identis : il sagit de FLK-2/FLT-3, du produit du proto-oncogne c-fms,
de TIE qui semblent tous jouer un rle important dans la prolifration
cellulaire. Tous ces antignes paraissent exprims sur les cellules souches
hmatopotiques. Ainsi, il a t montr quune grande partie de ces cellules
sont CD34
+
CD38
-
TIE
+ ;
TIE possde dans son domaine extracellulaire des
domaines du type immunoglobuline et des domaines dhomologie avec le
facteur de croissance pidermique (EGF) ; cest une protine dont
lexpression est aussi observe sur les cellules B. Le ligand de TIEest inconnu
et son rle dans lhmatopose prcoce nest pas tabli
[29]
. Le facteur de
croissance hmatopotique FLT-3 joue un rle cl dans la croissance des
cellules souches hmatopotiques. Le rcepteur de FLT-3 est un rcepteur
tyrosine kinase qui est exprim sur les cellules hmatopotiques normales et
malignes. Lhomologue murin de ce rcepteur, FLK-2, a clairement t
identi comme un rcepteur tyrosine kinase spcique des populations
souches hmatopotiques enrichies en progniteurs
[37]
. Ce rcepteur pourrait
avoir un rle dterminant dans la transduction du signal dans les cellules
souches totipotentes et dans leur prognie immdiate. CD135 (= le rcepteur
de FLT-3)
[49]
est exprim sur les cellules souches hmatopotiques prcoces
et aussi sur les cellules engages dans la ligne monocytaire mais le niveau
dexpression reste toujours relativement faible. Ce sont donc les cellules
CD34
+
CD38
-
(ou faible) HLA-DR
-
CD117 faible qui expriment
CD135
[50, 68]
. De plus, lexpression de CD90 est essentiellement restreinte
la population CD135 faible. Un troisime membre de cette famille de
rcepteurs tyrosine kinase, CD115 ou produit du proto-oncogne c-fms est
galement exprim sur une sous-population de cellules souches
hmatopotiques : il semble toutefois que son expression soit plus restreinte
aux cellules ayant un devenir dans la ligne monocyte/macrophage
[58]
.
Plusieurs travaux rapportent que des anticorps monoclonaux dirigs contre
lantigne de surface rcemment clustris CD164 (ou MGC-24v) ne
reconnaissent pas seulement des tumeurs solides de diffrentes origines mais
aussi les cellules prcurseurs rythrodes et la majorit des cellules de la
moelle osseuse exprimant CD34
[10]
. Lantigne de surface CD164 est une
molcule du type mucine qui avait t identie au dpart sur une ligne de
cellules de carcinome gastrique, il semble quelle agisse comme un rgulateur
ngatif de lhmatopose
[72]
.
Rcemment, un nouveau marqueur des cellules souches hmatopotiques a
t identi grce un nouvel anticorps monoclonal : AC133. Lantigne de
surface reconnu prsente une structure originale puisquil possde cinq
domaines transmembranaires
[41, 70, 71]
. AC133 marque les populations
Tableau IV. Antignes de surface utiliss pour la caractrisation des cellules souches hmatopotiques.
Ag Autre nom Expression sur CSH Taille
(1)
Structure Ligand/fonction Expression sur dautres cellules
CD34 + forte 90-120 type mucine trs glycosyle CD62L, CD62E interaction leucocyte
/endothlium
cellules endothliales, cerveau
CD38 ADP-ribosyl-cyclase - 46
HLA-DR -
(2)
CD90 Thy-1 + 18 ancrage GPI certains endothliums, neurones,
broblastes...
CD109 + 170 ancrage GPI plaquettes actives, lymphocytes T
activs, cellules endothliales...
CD117 c-kit + faible 145 rcepteur activit tyrosine
kinase
c-kit ligand ou SCF rle dans le
dveloppement des CSH, des gonades
et des cellules pigmentaires
mlanocytes, cerveau embryonnaire,
appareil gnital...
CD135 FLT-3 + faible 130/160 rcepteur activit tyrosine
kinase
FLT-3 ligand croissance
et dveloppement des CSH
TIE + 135 rcepteur activit tyrosine
kinase
CD115 c-fms + rcepteur activit tyrosine
kinase
CSF-1
CD164 MGC-24v + 80 type mucine trs glycosyle adhsion? cellules stromales de moelle osseuse,
cellules pithliales
CSH : cellules souches hmatopotiques ; (1) taille donne en kDa ; (2) sur les CSH de la moelle osseuse ; SCF : stem cell factor.
ANTIGNES DE SURFACE EN HMATOLOGIE Hmatologie 13-000-M-83
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prognitrices exprimant fortement CD34 drives de la moelle osseuse.
Contrairement CD34, cet antigne nest pas exprim sur les cellules
endothliales de type HUVEC, ni sur la ligne KG-1a, ni sur les broblastes.
Lanticorps AC133 dnit donc une population de cellules immatures et de
cellules engages dans la voie granulomonocytaire : cet antigne pourrait
donc savrer utile dans la slection des cellules souches hmatopotiques
en plus de CD34.
Dans le cadre de la recherche de nouveaux marqueurs, un nouvel anticorps
monoclonal, AY19, a t obtenu : il reconnat les cellules souches
hmatopotiques du sang de cordon ftal et dnit les progniteurs
granulomonocytaires
[1]
.
Enn, un certain nombre dantignes sont utiliss pour dterminer
lengagement dune cellule dans une voie de diffrenciation hmatopotique.
CD33 permet ainsi didentier les cellules engages dans la voie mylode,
CD64 est un marqueur de lengagement granulomonocytaire
[47]
, CD7 et
CD19 permettent, respectivement, didentier les cellules engages vers les
lymphocytes T ou B. Lanalyse de lexpression de CD45RA, un des
isomorphes de lantigne CD45, permet de discriminer les progniteurs
mylodes de faon prcoce : les cellules CD34
+
mylodes prcoces sont
CD45
+
/RA
-
contrairement aux cellules mylodes qui sont CD45RA
+
(fortement exprim) et CD33
+ [16]
.
Le phnotype des cellules souches hmatopotiques sest donc notablement
prcis depuis les premiers travaux avec CD34. Il apparat que celles-ci
expriment un certain nombre dantignes (tableau IV) : CD34, CD90,
CD117, CD135, CD164, AC133 et au contraire nexpriment aucun antigne
caractristique dune ligne hmatopotique, ni les marqueurs CD38 et
HLA-DR (pour les cellules souches de la moelle osseuse adulte).
En ce qui concerne lobtention de cellules souches hmatopotiques, elles
sont actuellement essentiellement rcupres dans le sang priphrique aprs
mobilisation (selon diffrents protocoles). Des leucaphrses sont donc
ralises et les cellules sont tries pour rcuprer un maximum de cellules
souches hmatopotiques. Le marqueur utilis en routine est CD34 puisquil
existe des colonnes sur lesquelles lanticorps CD34 est adsorb et qui
permettent ainsi de retenir les progniteurs CD34
+
et dliminer les cellules
tumorales.
Mais nous avons vu quil existe beaucoup dautres marqueurs : il sera donc
ncessaire pour augmenter le degr de purication dutiliser plusieurs
anticorps. Actuellement, des colonnes utilisant une double slection base sur
lexpression de CD34 et CD90 sont lessai.
Une des questions actuelles est de savoir si lantigne CD34 permet
rellement didentier la cellule la plus primitive. En effet, certains travaux
rcents tendent montrer que la cellule souche la plus primitive ne porterait
pas CD34 et serait vraisemblablement pauvre en antignes de surface, ce qui
rendrait sa caractrisation et sa purication extrmement difficiles
[21]
.
Les antignes de surface permettent donc de diagnostiquer des pathologies et
galement didentier les cellules souches hmatopotiques. La
dtermination des antignes de surface peut aussi avoir des applications dans
le cadre de la thrapie gnique. En effet, on sait que le systme immunitaire
peut se rvler incapable de gnrer une rponse immune correcte contre des
cellules tumorales. Cela peut tre d plusieurs dfauts sur les cellules
tumorales : une absence de molcules du complexe majeur dhisto-
compatibilit (CMH), labsence dantigne tumoral, un dfaut dapprtement
des antignes ou une absence de molcules de costimulation. Un intrt
croissant se manifeste pour induire limmunit antitumorale en introduisant
de nouveaux gnes dans les cellules tumorales. Une approche consiste
introduire les gnes codant pour des molcules de costimulation comme B7-1
(CD80) ou B7-2 (CD86). Dans des modles animaux, il est apparu que la
transfection de CD80 dans une ligne de mlanomes induisait une immunit
protectrice ; toutefois, dans dautres modles de tumeurs, lintroduction de
CD80 na confr aucune protection, ce qui suggre que lefficacit de la
transfection dpend du type de tumeur et vraisemblablement de son
immunognicit de dpart. Dans le cas des tumeurs hmatopotiques, la
transduction de molcules costimulatrices pourrait tre bnque car ces
cellules expriment fortement les molcules du CMH de classe I comme de
classe II et sont capables, au moins dans certaines circonstances, de prsenter
un antigne mais la plupart dentre elles sont dcitaires pour lexpression de
CD80, CD86 ou les deux
[30]
. Dans un modle murin de leucmie mylode
aigu, il a t montr que des cellules de LAM transduites avec le gne de
CD80 et irradies induisaient une immunit des souris pour une priode de
5 6 mois contre des cellules de LAM administres conscutivement. De
plus, linjection de cellules de LAM CD80
+
irradies engendrait un rejet des
leucmies chez des souris atteintes de stades prcoces
[18, 38]
. Il apparat donc
que la caractrisation des cellules tumorales en termes dantignes de surface
impliqus dans linduction dune rponse immunitaire permettra de cibler les
molcules utiliser dans le cadre de la thrapie gnique.
Rfrences
ANTIGNES DE SURFACE EN HMATOLOGIE Hmatologie 13-000-M-83
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ANTIGNES DE SURFACE EN HMATOLOGIE Hmatologie 13-000-M-83
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