La tincin de May Grnwald-Giemsa (MGG) es una tcnica de tincin derivada del mtodo de Romanowsky que se utiliza principalmente para el coloreo de muestras de frotis sanguneos o extendidos de mdula sea. Como el resto de las coloraciones basadas en la tcnica de Romanowsky, la tcnica MGG permite diferenciar cualitativa y cuantitativamente los principales elementos formes de la sangre. En los laboratorios clnicos de hematologa resulta especialmente til para la demostracin de alteraciones en el nmero, proporcin y morfologa de las clulas sanguneas. Tambin puede ser adaptada para su utilizacin como una tcnica de tincin clsica para cortes histolgicos. Como su nombre lo indica, la tcnica combina las tcnicas de coloracin desarrolladas por May- Grnwald y Giemsa. Estas tcnicas a su vez se basan en el empleo de dos soluciones colorantes: La solucin de May-Grnwald, que contiene el colorante ninico eosina y el colorante catinico azul de metileno ambos disueltos en metanol La solucin de Giemsa, que contiene eosina, azul de metileno y una serie de productos de la oxidacin de este ltimo tales como el azur A, el azur B, el violeta de metilo y el azul de metilo. Todos estos colorantes se encuentran en estado no ionizado mientras se mantienen en solucin de alcohol metlico, pero al aadir agua se ionizan y se unen selectivamente a los constituyentes celulares precipitando como sales insolubles.
Tincin de Gram La tincin de Gram o coloracin de Gram es un tipo de tincin diferencial empleado en Bacteriologa para la visualizacin de bacterias, sobre todo en muestras clnicas. Debe su nombre al bacterilogo dans Christian Gram, que desarroll la tcnica en 1884. Se utiliza tanto para poder referirse a la morfologa celular bacteriana, como para poder realizar una primera aproximacin a la diferenciacin bacteriana, considerndose Bacteria Gram positiva a las bacterias que se visualizan de color morado, y Bacteria Gram negativa a las que se visualizan de color rosa o rojo o grosella El cristal violeta (colorante catinico) penetra en todas las clulas bacterianas (tanto Gram positivas como Gram negativas) a travs de la pared bacteriana. El lugol es un compuesto formado por I2 (yodo) en equilibrio con KI (yoduro de potasio) y Sl (Siulterio), los cuales estn presente para solubilizar el yodo, y actan de mordiente, haciendo que el cristal violeta se fije con mayor intensidad a la pared de la clula bacteriana. El I2 entra en las clulas y forma un complejo insoluble en solucin acuosa con el cristal violeta.. La mezcla de alcohol-acetona que se agrega, sirve para realizar la decoloracin, ya que en la misma es soluble el complejo I2/cristal violeta. Los organismos Gram positivos no se decoloran, mientras que los Gram negativos s lo hacen. Para poner de manifiesto las clulas Gram negativas se utiliza una coloracin de contraste. Habitualmente es un colorante de color rojo, como la safranina o la fucsina. Despus de la coloracin de contraste las clulas Gram negativas son rojas, mientras que las Gram positivas permanecen violetas. La safranina puede o no utilizarse, no es crucial para la tcnica. Sirve para hacer una tincin de contraste que pone de manifiesto las bacterias Gram negativas. Al trmino del protocolo, las Gram positivas se vern azul- violceas y las Gram negativas, se vern rosas (si no se hizo la tincin de contraste) o rojas (si se us, por ejemplo, safranina). Esta importante coloracin diferencial fue descubierta por Hans Christian Gram en 1884. En este mtodo de tincin, la extensin bacteriana se cubre con solucin de uno de los colorantes de violeta de metilo, que se deja actuar durante un lapso determinado. Se escurre luego el exceso de violeta de metilo y se aade luego una solucin de yodo, que se deja durante el mismo tiempo que la anterior; despus se lava el portaobjetos con alcohol hasta que ste no arrastre ms colorante. Sigue a tal tratamiento una coloracin de contraste, como safranina, fucsina fenicada diluida, pardo Bismarck, pironin B o hasta inclusive verde de malaquita.