REALIZACIN DE CULTIVO DE LEUCOCITOS DE SANGRE PERIFRICA Y

OBTENCIN DE CROMOSOMAS HUMANOS

Objetivo general:
Identificar adecuadamente cromosomas humanos, a partir de la prctica propuesta.
Obtener especficos:
Observar microscpicamente con el objetivo de 100X con aceite de inmersin, los
cromosomas humanos.
Resultados

Imagen de eritrocitos
La obtencin de muestra sangunea se realiz mediante la tcnica de flebotoma
correcta, para la identificacin de cariotipos humanos, para ello se llev a cabo la
preparacin del medio de cultivo McCoys, la cual se realiz en condiciones estriles para
evitar la contaminacin por bacterias, como nos indica ( .?) el medio McCoys es un
medio diseado para el crecimiento de clulas diploides tanto de rata como de humano, el
cual contienes los siguientes componentes: Sales inorgnicas (NaCl), vitaminas
(reboflamina) , aminocidos (glicina) y otros componentes como dextrosa, rojo de fenol.
No se observaron los leucocitos bien, porque los cromosomas estaban condensados al
realizar el anlisis de bandeo G, el cual (,?) nos indica que el anlisis de bandeo G es un
tratamiento de tripsina + gemsa ( tincin de frotis sanguneo). Lo cual por esta situacin
no se pudieron observar las estructuras cromosmicas y no poder identificar los nombres
de los cromosomas de acuerdo a las posiciones de sus centrmeros en dichas
preparaciones.

Discusin:
DISCUSIN DE RESULTADOS
Primeramente se realiz el cultivo celular de linfocitos a partir de tomas de muestras de
sangre que consista en la obtencin de los cariotipos de los cromosomas. Se utiliz el
medio McCoy el cual es un medio diseado para el crecimientode lneas celulares
diploides. Seguido de la adicin de antibiticos para evitar la contaminacin de las
muestras,segudo de la fitohemaglutinina que es una lecitina con la capacidad aglutinar
eritrocitos y leucocitos adems deque estimula inespecficamente la proliferacin de
clulas T y es esta caracterstica mitognica lo que le da suprincipal aplicacin. Se utiliz
solucin de colchicina la cual impide la polimerizacin de los microtbulos (tubulinas y )
y de esta forma se detengan los cromosomas en la etapa de metafase para que no pasen
a la anafase y aslogremos visualizarlos ms claramente. Al agregarse la solucin
hipotnica de cloruro de potasio lo que se hizofue lisar las clulas.Al utilizar la solucin
fijadora de Carnoy, lo que se busca con la esta etapa es matar a las clulas
sindeshidratarlas, y eliminar a la vez residuos citoesquelticos; con la tcnica de fijacin
Carnoy que esta diseadapara determinar el cariotipo (es decir, el nmero y la forma
caracterstica de los cromosomas) se logra observar una mayor diferenciacin entre un
cromosoma y otro, ya que estos presentan patrones de bandeo G espontneo,el cual con
procedimientos especficos puede ser mejorado. Y por ltimo se dejaron caer las gotas de
la muestra en suspensin area para romper los ncleos y as lograr observar los
cromosomas. Al realizar la tincin cromosmica en la segunda parte de la prctica, se
observ que entre 4 y 5 minutos eran los ideales en promedio para realizar las tinciones,
pero esto dependa de cada caso ya que para algunas tinciones incluso 2 minutos eran
suficientes; esto dependa del grado de absorbencia de las clulas de cada uno de los
sujetos. El colorante era el de Giemsa que esta compuesto por Azur-Eosina-Azul de
Metileno, lo que le dio la coloracin a las clulas.Los ncleos celulares se podan observar
con una coloracin azul. Muchos de ellos no se rompieron paraobservar sus cromosomas
posiblemente debido a que no se aplic la fuerza necesaria para romper el ncleo yque
de esta manera se lograran observar los cromosomas adecuadamente.Las observaciones
que se realizaron de los cromosomas, se observaron en coloracin rojo-rosa y se
observaban junto al ncleo que se encontraba roto (por que de ah salieron) e incluso en
algunas de las observaciones selograban observar parte de los cromosomas dentro y otra
parte fuera del ncleo (no se alcanzaban a salir). Y enotras de las observaciones se vean
varios cromosomas amontonados (de varias clulas juntas en el mismo lugar)que no
correspondan a anomalas ya que los ncleos a los que correspondan los cromosomas
se encontraban juntos.Se intentaron contar los cromosomas, pero se vean demasiado
pequeos as que se utiliz aceite de inmersin,pero ya que el microscopio tena algunas
fallas tcnicas se vean borrosos y no claramente, por lo que no selograron contar de
manera adecuada los cromosomas, sin embargo algunos de los cromosomas, aunque
muypequeos, se podan observar bien, e intuyendo por el tamao se podra decir que
eran cromosomas del grupo Ay/o B los ms grandes y visibles. En total se observaron
clara y completos, 6 cariotipos, 5 a medias, y aprox. 3


CUESTIONARIO
1. Mencione y explique detalladamente la composicin de la sangre (haga
hincapi en los linfocitos).
Composicin de la sangre
Globulos rojos de la sangre El cuerpo humano adulto tiene entre 4,5 y 6 litros
de sangre. El 55% es plasma, que es la parte lquida, compuesta por agua,
sales minerales y protenas. El 45% restante se compone de glbulos rojos,
glbulos blancos y plaquetas. La sangre tambin transporta gases, hormonas,
vitaminas, glucosa, etc.
La sangre tiene la funcin de hacer llegar el oxgeno y el alimento a todas las
clulas del cuerpo, y retirar el anhdrido de carbono y las sustancias de
desecho.
Por la circulacin sangunea viajan tres tipos de clulas:
1.- Los glbulos rojos o hemates. Tambin llamados eritrocitos. Constituyen
aproximadamente el 40% del volumen sanguneo. Se producen en la mdula
sea. Son clulas en forma de disco bicncavo que no tienen ncleo. En la
sangre hay normalmente entre 4 y 5,5 millones por milmetro cbico (mm3).
Viven unos 120 das. Su tamao es de unas 8 micras (8 milsimas de
milmetro). Su funcin es transportar el oxgeno desde los pulmones hasta las
clulas de todos los tejidos corporales. Para ello utilizan una protena llamada
hemoglobina, que contiene hierro y es capaz de trasportar molculas de
oxgeno. La hemoglobina es lo que da el tpico color rojo a los hemates.
Cuando por alguna enfermedad hay falta de hemates en la sangre se padece
de anemia. El ndice hematocrito es un indicador sobre el porcentaje de
glbulos rojos que hay en la sangre por unidad de volumen; lo normal esta
entre 42% y 50% en hombres y entre el 38% y 47% en mujeres. Las
caractersticas de la membrana de los hemates definen los grupos sanguneos.
2.- Glbulos blancos o leucocitos. Son clulas defensivas que forman parte
del sistema inmunolgico. Tienen la funcin de combatir los
microorganismos y cuerpos extraos. Se producen en la mdula sea. En la
sangre hay entre 4.000 y 10.000 leucocitos por milmetro cbico. Los
glbulos blancos estn dispersos por todo el cuerpo, y muchos de ellos se
adhieren a las paredes de los vasos sanguneos o los traspasan para ir a otros
tejidos o all donde sean necesarios.
Hay varios tipos de leucocitos, que se clasifican en:
- Granulocitos: Son clulas defensivas que tienen un ncleo polimorfo con
numerosos grnulos en su citoplasma. Se clasifican a su vez en 1) neutrfilos,
2) basfilos y 3) eosinfilos. Los neutrfilos son los encargados de fagocitar o
"comerse" sustancias extraas, como las bacterias y los agentes externos que
entran en el cuerpo; son los leucocitos ms numerosos y su cantidad aumenta
cuando hay una infeccin. Los basfilos segregan sustancias anticoagulantes
y participan en el control de la inflamacin. Los eosinfilos son clulas
fagocitarias que eliminan los complejos antgeno-anticuerpo y que por su
capacidad citotxica tienen una funcin de defensa ante los microorganismos
no fagocitables, como los parsitos.
- Linfocitos: Son los leucocitos de menor tamao y las clulas del sistema
inmunolgico especializadas en regular la inmunidad adquirida. Se localizan
en los ganglios linfticos. Los linfocitos son los encargados de la produccin
de anticuerpos y de la destruccin de clulas defectuosas. Hay dos tipos: 1)
los linfocitos T tienen una funcin inmunolgica celular; 2) los linfocitos B se
encargan de fabricar los anticuerpos.
- Monocitos: Son las clulas sanguneas de mayor tamao. Despus de viajar
por la sangre llegan al tejido conectivo, donde se convierten en macrfagos.
Su funcin consiste en fagocitar microorganismos y restos celulares,
rodendolos con sus pseudpodos.
3.- Las plaquetas o trombocitos. Son partculas (no propiamente clulas) que
participan en la coagulacin de la sangre. Son necesarias para taponar
rpidamente las heridas e impedir hemorragias. Se fabrican en la mdula sea.
Tienen un tamao de 3 o 4 micras, son de forma oval y no tienen ncleo.
Suele haber entre 140.000 y 450.000 plaquetas por milmetro cbico. Hay una
enfermedad hereditaria llamada hemofilia que consiste en un dficit en la
coagulacin de la sangre.
Celulas de la sangre: globulos rojos, leucocitos, plaquetasEn la fotografa
superior se observan glbulos rojos. En la fotografa inferior se observan
varios tipos de clulas sanguneas; puede compararse su tamao.
2. Defina cromosoma autosmico

Un autosoma o cromosoma somtico es cualquier cromosoma que no sea
sexual. En el humano, los cromosomas del par 1 al 22 son autosomas, y el
par 23 corresponde a los cromosomas sexuales X e Y, tambin llamados
heterocromosomas o gonosomas. Los rasgos o caracteres ligados a los
autosomas se dice que presentan una herencia autosmica, y los rasgos o
caracteres ligados a los cromosomas sexuales o heterocromosomas se
denominan a veces son independientes de X o de Y. Algunos desrdenes
genticos son causados por un nmero anormal de cromosomas
autosomas.

3. Esquematice un cariotipo cualesquiera e identifique los cromosomas segn
la posicin de su centrmero.

Localizacin de los centrmeros, los cromosomas se dividen en: a)
metacntricos, con e centrmero ubicado en la parte media del mismo, b)
submetacntricos, con el centrmero desplazado hacia alguno de los
extremos, de tal manera que se evidencia un brazo corto (p) y uno largo
(q) y c) acrocntricos cuando el centrmero est situado muy prximo a
uno de los extremos y se observa un brazo corto muy reducido. Los
cromosomas acrocntricos tienen caractersticamente en los brazos cortos
una estructura denominada regin de organizador nucleolar (NOR) que
estn formadas de un tallo y de un satlite; estas regiones son polimficas
por lo que cualquier variacin en tamao o forma no tiene efecto
fenotpico en el individuo.

4. Defina bandas G y explique el por qu de su nombre.

Las bandas G se obtienen al digerir parcialmente a los cromosomas con
protelisis suave por tripsina y tincin con GIEMSA. Con este tipo de
bandeo, los cromosomas humanos presentan un patrn de bandas claras y
obscuras caractersticas de la especie humana que permiten detectar
alteraciones numricas y estructurales mediante un anlisis microscpico
detallado.

El mecanismo por el cual se forman las bandas G no se conoce con
exactitud. Es posible que el colorante interacte primariamente con
proteinas cromosmicas, aunque estos estudios in vitro indican que la
Giemsa slo se une significativamente a DNA. S cree que

las diferencias en las bandas claras y obscuras se pueden deber a la
distribucin constante de proteinas cromosmicas del DNA. Otra idea es
que las bandas G positivas son zonas relativamente ricas en proteinas
disulfuro, mientras que las G negativas contienen sulfidritos. Es
interesante que las bandas G y Q producen patrones muy similares aunque
los mecanismos que producen estas bandas parecen ser muy diferentes.

5. Plantea una actividad biotecnolgica donde apliques esta prctica
Para la realizacin de cariotipo
El cariotipo es el patrn cromosmico de una especie expresado a travs
de un cdigo, establecido por convenio, que describe las caractersticas de
sus cromosomas. Debido a que en el mbito de la clnica suelen ir ligados,
el concepto de cariotipo se usa con frecuencia para referirse a un
cariograma, el cual es un esquema, foto o dibujo de los cromosomas de
una clula metafsica ordenados de acuerdo a su morfologa
(metacntricos, submetacntricos, telocntricos, subtelocntricos y
acrocntricos) y tamao, que estn caracterizados y representan a todos los
individuos de una especie.
Bibliografa.
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