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CONTROLES DE CALIDAD DE PRODUCTOS ESTERILES PIROGENOS

La fabricacin de productos estriles est sujeta a requisitos especiales para
minimizar los riesgos de contaminacin microbiana, de partculas y de
pirgenos. Depende, en gran parte, de la habilidad, formacin y actitud del
personal implicado. La Garanta de Calidad reviste una importancia especial y
esta fabricacin debe seguir estrictamente mtodos de preparacin y
procedimientos cuidadosamente establecidos y validados. La garanta de la
esterilidad y de otros aspectos de calidad de los medicamentos no debe
depender nicamente de los ensayos realizados al final del proceso o sobre el
producto terminado.
GENERALIDADES:

1. La fabricacin de productos estriles debe realizarse en zonas limpias.
El accesoa estas zonas debe realizarse a travs de esclusas reservada
s para el personaly/o los equipos y materiales. Las zonas limpias de
ben mantener un nivel delimpieza adecuado y han de estar dotadas d
e aire filtrado a travs de filtros de una eficacia apropiada.
2. Las diversas operaciones de preparacin de los componentes, preparaci
n delproducto y llenado deben realizarse en zonas separadas dent
ro de la zonalimpia. Las operaciones de fabricacin se clasifican en do
s categoras: en primerlugar, aquellas en que el producto se esteriliz
a al final y, en segundo lugar,aquellas que se realizan aspticamente
en todas o algunas de sus fases.
3. Las zonas limpias para la fabricacin de productos estriles se clasifican
segnlas caractersticas requeridas del entorno. Cada operacin de fabr
icacin exigeun grado adecuado de limpieza del entorno en estado de fu
ncionamiento paraminimizar los riesgos de contaminacin microbiana o
de partculas en el productoo los materiales que se estn manipulando.
A fin de cumplir las condiciones en funcionamiento, estas zonas deben
disearse de forma que alcancen ciertos niveles especificados de limpieza del
aire cuando estn en reposo. La situacin en reposo es aquella en la que la
instalacin est completa y operativa, con los equipos de produccin instalados
pero sin que est presente el personal. La situacin en funcionamiento


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esaquella en la que la instalacin est funcionando de la forma definida de
trabajo con el nmero de personas definidas trabajando.
Para la fabricacin de medicamentos estriles se distinguen cuatro grados:
Grado A: zona donde se realizan operaciones de alto riesgo tales como
la zona de llenado, de bandejas de tapones, de ampollas y viales
abiertos y de realizacin de conexiones aspticas. Normalmente estas
condiciones son provistas por estaciones de trabajo de flujo laminar. Los
sistemas de flujo laminar deben proporcionar una velocidad homognea
del aire en un intervalo de 0,36 0,54 m/s (valor orientativo) a nivel del
punto de trabajo en entorno abierto. Debe demostrarse y validarse el
mantenimiento de la laminaridad. Se puede utilizar un flujo de aire
unidireccional y velocidades ms bajas en aisladores cerrados y con
guantes.
Grado B: entorno para la zona de grado A en el caso de preparacin y
llenado aspticos.
Grados C y D: zonas limpias para realizar fases menos crticas de la
fabricacin de productos estriles.
CONTROL DE CALIDAD DE PRODUCTOS INYECTABLES:
La calidad se define como la capacidad de un producto para satisfacer las
necesidades para las que ha sido creado, el control de calidad es un conjunto
de actividades que aseguran que el producto cumple con las caractersticas
requeridas en grado aceptable de conformidad con los lmites establecidos.
La calidad de los productos farmacuticos est garantizada por una buena
prctica de manufactura durante todo el proceso productivo ms que por el
anlisis del producto final, es decir La calidad se hace, no se controla.
En la Industria farmacutica, el rea de Control de Calidad se encarga de
verificar que el producto cumple con las especificaciones, su labor se inicia
desde el anlisis de materias primas, se extiende al control riguroso de las
etapas de fabricacin y finaliza con los controles del producto terminado.
Asegura tambin la calidad de los materiales, reactivos y equipos que
intervienen en el proceso analtico llevando en paralelo el control de la
documentacin.
LA MANUFACTURA DE PRODUCTOS INYECTABLES:
El proceso de manufactura de productos parenterales es el siguiente:


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A. Lavado de ampollas:
Las ampollas que ingresan a las plantas (abiertas y no estriles) pasan por un
proceso de lavado para eliminar residuos y partculas. Se lavan con agua
destilada aprobada por control de calidad, a temperatura de 50 a 70 C y que
pasa por un filtro de 3 micras. El lavado comprende 4 fases: la fase 1 es
inyeccin de aire filtrado al interior de las ampollas. La Fase 2 : inyeccin de
agua filtrada a las ampollas. La Fase 3 : se repite la fase 1 y la Fase 4 en la
que se repite la fase 2.
Las ampollas limpias se trasladan al horno de despirogenizacin en una cabina
de flujo laminar de transporte.
B. Esterilizacin:
Despus del lavado, las ampollas se colocan en recipientes de acero inoxidable
denominadas cacerinas y se someten a esterilizacin por calor seco a 250 C
por 2 horas en un horno de esclusa que permite el ingreso de las ampollas sin
esterilizar por una puerta y el retiro de las mismas una vez esterilizadas por la
puerta que da al rea de envasado. La carga colocada deber ser en nmero y
orden determinado por el proceso de validacin.
C. Manufactura:
Paralelamente a las operaciones de lavado y esterilizacin de las ampollas se
fabrica el bulk (solucin inyectable en granel) en un ambiente no estril (Clase
100 000) en un tanque mezclando las materias primas de la formulacin:
principios activos, agua libre de endotoxinas y excipientes segn el
procedimiento respectivo.
D. Filtracin:
Se realiza bajo una cabina de flujo laminar (rea Clase 100)
Terminado y analizado el bulk, se esteriliza por el mtodo de filtracin a travs
de una membrana de 0,2 micras, que garantiza que todas las bacterias
presentes en el bulk queden retenidas en el filtro. Esta membrana tiene una
presin de punto de burbuja de 50 psi. Antes de la filtracin se realiza la prueba
del punto de burbuja para asegurar que la membrana se encuentra ntegra. En
esta prueba se presuriza el sistema de filtracin hasta aproximadamente 40 psi
y luego lentamente se incrementa la presin hasta 50 psi (se observa una
rpida y continua corriente de burbujas), cuando alcanza la presin indicada, se
debe mantener no menos de 10 segundos y no debe observarse prdida de


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presin lo que garantiza que no hayan orificios. Esta prueba se hace al inicio y
al final de la filtracin y finalizado para asegurar que la membrana se mantuvo
en las mismas condiciones durante todo el proceso. El bulk filtrado se queda en
el rea estril en el frasco para envasado.
E. Envasado y Sellado:
Se realiza en el rea estril, se retiran cuidadosamente las cacerinas del horno
y se colocan en la zona de envasado. Con las ampollas estriles y la solucin
estril (dentro del rea estril segn Figura 2) y se procede a envasar en una
mquina en tres fases:
Fase 1 : inyeccin de la solucin en las ampollas
Fase 2 : inyeccin de nitrgeno en las ampollas
Fase 3 : cierre o sellado de las ampollas con calor (llama de gas y
oxgeno)
Antes de ingresar al rea estril, el operario debe verificar que la alimentacin
de gases sea conforme e ingresa con mamelucos estriles. El operario debe
cumplir pautas de comportamiento que minimicen el riesgo de contaminacin.
El envasado se lleva a cabo en el rea estril (Ambiente clase 100) y bajo flujo
laminar. La temperatura se mantiene en 21 C + 2 C y la humedad relativa en
45 + 5%. El aire ingresa pasa por filtros absolutos con filtro terminal tipo HEPA
de 99,97% de eficiencia con retencin de partculas de hasta 0,5 micras de
dimetro. La renovacin del aire del rea no es menos de 20 cambios por hora
con presin positiva mayor de 0,05 pulgadas de agua.
F. Prueba de hermeticidad:
Las ampollas se someten a esta prueba para detectar posibles fugas o
defectos de cierre imperceptibles al ojo humano. Se realiza al 100% de las
ampollas envasadas para verificar que el cierre sea hermtico. Se emplea azul
de metileno al 0,1% en el cual se sumergen las ampollas sometindose a vaco
controlado, para que las ampollas que pudiesen presentar fugas se coloreen
internamente.
G. Inspeccin de partculas extraas:
Personal entrenado revisa el total de ampollas separando aquellas que
presentan partculas extraas insolubles, mviles diferentes a burbujas de gas
involuntariamente presentes que sern luego parte de la merma. Esta
inspeccin se realiza en una pantalla que consta de paneles de contraste


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iluminados: un panel negro mate (sin brillo), otro panel blanco mate y un porta
lmpara fijo.
El personal del rea de revisin de ampollas pasa anualmente por un examen
de aptitud visual. Se pueden encontrar defectos como residuos de vidrio,
puntos negros, ampollas quemadas, con falla de impresin, pelusas, volumen
bajo, falla de cierre, etc.
H. Empaque:
Las ampollas que pasan la inspeccin visual son acondicionadas en sus
empaques secundarios y son llevados al almacn en calidad de cuarentena
hasta su liberacin y futura distribucin a las farmacias.
EL CONTROL MICROBIOLGICO EN LA MANUFACTURA DE
PRODUCTOS INYECTABLES:
La calidad microbiolgica de todo producto farmacutico se ve influenciada por
el medio ambiente en el que se fabrica y por los materiales utilizados en su
frmula; su carga bacteriana representa la sumatoria de la carga inicial de las
materias primas, equipos, ambiente, operadores y envases utilizados en su
fabricacin.
El control microbiolgico verifica que cada una de estas variables cumplen las
especificaciones, confirma que los procesos se estn realizando de acuerdo a
lo establecido y nos da la seguridad de que las condiciones ambientales y
personales son adecuadas dando como resultado un producto de buena
calidad que cumplir su objetivo. La manufactura de productos parenterales
requiere un control microbiolgico estricto que involucra todos los procesos,
mencionamos algunos de estos.
A. Control Ambiental:
Es la evaluacin microbiolgica de los ambientes de produccin que evala el
proceso de limpieza y sanitizacin, as como el correcto comportamiento del
personal indicando que el rea est bajo control. En algunos casos se realiza
diariamente aunque no estn en operatividad (rea estril). La USP 27 acoge la
Norma Federal Estndar 209E que indica el diseo y la construccin de
ambientes controlados y ambientes limpios basndose en los lmites de
partculas de tamao mayor o igual a 0,5 micras. La industria farmacutica
adopta esta norma desde los valores de la clasificacin M 3,5 hacia delante
segn Tabla 1. Los parmetros microbiolgicos se presentan en la tabla 2. (4)


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Se evala el nivel de partculas no viables considerando que los
microorganismos se encuentran asociados a partculas de 10 a 20 micras y
podran influir en dos requerimientos del producto final: partculas extraas y
esterilidad. Un rea limpia es aquella que cuenta con un control de la
contaminacin por microorganismos y/o partculas no viables. Segn la Federal
Estndar 209E, los ambientes se clasifican en 3 grupos:
rea Clase 100, ambientes crticos controlados Clean romos: donde
el nmero de partculas no excede 100/pie3. Por ejemplo bajo flujo
laminar del rea estril de inyectables.
rea Clase 10 000: donde el nmero de partculas no excede 10
000/pie3 como son las reas de soporte o adyacentes a las de clase
100.
rea Clase 100 000: el nmero de partculas no excede 100 000/pie3
Por ejemplo las reas de manufactura de productos no estriles. Se
debe contar con un programa de control ambiental, establecer
parmetros, frecuencias de muestreo y acciones preventivas.
B. Control de Uniformes:
El uniforme corresponde a la indumentaria que el personal utiliza en las reas
de trabajo, estos pueden contribuir con partculas viables y no viables en el
ambiente. La principal fuente de contaminacin en los ambientes controlados
son los operarios y el rea de microbiologa debe verificar que el personal y su
indumentaria estn cumpliendo las especificaciones con muestreos peridicos
aleatorios segn procedimiento.
Se evalan los uniformes del personal que labora en las reas de manufactura
y filtracinenvasado (rea estril) con la finalidad de verificar que ofrezcan las
condiciones apropiadas de asepsia. El personal que trabaja en el rea de
filtracinenvasado debe vestir correctamente un mameluco estril que no
desprenda fibra ni partculas evitando que ingrese contaminacin. Para el
anlisis se emplea el mtodo de contacto directo con el agar usando placas
Rodac el mtodo del hisopado.
C. Control de Superficies:
El control de superficies permite evaluar que los de equipos e infraestructura de
las reas cumplen con las especificaciones establecidas e minimizndose los
riesgos de contaminacin microbiana por contacto con el producto. La


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superficie a muestrear es toda zona expuesta que est en contacto o sobre el
cual se manipulan los productos farmacuticos (mesas, equipos, etc.). Se
realiza el hisopado de paredes, pisos, mesas, partes de mquina, ropa, etc.
Los tanques de fabricacin, la mquina envasadora, etc. se hisopan segn
frecuencia establecida en el procedimiento para verificar la limpieza y
determinar su vigencia en esta condicin. Tambin se realiza esta prueba
durante la Validacin de Limpieza y como anlisis de soporte despus de una
recuperacin del rea asptica de inyectables cuando se haya perdido la
condicin de esterilidad.
D. Control de Esterilizaciones: Todos los materiales, equipos, uniformes, etc.
empleados en la fabricacin de inyectables deben ser esterilizados antes del
uso. Dicha esterilizacin puede llevarse a cabo por 2 mtodos:
Por calor hmedo; Autoclavado,
Autoclave: equipo de cierre hermtico, resistente a altas presiones y
temperaturas en cuya cmara ingresa vapor, de calidad adecuada para
esterilizar los productos que se colocan en su interior. El autoclavado
emplea vapor saturado a presin y temperatura regulada durante un
tiempo determinado, suficiente para eliminar los microorganismos y dejar
a los productos sometidos a este proceso en calidad de estriles. El rea
de Produccin esteriliza por autoclave los materiales que no resisten
altas temperaturas : uniformes, equipos de filtracin, agua, muestreador
de aire, equipo de filtracin esterilizante, sistema de envasado (agujas
dosificadoras, mangueras, jeringas, vlvulas de alimentacin, varillas de
aspiracin), materiales de limpieza del rea estril, etc. empleando un
bioindicador para verificar la idoneidad del proceso. El bioindicador es
una ampolla conteniendo esporas de Bacillus stearothermophyllus ATCC
7953. En un correcto proceso de autoclavado a 121 C x 75 minutos a 1
atmsfera de presin (segn validacin vigente), las esporas
experimentan destruccin total, pero a temperaturas ms bajas o un
tiempo menor pueden sobrevivir parcialmente. Estas ampollas se
colocan junto con la carga normal a autoclavar tambin establecida en la
validacin y luego se incuban a 60 + 2 C durante 48 horas. El rea de
Microbiologa evala los resultados del bioindicador y de las cartillas
registradoras de autoclavado. Adicionalmente se emplean cintas


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indicadoras que tienen la propiedad de cambiar de color despus del
proceso.
Por calor seco: Se lleva a cabo en un horno calificado al que se le han
determinado los puntos mas fros. La esterilizacin se realiza a 170 C x
3 horas y la despirogenizacin a 250 C x 2 horas segn calificacin
(ejemplo en tabla 5). Esterilizacin y Despirogenizacin por calor seco:
Esterilizacin es el proceso por el cual se destruye totalmente las formas
vivas (microorganismos, hongos y levaduras) aplicando calor a altas
temperaturas. Despirogenizacin es el proceso de destruccin de
pirgenos por medio del calor a temperaturas mucho ms elevadas.
La correcta esterilizacin y despirogenizacin por calor seco es revisada
en las cartillas circulares graficadoras del proceso que son verificados
por microbiologa y se corrobora con la prueba de esterilidad de
ampollas vacas. Este control es importante para verificar las
condiciones de esterilidad de las ampollas de vidrio vacas empleadas
en el envasado de inyectables y es una prueba de apoyo a la Validacin
de llenado asptico. Estas pruebas nos permiten confirmar que el
proceso de esterilizacin ha sido adecuado garantizando resultados
confiables y repetitivos en la obtencin de un producto o material estril.
E. Pruebas de los inyectables como producto terminado:
Esterilidad:
Esta prueba evala si el producto est libre de microorganismos viables
garantizado su inocuidad y su liberacin para su uso por los pacientes.
Se filtra 100mL del producto en un equipo de filtracin estril, se enjuaga
con 300mL de agua peptonada el nmero de veces segn indica la
prueba de bacteriostasis y se coloca la membrana en caldo casoy y
tioglicolato. Se espera 14 das controlndose diariamente el desarrollo
de turbidez al final de los cuales al no haber crecimiento el producto
tendr calidad de estril
Control Ambiental del rea de Control de Esterilidad:
La prueba de esterilidad se lleva a cabo en el rea estril de
microbiologa que es rigurosamente controlado como el del rea de
inyectables. Durante la prueba se muestrea en paralelo el ambiente para
garantizar que las condiciones ambientales son ptimas para desarrollar


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el test evitando riesgos de contaminacin y falsos positivos. Los
requerimientos iniciales para llevar a cabo esta prueba son la Promocin
de Crecimiento y la Prueba de Bacteriostasis y Fungistasis.
Promocin de crecimiento:
La promocin de crecimiento consiste en inocular 3 unidades del lote de
cada caldo con suspensiones de cepas ATCC (segn tabla 6) que
tengan concentracin de 10 a 100 ufc/mL segn lo indica la farmacopea,
se incuban los caldos a las condiciones de cada bacteria y en paralelo
se coloca un blanco. Se debe evidenciar crecimiento slo en las
unidades inoculadas, lo cual indica que los medios (caldo casoy y caldo
tioglicolato) logran recuperar los microorganismos descartndose falsos
negativos durante el ensayo de esterilidad.
Prueba de Bacteriostasis y Fungistasis :
La bacteriostasis es la capacidad de inhibir el crecimiento bacteriano y la
fungistasis es la capacidad de inhibir el crecimiento de hongos.
Esta prueba nos permite verificar la adecuada eliminacin de los
conservadores de la muestra mediante enjuagues sucesivos con agua
peptonada determinndose el nmero de enjuagues necesarios para
que no se produzca inhibicin de los microorganismos que puedan estar
presentes en la muestra. Esto permite asegurar que los resultados
obtenidos en la Prueba de Esterilidad son confiables.
La mayora de productos farmacuticos tienen conservadores en su
formulacin los cuales inhiben el crecimiento bacteriano. En la prueba de
esterilidad se debe enjuagar la membrana con 300mL de agua
peptonada a fin de eliminar la presencia de dichos conservadores en la
membrana filtrante. Muchas veces es necesario enjuagar un mayor
nmero de veces para eliminar totalmente los residuos bacteriostticos
(por ejemplo antibiticos inyectables u otros). Para ello se filtra 100mL
del producto, se inocula la membrana enjuagada con cepas de bacterias
entre 10 100 ufc/mL (segn tabla 6) y se incuba conjuntamente con un
control positivo que consiste en inocular la membrana con dicha
suspensin pero sin filtrado inicial de producto. Debe evidenciarse igual
crecimiento. Si hubiese menor turbidez que el control positivo indica que
hay bacteriostasis y por ende, se debe agregar ms agua peptonada


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hasta encontrar el nmero de enjuagues necesarios. Esta prueba incluye
controles positivos a ser realizadas con cepas ATCC.
F. Acabado de productos estriles.
Los viales liofilizados parcialmente cerrados debern mantenerse en
todo momento bajo condiciones de grado A hasta que el tapn sea
completamente insertado.
Los envases se cerrarn mediante mtodos validados adecuadamente.
El 100% de los envases cerrados por fusin como, por ejemplo, las
ampollas de cristal o plstico debern someterse a una prueba de
integridad. De los otros envases, se sometern muestras a la prueba de
integridad segn procedimientos adecuados.
El sistema de cerrado para viales llenados aspticamente no est
totalmente terminado hasta que la cpsula de aluminio ha sido sellada
en el vial taponado.
Por tanto, el sellado de la cpsula deber realizarse lo ms pronto
posible tras la insercin del tapn.
Dado que el equipo utilizado para sellar las cpsulas de los viales puede
generar grandes cantidades de partculas no viables, ste debe
colocarse en una estacin separada dotada de una extraccin de aire
adecuada.
El capsulado de los viales puede llevarse a cabo como un proceso
asptico utilizando cpsulas esterilizadas, o como un proceso limpio
fuera de la zona asptica. Cuando se lleva a cabo este ltimo
procedimiento, los viales debern protegerse por condiciones de grado A
hasta que abandonen la zona asptica, y despus, los viales tapados
debern protegerse con un suministro de aire de grado A hasta que la
cpsula haya sido sellada.
Los viales sin tapones o con tapones desplazados debern rechazarse
antes del capsulado. Cuando en la estacin de capsulado sea necesaria
la intervencin humana, se utilizar la tecnologa adecuada para
prevenir el contacto directo con los viales y minimizar la contaminacin
microbiana.


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Para asegurar las condiciones requeridas y minimizar las intervenciones
humanas directas en el proceso de capsulado, pueden ser beneficiosas
las barreras de acceso restringido y los aisladores.
En los envases cerrados al vaco se comprobar el mantenimiento de
este vaco tras un periodo adecuado y previamente determinado.
Los envases de productos parenterales llenos debern inspeccionarse
individualmente para detectar la contaminacin por materia extraa u
otros defectos. Si la inspeccin se hace visualmente, deber llevarse a
cabo en condiciones adecuadas y controladas de iluminacin y fondo.
Los operarios que realicen la inspeccin debern someterse a controles
peridicos de agudeza visual, con gafas si las llevan, y se les permitir
interrumpir frecuentemente dicha inspeccin. Cuando se utilicen otros
mtodos de inspeccin, el proceso deber validarse y se comprobar
peridicamente la eficacia del equipo/s. Los resultados quedarn
registrados.