1

REATORES E PROCESSOS BIOQUMICOS:

SISTEMAS ENZIMTICOS
Universidade Federal do Cear
Centro de Tecnologia
Departamento de Engenharia Qumica
Profa. Maria Valderez Pone Ro!"a
Enzimas - Introduo
2
#O milagre da vida que inmeras reaes qumicas
ocorrem simultaneamente na clula com grande preciso e a
uma velocidade impressionante.$
3
ENZIMAS PROTENA
Classificao
protenas
Proe%na&
'lo()lare&
Primria Secundria Terciria Quaternria
Protenas
fibrosas
Enzi*a&:
Protenas com alto peso
molecular, maioria entre
15 a 1000 Kilo altons
!nit "K#
$%S& 1 alton ' 1
unidade de peso molecular
"()!#
4
*lobular& cadeia peptdica enrolada
em forma +lobular, sol,-el em +ua,
difundem facilmente, t.m funo m/-el
ou din0mica
1ibrosa& insol,-eis, compridas e
filamentosas, cadeia estendida ao lon+o
de um ei2o, funo estrutural ou
protetora3 tamb4m so fibrosas as
contrcteis miosina e actina
P5$T678(S&
1ormas
So as unidades fundamentais das protenas9
Todas as protenas so formadas a partir da li+ao em
se:;.ncia de aminocidos, :ue obedecem < estrutura
+eral representada na 1i+ura abai2o&

P5$T678(S&
(minocidos
*rupo
Carbo2lico
Carbono
(lfa
*rupo (mina
Cadeia
=ateral
!
P5$T678(S&
alfa-(minocidos
"
Polaridade& >mport0ncia
$pera?es de separao e identificao de produtos
biotecnol/+icos dependem das propriedades el4tricas dos
aminocidos3
Propriedades cido base& fundamental para sua anlise
6letroforese
Cromato+rafia de troca i@nica
P5$T678(S&
(minocidos
#
Comportamento :umico anf/tero
cidos bases
"doadores de pr/tons# "receptores de pr/tons#
(d:uirindo car+a el4trica efeti-a dependendo da ABCD
"pB#9
Ponto >soel4trico "P>#& pB cuEo determinado aminocido
encontraFse eletricamente neutro9
P5$T678(S&
(minocidos
$
pH > pI
pH do meio est alcalino;
concenta!"o ed#$ida de
%ons H& no meio;
os AAs li'eam H&( )icando
eleticamente ne*ati+o,
pH - pI
pH do meio esta cido;
e.cesso de %ons H& no meio;
Os AAs ece'em H&( )icando
eleticamente positi+o,
P5$T678(S&
(minocidos
1%
CURVA +E TITU,A-.O +A A,ANINA
11
CURVA +E TITU,A-.O +A A,ANINA
P5$T678(S&
(minocidos
12
E&r))ra do& /0 a*ino1!ido& 2)e !o*34e* a& 3roe%na&
=
e
G
n
i
+
e
r
,

H
0
0
5

I
P
r
i
n
c

p
i
o
s

d
e

%
i
o
:
u

m
i
c
a
13
di&&)lfeo da ,5!i&ina
iol da ,5!i&eina
"idro6ila da ,5&erina
fenol da ,5iro&ina
io7er da
,5*eionina
!ar(o6il do ,5'l)a*ao o) ,5a&3arao
indol do
,5ri3ofano
i*idazol da
,5"i&idina
')anidina da
,5a'inina
8B
J8BFC
8B
H
8S9 55N9
/
8COO
5
JCB
H
$B
N
N N
B
K
CJSJ
JSJSJ
O9
:RUPOS R
e5a*ino da ,5li&ina
14
=>*(LM$ ()>( 68T56 $>S ()>8$NC>$S
P5$T678(S&
Peptdieos
=i+ao co-alente
5otao limitada
F obramento do es:ueleto prot4ico
1
*rupo (mino
Terminal
*rupo Carbo2ila
Terminal
P5$T678(S&
Peptdieos
1!
6ST5!T!5(S ( P5$T678(&
Primria, Secundria, Terciria e Quaternria
6ST5!T!5(
P5>)N5>(
6ST5!T!5(
S6C!8N5>(
6ST5!T!5(
T65C>N5>(
6ST5!T!5(
Q!(5T68N5>(
56S7!$S 6
()>8$NC>$S
(=1(FBO=>C6
C(6>(
P$=>P6PT>>C(
S!%!8>(6S
(SS$C>((S
P5$T678(S&
6struturas da Protenas
1"
eterminada pela se:;.ncia de aminocidos :ue comp?e a
mol4cula, sem se preocupar com a orientao espacial9
P5$T678(S&
6struturas da Protenas
E&r))ra Pri*1ria
1#
Mai& &i*3le& e *ai&
i*3orane, pois dele
deri-a todo o arranEo
espacial da mol4cula9
P5$T678(S&
6struturas da Protenas F ESTRUTURA PRIMRIA
Val-His-Asp-LeuGlyArg-Thr

LeuGlyThr-Val-Arg-Asp-His
1$
ESTRUTURA SECUN+RIA
(lfaFG4lice
1olGaFbeta
P5$T678(S&
6struturas da Protenas
2%
1$5)(LM$ ( 6ST5!T!5( S6C!8N5>(
Fpontes B intraFcadeia IalfaFG4lice
P5$T678(S&
6struturas da Protenas F ESTRUTURA SECUN+RIA
21
1$5)(LM$ ( 6ST5!T!5( S6C!8N5>(
Fpontes B entre cadeias I%etaFpre+ueada
P5$T678(S&
6struturas da Protenas F ESTRUTURA SECUN+RIA
Confi+urao do col+eno
22
ESTRUTURA TERCIRIA:
P5$T678(S&
6struturas da Protenas
23
P5$T678(S&
6struturas da Protenas F ESTRUTURA TERCIRIA
(rranEo 6special& intera?es a lon+as dist0ncias entre
resduos& formao de cur-as, 0n+ulos e direo
epende da presena de Prolina, Treonina, Serina
1orma especfica& depende da se:;.ncia de aminocidos
6stabiliPao "6strutura terciria# obtida por&
a# Pontes B
C
entre +rupos 5 de resduos de alas adEacentes
b# (trao i@nica entre +rupos 5 carre+ados de alas -iPinGas
c# >nterao Gidrof/bica entre +rupos 5 Gidrof/bicos
d# >nterli+a?es co-alentes& resduos cistina intraFcadeia "s/
al+umas protenas possuem#9
24
P5$T678(S&
6struturas da Protenas F ESTRUTURA TERCIRIA
2
Quando a protena 4 composta por
mais de uma cadeia polipeptdica
9e*o'lo()lina
A&3arao ran&!ar(a*ila&e
ESTRUTURA +AS ENZIMAS ; E&r))ra Q)aern1ria
2!
a# 6nPima "ribonuclease, :uimotripsina, tripsina#
b# Transportadora "Gemo+lobina, lipoproteina#
c# 8utriti-a e de reser-a "o-oalbumina, caseina#
d# efesa "imuno+lobina, trombina, -eneno cobra#,
e# 6strutural "col+eno, elastina, :ueratina, fibrona#,
f# )o-imento "actina, miosina, tubulina#
+# 5e+uladora "insulina, Gorm@nio crescimento, repressores#
P5$T678(S&
1un?es
2
"
A3li!a<4e& Ind)&riai& de Enzi*a&
6S68Q$=Q>)68T$ $ P5$C6SS$ 68R>)NT>C$&
iferentes etapas
2#
6n+enGaria da enPima
F $bteno de diferentes propriedades para uma enPima de
interesse
6n+enGaria da reao e do reator
F $timiPao do sistema reacional
F estudo cin4tico, reaoSseparao inte+rada,
confi+urao de reator
6n+enGaria do processo
F Sntese e anlise de -iabilidade econ@mica do processo
68*68B(5>( ( 68R>)(&
8o-as propriedades
2$
1F 6n+enGaria +en4tica "troca de bases no +ene da
enPima#
HF Produo da enPima por diferentes microF
or+anismos "sel-a+ens e recombinantes#
KF )odificao da enPima e2istentes
Por imobiliPao multipontual na presena de
diferentes inibidores
Por modificao p/sFimobiliPao
UM POUCO +E 9IST=RIA
3%
Catlise biol/+ica incio s4c9 T>T
di+esto da carne& est@ma+o3
di+esto do amido& sali-a9
4cada de 50
=ouis Pasteur F concluiu :ue a fermentao do a<>!ar em 1l!ool
pela le-edura era catalisada por UfermentosV ' enPimas
6duard %ucGner "1WXY#
F 62tratos de le-edo podiam fermentar o a<>!ar at4 1l!ool3
F 6nPimas funciona-am mesmo :uando remo-idas da c4lula
-i-a9
U* 3o)!o de 9i&?ria
31
Zames Sumner "1XH[#
>solou e cristaliPou a urease3
Cristais eram de protenas3
Postulou :ue Utodas as enPimas so protenasV9
ZoGn 8ortGrop "d4cada K0#
CristaliPou a pepsina e a tripsina bo-inas3
4cada de 50 I s4c9 TT
Y5 enPimas isoladas e cristaliPadas3
1icou e-idenciado carter prot4ico9
(tualmente C H000 enPimas so conGecidas9
68R>)(S
32
S@o Proe%na&A e*(ora e6i&a*:
5iboPimas I pe:uenos 58(s catalticos
(bPimas I anticorpos catalticos
Efi!iene& Caali&adore&
(celeram as rea?es por um fator de 10
W
a 10
10
(tuam em pe:uenas concentra?es& 10
FK
a 10
F\
] da catalisador
Meio A*(iene:
So aceitos no meio ambiente
So completamente biode+rad-eis
Condi<4e& Rea!ionai&
(tuam sob condi?es amenas de reao
pB na fai2a 5FW, +eralmente Y
Temperatura& H0F\0 ^C, e2istindo tamb4m na fai2a de 50FY0 ^C
)inimiPa problemas de rea?es laterais indeseEadas como& decomposio,
isomeriPao, racemiPao e rearranEo9
68R>)(S
33
$ substrato li+aFse < enPima atra-4s do &%io aiBo,
local onde ocorrer a reao catalisada pela enPima9
STIO ATIVO
Re&%d)o& de a*ino1!ido& capaPes de intera+ir com o
substrato e formao do produto9
6stes resduos denominamFse 'r)3o& !aal%i!o&
68R>)(S
S7T>$ (T>Q$
34
5epresentao es:uemtica da estrutura tridimensional da lipase de
seudomonas cepacia9
&er
'is
(sp
MO+E,OS +E ,I:A-.O 5 SUBSTRATO5ENZIMA
3
3!
MO+E,OS +E ,I:A-.O 5 SUBSTRATO5ENZIMA
A)a e* )* >ni!o i3o de
'r)3o f)n!ional
629& a enPima :ue Gidrolisa
li+ao 4ster no mostra
nenGuma possibilidade de
reao com o +rupo acetal
+eBido a &)a e&r))ra
ridi*en&ionalA a& enzi*a&
di&in')e* o& 'r)3o&
f)n!ionai& &i)ado& e*
diferene& re'i4e& da *e&*a
*ol7!)la de &)(&rao
3"
QUIMIOSE,ETIVI+A+E RE:IOSE,ETIVI+A+E
68R>)(S F S6=6T>Q>(6
O
O
R1
R2
O
O
R1
R2
R3
ster acetal
O R1
O
R2
O
O
O
O
R3
OH
O
R2
O
OH
R1 R3
+
+
lipase 1,3
especfica
3#
ENANTIOSE,ETIVI+A+E
O
R
O
+
H
R
1
R
2
H
HO
R
1
R
2
OH
O
R +
H
HO
R
1
R
2
R
2
R
1
HO
H
(S) -2-lcool
(R)-2-lcool
(R) - 2-lcool
R-ster
( S ) -2-lcool
68R>)(S F S6=6T>Q>(6
Enzimas so constitudas de L-aminocidos e por isso so
catalisadores quirais.
ASPECTOS TERMO+INCMICOS
3$
)aria*+o de
energia livre
Energia de
ativa*+o
Estado de transi*+o
,eag
-rod
8o alteram o estado de
e:uilbrio
F (bai2am a ener+ia de
ati-ao3
F Ke: no 4 afetado pela
enPima9
8o apresenta efeito
termodin0mico +lobal
5 * no 4 afetada pela
enPima
4%
PERDIS +E ENER:IA +E ATIVA-.O
41
E6e*3lo de Rea<@o Caali&ada 3or Enzi*a
6nPimas999 aceleram rea?es :umicas
62& ecomposio do B
H
$
H
H
2
O
2
H
2
O O
2
+
Catalase
Condi?es da 5eao 6ner+ia li-re de (ti-ao
KZSmol KcalSmol
Qelocidade
5elati-a
Sem catalisador
Plaina
Enzi*a Caala&e
Y5,H 1W,0
EFAG HHAI
/JA0 KAK
1
/AII 6 H0
E
LAKH 6 H0
F
42
i-iso em [ classes de acordo com a reao :ue a enPima catalisa&
8omenclatura&
F8ome tri-ial&
F 8ome sistemtico
C,ASSIDICA-.O +E ENZIMAS C,ASSIDICA-.O +E ENZIMAS
43
( >nternational !nion of %iocGemistr_ and )olecular %iolo+_ ">!%)%# classificou as enPimas
em seis +randes +rupos "Classes#, de acordo com o tipo de reao :ue catalisam9 Cada
enPima descrita recebe um n,mero de classificao, conGecido por U69C9V "6nP_me
Commission of tGe >!%)%#, :ue 4 composto por \ d+itos&
19 Classe
H9 SubFclasse dentro da classe
K9 +rupos :umicos especficos :ue participam da reao9
\9 a enPima, propriamente dita
6T6)P=$& Quimotripsina& 69C9 K9\9H191
K Classe ' Bidrolase "catalisa rea?es de Gidr/lise de li+a?es co-alentes#
\ SubFClasse ' Peptidase "Gidrolisa li+a?es peptdicas#
H1 SerinoFendopeptidases "enPimas contendo serina no stio ati-o#
1 :uimotripsina
C,ASSIDICA-.O +E ENZIMAS C,ASSIDICA-.O +E ENZIMAS
( relao completa das enPimas com suas classifica?es pode ser encontrada na p+ina&
"3:MMNNN.!"e*.2*)l.a!.)OMi)(*(MenzP*eM9
(s informa?es :ue se se+uem apenas resumem a:uelas dispon-eis nessa p+ina9
44
C,ASSIDICA-.O
+E ENZIMAS
C,ASSIDICA-.O
+E ENZIMAS

Classe da Enzima Nmero Tipo de reao

Classificadas Disponveis

1.oxidoredutases 650 90 Reduo-oxidao:
oxigenao de ligaes de C-
H, C-C, C=C; ou remoo total
ou adio de equivalentes de
tomos de hidrognio
2.transferases 720 90 Transferncia de grupos:
aldedico, cetnico, acila,
acar, fosfato ou metila
3.hidrolases 636 150 Hidrlise: formao de
steres, amidas, lactonas,
lactamas, epxidos,
nitrilasanidridos, glicosdeos,
organohaletos
4.liases 255 35 Adio-eliminao de
pequenas molculas nas
ligaes C=C, C=N, C=O
5.isomerases 120 6 Isomerizao tais como
racemizao, epimerizao,
re-arranjos
6.ligases 80 5 Formao-clivagem de
ligaes C-O, C-S, C-N, C-C
com concomitante clivagem
de trifosfato

4
C,ASSIDICA-.O +E ENZIMAS C,ASSIDICA-.O +E ENZIMAS
Classificadas& [50
ispon-eis& X0
Classificadas& YH0
ispon-eis& X0
Classificadas& [K[
ispon-eis& 150
4!
C,ASSIDICA-.O +E ENZIMAS C,ASSIDICA-.O +E ENZIMAS
Classificadas& W0
ispon-eis& 5
Classificadas& H55
ispon-eis& K5
Classificadas& 1H0
ispon-eis& [
4"
C,ASSIDICA-.O +E ENZIMAS 5 E6e*3lo C,ASSIDICA-.O +E ENZIMAS 5 E6e*3lo
4#
C,ASSES:
19 $2idorredutases
So todas as enPimas :ue catalisam rea?es de o2idaoFreduo9 $ substrato o2idado
4 um Gidro+.nio ou doador de el4tron9 $ nome mais comum 4 Udesidro+enaseV "sempre
:ue poss-el#9 U$2idaseV 4 tamb4m usado :uando o $
H
4 um aceptor9 So classificadas
em subFclasses pois atuam em diferentes +rupos doadores ou aceptores9 8o caso das
o2idoFredutases, so HH subF+rupos "191 a 19H1 e 19XY#9
( lactato desidro+enase "69C9 1919H9\#, transforma lactato em piru-ato&
C,ASSIDICA-.O +E ENZIMAS C,ASSIDICA-.O +E ENZIMAS
4$
H9 Transferases
So enPimas :ue catalisam a transfer.ncia de +rupos entre duas mol4culas9 Por e2emplo, as
metiltransferases transferem um +rupo metila9 $ doador pode ser um cofator "coenPima# :ue
carre+a o +rupo a ser transferido9 ( classificao se d se+uindo o es:uema&
doador "+rupo# transferase
ou
aceptor "+rupo# transferase
Por e2emplo, a alanina aminotransferase "69C9 H9[919H# catalisa a transfer.ncia de um
+rupamento amino da alanina para o Fceto+lutarato&
C,ASSIDICA-.O +E ENZIMAS C,ASSIDICA-.O +E ENZIMAS
%
K9 Bidrolases
Catalisam a reao de Gidr/lise de -rias li+a?es co-alentes9 $ nome, em +eral, 4
dado pelo UsubstratoV C o sufi2o UaseV, como 4 o caso das peptidades "69C9 K9\#, :ue
catalisam a Gidr/lise de li+a?es peptdicas&
(l+umas Gidrolases so pouco especficas, o :ue dificulta a nomenclatura mais
especfica das mesmas9
C,ASSIDICA-.O +E ENZIMAS C,ASSIDICA-.O +E ENZIMAS
1
\9 =iases
=iases so enPimas :ue catalisam a cli-a+em de li+a?es CFC, CF$, CF8, entre outras,
atra-4s de Gidr/lise ou o2idao9 6las diferem das outras enPimas pois tem dois
substratos en-ol-idos em uma direo e apenas um na outra direo de reao9 8os
nomes comuns, encontramos as descarbo2ilases, aldolases, desidratases, ou mesmo
liases9 (s desidratases so a:uelas :ue eliminam +ua na reao9 8o caso em :ue a
reao in-ersa 4 mais importante, ou seEa, em :ue dois substratos ori+inam um, pode
ser usado o nome UsintaseV9
( piru-ato descarbo2ilase "69C9 \919191# transforma piru-ato em acetaldedo C C$
H
&
C,ASSIDICA-.O +E ENZIMAS C,ASSIDICA-.O +E ENZIMAS
2
59 >somerases
Catalisam a modificao de uma ,nica mol4cula, sem participao de outra9 Por
e2emplo, as 5acemases e as 6pimerases, catalisam a reao de racemiPao ou
epimeriPao de centros :uirais e as cisFtransF>somerases rearranEam a +eometria
de duplas li+a?es9 62istem $2idoredutases intramoleculares :ue o2idam uma parte
da mol4cula ao mesmo tempo :ue reduPem outra parte da mesma9
62emplo& alanina racemase "69C9 5919191#&
C,ASSIDICA-.O +E ENZIMAS C,ASSIDICA-.O +E ENZIMAS
3
[9 =i+ases
Catalisam rea?es de sntese de uma no-a mol4cula a partir da li+ao entre duas
mol4culas, com a concomitante Gidr/lise de (TP ou outro composto trifosfatado9 So
conGecidas como =i+ases, Carbo2ilases ou Sintetases, sendo :ue e2istem [ subF
classes dessas enPimas9
62emplo& +lutamateFammonia li+ase ou +lutamina sintetase "6C [9K919H#9
C,ASSIDICA-.O +E ENZIMAS C,ASSIDICA-.O +E ENZIMAS
4
+EDINI-QES BSICAS
AiBidade enzi*1i!a
esi+na a pr/pria ati-idade cataltica da enPima, e2pressa em unidades de
-elocidade, ou seEa, massa transformada por unidade de tempo "`molSmin#3
S)(&rao
8ome :ue se d a subst0ncia cuEa transformao a enPima 4 capaP de catalisar
Unidade de enzi*a
ConsideraFse uma unidade "!# a :uantidade de enPima capaP de transformar 1`mol
de substrato por minuto em condi?es definidas de pB, temperatura, fora i@nica I com
substratos presentes em condio de saturao3
AiBidade e&3e!%fi!a
O a ati-idade da enPima, e2pressa em `molSmin, di-idida pela :uantidade de
protena "m+#3
N>*ero de renoBa<@o R)rnoBerS
8umero de mol4culas de substrato :ue uma ,nica mol4cula de enPima 4 capaP de
transformar por unidade de tempo "tempo
F1
#3
COMO OS SUBSTRATOS SE ,I:AM A
ENZIMAST

S%io aiBo
(minocidos essenciais para a ati-idade enPimtica3
Ea3a&:
1a# =i+ao !u"strato-Enzima3
Ha# 1ormao do estado de transio3
Ka# Catlise e conse:uente formao dos produtos3
ESTRUTURA +AS ENZIMAS
!
Podemos enumerar :uatro tipos de estrutura para
as protenas&
6strutura primria3
6strutura secundria3
6strutura terciria3
6strutura :uaternria3