TESIS - Catequinas Por HPLC en Sapote

UNIVERSIDAD DE COLIMA
DOCTORADO EN CIENCIAS, REA: BIOTECNOLOGA

CATEQUINAS Y COMPATIBILIDAD EN HOMOINJ ERTOS DE Calocarpum
sapota (J ACQ.) (MERR.) Y HETEROINJ ERTOS DE Calocarpum sapota/Achras
sapota L. EN DOS ETAPAS FENOLGICAS

TESIS

QUE PARA OBTENER EL GRADO DE

DOCTOR EN CIENCIAS, REA: BIOTECNOLOGA

PRESENTA

JUAN MANUEL GONZLEZ GONZLEZ

ASESORES

DR. OSCAR REBOLLEDO DOMNGUEZ
DRA. LOURDES VIRGINIA DAZ J IMNEZ

COASESOR

DR. J AIME MOLINA OCHOA

TECOMAN, COLIMA, MXICO. J UNIO DE 2004.
CONTENIDO

Pg.
NDICE DE CUADROS..................................................................................i
NDICE DE FIGURAS....................................................................................ii
RESUMEN........................................................................................................iii
ABSTRACT......................................................................................................iv

I INTRODUCCIN.........................................................................................1

II ANTECEDENTES....................................................................................7
2.1 Propagacin por injerto................................................................................7
2.1.1 Injertos en especies herbceas..............................................................7
2.1.2 Injertos en frutales leosos...................................................................10
2.1.2.1 Anonceas......................................................................................10
2.1.2.2 Kiwi..................................................................................................11
2.1.2.3 Acerola............................................................................................12
2.1.2.4 Quercus...........................................................................................12
2.1.2.5 Macadamia......................................................................................12
2.1.2.6 Tamarindo.......................................................................................13
2.2 Efectos de los portainjertos en diferentes especies......................13
2.2.1 Herbceas.............................................................................................13
2.2.2 Aguacate...............................................................................................15
2.2.3 Mango...................................................................................................16
2.2.4 Maple....................................................................................................16
2.2.5 Acacia...................................................................................................17
2.2.6 Pino.......................................................................................................17
2.2.7 Caducifolios...........................................................................................18
2.3 Propagacin de sapotceas.........................................................................21
2.4 Etapas fenolgicas de plantas leosas........................................................23
2.4.1 Defoliacin-refoliacin.............................................. .............................23
2.4.2 Floracin-fructificacin...........................................................................25
2.4.3 Dormancia-actividad...............................................................................27
2.5 Polifenoles en plantas y su deteccin por cromatografa lquida
de alta resolucin (HPLC)............................................................................35
2.5.1 Haba......................................................................................................35
2.5.2 Abedul....................................................................................................36
2.5.3 Gerbera..................................................................................................36
2.5.4 Guaran.................................................................................................37
2.5.5 Pino........................................................................................................37
2.5.6 Papaya...................................................................................................37
2.5.7 Tamarindo..............................................................................................38
2.5.8 T...........................................................................................................38
2.5.9 Caducifolios............................................................................................39
2.6 Incompatibilidad en homo y heteroinjertos...................................................44
2.6.1 Tipos......................................................................................................44
2.6.1.1 Localizada.....................................................................................44
2.6.1.1.1 Categorias.........................................................................45
2.6.1.2 Translocada...................................................................................45
2.6.2 Castaa..................................................................................................46
2.6.3 Maple......................................................................................................48
2.6.4 Kiwi.........................................................................................................49
2.6.5 Leucaena................................................................................................50
2.6.6 Caducifolios............................................................................................50
2.7 Incompatibilidad histolgica en homo y heteroinjertos.............59
2.7.1 Herbceas...............................................................................................62
2.7.2 Castaa...................................................................................................73
2.7.3 Mango......................................................................................................73
2.7.4 Caducifolios.............................................................................................75

III MATERIALES Y MTODOS .................................................................79
3.1 Localizacin geogrfica.................................................................................79
3.2 Materiales......................................................................................................79
3.2.1 Equipo de campo.....................................................................................79
3.2.2 Equipo de laboratorio..............................................................................79
3.2.3 Material biolgico.....................................................................................81
3.3 Mtodos.........................................................................................................82
3.3.1 Homoinjertos y heteroinjertos..................................................................82
3.3.2 Preparacin de las muestras...................................................................83
3.3.3 Diseo experimental................................................................................83
3.3.4. Anlisis de datos...84

IV RESULTADOS.............................................................................85
4.1 Compatibilidad entre homoinjertos de mamey (C. sapota)............................85
4.1.1 Etapa fenolgica de defoliacin..............................................................85
4.1.2 Etapa fenolgica de refoliacin...............................................................86
4.2 Compatibilidad entre heteroinjertos de C. sapota/A. sapota..........................87
4.2.1 Etapa fenolgica de defoliacin.............................................................87
4.2.2 Etapa fenolgica de refoliacin..............................................................88
4.3 Determinacin de catequinas por HPLC en heteroinjertos............................89
4.3.1 Portainjerto chicozapote (A. sapota) injertado en la etapa
fenolgica de defoliacin.......................................................................89
4.3.2 Portainjerto chicozapote (A. sapota) injertado en la etapa
fenolgica de refoliacin........................................................................90
4.4 Determinacin de catequinas por HPLC en homoinjertos.............................91
4.4.1 Portainjerto mamey (C. sapota) injertado en la etapa
fenolgica de refoliacin........................................................................91
4.4.2 Portainjerto mamey (C. sapota) injertado en la etapa
fenolgica de defoliacin y con xito...................................................92
4.4.3 Portainjerto de mamey (C. sapota) injertado en la etapa
4.4.4 Vareta de mamey (C. sapota) injertada en la etapa
fenolgica de refoliacin.......................................................................94
4.4.5 Vareta de mamey (C. sapota) injertada en la etapa
4.5 Nmero de hojas en injertos con xito..........................................................97
4.6 Porcentaje de homoinjertos y heteroinjertos con xito.................................98

V DISCUSIN.................................................................................100
5.1 Concentracin de catequina y epicatequina en heteroinjertos de
C. sapota/A. sapota y homoinjertos de C. sapota en dos
etapas fenolgicas.......................................................................................100
5.2 Porcentaje de homoinjertos de C. sapota y de heteroinjertos de
C. sapota/A. sapota con xito......................................................................102
5.3 Compatibilidad en homoinjertos de C. sapota y heteroinjertos
de C. sapota/A. sapota ...............................................................................103

VI CONCLUSIONES.......................................................................107

VII LITERATURA CITADA........................................................................108

NDICE DE CUADROS

No. Pg.

1 Polifenoles presentes en tejidos de corteza, floema, xilema,
hojas, fruta verde y fruta madura de rboles de cerezo
(Prunus avium) (Tarnai et al., 1994)............................................................40

2 Relacin de investigadores, tipo de muestra y sustancias identificadas
usando HPLC...............................................................................................43

3 Relacin de accesorios y consumibles para HPLC......................................80

4 Deteccin de catequina y epicatequina en extractos de tallos y varetas
de mamey (C. sapota) y chicozapote (A. sapota) por HPLC
(mg/g de muestra) en dos etapas fenolgicas.....................97

5 Orden de brotacin y nmero de hojas en homoinjertos de
mamey (C. sapota) con xito.......................................................................98

NDICE DE FIGURAS

No. Pg.

1 Frmula estructural de la catequina (Seto et al., 1997)...............................81

2 Frmula estructural de la epicatequina (Seto et al., 1997)..........................81

3 Homoinjerto con xito en la etapa fenolgica de defoliacin.....................85

4 Homoinjerto sin xito en la etapa fenolgica de refoliacin.......................86

5 Aserrado de la unin portainjerto-injerto de un homoinjerto
sin xito en la etapa fenolgica de refoliacin............................................87

6 Aserrado de la unin portainjerto-injerto de un heteroinjerto
sin xito en la etapa fenolgica de defoliacin.............................................88

7 Aserrado de la unin portainjerto-injerto de un heteroinjerto
sin xito en la etapa fenolgica de refoliacin..............................................89

8 Cromatograma de la muestra del portainjerto chicozapote (A. sapota)
injertado en la etapa fenolgica de defoliacin............................................90

9 Cromatograma de la muestra del portainjerto chicozapote (A. sapota)
injertado en la etapa fenolgica de refoliacin.............................................91

10 Cromatograma de la muestra del portainjerto mamey (C. sapota)
injertado en la etapa fenolgica de refoliacin.............................................92

injertado en la etapa fenolgica de defoliacin y con xito.........................93

injertado en la etapa fenolgica de defoliacin...........................................94

13 Cromatograma de la muestra de vareta de mamey (C. sapota)
injertada en la etapa fenolgica de refoliacin...........................................95

14 Cromatograma de la muestra de vareta de mamey (C. sapota)
injertada en la etapa fenolgica de defoliacin...........................................96

AGRADECIMIENTOS

Al Supremo Maestro.

A la Universidad de Colima y a su Rector, Dr. Carlos Salazar Silva.

A la Facultad de Ciencias Biolgicas y Agropecuarias y a su exdirector, Ing.
Rodolfo Valentino Morentn Delgado.

Al Consejo Nacional de Ciencia y Tecnologa.

A mis Asesores: Dr. Oscar Rebolledo Domnguez, Dra. Lourdes Virginia Daz
J imnez y Dr J aime Molina Ochoa.

A la Dra. Pilar Errea Abad y Dra. Mara ngeles Moreno Snchez.

A los integrantes del Comit Revisor, formado por: Dr. J avier Faras Larios, Dr.
J os Gerardo Lpez Aguirre, Dr. Roberto Lezama Gutirrez y Dra. Mara de los
Remedios Cigales Rivero.

A todos los Profesores y Alumnos del Posgrado en Biotecnologa que influyeron en
la elaboracin de este trabajo.

Al Ing. Martn Barajas Delgado.
DEDICATORIA

A mi esposa Ana Bertha Gonzlez Urea.

A mis hijos J uan Saulo, Ana Salom, Samuel y Rosalina.

A mis hermanos.

A mis amigos.

A mis compaeros de la DT-6
RESUMEN

Se realiz un experimento para determinar la relacin compatibilidad/incompatibilidad
entre homoinjertos y heteroinjertos de sapotaceas en dos etapas fenolgicas e identificar
las sustancias responsables de dicho fenmeno. Para tal efecto se realizaron heteroinjertos
de mamey (Calocarpum sapota (J acq.) (Merr.) sobre chicozapote (Achras sapota L.)
durante la etapa fenolgica de defoliacin de la planta donadora de vareta y durante la etapa
de refoliacin. Asimismo se efectuaron homoinjertos de C. sapota sobre C. sapota en las
dos etapas fenolgicas. En ambas se tomaron muestras de tejidos de portainjertos y varetas
al injertar y a los 60 das, para su anlisis por HPLC. Los resultados indican que los
heteroinjertos de C. sapota sobre A. sapota durante las dos etapas fenolgicas presentaron
un 100% de incompatibilidad y por lo tanto ningn heteroinjerto tuvo xito. En lo que
respecta a los homoinjertos de C. sapota, durante la refoliacin, los resultados fueron
similares, ya que presentaron el 100% de incompatibilidad y por lo tanto ningn
homoinjerto tuvo xito. Por el contrario, durante la etapa de defoliacin, se obtuvo el 80
% de xito. La deteccin de sustancias por HPLC como responsables de la
incompatibilidad, en muestras tomadas el mismo da del injerto, en los portainjertos A.
sapota injertados con vareta de C. sapota en defoliacin, reportaron 17.5 y 32.3 mg/g de
catequina y epicatequina, respectivamente. Las concentraciones en los portainjertos A.
sapota, cuando se injert en refoliacin, fueron las segundas ms altas del experimento,
con: 14.1 y 24.7 mg/g. En los portainjertos C. sapota injertados en refoliacin, se
detectaron 7.2 y 13.2 mg/g. Los portainjertos C. sapota injertados en defoliacin tuvieron
6.8 y 11.9 mg/g. Las varetas de C. sapota con hojas tuvieron 6.4 y 12.4 mg/g. Las varetas
de C. sapota en defoliacin reportaron la concentracin ms baja de catequina y
epicatequina; 5.1 y 9.5 mg/g. Las muestras de portainjertos de C. sapota injertados en
defoliacin y con xito, tuvieron 7.1 y 10.8 mg/g. Se concluye que las catequinas son las
responsables de la incompatibilidad de heteroinjertos de C. sapota/A. sapota en ambas
etapas y en los homoinjertos deC. sapota en la etapa de refoliacin.

Palabras clave: incompatibilidad, HPLC, catequinas, homoinjertos, heteroinjertos,
Sapotaceae.
ABSTRACT

The responsible substances involved in the phenomenon of compability/incompatibility in
sapotaceae species during two phenological stages were elucidated. An experiment was
carried out to determine the compatibility/incompatibility relationship between homografts
and heterografts of Sapotaceae species during two phenological stages, and to identify the
responsible substances involved in the phenomenon. In order to determine the
compatibility/incompatibility between sapotaceae species, heterograftings were made using
the mamey (Calocarpum sapota (J acq.) Merr.) as scion, and chicozapote (Achras sapota
L.) was used as rootstock. Grafting was conducted during the phenological stage of
defoliation of the scion donor plant, as well as during budding. Homografts were also made
using C. sapota on C. sapota in both phenological stages. Plant tissue samples were
obtained from scions and rootstocks in both phenological stages, and they were used for
HPLC analysis. Heterografts (C. sapota on A. sapota) showed 100% incompatibility in
both stages, and lack of success during grafting was obtained, similar results were registred
with the homografts (C. sapota on C. sapota) during the budding stage, however during the
defoliation stage 80% of successful grafting was obtained. The responsible substances
involved in the phenomenon of compatibility/incompatibility using samples taken during
the grafting day and 60 days after (C. sapota grafted on A. sapota during defoliation stage),
were identified as: catechin, and epicatechin at a concentration of 17.5, and 32.3 mg/g,
respectively. Levels of both substances were 14.1 and 24.7 mg/g, when the grafts were
made during the budding stage. Concentrations in the C. sapota grafts during the budding
stage were 7.2 and 13.2 mg/g. Rootstocks of C. sapota grafted during the defoliation stage
had 6.8 and 11.9 mg/g of the substances mentioned above. The scions of C. sapota with
leaves had 6.4 and 12.4 mg/g. Scions of C. sapota in the defoliation stage produced the
lowest concentration of catechin, and epicatechin with 5.1, and 9.5 mg/g. Samples of
rootstocks C. sapota grafted during the defoliation stage, and those with successful
grafting had 7.1 and 10.8 mg/g. Catechins are the responsible substances of incompatibility
in the heterografts of C. sapota/A. sapota in both phenological stages, as well as during the
budding stage in the homografts on C. sapota..
Key words: incompatibility, HPLC, catechins, homografts, heterografts, Sapotaceae.
I INTRODUCCIN

El cultivo de especies frutales constituye desde sus inicios una actividad de gran
importancia econmica y social dentro del sector agrcola; segn las estadsticas siempre ha
presentado una mayor redituabilidad promedio que el resto de especies cultivadas, misma que
se estima en una proporcin de 2.3 a 9 veces mayor por unidad de superficie. Ante tal
circunstancia, socialmente, el sector de la poblacin beneficiado directa e indirectamente es
importante, pues adems de las personas que participan como productores y los que de ellos
dependen, tambin hay un sector de fuerza de trabajo que se emplea para desarrollar las
actividades dentro de los huertos frutcolas, tambin arraiga a la poblacin, por ser una fuente
de trabajo permanente, asimismo beneficia a la poblacin que participa en los proceso de
comercializacin e industrializacin (INEGI-Colegio de Postgraduados, 1991).

Injertar es el arte de unir entre s dos porciones de tejido vegetal viviente de tal manera
que se unan y posteriormente crezcan y se desarrollen como una sola planta (Hartmann y
Kester, 1992). El injerto est formado por dos partes: la inferior que constituye el sistema
radicular, llamada portainjerto o patrn y la superior, que es una rama o yema del clon que se
desea propagar, se denomina pa o vareta y normalmente son compatibles (Mcmillan, 1979).
Uno de los objetivos del injerto es reproducir plantas que son imposibles de reproducir por
otro mtodo vegetativo (Wright, 1973).

Un rbol frutal injertado, es en general, la asociacin de dos individuos, el patrn y el
injerto, a los que se les fuerza a vivir en estrecha relacin, influyndose ambos mutuamente y
apareciendo en casos extremos sntomas de incompatibilidad (Moreno et al., 1987).

Los portainjertos se usan para propagar rboles frutales caducifolios desde hace 2000
aos. Muchos de los portainjertos sobresalientes, proporcionan material con buenas
caractersticas para la propagacin de frutales selectos, sus efectos se reflejan en el
crecimiento del tallo, vigor, hbito de crecimiento, precocidad, abundancia de la floracin,
relacin de flores a frutos, eficiencia de la produccin y la adaptabilidad a diferentes
condiciones ambientales y edficas (Webster, 1995a).
2
Numerosos artculos cientficos que tratan sobre la compatibilidad e incompatibilidad
han sido publicados, y sin embargo, mientras no se establezcan criterios bioqumicos y
fisiolgicos para predecir el resultado de procedimientos de injerto, la investigacin por
prueba y error del pasado establece mnimas guas y expectativas, que los fruticultores
tienen que aprender y aceptar y producir potencialmente combinaciones de injerto
incompatibles aunque el patrn y la vareta pertenezcan a la misma especie (Santamour, 1992).

La estabilidad en los cultivares de los rboles frutales se asegura al injertar sobre
portainjertos particulares y por lo tanto, un frutal se considera como una simbiosis entre la
vareta y el portainjerto (Errea, 1998).

Las razones para desarrollar portainjertos de rboles frutales son procurar el bienestar
de los productores. Los principales mtodos de propagacin de portainjertos describen los
criterios para seleccionar portainjertos clonales, otros atributos son la resistencia a plagas y
enfermedades, a condiciones no favorables del clima o la habilidad de enanizar al cultivo, que
son grandes prioridades. As nuevos mtodos de propagacin toman su turno como
prioritarios en la propagacin de clones sobresalientes (Webster, 1995b).

Hasta ahora, la gran dificultad que ha confrontado el desarrollo de la fruticultura
tropical ha sido la seleccin de buenas variedades de las diversas frutas tropicales y su
multiplicacin clonal para establecer plantaciones comerciales de variedades selectas. Las
especies de la familia de las sapotceas son especialmente difciles de multiplicar por
injerto, debido a la presencia de ltex con abundantes polifenoles en la zona del cambium
(Lazo, 1957).

El mamey zapote (Calocarpum sapota (J acq) Merr.) est considerado como una de las
especies ms difciles de propagar asexualmente, por lo que la mayora de los rboles
existentes en la regin del Soconusco, Chiapas son de pi franco y presentan gran variabilidad
tanto en su capacidad productiva como en calidad de fruta (Quilantan, 1979).

3
El mamey zapote es un frutal nativo de los trpicos americanos se propaga
principalmente por semilla y dura en promedio 15 aos para empezar a producir, ya que la
propagacin por injerto se considera difcil. Una modificacin del injerto de enchapado lateral
en combinacin con das calurosos, noches frescas y baja humedad, se ha determinado como
la mejor estrategia para injertar el mamey zapote bajo las condiciones del sur de la Florida
(Ogden et al., 1982).

Las plantas de mamey desarrolladas en viveros o campos exhiben una fuerte
dominancia apical. En plantas jvenes y adultas, las yemas axilares son tan pequeas que es
difcil determinar si ellas estn suficientemente desarrolladas para su uso en diferentes tipos de
injerto. Las plantas jvenes muestran una yema terminal grande y generalmente carecen de
ramas hasta que la planta alcanza aproximadamente 2 m de altura. La remocin de las yemas
terminales rompe el mecanismo de la dominancia apical y produce un mayor porcentaje de
injertos logrados, inclusive en el verano cuando normalmente los injertos no prenden, ya que
el crecimiento es ms activo (Ogden et al.,1984).

Las diferencias en el porcentaje de xito en injertos de zapote mamey con el tipo de
injerto enchapado lateral, son sumamente marcadas en diferentes pocas del ao; ya que se
obtiene el 10% de xito en agosto, cuando las varetas usadas provienen de rboles con hojas,
contra 78.3% cuando se injerta durante febrero-abril usando varetas de rboles defoliados;
asimismo, en cuanto a altura, los injertos que se realizan a 20 cm arriba del cuello de la
planta tienen mas xito (Quilantan, 1979).

El injerto de copa en el zapote mamey es extremadamente difcil, una vez que ha
floreado y fructificado, pero puede ser ventajoso ya que se eliminan caractersticas
indeseables de calidad y pueden mejorar la produccin y resistencia a plagas y enfermedades.
Si los rboles injertados se congelan abajo de la unin del injerto, el injerto de copa puede
lograr que los rboles vuelvan a producir. Autores como Ogden et al., (1983) determinan que
las copas de rboles francos preparadas para usarse como interinjertos, permiten el uso de
varetas maduras y madera revertida a juvenil, para injertar mamey. Adems el
experimento tiene
4
xito durante el verano, estacin en la que generalmente los injertos no son posibles.

Las interacciones clula-clula envuelven el reconocimiento y la incompatibilidad. Los
principales eventos en la ontogenia de un injerto compatible son: adhesin del portainjerto y la
vareta, la derivacin de clulas en la interfase del injerto y el restablecimiento de los haces
vasculares. En la incompatibilidad de injerto, algunos injertos presentan sntomas de
inmediato, pero en ocasiones slo despus de 20 aos se presentan signos visibles de
incompatibilidad. Las principales causas de incompatibilidad son: incorrecta unin mecnica
entre patrn e injerto, deshidratacin de los tejidos, temperaturas adversas y/o inadecuado
rgimen de luz, falta de proliferacin de callo, rechazo fisiolgico de una o las dos partes, y la
diferenciacin anormal de los tejidos vasculares (que es la ms comn). La incompatibilidad
localizada incluye combinaciones en las cuales aparentemente las reacciones de
incompatibilidad dependen del contacto actual entre el patrn y el injerto (Moore, 1981).

Los derivados fenlicos representan el gran grupo de los llamados productos
secundarios de las plantas sintetizados por las plantas superiores; exhiben una amplia
variedad de funciones, no solo para las plantas. Todos los rganos de las plantas superiores
(con algunas excepciones) desempean casi exclusivamente un metabolismo aerbico.
Algunas veces ellos son igualmente sujetos a la sobresaturacin de oxgeno bajo altas
intensidades de luz durante largos perodos de tiempo. Como una consecuencia, las estrategias
antioxidantes han sido introducidas desde el desarrollo del fotosistema II y tambin la
evolucin del oxgeno por los precursores de las cianobacterias desde hace 3.5 x 10
9
aos
(Elstner, 1994).

Las catequinas pertenecen al grupo de los polifenoles; se encuentran en la naturaleza y
en el medio ambiente, tienen inters desde muchos puntos de vista: son componentes de la
pared celular de las plantas, preforman las defensas qumicas antimicrobianas e inducen
resistencia a la infeccin por patgenos (Mtraux y Raskin, 1993); son antioxidantes,
astringentes, proporcionan sabor amargo, color, reacciones de bronceado, oxidacin de
sustratos y son constituyentes de las protenas; se han aislado de un amplio rango de plantas
vasculares, con ms de 8000 componentes individuales conocidos, actan tambin como
5
fotorreceptores, atrayentes visuales, repelentes de consumidores y selectores de luz. Hay
evidencias que asocian las enfermedades crnicas y la tensin oxidativa con la distribucin y
la estructura bsica de polifenoles antioxidantes de las plantas (Pietta, 2000). Tambin tienen
efectos biolgicos relacionados con la biovariabilidad y los cambios metablicos en el
intestino humano y su absorcin por el organismo (Urquiaga y Leighton, 2000).

Diversos investigadores han encontrado la presencia de catequinas cuando hay
incompatibilidad entre injertos: Decooman et al.,(1996) localizan en el rea de injerto de
microinjertos in vitro de Eucalyptus gunnii L., una tpica acumulacin de cidos glico,
elgico, gentsico, p-cumarnico y catequina.

Errea et al., (2001) por su parte, localizan compuestos fenlicos en algunas reas
(10% del rea total de contacto) de la superficie de combinaciones compatibles de chabacano
(Prunus armeniaca L.) sobre diferentes portainjertos de ciruelo (Prunus spp.) en tejidos de
callo in vitro la tercera semana despus de injertar, en contraste, en las combinaciones
incompatibles detectan una alta acumulacin de fenoles, entre otros las catequinas.

Las plantas en forma natural tienen catequinas en sus tejidos que les sirven entre otras
cosas como repelentes de insectos y de fitopatgenos y como mecanismo de rechazo para
objetos y sustancias extraas, sobre todo cuando existe alguna herida en el floema o xilema.
Al realizar la prctica del injerto es indispensable cortar los tejidos de ambos componentes y
colocarlos en contacto ntimo de tal forma que las clulas parenquimatosas se entremezclen, se
desarrolle el callo, se restablezcan los haces vasculares y el injerto tenga xito. En el caso de
las sapotceas se conoce empricamente que no es fcil el homoinjerto de C. sapota y se
desconoce algn resultado en los heteroinjertos. C. sapota presenta adems dos etapas
fenolgicas caractersticas en cuanto a defoliacin y refoliacin que lo hacen una planta
especial por su variacin en el contenido de sustancias en cada etapa; por lo tanto, se requiere
cuantificar la presencia y los efectos de las catequinas en homoinjertos y heteroinjertos de
sapotceas para formular una estrategia de propagacin que redunde en un alto ndice de
injertos con xito.

6
Con base a lo antes mencionado se plante la siguiente hiptesis:

La acumulacin de catequina y epicatequina en la zona de unin del injerto es
responsable de la incompatibilidad en homoinjertos de C. sapota y en heteroinjertos deC.
sapota/A. sapota en la etapa fenolgica de refoliacin.

Para dar respuesta a esta hiptesis se plante el siguiente objetivo general:

Evaluar la compatibilidad/incompatibilidad en homoinjertos de C. sapota y
heteroinjertos de C. sapota/A. sapota en las etapas fenolgicas de defoliacin y refoliacin.

Con los siguientes objetivos particulares:

- Determinar la presencia de catequina y epicatequina en homoinjertos de C. sapota en las
etapas fenolgicas de defoliacin y refoliacin.
- Determinar la presencia de catequina y epicatequina en heteroinjertos de C. sapota/A. sapota
en las etapas fenolgicas de defoliacin y refoliacin.
- Cuantificar los homoinjertos de C. sapota y los heteroinjertos de C. sapota/A. sapota, con
xito en las etapas fenolgicas de defoliacin y refoliacin
II ANTECEDENTES

2.1 Propagacin por injerto

El injerto puede ser usado por una gran variedad de razones; como crear formas,
regular el crecimiento, inducir resistencia a plagas y enfermedades del suelo y del medio,
incrementar la precocidad y calidad de la fruta, mejorar la produccin de madera y de plantas
de ornato para el paisaje, entre otros (Hutchinson, 1980).

Al injertar se afectan o modifican los frutos de ctricos y caducifolios, considerando
sobre todo la preferencia del consumidor en cuanto a: precocidad, tamao, forma, color,
firmeza, apariencia, cscara, slidos solubles, acidez, sabor, contenido de semillas y textura
de la fruta, as como la carga de cosecha, tamao de los rboles, ciclos fenolgicos anuales,
efectos de las relaciones agua-planta y del transporte de azcares y adems la tasa de
respiracin de la fruta (Castle, 1995).

El injerto es una de las tecnologas agrcolas importantes en la prctica de la
horticultura, en la propagacin y mejoramiento de rboles frutales, hortalizas y flores, y es uno
de los mtodos y tcnicas valorables en la investigacin cientfica bsica. Sin embargo, el
conocimiento de este estudio fundamental es parcial, existiendo serios impedimentos para la
aplicacin de los injertos (Shanfa y Yanru, 1999).

2.1.1 Injertos en espcies herbceas

La produccin vegetal usando plantas injertadas tuvo sus inicios en Asia en 1920. El
injerto se ha convertido desde entonces en una especialidad popular en los vegetales-fruta en
espaldera, creciendo en invernaderos. En 1990, el rea usando plantas injertadas en J apn y
Corea lleg al 59% en la produccin de sandas, berenjenas, pepino, tomates y meln. El
injerto es muy efectivo para el control de nemtodos y enfermedades del suelo, pero es
laborioso y requiere tiempo, espacio y materiales. Recientemente la produccin de plantas
injertadas ha sido difcil para los horticultores ya que no es una labor rpida. La aclimatacin
8
de los injertos ha sido estudiada y la supervivencia de plantas injertadas por los nuevos
mtodos (aproximacin de lengeta, de hendidura, de corte superior, de aproximacin y
enchapado lateral) e instrumentos de injertar, se ha incrementado (Oda, 1995).

Actualmente las sandias, melones berenjenas y los pepinos son injertados antes de
trasplantarlos al campo o invernadero, el propsito es reducir los ataques de enfermedades del
suelo y salinidad, tolerancia al fro y a malezas, incremento de vigor y la absorcin de
nutrientes y la extensin de la duracin econmica de la cosecha. En Estados Unidos o en
otros pases donde el uso del suelo no es intensivo, es poco practicado, comparado con paises
Europeos o Asiticos donde el uso del suelo es intensivo y el rea cultivada es pequea (J ung,
1994).

En 1993 el porcentaje del rea comercial cultivada con hortalizas injertadas en
invernaderos corresponde a 81% en Corea y 54% en J apn.. El proceso de injertar es una labor
intensiva y laboriosa, adems requiere de un perodo limitado; por ejemplo, 3000 injertos de
pepino requieren seis horas de labor de siete personas. Adems se requieren millones de
plantas para los agricultores en la misma poca, por eso se desarrollan robots para injertar
automticamente, con uniformidad y bajo costo (Kurata, 1994).

Con el mismo objetivo, Oda et al., (1994) disean un plato para injertos mltiples,
horizontales y simultneos de plantulas de tomate. Al aplicar presin entre las superficies de
los cortes de las varetas y los portainjertos, se incrementa la tasa de supervivencia de 56 a
93%. La productividad de las plantas producidas por injerto horizontal tiende a ser ms bajo
que las plantas producidas por el injerto convencional de hendidura.

Asimismo, Oda et al., (1995) desarrollan instrumentos mecnicos para injertar por el
mtodo de clavija. Para confirma la sustentabilidad de los instrumentos para injertar
plntulas de tomate desde el punto de vista crecimiento y produccin, injertan por pequeas
clavijas plantas en macetas de forma instrumental y manual. Como resultado, no se
remarcan diferencias entre los injertos mecnicos de clavija con los instrumentos, y los
injertados a mano, en cuanto a la supervivencia, crecimiento y produccin despus de
9
plantadas, ya que el nmero de injertos con xito es bajo (40%) tanto en el injertador
mecnico, como en los injertos convencionales.

Posteriormente, Oda et al., (1997) injertan plntulas de berenjena (Solanum melongena
L.) con un desarrollo de dos hojas, sobre berenjena Scarlet (Solanum integrifolium Poir.) a
mano y con un robot. Las varetas y los portainjertos son fijados con un tubo elstico en los
injertos a mano, y con un endurecedor adhesivo para el injerto robtico. Despus de la
aclimatacin, las plantas injertadas son trasplantadas cuando tienen entre tres y once hojas en
invernadero. Las plantas injertadas por el robot muestran un alto porcentaje de supervivencia,
y alcanzan entre tres y once hojas ocho das ms temprano en promedio, que las injertadas a
mano. Los tallos son largos, y la masa fresca de los vstagos y la produccin de fruta de las
plantas son altas para las de tres hojas, comparadas con las de once hojas a la plantacin,
independientemente del mtodo de injerto. El crecimiento vigoroso y la alta produccin
resultan ausentes en los injertos robticos para las plantas de once hojas al trasplante, pero son
presentes para las plantas con tres hojas a la plantacin.

Golecki et al., (1998) usan injertos interespecficos e intergenricos de Cucurbitceas
para estudiar la movilidad de protenas-P estructurales en el floema. Cuando el meln
(Cucumis sativus L.), es injertado sobre portainjertos de Cucurbita spp., al menos nueve
protenas adicionales aparecen por electroforesis del exudado de la vareta, 9-11 das despus
de injertar. La aparicin de protenas adicionales est correlacionada con el establecimiento de
puentes de floema a travs de la unin del injerto. La coincidencia experimental establece que
las protenas estructurales o sus precursores son traslocados por el floema. Esta traslocacin
es un fenmeno universal en Cucurbitceas mostrado por comparacin selectiva para protenas
adicionales en 11 combinaciones de injertos, al usar (Benincasa hispida (Thumb.) Cogn),
(Citrullus colocynthis (L.) Schrad.), (Cucumis melo L.), (C. sativus L.), (Cucurbita ficifolia
Bounche), (Cucurbita maxima Duchesne ex Lam.) y (Trichosanthes cucumeriana var. lobata
Roxb.). De acuerdo a esta seleccin la direccin de trasmisin de protenas adicionales
depende de la combinacin. Mientras algunos injertos fallan al mostrar cambio, algunos se
comportan como donadores de protenas adicionales y mantienen inmviles a otras; C.
sativus se identifica consistentemente como un aceptor de protenas.
10

2.1.2 Injertos en frutales leosos

2.1.2.1 Anonceas

Lederman et al., (1997) ensayan diferentes mtodos de injerto en guanbana (Annona
muricata L.); de escudo, de parche, de ltigo y de hendidura, sobre portainjertos de 10 y 12
meses de edad, bajo condiciones de vivero. Cada parcela se constituye con 10 plantas del
mismo tamao y dimetro de tallo; para asegurar cual de los cuatro tipos de injerto es el
mejor, se hacen todos al mismo tiempo y con intervalos de dos meses. Los portainjertos de
12 meses de edad resultan los mejores con el mtodo de parche y 97.5% de injertos con
xito.

Asimismo, Ponce (1979) injerta guanbana (Annona muricata L.) por los mtodos de
astilla y enchapado lateral, sobre los portainjertos: (Annona sp. Af.); (A. lutescens L.); (A.
cherimola Mill.); (A. diversifolia Saff.); (A. muricata L.); (A. reticulata L.) y (Rollinia
jimenenezii Sch.), encuentra diferencias significativas en altura de planta y porcentaje de
prendimiento a los 168 das despus de injertar. El enchapado lateral resulta el mejor, con los
portainjertos A. muricata, A. reticulata y Annona sp.; sobre A. lutescens y R. jimenezii los
injertos se desarrollan notablemente clorticos; sobre A. diversifolia el follaje presenta
coloraciones oscuras similares a las quemaduras del sol y los injertos sobre A. cherimola
crecen muy poco.

Por su parte, Vidal et al., (1999) injertan guanbana, (Annona muricata L.) variedad
"Sin Fibra" sobre A. muricata L.; A. reticulata L.; A. purpurea L.; A. cherimola Mill.; A.
montana L.; A. spinosa L.; A. squamosa L. y homoinjerto "Sin Fibra", con el injerto
enchapado lateral y varetas subterminales. Como resultado, sobresalen los portainjertos A.
muricata var. "Sin Fibra" y A. montana. Las caractersticas anatmicas de incompatibilidad
que se presentan en los injertos fallidos son; depsito de taninos y sustancias atpicas
(fitoalexinas y polifenoles) en fibras y vasos, ausencia funcional del xilema secundario y
desprendimiento del injerto.
11
2.1.2.2 Kiwi

Lindsay et al., (1995): evaluan tres tcnicas para mejorar plantas de kiwi: fusin de
protoplastos in vitro para hbridos somticos, co-cultura de protoplastos in vitro para
quimeras, y manipulacin de injertos in planta para quimeras periclinales. Los mtodos son
desarrollados inicialmente para dos especies con madera del gnero Actinidia. Se inducen
quimeras periclinales en las uniones de injerto in planta e in vitro entre Actinidia arguta L. y
Actinidia deliciosa L. De los injertos in planta, todos los brotes adventicios resultan A. arguta.
De los injertos in vitro, 75% de los brotes adventicios regenerados son A. deliciosa y ninguno
fue quimrico. Cada tcnica tiene potencial para producir nuevas plantas, No obstante, la
probabilidad de xito es baja y por lo tanto se requiere un gran nmero de regenerantes para
seleccionar las plantas deseadas.

El azcar libre y el contenido cido de frutos de actinidia (Actinidia arguta L.)
son
estudiados por Boyes et al., (1997a) y encuentran diferencias significativas al comparar el
contenido de cido y azcar en el kiwi (Actinidia deliciosa) cv. Hayward, los anlisis de A.
arguta y 12 combinaciones portainjerto / vareta de A. arguta demuestran que las influencias
significativas son ocasionadas por el portainjerto y la vareta. Las influencias significativas no
son consistentes en un portainjerto o vareta en particular. Las diferencias en la composicin de
la fruta de A. arguta y A. deliciosa, en parte se deben a factores fisiolgicos, tales como la
fecha de cosecha, y la percepcin de madurez de consumo; as como a un diferente estado
de madurez de la fruta.

Paralelamente Boyes et al., (1997b) miden la actinidina, (proteasa del fruto del kiwi),
en varias especies de Actinidia durante su crecimiento, en la cosecha y durante su
almacenamiento. Los niveles de actinidina en la fruta de kiwi (Actinidia deliciosa L.) cv.
Hayward, son comparados a los niveles en fruta de plantas de varias especies para ser usadas
como portainjertos, medidas en la etapa corte-crecimiento. La fruta muestra un amplio rango
de concentracines de actinidina, las cuales se influencan por el genotipo del portainjerto e
12
injerto. Los portainjerto con bajos contenidos de actinidina los transmiten a los frutos de
los
injertos, y cuando tienen niveles altos, los injertos tambin los tienen.

2.1.2.3 Acerola

Neto et al., (1996) estudian tres mtodos de injerto (hendidura, yema de parche y de
empalme), en acerola (Malpighia glabra L.) que son como tratamientos principales; y la
proteccin de los injertos y yemas con una bolsa de plstico o sin proteccin, como
subtratamientos. La yema de parche obtiene los mejores resultados entre las tcnicas de
propagacin estudiadas, con un alto porcentaje (86.7%), cuando la yema es protegida. La
proteccin del injerto o yema con bolsas de plstico incrementa consistentemente el porcentaje
para todos los mtodos estudiados.

2.1.2.4 Quercus

Zaczek y Steiner (1997) establecen pruebas de injerto y enraizamiento para seguir el
desarrollo y la habilidad para enraizar de yemas individuales (meristemos axilares y apicales)
de Quercus rubra L. Para lo cual injertan yemas de 64 varetas individualmente sobre
portainjertos. Los resultados muestran que los brotes de injertos originados de varetas
proximales se desarrollan ms que las de origen distal. Todos los injertos tienen diferencia
significativa en el desarrollo de races. Estos resultados demuestran que el injerto puede servir
para seleccionar meristemos con potencial para alto xito en el enraizado por estimulacin del
desarrollo en los brotes.

2.1.2.5 Macadamia

Vzquez et al., (1999) prueban diferentes mtodos de injerto en macadamia, los
portainjertos son de (Macadamia tetraphylla L. J ohnson), de 20 meses de edad, dimetro del
tallo de 2 cm y altura de 80 cm. Las varetas son terminales y sin anillado previo, provenientes
de rboles de (Macadamia tetraphylla L.) de la zona, de 15 aos de edad, vigorosos y en plena
13
produccin, libres de plagas y enfermedades, se desinfectan y se utilizan un da despus de su
corte, los mtodos de injerto evaluados son: enchapado lateral, ingls y hendidura. El
experimento se maneja a pleno sol. El enchapado lateral resulta mejor, con 35% de
prendimiento, con los mtodos ingls y hendidura el resultado es de 0%. La vareta terminal sin
anillado previo injertada inmediatamente despus de su corte, presenta resultados muy
satisfactorios.

2.1.2.6. Tamarindo

Fonseca

y Gonzlez (1999) injertan plntulas de tamarindo (Tamarindus indica L.);
los portainjertos cuentan con un metro de altura y ocho meses de edad, provenientes de
rboles criollos de la regin, la vareta se selecciona por su buen estado fitosanitario, por su
productividad y buen tamao de fruto, provenientes de rboles de 15 aos de edad y en plena
produccin. Usan varetas terminales, defoliadas naturalmente, seleccionadas por su vigor, se
desinfectan con fungicida y se injertan el mismo da de su corte. Los tipos de injerto son:
enchapado lateral, hendidura y yema (astilla). Al finalizar el experimento, el enchapado
lateral, es el mejor y representa el 79.17% de injertos con xito.

2.2 Efectos de los portainjertos en diferentes especies

2.2.1 Herbceas

Oda et al., (1996) estudian el control de crecimiento, produccin de fruta y contenido
de azcar de frutos, por comparacin entre plantas de tomate injertadas sobre portainjertos de
tomate (Lycopersicon esculentum Mill.) y berenjena Scarlet (Solanum integrifolium Poir.). El
crecimiento vegetativo tiende a ser abatido y la incidencia de floracin y fructificacin se
incrementan al injertar sobre portainjertos de berenjena Scarlet. La produccin de fruta sobre
portainjertos Scarlet es igual de baja como sobre los portainjertos de tomate. La gutacin no
se observa en plantas injertadas sobre los portainjertos Scarlet. Sin embargo las
concentraciones de clorofila en las hojas, los slidos solubles y el contenido de azcar en los
frutos son elevados en plantas injertadas sobre los dos portainjertos.
14

Los cultivares de Poinssetia (Euphorbia pulcherrima L.) se dividen en grupos de
rameo libre y rameo restringido. Autores como Dole y Wilkins (1991) realizan autoinjertos e
injertos recprocos para determinar la trasmisin de la caracterstica del rameo entre tres
cultivares de rameo libre: Brillian Diamond (BD), Topwhite (TW) y Hot Pink (HP), y entre
dos cultivares de rameo restringido: C1 Red (CR) y C1 White (CW). Cuando las varetas (CR)
se injertan en portainjertos (BD), las caractersticas vegetativas del diseo de rameo y
morfologa de las plantas (CR) se alteran, comparadas a CR/CR. El diseo de rameo es
determinado con una insicin en la vareta arriba del nudo 12 y midiendo los brotes axilares,
largo, dimetro y nmero de nudos 30 das despus. Las varetas (CR) injertadas en
portainjertos (BD) producen plantas muy similares a las (BD) cuando se comparan brotes
axilares, largo y nmero de nudos. Sin embargo, el dimetro de brotes axilares y morfologa
de la hoja son intermedios entre (CR) y (BD). Los cambios se mantienen despus de dos
generaciones de propagacin vegetativa y se consideran permanentes.

El cultivar Hegg Brillant Diamond (BD) de Poinsettia (Euphorbia pulcherrima L.)
contiene un agente de rameo libre que es transmisible por injerto al cultivar de rameo
restringido Eckespoint C-1 Red (CR). Las plantas CR son transformadas por el agente,
indiferentemente si las plantas se usan como portainjerto o vareta; esto indica que el agente se
mueve basiptala y acroptalmente a travs del injerto. El agente es transmitido repetidamente
a plantas CR por una serie de injertos con una Poinsettia de rameo libre. Se requiere un
contacto mnimo de 10 das con el injerto para que las plantas BD transmitan el agente a
plantas CR. El porcentaje de plantas CR que exhiben la caracterstica de rameo libre se
incrementa de 0% por menos de 10 das de contacto con el injerto con plantas BD al 100%
despus de 30 das (Dole y Wilkins, 1992).

Dua (1997) estudia la tcnica de injerto en cicer (Cicer arietinum L.), para el control
de la tasa de la tolerancia a la sal en raz y brotes en el sistema de la planta. Hizo injertos
recprocos entre varetas y portainjertos de un material sensible a la sal (CSG 8890) y uno
tolerante a la sal (CSG 88101). En las plantas injertadas con varetas tolerantes sobre
portainjertos sensibles resulta el 50% de supervivencia. Las plantas injertadas con varetas
15
sensibles sobre portainjertos tolerantes a la salinidad, son afectadas y mueren despus de 11
das; mientras que las varetas tolerantes sobre portainjertos sensibles resultan tolerantes a la
salinidad.

Por su parte, Shishido et al., (1995) conducen estudios sobre los efectos de las
variedades de portainjertos, nmero de hojas y el tamao de la vareta sobre el crecimiento y
transporte asimilado en plantas de berenjena (Solanum integrifolium Poir). El peso seco de las
varetas y el rea foliar son extremadamente altos en los portainjertos de la variedad Taibyo VF
(Solanum integrifolium Poir. x S. melongena L.), Scarlet (S. ingrifolium. Poir.), Hiranasu y
Senryo No 2 (S. melongena L.). La distribucin de porcentaje del C
14
asimilado por las hojas
del portainjerto hacia la vareta, vara del 35 al 40%, 28 das despus de injertar; cerca del 50%
de asimilados en los portainjertos, provienen de las hojas de la vareta. Los asimilados
fotosintticos del pice de la vareta y las hojas del portainjerto se traslocan directamente por
la unin del injerto y la cantidad depende del grado de conecciones vasculares establecidas.

2.2.2 Aguacate

Barrientos y Barrientos (1996) determinan la posibilidad de seleccionar portainjertos
enanizantes de aguacate (Persea americana Mill.), para tal efecto usan plntulas del cv. Collin
V-33, de un ao de edad y evaluan: altura del rbol; dimetro del tronco; ramas principales,
secundarias y terciarias. Se injertan con diferentes cultivares y selecciones de porte alto,
intermedio y bajo y despus de seis aos, evaluan la reduccin en altura y dimetro de copa
del rbol, as como la circunferencia del portainjerto. No encuentran relaciones significativas
entre las caractersticas de las plntulas de un ao y el efecto enanizante como portainjertos en
cultivares o selecciones y el total. Encuentran correlaciones significativas en el grupo de porte
bajo entre altura-reduccin de altura; dimetro-reduccin de altura; ramas totales-reduccin de
altura; ramas principales/altura-reduccin de la altura y en el grupo de porte alto entre ramas
totales-circunferencia del portainjerto. Por lo tanto se considera no adecuada la seleccin
temprana por medio de estas caractersticas.

16
En Israel se injertan cultivares de aguacate (Persea americana Mill.) sobre
portainjertos principalmente para prevenir problemas del suelo e incrementar su
productividad. Para su seleccin se usan portainjertos provenientes de semilla en 350
experimentos, con 120,000 rboles y 60,000 portainjertos clonales. Se evaluan durante 10
aos el rendimiento, tamao del rbol, alternancia y sntomas de estrs. Como resultado 40
portainjertos superiores son recomendados para uso comercial y se desarrollan 100
portainjertos clonales de rboles sobresalientes (Ben-Yaocov, 1996).

Ploets et al., (1993) monitorean el crecimiento de brotes y races de aguacate (Persea
americana Mill.), creciendo en macetones construidos con macetas largas y ventanas plsticas
transparentes. Para injertar utilizan Simmonds, un cultivar del Oeste de la India y Lula un
cultivar resultado de la cruza de Guatemalteco x Indio del Oeste como varetas, sobre
portainjertos Waldin. El crecimiento es calculado en mm/da y marcado diariamente. El
crecimiento de brotes y races aparece sincronizado y alterno en ciclos de 30 y 60 das. El
crecimiento de los brotes se detiene a finales del otoo y en el invierno, pero la raz crece
aunque lento, aproximadamente un tercio de lo normal y continua durante todo el ao.

2.2.3 Mango

Kurian et al., (1996) utilizan plantas nucelares de mango (Mangifera indica L.) cv.
Vellaikolamban como portainjertos para el cv. Alfonso y resultan enanizantes, florean ms
y tienen menos brotes vegetativos, registran una relacin inversa entre el contenido de fenoles
en yemas apicales de la vareta y el tamao del rbol.

2.2.4 Maple

En un experimento que realizan Howard y Oakley (1997), con injertos de yema
(astilla), el porcentaje de yemas brotadas de maple (Acer platanoides L.) con vareta rojo-
permitido Crimson King es del 33%, cuando los portainjertos estan en botes de dos litros;
77% cuando crecen en suelo franco arenoso y del 100% en suelos profundos arenosos. La
extensin de las races del portainjerto es un factor determinante del xito del injerto, y se
17
incrementa cuando el portainjerto y vareta se tratan con una mezcla de fungicidas (Benlate y
Rovral).

2.2.5 Acacia

Monteuuis (1995) investiga las posibilidades de propagacin vegetativa de ortets
(clones originales) juveniles (seis meses de edad) y maduros (tres a cinco aos de edad) de
acacia (Acacia mangium L.), al usar tcnicas in vivo ein vitro. La cantidad de injertos exitosos
in vivo con el injerto de hendidura es de 49% para varetas obtenidas de plantas juveniles y de
0% cuando se colectan de ortets maduros. Los resultados son proporcionales al tamao y a la
edad de los ortets.

2.2.6. Pino

Climent et al., (1997) comparan la conducta de varetas de pino negro (Pinus nigra L.)
subespecie Salzmannii, injertadas en 1987 sobre los portainjertos P. nigra y P. brutia L. Los
injertos resultan con bajo porcentaje de xito y mucha variabilidad tanto entre uniones
interespecficas, como en las intraespecficas, sin embargo la supervivencia es similar. Se
observan diferencias significativas entre ambos tipos de injerto al considerar el dimetro del
tallo y el origen de las ramas, la dominancia apical y la anchura de la corona. La
diferenciacin de brotes laterales, el desarrollo vegetativo y floral es alto en los heteroinjertos.
Estos resultados sugieren la utilizacin de varetas de P. nigra sobre portainjertos de P. brutia
para obtener abundante produccin de fruta.

Asimismo, J ayawickrama et al., (1997) estudian sitios, portainjertos, clones de varetas
y la interaccin entre estos factores sobre el crecimiento de la vareta y su produccin en pino
lobolly (Pinus taeda L.) 25 subfamilias se usan como portainjertos, seis clones de vareta se
injertan sobre ellos en todas las combinaciones. Se estudian tres sitios para huertas por semilla
en el sudeste de Estados Unidos; los rboles se miden ocho aos despus de injertar, se
consideran como variables: elongacin del injerto, dimetro del lder central (DLC), nmero
de conos y relacin de flores macho y hembra, en cada sitio. Encuentran diferencias altamente
18
significativas entre las varetas para todas las variables; para los sitios, el nico rasgo
significativo en los efectos de los portainjertos es DLC. Las interacciones portainjerto por
vareta son significativas para la elongacin de la vareta, volumen de la corona, dimetro del
lder central, sitio por interacciones de flores femeninas y conos.

2.2.7 Caducifolios

Las diferentes influencias de portainjertos en origen gentico y cualidades
agronmicas, sobre las caractersticas comerciales y la composicin qumica de la fruta son
investigadas en el muy precoz periodo de desarrollo de la fruta (100 das) de durazno (Prunus
persica Batsch.), cv. Maravilla conducido en Y en alta densidad de plantacin (2,500
rboles por ha). De los portainjertos probados, cinco pertenecen a P. persica (Harrow Blood,
Ps B2, Ps C14, Rubira y Rutgers Red Leaf), tres son hbridos de P. persica x P. dulcis L.
(GF677, Hansen 2168 y Hansen 536) y dos son hbridos completos de cereza (P. cerasifera
Ehrl.) (Mr S 2/5, M x P). Las ms vigorosas combinaciones de injertos dan producciones
altamente significativas. Los portainjertos influyen sobre el contenido de minerales (N, K, Fe
y Zn), azcares (sacarosa y fructosa) y cidos orgnicos (succnico) de la fruta, aunque estas
diferencias no afectan importantemente el valor comercial de la fruta y la opcin directa hacia
un portainjerto u otro. El peso de la fruta, el color de la epidermis, la forma, valores del
refractmetro (grados Brix) no son afectados por los portainjertos, el corto perodo de
desarrollo de la fruta, junto con una fuerte poda requerida por alta densidad de plantacin,
presumiblemente minimiza las diferencias en calidad de la fruta entre las combinaciones de
injertos (Caruso et al., 1996).

Larsen y Higgins (1997) examinan la influencia de cinco portainjertos clonales de
pera (Pyrus communis L.), Old Home x Farmingdale, sobre el tamao de rboles cv. Pera
Asitica. Despus de diez aos, el efecto de los portainjertos sobre el tamao de las
variedades, vara en algunos cortes seccionales del tronco, y resultan significativamente
grandes, indiferentemente del portainjerto. Esta investigacin permite hacer una prediccin
general de la influencia relativa de los portainjertos clonales Old Home x Farmingdale sobre
el tamao de los rboles de Pera Asiatica.
19

Webster y Lucas (1997) prueban diecisis especies de ciruelo (Prunus spp.) y clones
hbridos como portainjertos potenciales para enanizar; usan varetas de cereza dulce (P.
cerecifera Ehrl.), cvs. Van, Morton Glory y Merpet. Las pruebas se desarrollan sin riego,
sobre suelos francos y ligeros. Aunque algunos de los portainjertos producen rboles enanos
y cerrados, solo uno, un clon de P. mugas L., muestra buenos brotes de vivero y longevidad
del rbol. Otros rboles sobre portainjertos enanizantes, como, Gisela 1, (Gi. 172/9), crecen
muy pobremente en este lugar y muchos de los rboles mueren antes de completar el
experimento. Los rboles sobre Gi. 202/2 y M x M 39, muestran pobre compatibilidad al
injerto. Aunque no completamente enanos, algunos otros portainjertos probados muestran
grandes posibilidades para inducir excelente produccin, precocidad y productividad. Entre
los portainjertos ms promisorios estn; Weiroot 10, Gi. 195/4 y Gisela 6 (Gi 148/1).

Ademir es un portainjerto Miroboln para ciruelos (Prunus cerasus L.), se adapta
bien a suelos altamente calcreos y compactos, no presenta clorosis por hierro ni asfixia de
races, se prueba de vivero y huertas con suelo pesado, arcilloso y calcreo, con pH=8-9. No
presenta sntomas de clorosis en las varetas injertadas sobre Ademir. Bajo riego por
inundacin y drenaje pobre, las variedades sobre Ademir no mueren (Moreno et al., 1995).

La formacin en campo de los portainjertos Adara (Prunus cerasifera Ehrl.), SL 64
(Prunus malhaleb L.) y Colt (Prunus avium L. x Prunus pseudocerasus L.), injertados con dos
cultivares de cereza dulce (Prunus avium L.) cvs. Van y Tardif de Vignola, son probados
por 12 aos sobre un suelo calcreo franco-arcilloso, con riego por inundacin. Los rboles no
injertados sobre Adara mueren durante el experimento. El porcentaje de rboles muertos de
Tardif de Vigniola sobre Sl64 y Colt, es de 63 y 19% respectivamente. El de Van es de
19% sobre SL64 y 6% sobre Colt. Para las varetas de Van, Adara es el portainjerto menos
vigoroso y muestra gran eficiencia en campo y produccin acumulativa despus de 12 aos, la
concentracin de minerales en las hojas es muy cercana a la ptima. Adara es el mejor
portainjerto para cereza, evita la asfixia de la raz en suelos pesados y calcreos que no son
favorables para otros portainjertos (Moreno et al., 1996).

20
Sule y Burr (1998) investigan los efectos de dos portainjertos de vid (Vitis vinifera L.)
sobre la susceptibilidad de varetas injertadas a la agalla de la corona (Agrobacterium vitis y
Agrobacterium tumefaciens) en experimentos de invernadero. La incidencia de la agalla de la
corona sobre una vareta de cultivar susceptible de vid (Vitis vinifera L.) cv. Kiralyleanyka
sobre un portainjerto resistente a la agalla de la corona (Vitis riparia L.), cv. Gloire o sobre un
portainjerto hbrido susceptible (V. berlandieri x V. riparia cv. Teleki 5C), no es afectada por
el injerto durante dos meses de observacin en invernadero.

La formacin de 18 portainjertos de manzana (Malus domestica Borkh.) es evaluada
con varetas de los cultivares Golden Delicious, Granny Smith y Delicious durante
nueve aos. Los portainjertos de la prueba, en orden de la medida seccional del tronco (MST)
son: M.7a, M.7EMLA, MM.111EMLA, P.13, A.306, MM.106EMLA, MM.106, M.2EMLA,
B.490, MAC.16, MM.104EMLA, M.4, MAC.1, B.118, P.18, Mac.4, A.313 y MAC.24. Estos
tienen pequeos cambios en relacion a la MST / portainjerto y cultivar despus de 5 aos. La
influencia de los portainjertos despus de 9 aos resulta similar para cada cultivar (Barrit et
al., 1996).

Salvatierra et al., (1998) comparan la distribucin y el desarrollo de la unin del injerto
de duraznos (Prunus persica Batsch.) injertados sobre ciruelo (Prunus tomentosa Thumb.). El
bajo peso de materia seca total confirma los efectos enanizantes de P. tomentosa. El contenido
de carbohidratos muestra que el principal azcar presente es sorbitol. Durante los primeros
meses la unin del injerto en ambos portainjertos se caracteriza por el desarrollo de callo y
clulas cambiales similares, pero en los portainjertos enanizantes se observan clulas
necrticas en el callo y en el nuevo xilema del tallo, dos-cuatro aos despus muestran puntos
necrticos en el xilema de los portainjertos, lo que raramente se observa en portainjertos
vigorosos. Tambin se aprecian vasos delgados en la zona del injerto en portainjertos
enanizantes. La orientacin de los elementos del xilema pierde su modelo normal, y se
acumulan los vasos en forma de remolino en la zona del injerto de ambos portainjertos. Estas
observaciones indican que la necrosis en la unin del injerto es provocada por alguna
sustancia y su acumulacin causa una disfuncin en el sistema vascular, afectando al
crecimiento.
21

2.3 Propagacin de sapotceas

El mamey zapote (Calocarpum sapota (J ack.) (Merr.) est considerado como una de
las especies ms difciles de propagar asexualmente, por lo que la mayora de los rboles
existentes en ciertas zonas productoras como la regin del Soconusco, Chiapas, Mxico, son
de pi franco y presentan gran variabilidad tanto en su capacidad productiva como en calidad
de fruta. Para experimentar al respecto, se prueban cuatro tipos de injerto y dos fechas de
injertacin. De los mtodos de injerto el enchapado lateral presenta el porcentaje de
prendimiento ms alto (78.3%). La mejor poca de injertacin es de febrero a abril, cuando
los rboles donadores estan defoliados. La poca que coinicide con la refoliacin (agosto), es
la menos adecuada, ya que concluye en un 10% de prendimiento (Quilantan,1979).

Salcedo (1985) prueba cinco tratamientos en la propagacin por injerto del mamey: 1)
sequa al portainjerto, 2) limpieza con cido sulfrico, 3) portainjertos anillados, 4) doble corte
y 5) manejo normal, utiliza el injerto enchapado lateral, y varetas terminales que se cortaron:
a) a principios de la defoliacin de la planta madre (febrero), b) en defoliacin completa
(abril) y c) a principios de la foliacin (junio). Obtiene los mejores resultados con la vareta
cortada a principios de la defoliacin de la planta madre (febrero) junto con los portainjertos
anillados (80%); posteriormente con doble corte (62.5%); despus, sequa al portainjerto y
manejo normal (50%) y por ltimo, limpieza con cido sulfrico (0%) y en la poca de
refoliacin obtiene 25% con el manejo normal y portainjertos anillados, 12.5% con sequa al
portainjerto, y los dems terminan en 0%.

Carneiro y Deassis (1996) realizan un estudio taxonmico de las angiospermas,
familia Sapotaceae, basado en especmenes colectados en las planicies costeras de
Picinguaba, municipio de Ubatuba, Estado de Sao Paulo, Brasil, y encuentran seis especies y
cinco gneros con posibilidades de utilizarse como portainjertos para otras sapotceas.

22
Asimismo, Madrigal y Pennington (1997) reportan a Pouteria bulliformis L., una
nueva especie de la selva lluviosa tropical de Costa Rica y Colombia, con posibilidades de ser
un nuevo portainjerto paraCalocarpum sapota.

J aimiqui (Manilkara emarginata (baker) Lam. & Meeuse), es un rbol nativo de los
cayos de la Florida y de las Antillas, es pequeo (cinco-seis m), de apariencia similar a la del
chicozapote, pero se caracteriza por su lento crecimiento. El chicozapote se injerta
exitosamente sobre portainjertos de J aimiqui (por aproximacin y enchapado) y algunos
ensayos estn en progreso para determinar el potencial de esta especie como un portainjerto
enano para el zapote (Ogden y Campbell, 1980).

Gonzlez et al., (1999) injertan chicozapote (Achras sapota L.) en tres pocas del ao:
Mayo, Agosto y Septiembre, usan portainjertos criollos de la regin, prueban cinco mtodos
de injerto: ingls, ingls lateral, hendidura, enchapado lateral y yema (astilla) y cuatro fechas
de injertado por cada poca (cada semana). Las varetas son terminales y vegetativas,
seleccionadas por su vigor y sanidad, de la variedad Betawi, injertan el mismo da de su
corte. Sobresale el enchapado lateral con prendimiento de 99%, el ingls lateral con 98% y el
ingls con 95%, en mayo. En agosto, 98, 95 y 92%, respectivamente, y 91, 94 y 86% durante
septiembre. La poca ms adecuada para injertar es la de Mayo, la de Agosto resulta
intermedia, y la menos adecuada es la de Septiembre. El flujo de ltex no tiene influencia en
el prendimiento de los injertos.

Barreto et al., (1995) prueban tres alturas de injertacin en chicozapote (Achras
sapota L.), y concluyen que la altura del injerto a 20 cm, con varetas terminales y el tipo de
injerto enchapado lateral, es la mejor con 94% de xito.

Por su parte, Miege (1954) reporta que el nmero cromosmico de las
sapotceas
Achras sapota, con sinnimo Manilkara sapota (L.) Van Royen y Calocarpum sapota, con
sinonimia de Pouteria sapota (J acquin) H. E. Moore & Stearn es de 2n=26.

23
En Mxico se cultivan a nivel nacional, 962 ha de mamey (Calocarpum sapota), en el
Estado de Colima se cultivan 38 ha, (INEGI-Gobierno del Estado de Colima, 2002); las cuales
en su totalidad provienen de propagacin sexual o por semilla, ya que su propagacin asexual
o por injerto presenta serias limitantes de incompatibilidad.

2.4 Etapas fenolgicas de plantas leosas

2.4.1 Defoliacin-refoliacin

La dormancia cambial y los anillos anuales en rboles tropicales, son inducidos por
ocurrencias anuales de perodos secos o inundacin. La periodicidad del crecimiento es
indicada por la cada de hojas, conducta y su conexin con una periodicidad anual de
elongacin de brotes. Los cambios en el dimetro del tallo son medidos con un dendrmetro o
por diferencias apreciables en la resistencia elctrica del cambium. Los mtodos
dendrocronolgicos aplicados a muestras cuidadosamente preparadas pueden servir como
prueba de la periodicidad anual de zonas de crecimiento. Con este propsito pueden usarse los
siguientes mtodos: herida cambial, radiocarbn fechado, deteccin de direccin anual y
anlisis de regresin de la anchura de los anillos y datos del clima. Aunque la densitrometra
por rayos X y el anlisis de istopos estables en anillos de rboles tropicales prometen
proporcionar interesante informacin climatolgica, el uso de stos mtodos presenta cierta
dificultad (Worbes, 1995).

Hakola et al., (1998) miden las tasas de emisin de monoterpenos, isopropenos e
hidrocarburos de Salix phylicifolia L., Betula pendula L. y Populus tremula L. durante la
estacin de crecimiento. Las tres especies tienen significancia en la emisin de monoterpenos
cuando las hojas estan jvenes, en mayo. Salix emitie butano, etano y propano cuando esta en
floracin en mayo. En agosto, Betula emitie monoterpenos y poco isopropeno. Salix y Populus
emiten altas cantidades de isopropeno en agosto, dos-tres semanas despus de iniciar la
defoliacin. El estado fenolgico es estimado sumando la temperatura efectiva. La sntesis de
isopropeno inicia cuando la suma efectiva de temperatura vara de 120-210 y 120-280 F/da
para Salix y Populus respectivamente. Adicionalmente a la fenologa, la emisin de
24
isopropeno es dependiente de la temperatura y la radiacin activa fotosinttica, mientras que la
emisin de terpenos depende solo de la temperatura.

Ivizi y Araujo (1997) cuantifican la emisin de hojas, flores y frutos en trece especies
en una selva decidua. La menor cantidad de hojas en el dosel se observa en la poca de menor
precipitacin. El dosel se recupera rpidamente empieza al inicio de la estacin lluviosa. La
mayora de las especies florean durante el perodo lluvioso, mientras que la fructificacin se
extiende por todo el ao.

La fenologa de rboles de ocho selvas tropicales heterogneas, es consistente con la
hiptesis de que la produccin de hojas y flores es selectiva y que coincide con el apogeo
estacional de la radiacin (Wrigth y Van Schaik, 1994).

Sturm et al., (1998) determinan la concentracin de cido abscisco ABA en el xilema
de pino (Pinus sylvestris L.) durante dos veranos consecutivos. Cuando el rango del potencial
del agua cambia de -0.4 a -0.6 Mpa, el ABA del xilema se incrementa de 200 a 500 nmol/l.
As se observa una reaccin inmediata hoja-nivel al principio de las condiciones del verano,
por ejemplo, la conduccin y el uso del agua de las hojas decrecen. Por lo tanto, las funciones
del ABA son una llave que controla el balance del agua, transmitiendo informacin acerca del
estado del suelo y modificaciones endgenas responsables de la defoliacin del dosel en orden
del balance del agua y acerca de la demanda extensiva en la mayora de los aos.

Capel et al., (1998) aplican tratamiento de baja temperatura y sombreo a plntulas de
Arabidopsis thaliana L. Resultando en un rpido incremento en la cantidad de RNAm
codificado para mayores polipptidos del complejo luz-cosecha del fotosistema II (genes
Lhcb1,3). Este incremento es transitorio y parece ser principalmente originado por la
acumulacin de Lhcb1,3 transcriptores. La cantidad de Lhcb1,3 RNAm decrece en respuesta
al ABA exgeno, sugiriendo esto que la fitohormona actua como un regulador negativo.
Adems, la acumulacin de Lhcb1,3 RNAm en plantulas etioladas deficientes en ABA
tratadas con frio es alta, igual que las plantas silvestres en defoliacin y plntulas etioladas con
25
ABA intensivo, indicando esto, que la regulacin de la baja temperatura de Lhcb1,3 RNAm no
es mediante ABA.

Abernethy y McManus (1998) miden las respuestas de plntulas de Festuca
arundinacea L. cv. Grasslands Roa creciendo bajo temperatura controlada y dficit de agua:
registran cambios en la tasa de elongacin de hojas (TEH), potencial de agua en hojas (PAH),
acumulacin de cido abscsico ABA, prolina y glicinebetaina, en tejido maduro de hojas en
puntos y tiempo especficos durante el curso del tratamiento de dficit de agua. En estas
condiciones el TEH declina cuando el contenido de agua del suelo decrece hasta que son
observados valores de cero. Coincidente con la declinacin de TEH es la acumulacin de
ABA, prolina y glicinebetaina. Estas observaciones ilustran la significancia de la acumulacin
de metabolitos como respuesta al dficit de agua y cada de hojas.

Velasco et al., (1998) realizan un minucioso anlisis de la familia del gen Cdet11-24
como responsable de la tolerancia a la deshidratacin en plantas de Craterostigma
plantagineum Hochst. Cdet11-24 comprende una pequea familia de genes que se expresan
como respuesta a tratamientos de deshidratacin, tensin por sales y cido abscsico ABA en
hojas. El gen producido es constitutivamente expresado en races y desaparece solo cuando las
plantas son transferidas al agua. Esto sugiere por lo tanto que las protenas son los sensores de
la cantidad del agua. Estas protenas son hidroflicas y dirigen algunas caractersticas de
embriognesis tarda similarmente con ABA, y la regulacin de la sequa. En tejidos
vegetativos el promotor se activa en respuesta al ABA que restringe el desarrollo y refoliacin
de plantas jvenes.

2.4.2 Floracin-fructificacin

Day et al., (1997) registran los datos de la fenologa de floracin, tamao de la planta,
nmero de frutos, polinizacin y sistema de rameo de dos poblaciones de Banksia brownii L.
en el oeste de Australia. La floracin de ambas poblaciones sigue un modelo similar, con la
primera apertura floral evidente en Abril, con pico en J unio. En ambas locaciones los rboles
difieren considerablemente respecto al tamao, nmero total de inflorescencias producidas y
26
la longitud de la etapa de floracin. El amarre de frutos es bajo, aproximadamente el 50% de
las inflorescencias.

Velez et al., (1998) analizan la fenologa, fitoqumica y produccin de tres especies de
Polylepis quadrijuga L. La produccin de follaje es ms baja durante la estacin seca, cuando
las temperaturas mnimas suelen ocurrir. La fenologa de floracin y fructificacin es
caracterstica de la estacin hmeda y los flavonoides, compuestos conocidos como
protectores UV-B, se encuentran en altas concentraciones en las hojas. Esto tiene una relacin
significativa positiva entre la lluvia mensual, temperaturas mnimas mensuales y la
concentracin de flavonoides.

Walkovszky (1998) investiga la variabilidad y cambios del clima al comparar mapas
de datos de floracin de Robinia pseudoacacia L. en tres intervalos entre 1951 y 1994.
Encuentra turnos de fechas de tres-ocho das para floracin temprana. Este cambio se
relaciona con el promedio de la temperatura primaveral. El modelo desarrollado puede estimar
la temperatura al usar datos fenolgicos de R. pseudoacacia con una exactitud de 0.2
o
C.
Asimismo compara temperaturas medias basadas en los cambios fenolgicos en series
climticas. Esta comparacin enfatiza la posibilidad de usar R. pseudoacacia como un
bioindicador.

Marco et al., (2000) analizan el modelo de produccin de flores, frutos y semillas en
poblaciones de rboles de L. divaricata L., en tres hbitats diferentes de la selva semirida del
Chaco. Dos poblaciones ocupan reas de antiguas selvas reemplazadas por monte bajo
despus de severos disturbios. La tercera poblacin se localiza en un rea de selva no
disturbada por ms de cien aos. El orden en la produccin de flores, frutos y semillas vara
entre las poblaciones analizadas durante el perodo de muestreo. Las poblaciones de la selva
muestran reproduccin temprana y produccin de fruta, comparables a las poblacines
altas y las del
chaparral.

27
Davenport y ONeal (2000) examinan las caractersticas de la floracin y
fructificacin del cv. Magana, para elucidar la fenologa reproductiva del mamey
(Calocarpum sapota). Las flores abren durante la noche, inician la antesis alrededor del ocaso.
La longitud de la apertura floral vara de acuerdo a la estacin, alcanzando seis das en el
invierno y un da en el verano. Las nuevas flores generalmente aparecen en ciclos de siete
das, en declinacin del nmero de flores por emisin, con todas las yemas florales al azar a lo
largo de las ramas, hasta solo unas cuantas abiertas a cualquier hora. Las flores y frutos
pequeos aparecen alrededor de las ramas en grandes cantidades, la fruta inmadura se
desarrolla ms frecuentemente de flores localizadas en el cuadrante superior de las ramas. El
cuadrante inferior produce pocos frutos inmaduros. Sin embargo la fruta del cuadrante
superior tiene mas absicin de frutos hasta la cosecha y en el cuadrante inferior se localizan
ms frutos maduros.

2.4.3 Dormancia-actividad

Guglielmino et al., (1997) estudian los eventos de la diferenciacin cambial en
Populus euramericana L., y cambios estacionales en el modelo de pectinas metilesterasas
(PME, EC 3.1.1.11) siguiendo las isoformas. Durante la estacin de descanso, el extracto de
las paredes celulares contiene muchas isoformas alcalinas, con un M-r de 55 kDa y pH ptimo
entre 5.6 y 6.0. Durante el perodo de alta actividad meristemtica, predominan los extractos
de isoformas neutrales con M-r de 35 kDa y pH ptimo entre 6.0 y 6.6. En los inicios de la
actividad cambial y en sus derivados inmediatos, las enzimas se inmunolocalizaron
exclusivamente en las dictosomas. En clulas viejas, se presentan en los dictosomas y en las
uniones de las paredes. Esto indica que la exportacin de PMEs neutrales hacia las fuerzas de
las paredes, puede ser considerada como una marca de diferenciacin en derivados cambiales.

Rajput y Rao (1998) determinan que se forman grandes espacios intercelulares de
rayos cambiales uniseriados a multiseriados de Tectona grandis L., Azadirachta indica L. y
Tamarindus indica L., durante el perodo en el que el cambium es inactivo, algunas de las
clulas de los rayos cambiales inician ovales o circulares, resultan en el desarrollo de espacios
intercelulares. Sin embargo, las clulas son poligonales y compactas durante el crecimiento
28
activo del cambium. Similarmente tales espacios son tambin avisados en los rayos del floema
y xilema. La ocurrencia de espacios intercelulares en los rayos cambiales est correlacionada
con la fenologa de los rboles y con factores climticos de la zona.

Savidge y Forster (1998) investigan la sntesis de uridina 5-diphosphoglucosa:
coniferil alcohol glucosiltransferasa (CAGT), enzima catalizadora de alcohol coniferil y 5-
diphosphoglucosa, a travs de un ciclo anual de crecimiento cambial y dormancia en Pinus
banksiana Lamb. Durante la dormancia la actividad de CAGT no se detecta en el cambium.
CAGT empieza a activarse debilmente en la primavera cuando las clulas fusiformes de los
meristemos laterales cambian de protoplasma denso a estado altamente vacuolado, justo antes
de reanudar la actividad de la divisin celular. Durante el crecimiento cambial y xilogenesis,
la actividad CAGT en los derivados cambiales es alta como en la zona cambial. En ambas
zonas cambiales y en el desarrollo del xilema, las estaciones cambian la actividad CAGT
paralelamente a la variacion estacional en el contenido endgeno de coniferina. La actividad
CAGT desaparece cuando el cambium entra a la dormancia en agosto, antes de completar la
lignificacin de las traqueidas del ltimo anillo. Los resultados indican que los promotores de
la expresin gentica de CAGT pueden ser especficos del cambium y enlazados al control
total del cambium estacional, crecimiento y dormancia.

Oribe et al., (1993) registran las variaciones de la reactivacin cambial dentro de los
tallos de karamatsu (Larix leptolepis Gord.) una confera decidua, y sugi (Cryptomeria
japonica D. Don) una perennifolia. En karamatsu la reactivacin de la divisin tangencial en
el cambium inicia temprano en el tallo arriba de la base de la corona, as como abajo, despus
de los brotes, se determina por observacin de las paredes celulares delgadas bajo un
microscopio de luz. Por otra parte, en sugi aparece la iniciacin de la divisin celular en las
clulas cambiales cerca del mismo tiempo por todas partes del tallo del rbol exclusivamente
del tipo observado tempranamente antes de la brotacin. Por lo que se considera que la
dormancia cambial en deciduos es basiptala, rompiendo dentro del tallo del rbol, en relacin
a la brotacin. En conferas perenifolias el rompimiento parece ocurrir accidentalmente en el
tallo, indiferente de la brotacin. Las actividades de la divisin celular y la diferenciacin del
xilema despus del rompimiento de la dormancia cambial es ms conspicua en el tallo dentro
29
de la corona que en el tallo abajo de la base de la corona, en ambos casos al parecer la
variacin estacional de estas actividades dentro del tallo del rbol est asociada con el
desarrollo de los renuevos y las agujas, despus de brotar.

Moritz y Sundberg (1996) usan el cromatgrafo capilar lquido y el espectrmetro de
masas frit-FAB para identificar las citocininas endgenas en la regin del cambium vascular
en rboles maduros de Pinus sylvestris L. La espectrometra se realiza para
isopenteniladenina, isopenteniladenosina, zeatina ribosida, dihidrozeatina y dihidrozeatina
ribosida. De stos, isopentenyladenina, dihidrozeatina y dihidrozeatina ribosida se demuestran
por anlisis fsico- qumicos rigurosos, por primera vez en una confera. En adicin una
adenina glicocide se localiza por primera vez en una planta. Las citocininas identificadas se
cuantifican en tejido de la regin cambial activa y en dormancia por tcnicas de dilucin de
istopos. La concentracin de citocininas no vara grandemente entre los tejidos dormantes y
tejidos activos. Esto indica que el cese y reactivacin de la divisin celular en el cambium
vascular es controlado por otros factores, como la disponibilidad de citocininas.

Farrar y Evert (1997) examinan la ultraestructura del cmbium vascular del tronco de
Robinia pseudoacacia L., colectado despus de 2.5 aos. Durante la dormancia, las clulas
fusiformes tienen citoplasma denso con muchas vacuolas pequeas y ncleo central
localizado. La mitocondria es oval en vista seccional. Los plstidos son variables en forma,
con pocas membranas internas, y generalmente ausencia de granos de almidn. El
plasmalema est liso en la parte externa. El material protico aparece en las vacuolas y
muchos lpidos esparcidos a travs de las sustancias del fondo. El retculo endoplasmtico
(RE) liso y tubular se presenta altamente dilatado, predominando, pero tambin existen
segmentos rugosos. Abundantes ribosomas libres se encuentran eventualmente distribuidas
entre la substancia del fondo, y los dictosomas estan inactivos. Los microtbulos son
parietales y con varias orientaciones. Durante la reactivacin, el plasmalema empieza irregular
y a formar invaginaciones. El material proteico desaparece, las vacuolas empiezan a
fusionarse, aparecen los polisomas, y los dictosomas comienzan a formar vesculas. Durante
el perodo de actividad cambial, las clulas fusiformes son altamente vacuoladas, y el ncleo
se localiza en el centro. Las mitocondrias aparecen, ovaladas o elongadas. Los plstidos
30
contienen fitoferritina, granos de almidn, o ambos. Muchas invaginaciones largas del
plasmalema se introducen a la vacuola, empujando el tonoplasto y picando fuera de la
vacuola. Las gotas de lpidos son escasas. RE es rugoso, y los ribosomas generalmente
agregados como polisomos. Durante la transicin a la dormancia, las clulas fusiformes
gradualmente asumen la apariencia tpica de cambium en dormancia.

Oribe y Kubo (1997) registran las respuestas del cambium al calor durante tres fechas
en Cryptomeria japonica Don., de 14 aos de edad; asimismo en cuatro fechas en Larix
leptolepis Gord., de 27 aos de edad durante el perodo de la dormancia cambial invernal.
Calientan a 25-30
o
C por dos semanas la punta del tallo, la parte media del tallo y la corona de
la base del tallo. Despus del tratamiento, el cambium de las regiones tratadas y las no tratadas
se examinan con microscopio ptico y de transmisin de electrones. En C. japonica, el
tratamiento por calor, muestra resultados en la reactivacin cambial en las regiones tratadas, y
como respuesta pasa de la dormancia del invierno a condiciones de la primavera.
Contrariamente, en L. leptolepsi no se observa divisin celular en la regin cambial calentada
del tallo, hasta la reactivacin natural del cambium que ocurre despus de la pausa invernal.

Thobe et al., (1998) investigan el papel del glutation, el cual mantiene al grupo thiol de
protenas en estado reducido en las clulas vivas al inicio de la dormancia en yemas de uva
(Vitis vinifera L.). Cuando las plantas son expuestas a 30/25
o
C (alto), da/noche, o 20/15
o
C
(bajo), da/noche, antes del inicio de la dormancia de las yemas, las yemas administran las
bajas temperaturas antes de la dormancia, pero los tratamientos con altas temperaturas, no.
Sobre los brotes tratados con bajas temperaturas, los niveles endgenos de ABA se
incrementan pronto, despus del tratamiento, considerando que los niveles de ABA en los
brotes tratados con alta temperatura permanecen bajos. El contenido de glutation reducido
(CGR) en los brotes tratados con alta temperatura, se incrementa y en los brotes tratados con
baja temperatura, decrece gradualmente. El contenido de glutation oxidado CGO en los brotes
tratados con alta temperatura, permanece casi constante durante el perodo del experimento, y
con baja temperatura, se incrementa. Asimismo se incrementa en brotes inducidos a la
dormancia por el tratamiento de ABA.

31
Antonova y Stasova (1997) estudian los efectos de la temperatura y la precipitacin
sobre la produccin de clulas del xilema por el cambium activo, expansin y densidad de
paredes celulares en tallos de Alerce spp. Las observaciones se llevan a cabo en dos
estaciones, en rboles de 50-60 aos de edad y seleccionados de acuerdo a la tasa de
crecimiento. Se considera la temperatura a travs de la estaciones de mayor influencia en las
divisiones iniciales en el xilema, la expansin radial de las clulas y la acumulacin de
biomasa. Sin embargo, los niveles de cada efecto por separado de citogenesis son diferentes,
especialmente la influencia de la temperatura nocturna sobre la produccin de clulas del
xilema por el cambium. Los valores ptimos del primer y segundo perodo prueban ser
prcticamente iguales, mientras que las diferencias considerables son en respuesta a la
temperatura.

Tuominen et al., (1997) identifican el modelo de la distribucin radial del cido indol-
3 actico (IAA) a travs del desarrollo de tejidos del cambium en el tallo del hbrido aspen
(Populus tremula L. x Populus tremuloides Michx.). El contenido de IAA se mide en
criosecciones consecutivas tangenciales usando una microescala y espectrometra de masas. El
anlisis se realizado en rboles normales y en transgnicos con una expresin ecotpica de
Agrobacterium tumefaciens IAA-genes biosintticos. En todos los rboles probados el IAA se
distribuye como un gradiente alto a travs de los tejidos de la regin del cambium. El nivel
pico de IAA est dentro de la zona cambial, donde hay divisin celular. Los niveles bajos son
alcanzados en la regin donde la pared secundaria se inicia. Los rboles transgnicos muestran
un pico de bajo nivel y un gradiente radial abierto de IAA comparado con los tipos normales.
Estas alteraciones estn relacionadas a una baja tasa de divisin cambial celular y una larga
duracin de la expansin de las clulas del xilema en los rboles transgnicos, resultan en un
descenso en la produccin de xilema y un rea de fibras largas del lumen. Estos resultados
indican que el IAA tiene un papel en la regulacin de la tasa de proceso fisiolgico de la
divisin celular, y en la duracin del desarrollo del proceso de la expansin de fibras del
xilema, sugiriendo que las funciones del IAA son morfognicas transfiriendo informacin
posicional durante el desarrollo del xilema.

32
Hauch y Magel (1998) demuestran la presencia de sntesis de sacarosa y enzimas
degradadoras y la correlacin de la actividad enzimtica con el crecimiento cambial y la
formacin de corazn de madera en troncos de acacia falsa negra (Robinia pseudoacacia L.).
La sacarosa es formada por sntesis de fosfato de sacarosa (SFS) principalmente en la parte de
almacenamiento de la savia. En la zona de diferenciacin cambial y en la savia de la zona de
transicin del corazn, formados por el descenso de carbohidratos, la sacarosa es
primeramente partida por sntesis de sacarosa (SiSa) y una invertasa neutral (IN). En
primavera, aumentan las actividades de SiSa e IN fundadas en la diferenciacin de tejidos del
xilema. Esto coincide con tasas elevadas de SFS en los sitios de movilizacin de almidn. La
formacin de corazn en el otoo, un perodo de intensa acumulacin de fenoles en los tejidos
vivos internos es acompaado por alta actividad de SiSa e IN. Los incrementos en las
actividades de SFS e IN en todos los tejidos de las muestras de invierno, estn correlacionados
con la aclimatacin al fro.

Zagirova y Kusin (1998) monitorean la tasa de evolucin de CO
2
de troncos de pino
(Pinus sylvestris L.) a varias alturas, durante tres estaciones de crecimiento. Estudian la
dinmica estacional del desarrollo de floema y xilema y la diferenciacin celular. La
dependencia del tronco de la temperatura y humedad no es aparente siempre. Esto supone que
los cambios en la evolucin del CO
2
de los troncos de pino durante la estacin de crecimiento
estn relacionados con el contenido de clulas vivas en el anillo de desarrollo anual. Durante
el perodo de crecimiento radial, la evolucin del dixido de carbn ocurre ms rpido en las
partes superiores, que en las inferiores del tronco, a causa de la alta actividad cambial en las
partes superiores.

Novitskaya (1998) realiza experimentos induciendo disturbios artificiales en la
actividad cambial de abedul comn (Betula pubescens Ehrh. y Kerlian), para descubrir el
mecanismo de la formacin anormal de madera. Al final, la capa cambial es removida por
fajas de corteza de madera durante el perodo de crecimiento radial activo del tronco para
estudiar las macro y microestructuras de los tejidos regenerados en las aberturas. Tambin
se hacen observaciones con el microscopio de luz en la seccin de tejidos al final del perodo
de crecimiento, durante el cual la herida se inflinge en seccin transversal dos aos despus.
33
La formacin de madera anormal en ambos casos se relaciona con disturbios en el transporte
de asimilables.

Baldwin et al., (1998) exponen plntulas de Amelanchier alnifolia Nutt., a varios
tratamientos hormonales, induciendo dormancia y aclimatacin a condiciones fras para
determinar si el sistema in vitro es viable para el estudio de dormancia/endurecimiento en
plantas leosas. La baja temperatura induce niveles significativos de endurecimiento despus
de seis semanas a - 4
o
C pero no aproxima los niveles del nitrgeno lquido del
endurecimiento completo y el dominio-crecimiento de yemas. La adicin de cido abscsico
ABA incrementa los niveles de endurecimiento al fro (-12
o
C), pero no son capaces de
endurecer plntulas o extender lo alcanzado a temperaturas bajas en condiciones de
aclimatacin.

Zhou y Leul (1998) por su parte, tratan plntulas de Brassica napus L. cv. 601 con 50
mg/l de uniconazol aplicado al follaje y expuestas a tensin por fro similar a la del perodo de
dormancia, con alternancia de luz/sombra y rgimen de 2/-3
o
C por cinco das. Las plantas
tensionadas tienen ms bajas concentraciones de GA
3
e IAA que las testigo, mientras que los
contenidos de zeatina y ABA y los niveles de etileno son incrementados significativamente. El
contenido de clorofila y la capacidad respiratoria de la raz se reducen significativamente
despus de que las plantas son sometidas al tratamiento por fro. La tolerancia al fro es
acompaada por el incremento de la actividad de varias enzimas antioxidantes, incluyendo
superxido dismutasa, catalasa y peroxidasa. Las aplicaciones foliares de uniconazol reducen
la salida de electrolitos, la acumulacin de malondialdehido y el dao a las membranas
causadas por la tensin del fro.

Con el mismo objetivo, Meza-Zepeda et al., (1998) aislan un clon de ADNc
codificador de ciclofilina (CyP), de Solanum commersonii L., usando hibridacin subtractiva.
El gen correspondiente es inducido a ser constitutivamente expresado en hojas de Solanum
commersonii. Sin embargo cuando las plantas son expuestas a baja temperatura, cido
abscsico ABA, sequa y heridas, la cantidad de ciclofilina del RNAm se incrementa
marcadamente. Adicionalmente, el gen muestra ser responsable del cido saliclico y riesgo
34
patgeno, sugiriendo un papel en la responsabilidad de muchas tensiones diferentes en las
plantas.

Rinne et al., (1998) establecen la existencia de factores fisiolgicos y genticos que
inducen a la aclimatacin, considerando la longitud del da y el perodo de dormancia.
Comparan dos especies de abedul (Betula pubescens Ehrh.) y (B. pubescens Ulv. F.
Hibernifolia). El nico tardo incapaz de incrementar sus niveles de ABA es el hibernifolia,
en este tipo, la longitud del da o las condiciones naturales del otoo en campo elevan los
niveles de ABA antes de la aclimatacin, la cual es acompaada por deshidratacin de tejidos,
ajustes osmticos y acumulacin del grupo de protenas 2 LEA (responsables del ABA (RAB)
16, 24 30 y 33 kDa) y protenas del grupo 4 LEA (abundantes en la embriognesis tarda, 14 y
19 kDa). Bajo condiciones similares la deficiencia del ABA en abedul, causa prdida reducida
de agua, osmorregulacin defectuosa, ausencia de grupos inducibles de protenas 2 LEA, y
retraso o disminucin de la tolerancia al fro. En contraste ambos genotipos muestran
produccin estacional del grupo de protenas 4 LEA. El ABA resulta importante para
engranar los acontecimientos de la aclimatacin al fro en rboles sensibles al fotoperodo.

Shinozaki et al., (1998) determinan que las plantas de Arabidopsis thaliana L.
responden y se adaptan a los cambios del medio ambiente, incluyendo sequa, elevada
salinidad y baja temperatura caracterstica del perodo de dormancia. El cido abscsico
(ABA) desarrolla importantes papeles en estas respuestas y se acepta su funcin en la
tolerancia a la tensin y respuestas de la planta. Existen un mnimo de cuatro seales de
transduccin de genes de trayectoria en Arabidopsis thaliana: dos son ABA dependiente y dos
son ABA independiente, un cis activador llamado ERD (Elemento Responsable de
Deshidratacin) est presente en una de las trayectorias de la transduccin de la seal del
ABA independiente, y es un amarrador de protenas del ADN.

2.5 Polifenoles en plantas y su deteccin por cromatografa lquida de alta resolucin
(HPLC)

35
Singleton et al., (1999) indican que los mtodos para aislar fenoles en crudo, como por
ejemplo el HPLC, son difciles de aplicar a cada grupo qumico, ya que tienen muchos
componentes individuales dentro de cada subgrupo, y por lo tanto la interpretacin de estos
resultados no es muy fcil.

Rivas-Gonzalo et al., (1995) estudian la interaccin entre catequina y maldivin 3
monoglucsido en la presencia de acetaldehido en soluciones modelo. La formacin inicial de
dos pigmentos (I y II), posteriormente son envueltos en estructuras ms condensadas. La
evidencia se funda en la formacin de pigmentos, catequina tiene reaccin primero con
acetaldehido y el resultante aducido despus se condensa con antocianina; esto sugiere que los
pigmentos I y II son dos estructuras enantiomricas de la catequina-(8-)-acetil-(-8)-antocianina
dmero. Para su formacin, es necesario un pH relativamente cido; esto es atribuido a la
demanda que el acetaldehido tiene en forma catinica para que la condensacin ocurra. La
condensacin entre unidades de catequina envuelve tambin acetaldheido.

2.5.1 Haba

Bekkara et al., (1998) analizaron la fisiologa de la exudacin fenlica de semillas y
races de dos cultivares de haba (Vicia faba L.), uno rico en taninos condensados (cv. Alfred)
y otro libre de taninos (cv. Blandine). La caracterizacin y separacin de compuestos
fenlicos fue determinada por HPLC. En el cv. Alfred dominaron la catequina, taninos
condensados y flavonas. En el cv. Blandine predominaron cidos fenlicos, flavonas,
flavonoides y dihidroflavonoles. Los compuestos fenlicos fueron rpidamente liberados
durante la emergencia de las races y su concentracin en exudados fue mxima el primer da
de la germinacin.

2.5.2 Abedul

Nurmi et al., (1996) estudian las variaciones estacionales y entre rboles, de la
composicin y contenido total e individual de fenoles de bajo peso molecular (FBPM) en
abedul (Betula pubescens L.) sp. Tortuosa. La mayor cantidad de componentes fenlicos
36
identificados son: cido clorognico, quercetina-3-0-beta-D-glucoronopiranosida, miricetina-
3-0-(5-acetil)-L-ramnopiranosida, y 1-0-galoil-beta-D-(2-0-acetil)-glucopiranose. El contenido
de fenoles totales es una suma de los FBPM individuales, variando muy poco entre rboles,
mientras que la variacin en contenidos de FBPM individuales es grande. Las concentraciones
de casi todos los fenoles decrecieron durante la estacin de crecimiento, pero paralelamente
las correlaciones entre el contenido de fenoles individuales son similares la estacin completa,
indicando algunos rboles especficos perfiles FBPM reducidos en la estacin. Los
flavonoides inter-rboles, varian 2.6 veces ms alto que los componentes estacionales no
flavonoides durante toda la estacin. Las correlaciones significativas entre componentes
flavonoides y no flavonoides se relacionan con la biognesis de FBPM en hojas de abedul, y
su papel ecolgico.

Asimismo, J ulkunentiitto et al., (1996) seleccionan los fenoles y terpenoides
caractersticos del abedul plateado (Betula pendula L.) en ramillas de plntulas de 1 ao y 5
aos. Las sustancias se extraen con metanol, son purificadas y anlizadas por HPLC. En las
plantas de cinco aos predomina (+)-catequina y sus derivados, y se pueden usar como
herramienta para identificar especies.

2.5.3 Gerbera

Booy (1995) identifica cultivares de Gerbera spp. con HPLC para analizar los
compuestos fenlicos de rayos de flsculos, analiza antocianinas y flavonoides copigmentos
(flavonoles y flavonas) en 65 genotipos. Usa diferentes criterios para el pico mnimo y
mximo del rea, y no encuentra relacin entre la composicin de los fenoles y el color de los
flsculos.

2.5.4 Guaran

Marx y Fabricius (1997) determinan por SFE-HPLC las sustancias contenidas en
guaran (Paullinia cupana L.), usan metanol para la extraccin y una columna C18 para la
separacin y deteccin de: cafeina, teobromina teofilina, catequina y epicatequina.
37

Carlson y Thompson (1998) extraen las metilxantinas y polifenoles de guaran
(Paullinia cupana L.) por matz simple con fosfato caliente, solucin bufer metanol, enfriado,
filtrado e inyectado en el sistema de cromatografa lquida. Encuentran resolucin satisfactoria
para las metiolxantinas teobromina, teofilina, cafena y los polifenoles (+)-catequina y (-)-
epicatequina.

2.5.5 Pino

Kaundun et al., (1998) estudian los flavonoides de las agujas de pino (Pinus
halepensis Mill.) para determinar su variabilidad geogrfica, considerando la influencia del
medio en la expresin de los polifenoles. Detectan en todos los rboles dos proantocianinas:
prodelfinidina y procianidina, y seis flavonoles: miricetina, laricitrina, kaempferol,
isorhamnetina y siringetina, detectados y medidos por HPLC. Los rboles de dos sitios
experimentales tienen la misma composicin de flavonoides. Encuentran diferencias
significativas entre individuos de la misma zona colectados de poblaciones naturales. En las
zonas experimentales la expresion de los flavonoides es suficientemente estable y permite la
comparacin entre rboles de diferente origen geogrfico.

2.5.6 Papaya

Richard-Forget et al., (1998) investigan la oxidacin de diferentes fenoles (4-metilcate-
col, cido clorognico, (-)-epicatequina y (+)-catequina} por escarola polifenoloxidasa (PPO)
en la presencia de un extracto de papaya (Carica papaya L.). Las sustancias desconocidas son
purificadas con 4-metilcatecol, con una combinacin de Bio-gel Pt cromatogrfico y HPLC
semipreparativo con espectrometra de masas y un analizador de aminocidos y el agente
gamma-Glu-Cys para formar compuestos aducidos con 4-metilcatecol y cido clorognico, y
dos con los flavon-3-ols. Los tioles aducidos no son sustrados por escarola PPO, pero en el
caso de la conjugacin de 4-metilcatecol, actua como un inhibidor competitivo de PPO.

2.5.7 Tamarindo
38

Tsuda et al., (1994) investigan la actividad antioxidante de las semillas de tamarindo
(Tamarindus indica L.). Un extracto de metanol preparado de las cubiertas de las semillas
exibe actividad antioxidante medida por el mtodo del tiocinato y el cido tiobarbitrico
(TBA), pero no es activo el extracto preparado del germen. El extracto etil acetato preparado
de las cubiertas de las semillas tiene fuerte actividad antioxidante. Los componentes
antioxidantes de las cubiertas se determinan con HPLC del extracto etil acetato e identificados
como: 2-hidroxi-3,4-dihidroxiacetofenona (TAO), metil 3,4-dihidroxibenzoato (TA1), 3,4-
dihidroxifenil acetato (TA2), y (-)-epicatequina (TA3).

2.5.8 T

Seto et al., (1997) identifican del t (Camellia sinensis L.) las catequinas: (+)-
catequina, (-)-epicatequina, (-)epigalocatequina, (-)-epicatequina galada y (-)-
epigalocatequina, utilizan HPLC, despus de calentar a 120
o
C por 30 min.. El FAB-MS
elemental, H-1-, C-13-NMR y el anlisis de rotacin ptica clasifican a estos productos como
C-2 epmeros de las catequinas originales.

Lin et al., (1998) desarrollan un procedimiento isocrtico de HPLC para determinacin
simultnea de seis catequinas, cido glico, y tres metilxantinas en extracto acuoso de t en 15
ts chinos verdes y 13 ts J aponeses verdes. Los niveles medios de las catequinas totales: (-)-
epigalocatequina 3 galada, (+)-catequina, y cafena estan presentes en los dos grupos, pero
otras catequinas menores como: (-)-epigalocatequina, (-)-epicatequina, y (-)-galocatequina 5
galada aparecen en alto contenido en los ts verdes J aponeses. Asimismo (-)-epicatequina S-
galada, cido glico, teofilina, y teobromina se encuentran en alta concentracin en los ts
Chinos verdes.

Saijo y Takeda (1999) conducen estudios para determinar la existencia de catequinas y
formas epimricas de catequinas en varios gneros de t verde, por medio de HPLC. En los ts
J aponeses verdes predominan las catequinas: (-)-epigalocatequina-3-galada, (-)-epicatequina-
galada, (-)-epigalocatecina y (-)-epicatequina y formas epimricas: (-)-galocatequina-3-galada,
39
(-)-catequina-3-galada, (-)-galocatequina y (-)-catequina. En los ts verdes Vietnamitas,
Chinos e Indes sobresalen: (-)-epigalocatequina-3-(3-0-metil) galado, (-)-epicatequina-3-
(3-0-metil) galado, (-)-epigalocatequina-3,5-digalado y (-)-epicatequina-3,5-digalado.

Sano et al., (1999) aislan dos derivados de catequinas (C-1 y C-2) con potente
actividad antialrgica, del t Taiwans oolong, por tcnicas de HPLC y anlisis NMR y FAB-
MS. Las estructuras C-1 y C-2 son identificadas como: (-)-epigalocatequina 3-0-(3-0-metil)
galada y (-)-epigalocatequina 3-0-(4-0-metil) galada. Las hojas de t oolong tienen 0.34% de
peso seco de C-1 y 0.20% de C-2.

Wang et al., (2000) desarrollan un anlisis simple de HPLC para detectar catequinas,
cafena y cido glico en t verde, con un sistema de elucin isocrtica. El sistema de
separacin consiste en una columna C18 de fase reversa, un sistema de elucin isocrtico de
metanol/agua/cido ortofosfrico y un detector UV. Este mtodo es apropiado para anlisis
rpidos de rutina para la determinacin de catequinas en t verde con buena repetibilidad y
exactitud de resultados.

2.5.9 Caducifolios

Feucht y Schmid (1979) por su parte, al analizar el floema de brotes maduros de
Prunus spp., determinan que las flavonas (catequina, epicatequina y material oligomrico) son
los componentes predominantes, constituyen del cinco al 12% de peso seco. Los cidos
clorognicos son menores en concentracin y variaron: entre 0.2 y 1.2% de peso seco. Las
flavonas son elevadas en cerezo dulce (P. avium L.) y en cerezo comn (P. cerasus L.). El
modelo no cambia notablemente cerca de la unin del injerto cuando cultivares de P. avium
son injertados sobre clones de P. cerasus y cerezo rojo (P. fruticosa L.). Asimismo Tarnai et
al., (1994) sealan la presencia de diez polifenoles en corteza, floema, xilema, hojas, fruta
verde y fruta madura de rboles de cerezo dulce (P. avium L.) (Cuadro 1).

Cuadro 1. Polifenoles presentes en tejidos de corteza, floema, xilema, hojas, fruta verde
y fruta madura de rboles de cerezo (Prunus avium ) (Tarnai et al., 1994).
40
Catequina Epiafzelequina
Epicatequina Epicatequina poliglicsido
Epicatequina-3-G Epigalocatequina
Epigalocatequina-3 galada Epigalocatequina-3-G
Galocatequina Kaempferol
Kaempferol glucsido Naringenina
Procianidina B
1
Procianidina B
2
Quercitina

Treutter (1988) extrae los fenoles de la corteza y hojas de diferentes especies de
Prunus, utiliza tres sistemas de separacin por HPLC. Encuentra 44 componentes, entre ellos
catequina y epicatequina. Demuestra que el mtodo es eficiente para el anlisis de extractos de
plantas en crudo, principios activos farmacolgicos y experimentos fisiolgicos.

Asimismo, Treutter (1989) describe un mtodo por HPLC con derivacin de
postcolumna para la deteccin especfica de catequinas y proantocianidinas en extractos
crudos de plantas caducifolias, as como tambin en bebidas. En presencia de cido sulfrico
concentrado, el 4-dimetilaminocinnamaldeido (DMACA) puede ser empleado como un
reactivo selectivo. La ventaja de este reactivo es la condensacin de productos con flavonoides
que muestran su mxima absorbancia cerca de los 640 nm. Otros fenoles, indoles y terpenos
tienen reaccin con productos con diferente absorbancia o reaccionan de forma muy dbil.

Surez et al., (1994) extraen los compuestos fenlicos neutrales: (+)-catequina,
(-)-epicatequina, polmeros flavon-3-oles (procianidinas), floridzin, floretin xiloglucsido, y
los flavonol glicsidos (isoquersitrina, hiperina, quercitrina, avicularina y rutina, de jugo de
manzana (Malus domestica Borkh.), con etil acetato, separados y cuantificados por HPLC-UV
con una columna C18 y agua cida (pH 2.8)-gradiente metanol solvente.

Treutter et al., (1994) desarrollan un mtodo para caracterizar flavon-3-oles en
caducifolios (entre ellos catequina y epicatequina) y procianidinas por HPLC con una lnea de
deteccin de UV y deteccin de reaccin qumica (CRD). La derivacin postcolumna de los
polifenoles con 4-dimetilaminocinnamaldehido (DMACA) en presencia de cido sulfrico
41
mejora la sensibilidad al comparar solo con la deteccin por UV. Los resultados son infludos
por la composicin del solvente, por tiempo de reaccin y temperatura.

Errea et al., (1994c) examinan muestras de floema de cultivares comerciales de
chabacano (Prunus armeniaca L.) y algunas especies de Prunus usadas como portainjertos,
por cromatografa lquida de alta resolucin (HPLC) combinada con deteccin de reaccin
qumica (CRD) para determinar diferencias cualitativas y cuantitativas en flavonoles
monomricos (catequinas) y oligomricos (proantocianidinas). Los cuatro cultivares de
chabacano tienen composicin similar de flavonoles con un total de siete-nueve picos. Sin
embargo ocurren grandes diferencias entre cultivares en la composicin de flavonoles totales;
los niveles varan de 572 a 1669 unidades de absorcin (AU). Se observan diferencias en la
composicin cualitativa de flavonoles de los ocho portainjertos evaluados, relacionados a los
cultivares. El nmero de flavonoles por portainjerto vara de cuatro a 11, y corresponde a
grandes diferencias en flavonoles totales; niveles de 807 a 9719 AU. La aplicacin de (+)-
catequina como un flavonol monomrico a brotes de chabacano cambia el plano de la divisin
celular en el floema, el cual resulta en una estructura de callo.

Fuleki y Dasilva (1997) identifican 11 flavon-3-oles en semillas de 17 hbridos de uva,
(Vitis vinifera L.) con HPLC. Los rangos de concentraciones ms importantes (mg/100 g de
semilla) son: (+)-catequina, 21-244 y (-)-epicatequina, 23-284. Los monmeros (+) catequina
y (-)-epicatequina estan presentes en ms cultivares en grandes cantidades que otros. Los
cultivares influyen en la composicin de flavon-3-oles en las semillas.

Arts y Hollman (1998) separan con HPLC gradiente de fase reversa y cuantifican con
UV las catequinas: (+)-catequina, (-)-epicatequina, (-)epicatequina galada y (-)-
epigaladecatequina, de manzanas, uvas y frijoles. La mejor extraccin se obtiene con metanol
60-100% para manzanas y uvas y metanol 40-80% para frijoles.

Guyot et al., (1998) extraen los compuestos fenlicos presentes en la epidermis,
parnquima, durmen y semillas de manzana (Malus domestica Borkh.) var. Kermerrien, a
partir de material seco y enfriado por tres extracciones sucesivas con solventes. El extracto
42
seco de metanol y el extracto seco acuoso de acetona se analizan por HPLC en fase reversa
acompaado por un detector de arreglo de diodos para observar el seguimiento de la tilisis
para cuantficar los compuestos fenlicos de acuerdo a sus clases (derivados del cido
hidroxicinmico, flavon-3-oles, flavonoles y dihidrochalconas). Encuentran que las
procianidinas son los constituyentes fenlicos predominantes y corresponden a estructuras
polimerizadas.

Peleg et al., (1998) demuestra que la astringencia de soluciones acuosas de compuestos
fenlicos de semillas de uva (Vitis vinifera L.): taninos, cido tannico, catequina y cido
glico, se incrementa con la adicin de cido ctrico, considerando que la astringencia del
alumbre es reducida. La astringencia del alumbre es decreciente equivalentemente a la adicin
de niveles cidos de cido lctico, cido ctrico o cido clorhdrico.

Rechner et al., (1998) desarrollan un modelo de HPLC para el anlisis de polifenoles
en jugo de fruta y vino, especialmente los polifenoles (flavonoles y dihidrochalconas)
aplicando una nueva fase fluorinada-RP. La ventaja del mtodo es la posibilidad de anlisis
simultneos de antocianinas y otros polifenoles.

Koganov et al., (1999) demuestran la concentracin de catorce fenoles vegetales, de
cinco grupos estructurales (flavonas, flavonoles, flavon-3-oles, isoflavonas y
fenilpropanoides) y la dependencia inhibitoria de los efectos moduladores en un cultivo de
tejidos de fibroblastos de Prunus spp. La actividad inhibitoria ms potente en esta
investigacin es mostrada por apigenina, con flavona, crisina y genisteina disminuye la
potencia; proporcionando as un mejor entendimiento de la accin de estos fenoles vegetales
en la respuesta inflamatoria / inmune.

Diversos investigadores han analizado diferentes alimentos, bebidas, rboles y plantas
mediciales por medio de HPLC buscando el principio activo que los caracteriza, en el Cuadro
2 se hace mencin a los ms importantes.

43
Cuadro 2. Relacin de investigadores, tipo de muestra y sustancias identificadas
usando HPLC.
Investigadores Muestra Sustancia
Feucht y Schmid (1979) Prunus Epicatequina y catequina
Feucht y Treutter (1991) Prunus Epicatequina y catequina
Feucht (1994) Kiwi y cereza Epicatequina y catequina
Errea et al.,(1994a) Chabacano Catequina
Errea et al.,(1994b) Prunus Catequina
Fuleki y Dasilva (1997 Uva Catequina y epicatequina
Marx y Fabricius (1997) Guaran Catequina y epicatequina
Seto et al.,(1997) T Catequina y epicatequina
Arts y Hollman (1998) Manzanas, uvas Catequina epicatequina
Guyot et al.,(1998) Manzana Catequina
Carlson y Thompson (1998) Guaran Catequina y epicatequina
Peleg et al.,(1998) Uva Catequina
Rechner et al., (1998) J ugo de fruta y vino Epicatequina y
fluorinada
Richard-Forget et al.,(1998) Papaya Epicatequina y catequina
Lin et al.,(1998) Ts Epicatequina
Saijo y Takeda (1999) T verde Catequina y epicatequina
Sano et al., (1999) T Catequina

2.6 Incompatibilidad en homo y heteroinjertos

Cuatrocientos aos de prctica e investigacin en injertos de plantas leosas no han
dado respuestas significativas a las preguntas acerca de las causas de incompatibilidad en
injertos, ni permitido predicciones vlidas para respetar la incompatibilidad potencial entre
plantas individuales o especies de rboles frutales (Santamour, 1988a).

Los sntomas de incompatibilidad se eliminan separando los componentes con un
portainjerto intermedio mutuamente compatible. A menudo la estructura de la unin es
mecnicamente dbil, presentando interrumpida la continuidad de los tejidos vasculares,
fisiolgicamente se presenta un disturbio en la unin del injerto, y debido a las dificultades
para la traslocacin, finalmente se agotan las races. Es comn encontrar en la unin del
injerto masas de tejido parenquimatoso en vez de tejidos normalmente diferenciados,
44
interrumpiendo la conexin vascular normal entre el portainjerto y el injerto. A veces los
vasos conductores establecen conexiones alrededor de masas de tejido de callo, mientras que
otras, los extremos de los vasos estn separados por masas de parnquima. En casos extremos
el tejido vascular se deforma, pero la capa de parnquima entre el portainjerto y la pa es
continua (Moore, 1981).

2.6.1 Tipos

2.6.1.1 Localizada

La incompatibilidad localizada incluye combinaciones en las cuales las reacciones de
incompatibilidad dependen del contacto actual entre el portainjerto y el injerto, la estructura de
la unin es mecnicamente dbil, presenta interrumpida la continuidad de los tejidos
vasculares y el cmbium, en la unin del injerto se encuentran masas de tejido parenquimatoso
en vez de tejidos normalmente diferenciados, interrumpiendo la conexin vascular normal
entre el portainjerto y el injerto (Hartmann y Kester, 1992).

2.6.1.1.1 Categorias

Herrero (1962) agrupa en cinco, las categoras de incompatibilidad localizada:
A) Uniones perfectas. La lnea de unin entre portainjerto y variedad es imperceptible.
B) Uniones que presentan madera y corteza continuas, pero que tienen algunos defectos
estructurales tales como distorsin en la madera, ligera involucin cambial y otros defectos no
absolutamente sintomticos de incompatibilidad.
C) Uniones con corteza parcialmente discontinua; muy raras veces discontinua en toda la lnea
de unin. Pueden o no tener defectos estructurales de la categora B.
D) Uniones con madera parcialmente discontinua, debido a la presencia de capa de
parnquima no lignificado en el plano de la unin. En general estas uniones presentan
discontinuidad en la corteza.
45
E) Uniones que se rompen al forzarlas o que presentan elevado grado de discontinuidad en la
madera.

2.6.1.2 Translocada

La incompatibilidad translocada, incluye casos en los que no se puede corregir por la
unin de un portainjerto intermedio mutuamente compatible, implica la degeneracin del
floema y se puede reconocer por el desarrollo en la corteza de una lnea de color pardo o una
zona necrtica. En consecuencia, en la unin del injerto se presentan restricciones al
movimiento de carbohidratos: acumulacin arriba y reduccin abajo. Puede presentarse
clorosis en el follaje, defoliacin, declinacin del crecimiento vegetativo, muerte en los tejidos
perifricos de la vareta y en general mala salud del rbol, que puede vivir as varios
aos.

En caducifolios este tipo de incompatibilidad se presenta hasta despus de 13 aos, y
se le atribuye a la degeneracin del floema, lo cual conduce a marchitamiento, muerte de las
races, y por ltimo a la muerte de la variedad (Hartmann y Kester, 1992).

2.6.2 Castaa

Santamour (1988b) injerta plntulas de castaa china (Castanea mollissima (Blume))
con anillos de corteza de plntulas de la misma especie cuyo modelo de bandas de isoenzimas
peroxidasas cambiales es de dos tipos: similar o diferente a la del portainjerto. Cuando el
tejido de la isoenzima del donador se ajusta con el del portainjerto, se forma un
encirculamiento completo del cambium y la continuidad del xilema vascular es restaurada a
travs de la zona de los tejidos del injerto. Sin embargo, cuando el fenotipo de la isoenzima
del donador difiere al del portainjerto, la continuidad vascular no es restaurada. En algunos
casos, las clulas cambiales de la planta donadora mueren despus de producir unas cuantas
clulas nuevas. Cuando el cambium donador contina su funcin como un meristemo, solo se
46
producen clulas parenquimatosas. Las peroxidasas son las nicas enzimas conocidas de la
polimerizacin de alcoholes cianmicos dentro de las ligninas y su enlace de ligninas a
carbohidratos de la pared celular primaria. Las plantas que difieren en mayor peroxidasas
pueden no ser compatibles por injerto.

Pereiralorenzo y Fernandezlopez (1997) estudian la propagacin de la castaa
(Castanea sativa L.) para mejorar su xito por injertos, para incrementar la resistencia de
clones hbridos interespecficos de C. sativa a la enfermedad de la tinta. Esta es una
combinacin interesante en Europa para la produccin de nuez, o nuez y madera para
construccin. Para tal efecto se prueban cinco mtodos de injerto, nueve portainjertos hbridos
espaoles y el francs CA15 Marigoule, adems se injertan en diferentes fechas. El
crecimiento en altura, el dimetro del tallo y la compatibilidad entre injertos y portainjertos se
estudian durante cuatro aos. Para los cinco portainjertos espaoles el mejor tipo de injerto es
el de parche que se realiza a fines de agosto o principios de septiembre. El hbrido C15
presenta severa incompatibilidad. La calidad de las plantas es muy buena despus de dos aos
de injertadas, el injerto de hendidura resulta con 149 cm y el de parche con 156.

Oraguzie et al., (1998) conducen tres experimentos para evaluar las fallas en los
injertos de selecciones de castaa(Castanea mollissima Blume) de Nueva Zelanda. Las fallas
corresponden a un genotipo especfico. Los injertos de las selecciones de North Island
(excepto 1002 y 1007) son afectados fuertemente. El corte de la unin del injerto de
diferentes selecciones muestra varias formas de fallas, aunque las razones de las fallas no son
claras. Cuando el portainjerto 1005 es escogido, la falla del injerto es categorizada en dos
formas: falla temprana y tarda. La temprana inicia inmediatamente despus del injerto
hasta 19 meses despus de injertar (MDI), con un pico a los nueve MDI. La tarda inicia a los
32 MDI. Las selecciones Long Bay 1 y 2, y Crewena 2 y 3 tienen fallas tempranas y tardas,
mientras que las selecciones 1005, 1015 y Don Whelan muestran fallas tardas. Crewenna 1
no cae en ninguna categora especfica. Los cortes en la unin de los injertos sobrevivientes
muestran diferentes grados de falla, extendindose desde injertos saludables con pequeas
hendiduras en la unin del injerto, hasta injertos con fallas y hendiduras extensas
47
acompaadas de madera y corteza negra dentro del tallo. Las fallas son causadas por una
reaccin de incompatibilidad interespecfica.

Oraguzie et al., (1999) realizan un estudio para determinar si las relaciones de las
selecciones de castaa de Nueva Zelanda y su origen reflejan comportamiento de fallas de
injerto entre las selecciones. Emplean dos diferentes grupos de datos para el anlisis de las
relaciones entre las selecciones de nueces; polimrficos aleatorias amplificados de DNA al
azar (RAPD) y morfo-nuez. Cuando los injertos no tienen xito, los datos son mapeados
dentro del consenso construido de los rboles para el anlisis de la congruencia de caracteres,
esto es fundado en la autoincompatibilidad de injertos que se refleja en el origen y relaciones
de las selecciones de nueces. Informacin sobre las afinidades de las selecciones de nueces y
las especies de nueces introducidas, muestran que estan mayormente implicadas en las fallas
de injerto cuando son del norte de la isla, que tienen afinidad con las especies de Castanea
crenata L. Pero las selecciones del sur de la isla tienen afinidad con Castanea sativa L. y sus
hbridos 1002 y 1007del norte de la isla, los injertos de C. mollisima Blume. y C. crenata L.
son exitosos, esto indica que la falta de xito del injerto en selecciones de castaa de Nueva
Zelanda, depende del origen y / o de la historia evolutiva de las selecciones.

2.6.3 Maple

Dos bandas mayores anodales de isoenzimas peroxidasas aparecen con alta frecuencia
(70-80%) en los tejidos cambiales de ramas y races de maple rojo (Acer rubrum L.). Algunos
maples rojos, y todos los maples plateados (A. saccarinum L.) experimentales les falta la
banda baja de enzimas. La presencia o ausencia de la banda baja no esta relacionada con el
origen geogrfico de las plantas. Por los grados de variacin de poliploida en maples rojos y
los hbridos entre maples rojos y plateados, la intensidad de la mancha de la banda de enzimas,
especialmente la banda baja, varan considerablemente.Los injertos de anillo de corteza entre
los maples rojos de una y dos bandas tienen sntomas de incompatibilidad similares a las otras
tres combinaciones con diferentes isoenzimas peroxidasas cambiales. Durante el perodo de
tres a cinco aos que se requiere para una completa envoltura del tocn del portainjerto
48
cortado en los maples rojos podados, se forman zonas de pobre lignificacin celular en el
lmite entre el portainjerto incompatible y el cambium de la vareta. Los modelos de
isoenzimas estn dados en muchos cultivares de maple rojo, y muchos tienen bandas A y B;
algunos datos son propiciados por la herencia. De tal manera que, se pueden reducir los
problemas de incompatibilidad de injerto en estos cultivares, seleccionando semillas para
portainjertos, solo de rboles con fenotipos de enzimas AB, creando plantaciones que provean
plntulas con las propiedades de las enzimas deseadas (Santamour, 1989).

Posteriormente, desarrolla una teora para explicar y predecir la compatibilidad e
incompatibilidad en los injertos en maples (Acer spp.). Esta teora se basa en la mayor
similitud de las enzimas peroxidasas en los tejidos cambiales del portainjerto y la vareta. Las
peroxidasas mediante la produccin de ligninas y clulas adyacentes en el portainjerto y en las
varetas, pueden producir ligninas similares y tener modelos de enzimas peroxidasas idnticas
y asegurar el desarrollo de un sistema vascular a travs de la unin del injerto. En algunas
especies, todas o la mayora de plantas individuales producen modelos idnticos de
peroxidasas, y los viveristas raramente encuentran problemas de incompatibilidad al injertar.
En especies en las cuales los injertadores tradicionalmente han tenido problemas, se encuentra
generalmente variabilidad entre enzimas peroxidasas. El anlisis detallado de las peroxidasas
en cada especie puede ser el mtodo ideal para predecir la incompatibilidad en los injertos
(Santamour, 1992)

Las causas de la inconsistencia y variabilidad en el xito de los injertos de yema de
astilla en el maple de Noruega (Acer platanoides L.) son investigadas por Howard, (1993)
para tal objetivo usa varetas de la variedad rojo-permitido Crimson King. Muchas
diferencias en la obtencin de las yemas son asociadas con el ao de brotacin: abajo del
perodo de 14 aos, el rango es del 22 al 94%. El efecto ao no se puede explicar por el
clima, o por diferencias en el xito de las yemas entre las fuentes comerciales de las varetas.
Asimismo ninguno tiene incompatibilidad entre las varetas de la variedad rojo-permitido
Crimson King y los genotipos individuales entre los portainjertos implicados; aunque estas
son las primeras seales de que la incompatibilidad est presente. El tamao de los
portainjertos al plantarlos no se correlaciona con los subsecuentes xitos de brotacin, aunque
49
muchas diferencias en la calidad del crecimiento de los portainjertos y la brotacin son
asociadas con bastantes diferencias en la obtencin de la yema, pero estas se confunden con el
efecto ao y los terrenos usados para el experimento.

2.6.4 Kiwi

Feucht (1994) analiza los tejidos de kiwi (Actinidia chinensis L.) y cereza (P.
cerasus L.) y determina que: a) los rboles muestran una alta acumulacin de flavonoles en
los brotes de rpido crecimiento y elongacin, y la frecuencia y localizacin espacial es
caracterstica de cada especie. Epicatequina y (+)-catequina son los flavonoles ms
prominentes. b) Los fenoles se originan en el borde de los tejidos, se localizan frecuentemente
en el floema y rayos del xilema, en el xilema primario y en la mdula. c) Los flavonoides atan
receptores membranales especiales que inducen a bloquear el flujo de auxinas, lo cual eleva el
nivel hormonal celular.

2.6.5 Leucaena

Brennan y Mudge (1998) usan una herramienta simple llamada injerto guia con una
nueva tcnica de injerto llamada el empalme simple de yema (ESY). El injerto guia
ensambla perfectamente los cortes complementarios de portainjertos y varetas, y as asegura
un buen contacto cambial, necesario para la formacin de la unin del injerto. Lo usan con
brotes vegetativos delgados (3-15 mm) de leucaena (Leucaena spp.) e hbridos, obtienen un
72% de xito. Adicionalmente usan una tecnica modificada del enchapado lateral cuando el
portainjerto y la vareta tienen dimetro grande, y logran 73% de xito. La compatibilidad
resultante entre 48 combinaciones vareta/portainjerto es del 90% o sea, 43 combinaciones
exitosas. Se utilizan 961 injertos en total, con varetas de 15 especies de Leucaena y tres
hbridos interespecficos, sobre portainjertos de dos especies.

2.6.6 Caducifolios
50

Mosse y Herrero (1950) manejan rboles con injerto simple, doble y un anillo de
corteza tipo veener, para estudiar la forma en la que los dos componentes de un injerto
compatible (pera Conference y membrillo A) pueden reaccionar a la introduccin como
portainjerto o injerto intermedio, de una tercera variedad (pera C8), la cual produce rboles
satisfactorios con unin fuerte cuando se injerta de forma simple con pera Conference.
Encuentran que los sntomas de incompatibilidad son producidos en rboles compatibles con
injerto simple al introducirles un anillo de corteza o una tercera variedad. Los anillos de
corteza veener resultan ms incompatibles que los injertos dobles, con los mismos
portainjertos, varetas y un intermedio de la variedad injertado por anillo de corteza. La
combinacin Conference/C8/Qa, crece bien, y la posicin relativa de los portainjertos y los
intermedios controlan el grado de incompatibilidad de los rboles.

Herrero (1951) realiza experimentos de durazno (Prunus persica Bastch.) var. Hales
Early sobre dos portainjertos, uno compatible; Brompton y otro incompatible; Miroboln B
para descubrir si el tiempo y la cantidad de crecimiento vegetativo, la estructura interna de los
tallos, la estructura de la unin del injerto o la distribucin del almidn estn relacionados con
la incompatibilidad de la combinacin del injerto. Encuentra que ni el tipo de crecimiento
vegetativo, ni el inicio de la actividad cambial en la primavera, parecen estar directamente
asociados con las causas de incompatibilidad. No existe relacin entre compatibilidad y las
caractersticas de la estructura del tallo que se examina. Sin embargo, determina que la
estructura de la unin del injerto, la condicin del interior de la corteza arriba y abajo de la
unin y la distribucin de almidn en las diferentes partes del rbol estn relacionadas con la
compatibilidad.

Asimismo, estudia las distintas manifestaciones de incompatibilidad portainjerto e
injerto durante los dos primeros aos de crecimiento, en combinaciones de chabacano/ciruelo
y manzano/membrillo, as como en sus combinaciones recprocas. Se presentan sntomas de
incompatibilidad en la unin del injerto, as como discontinuidad en floema y xilema. Las
combinaciones durazno/ciruelo, durazno / hbrido Mariana y durazno / chabacano, presentan
sntomas de incompatibilidad del tipo tristeza; sus combinaciones recprocas se muestran
51
compatibles. Los arboles con sntomas de tristeza se sobreinjertan con el clon que funciona
como portainjerto, y se modifica la compatibilidad de la nueva combinacin, estableciendo
diferencias sustanciales (Herrero, 1955a)

Tambin prueba el efecto de ciruelo (Prunus domestica L.) como intermediario en la
incompatibilidad de injertos de durazno (Prunus persica Bastch.) sobre ciruelo Miroboln
(Prunus cerasifera Ehrl.) como portainjerto, y llega a la conclusin de que la presencia de
Prunus domestica L., como intermediario no evita la incompatibilidad existente entre durazno
y ciruelo (Herrero, 1955b).

Mosse y Scaramuzzi (1956) reportan la estructura de la unin de injertos de rboles
de 15 y tres aos de edad, de pera sobre portainjerto de membrillo. Los rboles de 15 aos
son doblemente injertados con un intermedio de pera y los de tres aos son injertados de
forma simple y tambin con un intermedio de pera. Encuentran que todas las uniones
pera/membrillo independientemente de la compatibilidad del intermedio usado, muestran una
capa de separacin obscura marcada entre la corteza de pera y membrillo y proliferacin
anormal de rayos del floema. Tambin se refuerza la hiptesis de que la ruptura en la
continuidad de los tejidos de la madera se incrementa con sustancias letales que se acumulan
en el floema maduro cercano a la unin del injerto y que es capaz de alcanzar el cambium.

Herrero (1956) compara los sntomas producidos en portainjertos de durazno y
ciruelo al interrumpir la traslocacin, eliminando un anillo de corteza en la parte inferior del
tronco, con los sntomas que se producen en la combinacin incompatible durazno/ciruelo.
Seala que los duraznos anillados presentan sntomas de enfermedad y degeneracin
prematura del floema de las races, anlogos a los que se manifiestan en la combinacin
incompatible durazno/ciruela. Tambin los ciruelos anillados muestran clorosis y defoliacin
prematura, as como degeneracin prematura del floema de las races.

De la misma manera, analiza la estructura interna de las uniones portainjerto-injerto de
5 aos de edad entre 91 variedades de ciruelo y el portainjerto Miroboln B, a fin de estimar el
grado de compatibilidad en la unin del injerto. Encuentra que ocho variedades muestran
52
uniones con discontinuidad en los tejidos de la madera y dos de estas variedades presentan
distinto grado de incompatibilidad (Herrero, 1962)

Tabuenca (1973) estudia el comportamiento de rboles de durazno, Miroboln B y
Brompton doblemente injertados durante un ao de crecimiento. Se forman 18 diferentes
combinaciones de vareta, injerto intermedio y portainjerto. Solo el durazno/Myrobaln B.
muestra sntomas externos de incompatibilidad translocada. Cuando se vuelve a injertar con
Brompton o con Myrobaln B., las nuevas combinaciones se vuelven compatibles. Cuando las
combinaciones compatibles Myrobaln B./durazno, Myrobaln B./Brompton, y
Brompton/ Myrobaln se injertan con durazno, las nuevas combinaciones se convierten en
incompatibles. Como testigos se usan rboles francos y con una combinacin. El durazno
como vareta tiene gran cantidad de azcar, como el Brompton o Myrobaln B. Las ramas de
durazno franco tienen la misma concentracin de azcar que varetas de Brompton y
Myrobaln B. Esto puede ser interpretado como un efecto del injerto de durazno y no como
incompatibilidad por un alto contenido de azcar de los injertos de durazno, notable en
combinaciones compatibles e incompatibles. Esto no es exclusivo, este alto contenido de
azcar en injerto incompatible de durazno puede presentarse en otra poca del ao.

Herrero y Tabuenca (1962) estudian las estructuras de unin de 154 variedades de
pera injertadas sobre membrillo y las comparan con los resultados obtenidos por otros
investigadores. Encuentran que ninguna mostr sntomas de incompatibilidad en la parte
superior de la unin, las uniones bajas entre Beurr Hardy y membrillero C, muestran
modificaciones estructurales debido a la presencia de la variedad, pero el vigor mecnico no es
afectado. No existen diferencias en el grado de compatibilidad cuando alguna variedad de pera
es injertada sobre los diferentes portainjertos de membrillo.

Gebhardt y Feucht (1982) estudian heteroinjertos y homoinjertos de Prunus, formados
por cerezo dulce (P. avium L.) como variedad y cerezo comn (P. cerasus L.) como
portainjerto. Los injertos testigo se forman por homoinjertos de P. cerasus (clon W 8). Los
tejidos opuestos a la unin son divididos en cuatro segmentos sucesivos de tallo, y analizados
por su contenido de polifenoles. El modelo de distribucin cuantitativa entre los cuatro
53
segmentos es casi igual en los homoinjertos control. Los heteroinjertos reflejan reducida
compatibilidad ocasionada por una cantidad oscilante de polifenoles a lo largo de los cuatro
segmentos y algunas veces por una acumulacin de compuestos fenlicos arriba de la unin
del injerto.

Larsen et al., (1987) prueban las combinaciones de dos variedades de cereza sobre
cuatro interinjertos (pera, manzana, ciruelo y durazno) y a su vez sobre cuatro portainjertos
(pera, manzana, ciruelo y durazno), todos de 20 aos de edad. Encuentran que el 57% de la
mortalidad est asociada con la incompatibilidad de los interinjertos (pera y manzana), la
produccin es alta para todos los tratamientos, los interinjertos producen tallos delgados, pero
los rboles sin interinjerto tienen tallos ms delgados.

El ciruelo 2977 AD es un portainjerto vigoroso, de rpido crecimiento, aunque an no
est clasificado. Es interesante para portainjerto de cerezas bajo riego, donde otros
portainjertos no sobreviven. Ha mostrado incompatibilidad localizada en pocos cultivares de
cereza. Con el cultivar de ciruela Martn muestra incompatibilidad localizada, as como
tambin con el chabacano Moniqu, aunque es menor a la que presenta cuando se injerta
sobre Miroboln B. Duraznos y nectarinas injertadas sobre ciruelo 2977 AD muestran un
comportamiento muy diferente de acuerdo con el cultivar, pero una alta proporcin es
compatible con l. El almendro Marcona muestra un buen comportamiento cuando se injerta
sobre este portainjerto, mientras Desmayo presenta mal comportamiento, en tres aos de
haberse estudiado (Tabuenca y Moreno, 1988).

Cambra (1990) describe el estudio de 26 clones de ciruelo Miroboln (Prunus
cerasifera Ehrl.), sobresale el Ademir, que muestra aptitud a la propagacin por estaquillas
leosas, es compatible con variedades de ciruelo normalmente incompatibles con el
Miroboln B y tambin es compatible con el chabacano. Su vigor es inferior al Miroboln
y al B, por lo que tiene caractersticas interesantes como un portainjerto enanizante.

Feucht y Treutter (1991) estudian heteroinjertos formados por: portainjertos de cerezo
comn (P. cerasus L.) y varetas de cerezo dulce (P. avium L.) de un ao de edad; cuando
54
aparecen los sntomas de incompatibilidad como clorosis ligera, los fenoles se analizan en
porciones de tres mm arriba y abajo de las respectivas uniones de injerto. Las sustancias
identificadas en gradiente entre la variedad y el portainjerto son: genistina, prunina,
isosakuranina, crisina-7-glucsido catequina y epicatequina, todos ellas se encuentran en altas
cantidades en las varetas. Prunetina-5-glucsido, tectocrisina-5-glucsido y pinostribin-5-
glucsido, se localizan solo en el portainjerto. Algunos flavonoles se acumulan ms
fuertemente en las varetas que en los portainjertos, demuestran as que la incompatibilidad es
causada por la presencia de polifenoles, los cuales se movilizan fuera de sus zonas originales.

Moreno et al., (1993) comparan varias combinaciones de injertos de durazno (Prunus
persica Batsch.)/ciruelo Mirobaln (Prunus cerasifera Ehrl.), en pruebas de vivero. Dos
cultivares de durazno injertados sobre cinco clones de Mirobaln x Myrobaln son observados
durante el primer ao de crecimiento despus de injertados, muestran sntomas de
incompatibilidad translocada en los injertos de rboles de una repeticin durante el primer
ao, y son observados durante el segundo ao de crecimiento. El grado de incompatibilidad es
determinado por velocidad de crecimiento, peso seco de hojas por unidad de rea, y contenido
de pigmento en la hoja. El contenido de carbohidratos en raz es medido al caer las hojas.
Cuando la incompatibilidad es expresada durante el primer ao de crecimiento, las
modificaciones en velocidad de crecimiento, peso seco de hoja por unidad de superficie y
contenido de pigmentos en hojas preceden la expresin de sntomas visibles en hojas por
varias semanas. Las variaciones observadas durante el primer ao, aparecen como resultado de
una expresin tarda de incompatibilidad. Encuentran diferencias significativas en velocidad
y/o severidad de la expresin de incompatibilidad entre los dos cultivares de durazno y al
menos, algn portainjerto.

Moreno et al., (1994) estudian el comportamiento entre cultivares de ciruelo injertados
sobre Adafuel e INRA GF 677; hbridos de almendro x durazno. La compatibilidad de la
unin portainjerto e injerto es estimada por examen interno de las uniones. Cuando se injertan
sobre ambos hbridos, los cultivares de ciruelo europeo President y Reine Claude y los
cultivares japoneses Delbarazur y Fiar, tienen uniones compatibles. Opuestamente los
55
cultivares europeos de ciruelo Marjorie Seedling y Stanley muestran la presencia de tejido
parenquimatoso en la madera en el punto de unin injerto-portainjerto.

Moreno et al., (1994) analizan el contenido de aminocidos y protenas solubles en un
injerto compatible durazno/ciruela (Prunus persica Bastch.) cv. Springtime/(Prunus cerasifera
Erhl.) cv. Mirobaln P 2032 y un injerto incompatible (Prunus persica Bastch.) cv. Springtime
/ (Prunus cerasifera Erhl.) cv. Mirobaln P 18) tres meses despus de injertados. Durante un
primer periodo, entre 57 y 78 das despus de injertar, las protenas solubles y aminocidos
libres por rbol son removilizados del portainjerto en ambas combinaciones. Durante un
segundo periodo entre 78 y 89 das, el contenido de protenas solubles por rbol en los
portainjertos de ambas combinaciones, y el total de aminocidos contina decreciendo en el
portainjerto de la combinacin de injerto incompatible y estabilizado en la compatible. En la
vareta de durazno y en el portainjerto Miroboln; aspargina, aspartato, glutamato y arginina
son los mayores aminocidos libres. En la vareta de durazno, al final del experimento, la
concentracin de protenas solubles; aspargina, aspartato y glutamato es baja en todos los
rganos de los injertos incompatibles, indicativo de deficiencia de nitrgeno en las partes
areas.

Moreno y Tabuenca (1996) prueban durante 12 aos la formacin en campo de los
portainjertos Adara (Prunus cerasifera Erhl.), SL 64 (Prunus malhaleb L.) y Colt (Prunus
avium L. x Prunus pseudocerasus L.), injertados con dos cultivares de cereza dulce (Prunus
avium L.) cvs. Van y Tardif de Vignola, sobre un suelo calcreo franco-arcilloso, con
riego por inundacin. Los rboles no injertados sobre Adara mueren durante el experimento.
El porcentaje de rboles muertos de Tardif de Vigniola sobre Sl64 y Colt, es de 63 y 19%,
respectivamente. El de Van es de 19% sobre SL64 y 6% sobre Colt. Para las varetas de
Van, Adara es el portainjerto menos vigoroso y muestra gran eficiencia en campo y
produccin acumulativa despus de 12 aos, la concentracin de minerales en las hojas es
muy cercana a la ptima. Por lo tanto, Adara resulta el mejor portainjerto para cereza; es
completamente compatible y evita la asfixia de la raz en suelos pesados y calcreos que no
son favorables para otros portainjertos.

56
Wood (1997) prueba 12 cultivares antiguos de pera (Pyrus communis L.) en desarrollo
normal en huertas comerciales que actualmente presentan sntomas de infeccin de virus y de
fitoplasmas causantes de la enfermedad madera gomosa de la manzana. Todos los
cultivares son introducidos antes o al inicio de este siglo y son infectados en su pas de origen
antes de ser introducidos a Nueva Zelanda. Cuando se libran de la infeccin por terapia de
calor, algunos crecen exitosamente sobre los portainjertos de membrillo libres de virus East
Malling "Quince A" y "C", y sobre el portainjerto francs "Quince BA 29" sin problemas de
incompatibilidad, pero otros requieren un portainjerto intermedio como "Beurre Hardy" para
superar a los portainjertos de membrillo libres de patgenos pero que inducen
incompatibilidad.

Los injertos heteroespecficos son frecuentemente incompatibles, resultando en la
muerte del rbol. Las causas de la incompatibilidad han permanecido desconocidas, aunque
muchos eventos bioqumicos son afectados. En el chabacano los componentes fenlicos tienen
una funcin importante en las plantas y constituyen un importante grupo en las relaciones
vareta-portainjerto. Sus implicaciones en el mecanismo de incompatibilidad en etapas
tempranas del establecimiento del injerto son revisadas para proveer un marco de referencia
para una deteccin temprana de injertos incompatibles que acenten la eficiencia en el
mejoramiento de portainjertos (Errea, 1998).

Ermel et al., (1999) realizan un estudio histolgico de injertos compatibles e
incompatibles de pera / pera y pera / membrillo, para caracterizar los eventos estructurales
asociados con la incompatibilidad del desarrollo del injerto. El examen al microscopio define
las diferencias entre las combinaciones de injertos, mostrando los sntomas tpicos de
incompatibilidad: discontinuidad de la corteza con sus principales caractersticas; disfuncin
cambial y acumulacin de almidn en el portainjerto y pequeas clulas necrosadas en la
interfase.

Salvatierra et al., (1999) analizan los compuestos fenlicos extrados de la unin del
injerto de heteroinjertos de durazno (Prunus persica Batchs.) / ciruelo (P. tomentosa Thumb.)
por medio de histoqumica y HPLC y comparados con los homoinjertos de Prunus persica /
57
Prunus persica. Un mtodo de marcaje con DMACA (p-dimetilamino-cinamaldehido)
muestra en los estados tempranos despus de injertar, cmo los fenoles se localizan
principalmente en el callo celular, en el nuevo xilema y en los tejidos corticales de los
heteroinjertos y persistieron uniformes durante seis meses despus de injertar. Estos
compuestos fenlicos frecuentemente rodean a los tejidos necrticos que aparentemente
impiden la unin entre la vareta y el portainjerto. Del anlisis por HPLC, cuatro compuestos
fenlicos aparecen en ambos portainjertos y solo catequina se detecta en el floema de P.
tomentosa. En general el contenido fenlico en los tejidos del floema es alto en homoinjertos
y en heteroinjertos, particularmente prunina y naringenina. Catequina resulta en cantidades
similares en el xilema de ambas combinaciones, acumulndose en la unin del injerto,
mientras que en el floema de los heteroinjertos, su contenido es alto.

Musacchi et al., (2000) investigan el papel de los polifenoles en la incompatibilidad de
heteroinjertos de pera (Pyrus communis L.) sobre membrillo (Cydonia oblonga Mill.), para
determinar s tales compuestos secundarios tienen una seal temprana para pronosticar
incompatibilidad, como un potencial marcador bioqumico del fenmeno. Los anlisis de
muestras de corteza y floema extrados de rboles de pera "Beurre Bosc" y "Bartlett" de dos
aos de edad, por deteccin de HPLC muestran que la catequina y la epicatequina se
incrementan en los portainjertos incompatibles de membrillo. Ambos metabolitos se localizan
an dos aos despus de injertar y antes de la aparicin de sntomas visibles de
incompatibilidad.

Gulen et al., (2002) realizan estudios para identificar las isoenzimas peroxidasas que
pueden ser usadas como marcadores para predecir la incompatibilidad entre pera (Pyrus
communis L.) y varios clones de membrillo (Cydonia oblonga Mill.), usan yemas de los
cultivares de pera 'Bartlett' (BT) y 'Beurre Hardy' (BH), conocidos por formar injertos
incompatibles y compatibles respectivamente, y portainjertos de membrillo 'A' (QA),
'membrillo BA-29' y 15 clones procedentes de Turqua. Toman tejidos de la corteza y del
cambium de portainjertos e injertos no brotados, cuatro cm arriba y debajo de la unin del
injerto para el anlisis de isoenzimas peroxidasas por electroforesis de gel de almidn. El
anlisis es hecho en muestras tomadas 12 meses despus de injertar, muchas bandas de
58
isoenzimas se observan comunmente en las dos varetas. Sin embargo, una peroxidasa anodal
'A' es detectada en BH (vareta compatible), pero no en BT (vareta incompatible). Tambin es
detectada en QA, Membrillo BA-29 y nueve de los clones turcos de membrillo. Otra
isoperoxidasa banda 'B' es detectada en BH pero no en BT u otro de los portainjertos. Se
sugiere que el inicio de isoperoxidasa 'A' en portainjertos de membrillo y en vareta de BH
puede asociarse con un injerto de combinacion compatible. Adicionalmente, la presencia de
isoperoxidasas 'A' y 'B' en los tejidos de la unin del injerto pueden usarse como un indicador
para predecir un injerto incompatible entre BT y portainjertos de membrillo.
2.7 Incompatibilidad histolgica en homo y heteroinjertos

Aunque es largamente conocida la continuidad del plasmodesmo del citoplasma entre
las clulas dentro del cuerpo de la planta, hasta recientemente estas estructuras especiales se
han observado como organelos intercelulares dinmicos involucrados en el transporte de
macromolculas. Los estudios ultraestructurales proveen importante informacin sobre la
formacin del plasmodesmo durante la citokinesis (plasmodesmo primario) y en eventos de
post-citokinesis, donde los nuevos puentes citoplasmticos son insertados dentro de la pared
existente (plasmodesmo secundario). Las modificaciones a la frecuencia del plasmodesmo, y
presumiblemente la composicin, reflejan los requerimientos fisiolgicos y de desarrollo para
la continuidad/comunicacin del simplasto. El plasmodesmo desarrolla una actividad esencial
en la formacin de los dominios fisiolgicos y de desarrollo, en los cuales regulan la
circulacin de macromolculas y establecen una red de control no autnomo celular. La
funcin del trfico plasmodesmal de molculas de informacin provee un medio nuevo de
control de diferenciacin celular (Kragler et al., 1998).

Algunas anormalidades anatmicas no directamente conectadas con la estructura de la
unin del injerto son: la degeneracin del floema, las irregularidades del cilindro central de
madera y la discontinuidad del cambium. El flujo de elementos menores como el Boro, Zinc y
Manganeso, y mayores como el Potasio y Nitrgeno del portainjerto, se detiene en
combinaciones incompatibles, adems existe acumulacin de cido hidrocinico, arbutina,
enzima B-glucsida, hidroquinona, amigdalina, cido ascrbico, catequina y epicatequina
(Mosse, 1962).
59

La carga del floema activa la acumulacin de fotosintatos en las venas menores, a
travs de la fuerza de motivacin por fuerza de translocacin. Puede tomar carga a lo largo de
una ruta completamente simplstica, en todos los plasmodesmos, del mesfilo al floema. El
transporte de pequeas molculas a travs de los plasmodesmos es aparentemente pasivo, y el
concepto del floema simplstico parece as obligado a violar los principios termodinmicos.
No hay evidencia de que tal trayectoria en muchas plantas sea de acumulacin firme, y una
respuesta a los argumentos termodinmicos ha sido puesta por delante. El mecanismo
propuesto envuelve sntesis compuesta de rafinosa y estaciosa en el floema (Turgeon, 1996).

La aplicacin del microscopio confocal y otros mtodos innovadores del estudio de las
estructuras de las plantas, soportan la idea de una red endoplsmica mvil subdividida dentro
de las clulas. El concepto de que el transporte simplstico mvil es discontinuo solo en zonas
donde las plasmodesmas son bloqueadas o perdidas, ha sido enriquecida con las evidencias de
la similitud de la estructura del apoplasma, con las zonas hidroflicas e hidrofbicas. El
dominio flexible de la organizacin de la red de transporte, fuera del citoplasma y las
demandas a la clasificacin de las estructuras de las plantas es complementada con el nivel de
una red supercelular, el modelo clula-red del desarrollo de plantas y sus modificaciones es
debido a interacciones funcionales modificadas entre fotosntesis, respiracin, almacenaje y
exportacin de asimilados (Gamalei, 1997a).

El estado de los organelos endosimbiticos derivados, plsticos y mitocondrias en
la
planta, se enfocan como una unidad, y su probable funcionamiento sin el retculo endoplasma
tico (RE), envuelto durante la endosimbiognesis como el contacto interfase para
metabolismos simbiticos. El concepto concluyente de localizacin de organelos sin RE es
una alternativa a la idea axiomtica de localizacin de organelos sin citoplasma (Gamalei,
1997b).

Una evidencia directa avala que, las protenas endgenas y virales pueden ser
sintetizadas en una clula en particular y subsecuentemente ser transportadas dentro de sus
60
clulas vecinas, o ms distantes. Los plasmodesmos y la membrana celular alineados a los
poros citoplasmticos establecen la trayectoria intercelular responsable de este trfico de
macromolculas (protenas y cidos nucleicos) clula-a-clula. Esteconcepto explica por qu
en las plantas, el destino celular es determinado por bastante posicin como la alineacin de
clulas. La circulacin a larga distancia de protenas y cidos nuclecos dentro del floema
prove el mecanismo por el cual las seales de la planta llegan al meristemo apical, es un
interruptor de tiempo en la fase reproductiva de ese desarrollo (Mezitt y Lucas, 1996).

El desarrollo de clulas del xilema, de inicio procambial o cambial in situ, puede ser
inducido de clulas del parnquima por una tensin de herida, y por combinacin de
fitohormonas in vitro. Los recientes estudios moleculares y bioqumicos identifican algunos
genes y protenas involucrados en la diferenciacin del xilema, los cuales han dado
entendimiento de la diferenciacin del xilema basado en comparaciones de eventos in situ e in
vitro. Como un resultado, la diferenciacin en los elementos de las traqueidas (ET) ha sido
dividida en dos procesos: el proceso temprano que envuelve el origen y desarrollo de las
iniciales procambiales in situ; in vitro, el proceso temprano de transdiferenciacin envuelve
la dediferenciacin de clulas y la subsecuente diferenciacin de clulas dediferenciadas en
clulas precursoras ET. La divisin celular es obviamente importante para el continuo
abastecimiento de clulas del xilema. La regeneracin de tejidos del xilema alrededor de la
herida involucra la ordenacin de la divisin celular por generacin de vasos bien
organizados. Por lo tanto, el control fino de la organizacin de la divisin celular, puede
tambin ser importante para la formacin de tejido del xilema. El proceso tardo, observado
in situ e in vitro, envuelve una variedad de eventos especficos hacia la formacin de ET,
muchos de los cuales se observan en asociacin con la pared secundaria espesa y clulas
muertas programadas, incluyendo expresiones coordinadas de genes que estn involucrados en
la formacin de la pared secundaria (Fukuda, 1996).

El transportador de azcar en la hoja SUT1, es esencial para la carga del floema y para
el transporte a larga distancia de asimilados. Pero el SUT1 RNA mensajero (RNAm) y
protenas son mostradas a ser reguladas diurnamente y a tener tasas de alto volumen. Las
protenas SUT1 se detectan por inmunolocalizacin en membranas del plasma de elementos
61
nucleados de los tubos cribosos (ENT) en tabaco, papas y tomate. Los anlisis de hibridacin
in situ muestran cmo SUT1 RNAm localizan principalmente a los ENT y estn
preferentemente asociados con el plasmodesmo. La inhibicin de la expresin de SUT1 bajo
control de una clula compaera (CC) promotora especfica, indica sntesis de SUT1 RNAm
en la CC. Estos resultados proveen evidencias de ser el objetivo del RNAm endgeno de la
planta y potencialmente SUT1 a travs de los plasmodesmos del floema o por la carga de
azcar de la membrana del plasma de ENT (Khn et al., 1997).
Savidge (1996) realiza un ensayo del control fsico y qumico del desarrollo del xilema
primario y secundario en trminos de mecanismos, gentica, filogentica y fisiologa vegetal.
Las protenas sintetizadas son dirigidas en trminos de iniciales cambiales y determinacin del
destino de las clulas, y otros factores genticos y ambientales controlan la diferenciacin de
diversos fenotipos celulares, propone la extensin de la pared secundaria esculpida durante la
diferenciacin de los elementos de la traqueida, como una funcin de la duracin de la
expresin hometica de los genes.

Por su parte, J orgensen et al., (1998) demuestran que al injertar una vareta no
suprimida (caracterstica de las plantas transgnicas de eliminar una expresin gentica
indeseada; por ejemplo: de inhibir la sntesis de protenas por invasin de virus) sobre un
portainjerto suprimido, la supresin es inducida en la vareta por medio de los
plasmodesmos, clula a clula a larga distancia.

Turquois y Malone (1996) utilizan un mtodo no destructivo, continuo y funcional de
las conexiones hidrulicas con la planta intacta. La unin del injerto es usada como una prueba
del sistema. La tcnica envuelve repetidas aplicaciones de agua en el mismo punto del sistema
y registra simultneamente observaciones del modelo de abultado (incremento en el contenido
de agua) a otros puntos. Tal modelo refleja la resistencia hidrulica de la trayectoria
intervenida. Esto demuestra que las mayores conexiones hidrulicas en la unin del injerto de
tomate se hacen funcionales en un perodo cercano al sptimo da despus de injertar. Esto es
consistente con las observaciones histolgicas en la aparicin de puentes en la herida del
xilema en este tiempo. Esta tcnica puede aprovecharse para un monitoreo no destructivo de
62
los cambios en las conexiones hidrulicas en otros sistemas intactos, por ejemplo, durante la
absicin, sequa inducida, embolismo, o el ataque de patgenos vasculares que marchitan.

2.7.1 Herbceas

J effree y Yeoman (1983) presentan un marco morfolgico y de desarrollo de los
principales eventos celulares en la formacin del injerto en homoinjertos de tomate
(Lycopersicon esculentum Mill.), basado en el microscopio de escaneo y transmisin de
electrones. La adhesin inicial en la mdula de los injertos es seguida por la confrontacin de
nuevas clulas generadas de los tejidos de la periferia del portainjerto y de la vareta. Bandas
de pectina sobre la superficie de estas clulas establecen una unin mecnica entre las
superficies de las clulas, formando el equivalente funcional de una lamela media. Los
plasmodesmos formados de novo en el punto de contacto entre clulas opuestas enlazan las
membranas celulares, formando un paso potencial de comunicacin de alta especificidad.
Subsecuentemente los vasos cortados se diferencian sin el callo en la unin del injerto, y se
conectan dentro del sistema vascular del portainjerto y la vareta por vasos cortados
diferenciados del parnquima vascular y cortical.

Para contestar la pregunta s los plasmodesmos existen entre las clulas del portainjerto
y la vareta, en la unin del injerto de plantas superiores, Kolmann y Glockmann, (1985)
seleccionan un heteroinjerto con clulas marcadoras de cada especie especfica; haba (Vicia
faba L.) se utiliza como vareta y girasol (Helianthus annuus L.) como portainjerto. En la
mezcla de callos de la unin del injerto, las clulas individuales de las dos partes difieren en la
estructura del ncleo, plstidos y microcuerpos. En las paredes de las clulas fusionadas entre
Vicia y Helianthus, los plasmodesmos interconectan los protoplastos de las clulas no
relacionadas. Dos tipos de plasmodesmos se desarrollan: hilos simples y conexiones
ramificadas. La estructura fina de los puentes interespecficos de las clulas, se forman
secundariamente en paredes no divididas, similares a los plasmodesmos normales en paredes
divididas. La incompatibilidad de los injertos Vicia/Helianthus principalmente se debe al
insuficiente contacto celular directo en el parnquima, y especialmente en los tejidos
vasculares entre portainjerto e injerto.
63

De forma similar, Kollman y Glockmann (1991) estudian la formacin de novo de la
conexin citoplasmtica celular en la interface de heteroinjertos in vitro de cinco das de edad,
entre haba (Vicia faba L.) sobre girasol (Helianthus annuus L.) aparecen plasmodesmos
continuos y medios; ambos ramificados y no ramificados en varios estados de desarrollo en
paredes no divididas entre clulas dediferenciadas del callo semejantes y no semejantes, en las
porciones apicales de las clulas sobresalientes del callo y en la zona de contacto entre clulas
opuestas de pared celular extremadamente delgadas con un impresionante contacto con el
plasmalema. Durante el subsecuente espesamiento de las partes modificadas de la pared, los
hilos citoplasmticos envuelven depsitos constrictos atrapados sin el nuevo material de la
pared depositado. Estos hilos citoplasmticos representan plasmodesmos medios, los cuales en
caso de fusin con las estructuras correspondientes de clulas contiguas a travs de las paredes
sueltas, forman conexiones continuas de clulas. Las vesculas de Golgi secretan material de la
pared y son envueltas en el proceso de formacin de plasmodesmos medios y continuos, as
prosigue el mismo mecanismo del desarrollo del plasmodesmo como se describe para
protoplastos aislados en el cultivo de tejidos. Las uniones sugieren la existencia de un
mecanismo no unificado de formacin secundaria de plasmodesmos mostrando alcances
lejanos similares con los establecidos de las conexiones celulares primarias.

Kollman et al., (1985) estudian la ocurrencia de plasmodesmos en las interfaces de dos
heteroinjertos: Impatiens walleriana L. sobre Impatiens olivieri L. y Helianthus annuus L.
sobre Vicia faba L. Para ambas combinaciones encuentran dos tipos de hilos intracelulares: 1.
Plasmodesmos continuos interconectando las clulas de la vareta y el portainjerto, y 2.
Plasmodesmos medios atravesando la parte de la pared de una clula par sin conexin al
lindero celular. Hilos simples o formas ramificadas se desarrollan en ambos tipos de
plasmodesmos. En el caso de los plasmodesmos medios, predominan ramificaciones con
ndulos medianamente extendidos. La distribucin de los plasmodesmos medios y continuos
vara con las diferentes reas de la interfase del injerto: en la regin de los tejidos de los
puentes vasculares, existen ms conexiones celulares continuas. En reas donde el crtex o
clulas de callo derivadas de la mdula o tejidos desalineados en parejas (crtex/tejido
vascular; crtex/mdula y mdula/tejido vascular), predominan los hilos discontinuos.
64

Asimismo, tambin se forman plasmodesmos medios ramificados en presumibles
clulas fusionadas relacionadas con el callo; estas son tpicas estructuras secundarias
formadas en paredes no divididas. Las dos combinaciones de heteroinjertos estudiadas, tienen
diferente grado de incompatibilidad, no muestran signos de degeneracin en las parejas, las
clulas adyacentes con diferentes genomas interconectadas por los plasmodesmos muestran
una ptima preservacin de la estructura fina del citoplasma. Sin embargo, en algunos se
desarrolla una fuerte capa de aislamiento, debido a algn tipo de incompatibilidad, por
ejemplo un alto nmero de hilos citoplasmticos discontinuos (Kollman et al., 1985).

Posteriormente, Rachow y Kollmann (1992a) usan C
14
marcado para cuantificar las
tasas de transporte de asimilables entre vareta y portainjerto del injerto, y comparan el injerto
compatible intrafamiliar de Lycopersicon esculentum Mill., injertado sobre Solanum
tuberosum L., y el injerto interfamiliar menos compatible Vicia faba L. sobre Helianthus
annuus L. Los homoinjertos Lycopersicon/Lycopersicon, Helianthus/Helianthus y Vicia/Vicia
sirven como control. Examinan la correspondencia del transporte con el contacto del floema
en las uniones de los injertos en diferentes estados de desarrollo. El transporte de asimilables a
travs de la interface del injerto inicia en las combinaciones de heteroinjertos y homoinjertos,
entre cinco-siete das despus de injertar. En los injertos menos compatibles Vicia/Helianthus
la marca en la vareta no puede ser detectada en el portainjerto hasta diez das despus de
injertar. La mxima tasa de transporte de asimilables de una parte a la otra es
significativamente baja en injertos de Vicia/Helianthus. Los primeros tubos cribosos que
atraviesan la interfase del injerto se forman en Lycopersicon/Solanum, simultneamente con la
aparicin de asimilables en el portainjerto. Una posterior diferenciacin del incremento del
nmero de tubos cribosos en las uniones de los injertos correlacionados con el incremento de
la tasa del transporte de asimilables, indica que la ruta de translocacin es va floema.

Con el mismo objetivo, Rachow y Kollmann (1992b) aplican varios mtodos
(translocacin de C
14
, cromatografa de capa delgada, medicin de la actividad enzimtica y
micro autoradiografas) para evidenciar que en las uniones de los injertos de Lycopersicon/
Solanum y Vicia/Helianthus y sus homo-combinaciones, los asimilables son parcialmente
65
descargados en su camino de la vareta al portainjerto. Mientras que, en los entrenudos en
ambas partes de los injertos, la sacarosa es el principal asimilado marcado, en las uniones de
los injertos los monosacridos glucosa y fructosa exhiben el marcaje ms prominente. La
invertasa cida es ms activa en las uniones de los injertos que en los entrenudos de la vareta o
el portainjerto. Se observa que el flujo del apoplasto de los tejidos de la vareta es alto en las
uniones de los injertos y en los entrenudos. Las autoradiografas revelan asimilados marcados
fijados en clulas jvenes diferenciadas en la unin del injerto.

Del mismo modo, Schoning y Kollmann (1997) registran la translocacin por el
floema de C
14
-sacarosa y 5/6-carboxifluorescina (CF) de la vareta a travs del portainjerto, en
heteroinjertos in vitro de Lycopersicon sobre Solanum (L/S) y Vicia sobreHelianthus (V/H)
en varios estados de regeneracin. Los autoinjertos de todas las parejas son controles. La
relacin entre el transporte de C
14
y la regeneracin del floema es analizada de cuatro a 20
das de edad en los interinjertos por conexiones continuas de herida-floema entre las dos
partes del injerto. La edad incrementa los contactos entre la herida-floema en las uniones de
los injertos L/S y heteroinjertos V/H. El puente completo herida-floema ocurre durante los
siete primeros das despus de injertar. El nmero de tubos cribosos-herida se incrementa
continuamente 20 das despus de injertar, y es similar en ambos sistemas de injerto.
Evidentemente en los heteroinjertos V/H los nuevos tubos cribosos-herida desarrollados no
soportan el transporte de asimilados dentro del portainjerto. Los experimentos de
translocacin con C
14
-sacarosa, revelan una dependencia-edad que incrementa la
radioactividad en el portainjerto en todas las combinaciones. Las diferencias observadas en la
translocacin del floema estan relacionadas con el fenmeno de compatibilidad /
incompatibilidad en los heteroinjertos.

Wang y Kollman (1996) establecen varios injertos in vitro de explantes internodales:
los heteroinjertos, Nicandra physaloides sobre Lycopersicon esculentum y Vicia faba sobre
Helianthus tuberosus; y autoinjertos de Nicandra physaloides L. y Vicia faba L. La histologa
de la unin del injerto es estudiada con microscopio de luz y electrnico en diferentes edades
del desarrollo del injerto. La proliferacin del callo en la unin del injerto inicia
principalmente en asociacin cerrada con la envoltura del corte vascular, pasando a la regin
66
medular y formando una capa de aislamiento. Los elementos vasculares de la herida se
diferenciaron hacia uno y otro lado directamente del parnquima, o como una regla de las
clulas del callo, tres-cinco das despus de injertar. Las heridas del xilema y del floema
reconectan los cortes vasculares de la envoltura de ambos materiales (p-v) a travs de la
interfase de los autoinjertos de Nicandra y Vicia, cinco das despus. En el heteroinjerto
Nicandra/Lycopersicon las conexiones continuas del floema inician siete das despus de
injertadas. En los autoinjertos de Nicandra la herida del cambium aumenta el floema
secundario y los elementos del xilema se establecen siete-diez das despus de injertar.

Posteriormente, el funcionamiento de la herida del floema entre la unin del injerto es
examinado en diferentes estados de desarrollo usando C
14
-sacarosa; uno-tres das despus de
injertar solamente una pequea cantidad de la sacarosa marcada en el portainjerto es
absorbida, debido a la difusin por simplasto o por apoplasto a travs del callo de la unin del
injerto. La tasa de translocacin es incrementada al principio de la regeneracin del floema,
cinco-siete das despus de injertar. En los injertos menos compatibles Nicandra/Lycopersicon
despus de cuatro semanas de injertar la absorcin del portainjerto decrece de nuevo y los
complejos vasculares anormales inician en la vareta; finalmente los injertos completos
mueren. La incompatibilidad del heteroinjerto V. faba sobre H. tuberosus se caracteriza por
una completa prdida de regeneracin vascular entre la vareta y el portainjerto y
consecuentemente por una extremadamente baja tasa de translocacin de C
14
en el portainjerto
(Wang y Kollman, 1996).

Tambin Monzer y Kollmann (1986), describen las conexiones vasculares y los
contactos simplsticos entre clulas heteroespecficas en injertos de Lophophora williamsii L.
sobre Trichocereus spachianus L. Las conexiones del xilema y el floema son principalmente
establecidas durante el crecimiento secundario por unin, con la actividad cambial del
portainjerto y vareta. Las conexiones del xilema dentro del injerto son caracterizadas por un
espesamiento de la pared secundaria especie-especfica. Hay plasmodesmos interespecficos
enlazando las clulas del parnquima del portainjerto y la vareta. Existe evidencia
circunstancial de la ocurrencia de una conexin simplstica de los elementos de los tubos
cribosos entre el portainjerto y el injerto.
67

Igualmente Moore y Walker (1981a), al estudiar la compatibilidad vegetativa en
autoinjertos de Sedum telephoides L., determinan que la adherencia inicial de la superficie de
los cortes ocurre 24 horas despus de injertar y son correlacionados ambos con una
pronunciada actividad de los dictiosomas a lo largo de la interface del injerto, con
proliferacin de callo en el portainjerto y en la vareta. Una capa necrtica de una o dos clulas
colapsadas en espesor se extienden inicialmente como una barrera continua entre el
portainjerto y la vareta, pero la capa es fragmentada dos-tres das despus de injertar cuando la
proliferacin del callo continua. La incisin del injerto tambin induce una senecencia suave
en las clulas de la interfase de los cortes, caracterizada por una reducida intensidad del
manchado del citoplasma, el reemplazo de la gran vacuola primaria por numerosas vacuolas
pequeas, y la ocurrencia de material floculente a travs del citoplasma. La acumulacin de
almidn durante el primer da despus de injertar desaparece dos-tres das despus. La
senescencia celular solo dura unas horas, y clulas a lo largo de la interfase del injerto se
observan completamente despus de tres semanas de injertar. La diferenciacin procambial
ocurre a travs del puente de callo diez das despus de injertar, y el tejido vascular continuo
maduro es establecido a los 14 das.

Por su parte, Tiedemann (1989) selecciona el heteroinjerto compatible de Cucumis
sativus L. sobre Cucurbita ficifolia L. para estudiar el desarrollo de la unin del injerto de la
formacin de una capa aislada y un callo parenquimatoso de la interfase del injerto sobre la
ocurrencia del contacto simplstico entre las clulas, especialmente los elementos de los tubos
cribosos del portainjerto y de la vareta. La carencia de marcadores ultraestructurales
especficos para especies, del contacto simplstico del floema entre Cucumis y Cucurbita es
demostrada indirectamente por una serie de divisiones. El desarrollo del floema en la unin
del injerto resulta en diferente nmero de tubos cribosos de conexin en cada injerto
individual, pero el nmero promedio de conexiones de tubos cribosos en Cucumis/Cucurbita
es notablemente bajo en relacin al homoinjerto Cucumis/Cucumis. Las observaciones
sugieren la existencia de clulas especficas de reconocimiento e inherente compatibilidad /
incompatibilidad, y que sustancias no especficas de especies como fitohormonas (auxinas),
liberadas por el dao vascular a los tejidos no se pueden considerar como molculas
68
especficas de reconocimiento, ya que proveen suficiente coordinacin interespecfica para
hacer que la unin del injerto se desarrolle en armona.

Numerosos plasmodesmos ramificados (pr) estn presentes entre las clulas de la
envoltura de la vaina (CsEV) y las clulas acompaantes especializadas, conocidas como
clulas intermediarias (CsI) en el floema de las venas menores de Cucumis melo L. y de
Cucurbita pepo L. Estos (pr) son iniciados a plasmodesmos secundarios a travs de paredes
existentes. En los tejidos de descenso, los precursores de CsI producen de dos a cuatrto CIs y
tubos cribosos, los cuales estn presentes por el tiempo de transicin del curso del descenso.
Los plasmodesmos a lo largo de la interfase entre los precursores de CsI y CsEV en los
tejidos de descenso son sin ramas y en nmero pequeo. Antes de que los tejidos de la hoja
inicien la transicin del curso de descenso, el nmero de canales (pr) ocurre completamente
por ramificacin, resultando en ms canales sobre el lado CsI como en el lado CsEV. En
meln esto incrementa en 12 el nmero de canales (pr) con el lado CsEV. As los (pr)
secundarios formados en el tiempo de transicin del curso de descenso pueden ser envueltos
en la carga del floema y exportacin de fotoasimilados (Volk et al., 1996).

Gonzlez y Correa (1996) usan tallos completamente desarrollados de Chondrus
crispus, Gracilaria chilensis, Gymnogongrus furcellatus y Mazzaella laminarioides para tasar
la compatibilidad de tejidos. Adems evaluan el efecto de la polaridad de los tallos sobre el
injerto y su regeneracin. La fusin ocurre entre fragmentos de la misma fenologa en C.
crispus, G. chilensis, G. Furcellatus y M. laminarioides. La fusin entre tejidos esporofticos
y gametofticos ocurre en C. crispus, G. Chilensis y M. laminarioides. La fusin intergenrica
se observa entre C. crispus y M. laminarioides, pero no entre G. chilensis y G. furcellatus.

Moore y Walker (1981b) efectuan un estudio ontognico del brote de un heteroinjerto
entre Sedum telephoides y Solanum pennellii, en orden, para caracterizar los eventos celulares
que ocurren durante la unin de un injerto incompatible. Encuentran que la adhesin del
portainjerto y el injerto ocurre 21 horas despus de injertar y es correlacionada con una
acumulacin de dictosomas en las clulas en la interfase del injerto. La incisin del injerto
provoca una respuesta en las clulas de la herida en ambas partes a lo largo de la interface del
69
injerto, caracterizado por: 1) reorientacin del citoplasma en las clulas adyacentes a la
superficie del corte; 2) deposicin de la pared celular; 3) acumulacin de almidn; 4)
reducida intensidad en la mancha del citoplasma, y 5) proliferacin de callo. Mientras que las
clulas de Solanum se recuperan de los efectos de la herida en el estado temprano y no letal,
las clulas de Sedum bordean la interfase del injerto experimentando una senecencia
celular letal.

Dicha etapa se caracteriza por: 1) suberizacin de la pared celular; 2) vesciculacin del
citoplasma; 3) degradacin de los organelos celulares; 4) prdida de la integridad de la
membrana, y finalmente 5) muerte y colapso de la clula. As, la necrosis celular en Sedum
caracteriza la respuesta de incompatibilidad entre Sedum y Solanum y resulta en la formacin
de una capa necrtica de clulas colapsadas y remanentes del citoplasma de la interfase del
injerto. Ambos portainjertos, Sedum y Solanum mantienen vivos los brotes durante tres das,
indicando esto que la adhesin inicial del portainjerto y vareta no envuelve un evento de
reconocimiento entre clulas vivas opuestas (Moore y Walker, 1981b).

Por otra parte, Barnett y Weatherhead (1988) usan el microscopio electrnico
convencional, y el de baja temperatura, para examinar el callo formado durante la interface del
homoinjerto de Picea sitchensis (Bong.) Carr. Las clulas del callo son producidas por ambos
cambium, as como la dediferenciacin y redediferenciacin de los rayos del parnquima en
portainjerto e injerto. La adhesin entre las clulas derivadas del injerto y el portainjerto es
principalmente a travs de collares pectinosos en la superficie de las clulas del callo,
precediendo una fusin ms general de paredes celulares. El cambium de los dos componentes
del injerto proviene de crecimientos hacia o cerca de cada uno por la presencia del callo. En
cambio, en la diferenciacin de nuevo cambium dentro del callo, cercano al cambium
expuesto a las superficies preparadas del injerto y portainjerto, estas se enlazan y forman una
capa continua de cambium alrededor del tallo combinado.

De la misma forma, Ruizsifre et al., (1997) injertan por aproximacin Euphorbia
pulcherrima cv. Eckespoint C-1 Red(CR), una Poinsettia restringida de ramas, con (TR),
una Poinsettia de ramificacin libre. Las uniones de los injertos son removidas para estudios
70
anatmicos a los cero, cinco, diez, 15, 20, 25 y 30 das despus de injertar, y a la porcin
abajo de la unin del injerto se le permite rebrotar. A los cero das inicia la formacin del
injerto con la secrecin de ltex en ambas superficies de los cortes. A los cinco das, las
plantas CR y TR an no se adhieren, aparece un tejido necrtico, formado por clulas muertas
de una clula de profundidad, en ambas superficies de los cortes, el portainjerto y la vareta an
no se adhieren y se pueden separar fcilmente. A los 10 das, la divisin celular y el
alargamiento de las clulas del parnquima a lo largo de las superficies de los cortes, forman
una capa indiferenciada de cinco-siete clulas de profundidad, estas nuevas clulas se
diferencian en rayos de parnquima, produciendo clulas de parnquima adicional (callo), los
nuevos tejidos de callo penetran en la capa de tejido necrtico y llenan los espacios entre
plantas TR y TC, cerrando la formacin de la unin del injerto y dando soporte mecnico
donde la capa necrtica est rota. Sin embargo, las plantas CR muestran incremento en el
rameo (se desarrollan brotes axilares de nudos latentes) a los diez das despus de injertar,
indicando que las conexiones vasculares no son necesarias para la transmisin del agente de
ramificacin libre, identificado tentativamente como un fitoplasma. La conexin del callo de
tallos TR y CR permite la transmisin del fitoplasma a travs de la unin del injerto.

Rao et al., (1996) estudian las variaciones estructurales en cambium, xilema y floema
colectados de troncos principales de Sterculia colorada, S. alata, S. villosa, S. urens y S.
foetida. En las cinco especies, el cambium es acumulado con variaciones a lo largo de clulas
cambiales fusiformes. Comparada con otras especies, S. foetida tiene las clulas cambiales
fusiformes ms largas y S. urens las clulas cambiales fusiformes ms cortas. Los rayos
cambiales en todas las especies son compuestos y con clulas heterocelulares con vaina. La
altura y ancho son mximos en S. foetida y en S. villosa, respectivamente. En todas las
especies la acumulacin natural de clulas fusiformes cambiales, se mantiene en clulas
derivadas desarrolladas en los elementos de los tubos cribosos, elementos de los vasos y
parenquima axial del floema y del xilema. No obstante, las fibras del floema y xilema no son
abastecidas.

Cagnon y Beebe (1996) muestrean la expansin de las hojas de Moricandia arvensis
bajo la transicin descenso-a-fuente por microscopio de transmisin de electrones, siguiendo
71
la diferenciacin de venas, las interfaces celulares y el desarrollo plasmodesmal a clulas
acompaantes contiguas. El engranaje del desarrollo de plasmodesmos es el mismo para todas
las clases de venas menores, y es asociado con la diferenciacin de elementos de los tubos
cribosos-complejo clulas acompaantes (ETs-CCAs). Plasmodesmos especializados
empiezan a diferenciarse cuando los ETs-CCAs estan sin diferenciacin. Estos plasmodesmos
son maduros estructuralmente por el tiempo que las clulas acompaantes aparecen
completamente diferenciadas, aunque los elementos de los tubos cribosos (Ets) son inmaduros.
Sacarosa, fructosa y glucosa son detectadas por anlisis de HPLC en hojas maduras y tallos,
mientras que ninguna rafinosa es detectada, estableciendo a M. arvensis como una especie
translocadora de sacarosa.

La sntesis de protenas especficas que se acumulan formando estructuras nicas con
los tubos cribosos, coincide con el desarrollo vascular en cucurbitceas, segn los estudios de
Dannenhoffer et al., (1997), que para seguir la acumulacin de lecitina del floema (PP2) y sus
RNAm por anlisis de mancha de RNA, ensayan con enzimas inmunoabsorbentes,
inmunocitoqumica e hibridacin in situ. Los genes codificados PP2 son regulados en su
desarrollo durante la diferenciacin vascular en hipocotilos de Cucurbita maxima. La
acumulacin de PP2, RNAm y protenas paralelamente una de otra durante la elongacin del
hipocotilo, despus los niveles de RNAm decrecen, mientras las protenas son estables. Pero
PP2 y sus RNAm son inicialmente detectados durante la diferenciacin del metafloema.

Igualmente, RNAm de PP2 es detectado en clulas acompaantes en ambas envolturas
y el floema extrafascicular, pero nunca en los elementos de diferenciacin de los tubos
cribosos. En estados posteriores de desarrollo, RNAm de PP2 es ms frecuentemente
observado en floema extrafascicular. En tallos en desarrollo de C. moschata, PP2 es
inmunolocalizado en clulas acompaantes pero no en protenas filamentosas del cuerpo del
floema (protenas-P), caracterizadas por tubos cribosos inmaduros de la envoltura del floema.
En contraste, PP2 es inmunolocalizada en cuerpos persistentes de protenas-P en tubos
cribosos del floema extrafascicular. La inmunolocalizacin de PP2 en heridas de tubos
cribosos maduros es similar a la de la envoltura del floema. Aparentemente PP2 es sintetizado
en las clulas acompaantes y transportado en los elementos diferenciados de los tubos
72
cribosos, donde es un componente de los filamentos de las protenas-P en la envoltura del
floema y persiste en los cuerpos de las protenas-P en el floema extrafascicular. Esta
acumulacin diferencial en la envoltura y en elementos extrafasciculares puede resultar de
diferentes actividades funcionales de los dos tipos de floema (Dannenhoffer et al., 1997).

2.7.2 Castaa

Hongwen et al., (1994) investigan la compatibilidad entre injertos de 15 cultivares
chinos de castaa (Castanea mollissima Blume,) Bl, nueve selecciones americanas (C. dentata
(Marsh.) (Borkh.)), seis cultivares japoneses, y dos hbridos japoneses, sobre dos portainjertos
de castaa china. Los injertos intraespecficos de castaa china tienen 80% de xito despus
de dos estaciones de crecimiento. Una estructura anatmica inusual del tallo de la castaa da
efecto significativo en el xito de los injertos. Los injertos interespecficos de las selecciones
americanas y japonesas, tienen el 70% de xito. Los hbridos japoneses tienen bajo xito:
50%. Una marcada incompatibilidad se observa en una combinacin japons/chino y en dos
americanos/chinos, estos reflejan anormalidades morfolgicas en la unin del injerto,
observadas tambin en los injertos interespecficos. El liado de las fibras del floema refleja el
fracaso de los injertos del estudio. Los resultados sugieren que la incompatibilidad gentica
no es la mayor causa del fracaso en los injertos de castaa china.

2.7.3 Mango

Soule (1971) registra los detalles de la anatoma del tallo del mango (Mangifera indica
L.) y la formacin de la unin del injerto de yema de astilla, en tres portainjertos: Haden,
Saigon y Turpentine de igual edad y crecimiento en cinco etapas; del primer crecimiento
hasta un ao de edad y son: 1) Pre-callo: los tejidos expuestos cuando el portainjerto y la yema
son cortados, estan descoloridos, cuatro das despus de injertar, la herida de la peridermis se
presenta espesa, caf claro, cubierta por suberina ms contenidos resinosos de muchos canales
lacticferos sobre paredes de clulas externas expuestas acompaadas de muchas capas en
varios puntos donde los tejidos son cortados. No hay seales de proliferacin de callo y la
yema puede ser removida. 2) Callo: inicia entre el cuarto y octavo da, la yema est
73
fuertemente adherida al portainjerto ocho das despus de injertar. Las heridas de los cortes
siguen espesas y oscuras. Prolifera el callo del portainjerto y de la yema, envolviendo rayos de
madera, xilema, floema y capas de cambium recien formados. 3) Puente cambial: a travs de
la unin, se nota a los 12 das despus de injertar. Las capas del cambium se extienden
radialmente del callo del portainjerto fuertemente arqueado hacia el lado del injerto.

Subsecuentemente, gran cantidad de callo se origina de los tejidos del portainjerto,
particularmente los cercanos al cambium, el crecimiento es ms lento en la yema. La
diferenciacin de xilema y floema secundarios, aparentemente normales, es observada entre
36 y 48 das despus de injertar. 4) La unin sana: seis-ocho meses despus de injertar,
muchos cilindros continuos de nuevos tejidos entre el portainjerto y la yema se desarrollan de
forma radial y transversal de la zona de la unin del injerto. El nuevo xilema se produce de
forma circular y transversal en el portainjerto y la yema. El xilema, cambium, floema, cortex y
otros tejidos desarrollan tambin una curva de la base del portainjerto hacia la yema (Soule,
1971).

Asante y Barnett (1997) observan la formacin de la unin del injerto en mango
(Mangifera indica L.) con microscopio de luz: la herida inicial responde con secrecin de
resina, la cual contribuye principalmente a la adhesin inicial de las dos partes. La formacin
temprana de callo ocurre principalmente del portainjerto, cuyas clulas producen crculos
ordenados, definitivos, seguidos y frecuentes. Las clulas del parnquima, del crtex, de la
mdula, del xilema y rayos del floema, estn todas involucradas en la formacin del callo. El
establecimiento del puente cambial entre el portainjerto y la vareta es seguido por la
formacin de una capa protectora; la peridermis al otro lado del borde del tallo.

De la misma manera, estudian el efecto de la temperatura sobre la formacin del injerto
en mango (Mangifera indica L.) con auxilio del microscopio de luz y encuentran que la unin
del injerto es favorecida a temperaturas de 24 a 28 C., pero los injertos empiezan a fallar en
su desarrollo a 15 y 20 C, a los 38 C las uniones se forman 20 das despus de injertar, pero
la exposicin a esta temperatura causa dao y muerte a las clulas del callo (Asante y
Barnett, 1998).
74

2.7.4 Caducifolios

Los pesos frescos de suspenciones de cultivos de tejidos de pera (Pyrus communis L.)
y membrillo (Cydonia oblonga Mill.) se incrementan exponencialmente de 30 a 40 das
despus de hacer los subcultivos. La transferencia del cultivo de la pera al medio en el cual los
cultivos de membrillo estan creciendo por 10 das, resulta en 70% de inhibicin de
crecimiento del callo. La transferencia del cultivo del membrillo al medio en el cual los
cultivos de la pera estn creciendo por diez das resulta en 20% de inhibicin del crecimiento.
La adicin de los glicsidos cianognicos amigdalina y prunacina (50 ppm) matan los cultivos
de pera y el crecimiento de los cultivos de membrillo es inhibido en 50%. La adicin de otras
50 ppm inhibe severamente el crecimiento de ambos cultivos. Estos resultados indican que: 1)
La suspensin de los cultivos de membrillo libera los factores que inhiben significativamente
los cultivos de pera. 2) Los cultivos de membrillo son afectados relativamente por metabolitos
liberados por los cultivos de pera. 3) La severa inhibicin del crecimiento de la pera por los
metabolitos del membrillo es minimizada por la adicin de glicsidos cianognicos presentes
en todas las porciones del membrillo, y 4) La incompatibilidad entre pera y membrillo no
necesariamente es asociada con algn estado del desarrollo del injerto (Moore, 1986).

El estudio histolgico comparativo de injertos compatibles, pera/pera (Pyrus communis
L.)/(P. communis L.) e incompatibles pera/membrillo (Pyrus communis L.)/(Cydonia
oblonga Mill) que realizan Ermel et al,. (1993), demuestra que entre las varetas y
portainjertos se forma un callo en unin y conjuncin, producto de las dos partes. Dentro de
las cuatro combinaciones estudiadas (dos homoinjertos compatibles pera/pera: Passe-
Crassane/OHF 333 y Epine du Mass/OHF 333, un heteroespecfico compatible: Passe-
Crassane/EMC y otro heteroespecfico incompatible: Epine du Mas/EMC, pera/membrillo) la
observacin de neocambium es ms frecuente 22 das despus de injertar en el portainjerto y
vareta que en la interfase.Ya que es mas frecuente en los injertos homoespecficos que en los
heteroespecficos (compatibles e incompatibles). El neocambium dentro del callo de conexin
del portainjerto est sistemticamente presente en los injertos compatibles, sin embargo en las
combinaciones incompatibles su presencia es raramente observada.
75

Posteriormente, en las observaciones del microscopio fotnico, las clulas
neocambiales de la vareta y del portainjerto son observadas en cortes transversales y su
aspecto rectangular es apilado, tpico de un corte generatriz secundario. Esto es lo que lo
diferenca de las clulas cambiales que estn ya en su lugar, y tambin su contenido: un
citoplasma denso de vacuolas de tamao pequeo seguido de una importante cantidad de
materiales que presentan las reacciones de compuestos fenlicos hacia los colorantes
utilizados. Las clulas neocambiales de la interfase tienen formas redondas variadas. Estas no
tienen un aspecto apilado. Sus paredes no son tampoco orientadas con respecto al
neocambium de las dos partes. Su contenido parece idntico al de las clulas cambiales a
diferencia de las de la injerto y el portainjerto. En la variedad Passe-Crassane, es su
neocambium el que se dirige directamente hacia el portainjerto, y se mete dentro de propia
prolongacin con una orientacin dirigida hacia su neocambium. En el caso de la variedad
Epine du Mas, el neocambium describe un arco pronunciado hacia el interior, o bien se
llena sobre l mismo efectuando un abultamiento bien marcado (Ermel et al., 1993).

Errea et al., (1994) estudian la incompatibilidad en injertos de dos cultivares de
chabacano (Prunus armeniaca L.) Luizet compatible, y Moniqui incompatible sobre
portainjertos de ciruelo Mirobolano (Prunus cerasifera Ehrl.). En estas especies la
incompatibilidad se manifiesta por la ruptura del rbol despus de la fase de injertacin. El
proceso de la formacin de la unin del injerto es observado durante un mes despus de
injertar. No se observan diferencias en uno u otro en el proceso de cicatrizacin o en su
cintica. As la proliferacin de callo, su diferenciacin y las conexiones vasculares son
establecidas en la misma forma y en el mismo tiempo en los injertos compatibles e
incompatibles. Sin embargo, existen claros niveles de diferenciacin en el callo producido.
Mientras en los injertos compatibles el callo se diferenca rpidamente en el cambium y
tejidos vasculares, en los injertos incompatibles esta diferenciacin no es completa y una
porcin del tejido se envuelve dentro del tejido parenquimatoso y coexiste con los tejidos
vasculares diferenciados.

Por su cuenta, Ermel et al., (1997) realizan un estudio comparativo histo-citolgico de
76
injertos compatibles de pera/pera (Pyrus communis L.)/(P. communis L.) e incompatibles
pera/ membrillo, (Pyrus communis L.)/(Cydonia oblonga Mill), en invernadero; en uniones
colectadas de un da hasta 22 das despus de injertar (DDI), se estudian los principales pasos
sucesivos en la unin del injerto. La adhesin entre las dos partes es observada a lo largo de
los principales tejidos del interior de la corteza (floema y cambium): 24 horas despus de
injertar, aparece una capa necrtica en la interface del injerto. La primera divisin celular es
observada tres DDI. En el interior de la corteza la interface deja la formacin de una unin de
callo, formando nuevos hilos cambiales (neocambium) que aparece entre 10 y 15 das DDI,
iniciando desde las fechas de los cortes del cambium de la vareta y del portainjerto,
continuando despus cuando ellos empezaron a producir floema y derivaciones del xilema.
No se aprecian diferencias entre injertos compatibles e incompatibles durante el primer estado
de la unin del injerto. No se observa el fenmeno de clulas necrticas en la interface de
injertos incompatibles, sin embargo la unin neocambial es retardada en los heteroinjertos
pera/membrillo, especialmente en los incompatibles.

A su vez, Warmund et al., (1993) injertan rboles de manzana (Malus domestica
Borkh.) J onagold/Mark por yema de astilla y posteriormente son muestreados para
determinar por imagen de resonancia magntica la continuidad o discontinuidad vascular entre
portainjerto e injerto. Las imgenes se colocaron en tres categoras: 1) el portainjerto, la yema
de escudete y el nuevo crecimiento del injerto tienen una seal de alta intensidad; 2) el
portainjerto y la yema de escudete tienen una seal de alta intensidad, pero el injerto tiene una
seal de baja intensidad; y 3) el portainjerto tiene seal de alta intensidad, pero la yema de
escudete y el injerto tienen una seal de baja intensidad. La seal de alta intensidad es
asociada con la frontera del agua en tejido vivo y el establecimiento de la continuidad vascular
entre el portainjerto y el injerto. Cuando ocurre el fracaso de las yemas de escudo y/o el
injerto, se obtiene una seal de baja intensidad. La baja intensidad de la seal resulta de
cualquiera de los dos como una concentracin de agua libre en las clulas muertas, o a la falta
de agua en estos tejidos. Al colorear las uniones con azosulfamida, es ms evidente que la
continuidad vascular es establecida en la unin cuando el portainjerto, el escudete y la yema
tienen una seal de alta intensidad en la imagen. Las disecciones posteriores al coloreado con
77
azosulfamida confirman la discontinuidad vascular cuando la yema o el escudete tienen una
seal de baja intensidad.

Del mismo modo, Richardson et al., (1996) utilizan el microscopio de luz para
estudiar la formacin de la unin del injerto en autoinjertos y heteroinjertos de manzana
(Malus domestica Borkh.) en microinjertos in vitro. El desarrollo morfolgico e histolgico
exterior es similar para todas las combinaciones portainjerto-injerto, pero la formacin de la
unin del injerto es ms lenta en los heteroinjertos que en los autoinjertos. La expansin
inicial de hojas en el pice del injerto ocurre en todas las plntulas entre uno-cuatro das y no
es indicativo del xito del injerto. El crecimiento progresivo y desarrollo del injerto puede
usarse como un indicador del xito del injerto10-14 das despus de injertar y probablemente
est relacionado al establecimiento del contacto clula a clula en la interface del injerto. La
continuidad de nuevos elementos vasculares en el portainjerto e injerto se establece cerca de
los 40 das. Los nuevos elementos vasculares forman una curva delgada cerca de la mdula en
forma de C, como un puente entre la unin del injerto. El desarrollo vascular continua hasta
completarse, despus de seis meses.

III MATERIALES Y MTODOS

3.1. Localizacin geogrfica

El experimento se desarroll en el vivero de la Facultad de Ciencias Biolgicas y
Agropecuarias (FCBA) de la Universidad de Colima, en el campus Tecomn, localizada a los
los 18
o
55 LN y 103
o
52 LO, a 20 m sobre el nivel del mar, con clima BS1(h), temperatura
media anual de 26
o
C y precipitacin anual de 700 mm (INEGI, 1993) y en el CIATEJ (Centro
de Investigacin y Asistencia en Tecnologa y Diseo del Estado de J alisco, A. C.) de
Guadalajara, J al.

3.2. Materiales

3.2.1. Equipo de campo

En la fase de campo, el experimento se desarroll en el vivero experimental de la
FCBA con instalaciones a pleno sol, agua y seguridad para las plntulas siguiendo las
metodologas de Ploets et al., (1993), Pereira y Fernndez (1997), Larsen y Higgins (1997) y
Cambra (1990). Se utiliz navaja de injertar marca Victorinox, tijeras cortas de podar, 10 m
de polietileno transparente #16, 40 bolsas de polietileno negro de 25 x 35 cm, 100 kg de
arena, 100 kg de polvillo de coco, 100 kg de suelo, 100 kg de sulfato de amonio, 4 lb de
bromuro de metilo, 1 kg de Difolatan (Captafol) y 1 kg de Dipterex (Triclorfon) segn lo
indican Hartmann y Kester (1992).

3.2.2. Equipo de laboratorio

En la fase de laboratorio, se utiliz un HPLC marca Thermofinnigan con bomba
cuaternaria, modelo P4000, con automuestreador AS 3000, una columna Hypersil ODS C18,
250 x 4.6 mm de dimetro interno, de 5 micras de tamao de partcula, la fase mvil usada fue
A: cido actico al 5% y B: acetonitrilo, el flujo de trabajo fue de 1 ml / min y el volumen de
inyeccin de la muestra const de 30 l. La deteccin de la seal de los compuestos
80
analizados se hizo con un detector de ultravioleta visible (UV-VIS) de arreglo de diodos UV
6000 a una longitud de onda de 640 nanmetros, adems de accesorios y consumibles para
HPLC (Cuadro 3) en las instalaciones del laboratorio de Biotransformacin Microbiana del
CIATEJ .

Cuadro 3. Relacin de accesorios y consumibles para HPLC.
Concepto Marca

Columna Hypersyl ODS de 250 mm Aldrich
Guardacolumna Hypersil ODS Aldrich
Filtros miliporo de membrana 0.22 m. Aldrich
Epicatequina Sigma
Catequina Sigma
Tripton X100 Sigma Ultra
Metanol grado HPLC Sigma
cido actico glacial Sigma
DMACA Aldrich
Acetona Sigma
Acetona J .T. Baker

Dentro de los consumibles para HPLC se encuentran la catequina y la epicatequina
utilizados como estndares o sustancias muestra, para su posterior identificacin por medio del
cromatgrafa lquida de alta resolucin (Figs.1 y 2).

81

Figura 1. Frmula estructural de la catequina (Seto et al., 1997).

.

Figura 2. Frmula estructural de la epicatequina (Seto et al., 1997).

3.2.3. Material biolgico

Se utilizaron 20 plntulas de mamey C. sapota (Sapotaceae) (Quilantan, 1979), de un
ao de edad, con un promedio de 1.4 cm de dimetro del tallo a la altura de injertacin y 1.06
m de altura (Barrientos y Barrientos, 1996; Ogden et al.,1982; Moreno et al., 1987). Tambin
se utilizaron 20 plntulas de chicozapote Achras sapota L. (Sapotaceae) (Gonzlez et al.,
82
1999), de dos aos de edad, con dimetro promedio del tallo a la altura de injertacin de 1.16
cm y 70.28 cm de altura; ambas especies procedentes de plantas de la regin, en plena
produccin, seleccionadas por su calidad, precocidad y adecuadas condiciones sanitarias. Se
mantuvieron en bolsas de polietileno negro de 25 por 35 cm (Gonzaga et al. 1996, Pereira y
Fernndez, 1997), con una mezcla sustratos formada por una parte de suelo, otra de arena y
otra de materia orgnica (Howard, 1993; Honren, 1994), desinfectada con bromuro de metilo
(una libra / m
3
). Las varetas utilizadas fueron terminales, procedentes de plantas
seleccionadas, en plena produccin, de ramas maduras y vigorosas (Ogden et al., 1984;
Zaczek y Steiner, 1997), de igual dimetro que el de los patrones para incrementar el contacto
del tejido vascular (Garner y Chaudhri, 1976; Oda, 1995) y se injertaron el mismo da de su
corte (Ogden et al., 1983; Lazo, 1957; Moreno y Tabuenca, 1991), previa desinfeccin con
fungicida (Difolatan) diluido en agua (2 g/l) por inmersion rpida durante 30 seg (Gonzaga et
al., 1999).

3.3 Mtodos

3.3.1. Homoinjertos y heteroinjertos

Se injertaron las plntulas con el mtodo enchapado lateral o Veneer, a 30 cm de
altura, cubriendo el injerto completamente con polietileno para evitar transpiracin,
deshidratacin y la posible entrada de humedad y patgenos. Despus de injertar se cort el
pice de los patrones (suspendi) para evitar la dominancia apical (Ogden et al., 1984). Se
injertaron 10 plntulas de C. sapota (homoinjertos) y 10 de A. sapota (heteroinjertos) con
varetas de C. sapota en Marzo, cuando las plantas donadoras de vareta se defoliaron
naturalmente (etapa de defoliacin), se injertaron 10 ms de C. sapota y 10 deA. sapota, con
varetas de C. sapota en Mayo, cuando las plantas donadoras de vareta se refoliaron (etapa de
refoliacin) (Quilantan, 1979; Salcedo,1985).

3.3.2. Preparacin de las muestras
83

Al injertar se tomaron muestras de tejido de la zona del cambium de patrones y varetas
y se conservaron en nitrgeno lquido, hasta llevarlas a un supercongelador marca Revco,
modelo Ultima II, a -78 C, 60 das despus de injertar se realizaron cortes en la zona del
injerto, para evaluar objetivamente la compatibilidad / incompatibilidad en los homoinjertos y
heteroinjertos (Herrero, 1962). En muestras de patrones y varetas tomadas el da de la
injertacin y 60 das despus, se determin la presencia de sustancias inhibitorias para el xito
de los injertos, por medio de cromatografa lquida de alta resolucin (HPLC). A las muestras
se les extrajo el cambium y el floema y se rayaron hasta dejarlo en forma de polvo fino, para la
preparacin de los extractos. La extraccin de polifenoles, tipo catequinas, se realiz con una
solucin acuosa de acetona al 80% a la cual se le aadi 4% de Triton-X-100. Los extractos se
concentraron al vaco por medio de rotavapor marca Caframo, modelo VV 2000, a 40 C y se
redisolvieron en metanol, almacenndose a 4 C hasta su anlisis por HPLC; previamente se
filtraron y a una alcuota de los extractos se le hizo reaccionar con 4-
dimetilaminocinnamaldehdo (DMACA) y esta fue inyectada al cromatgrafo. La columna
usada fue Hypersil ODS C18 3 um (250 x 4.6 mm I.D.). La fase mvil estuvo formada por A:
solucin de cido actico al 5% y B: acetonitrilo. La medicin se hizo a una longitud de onda
de 640 nm segn la tcnica de Errea et al., (1994). Se analizaron dos repeticiones por cada
muestra de: portainjerto A. sapota injertado en la etapa de defoliacin, portainjerto A. sapota
injertado en la tapa de refoliacin, portainjerto C. sapota injertado en la etapa de
refoliacin, portainjerto C. sapota injertado en la etapa de defoliacin y con xito a los 60 das
de injertar, portainjerto C. sapota injertado en la etapa de defoliacin, vareta de C. sapota
injertada en la etapa de refoliacin y vareta de C. sapota injertada en la etapa de defoliacin.

3.3.3 Diseo experimental

Se aplic un diseo completamente al azar, cada plntula fue considerada como una
unidad experimental, con 10 repeticiones (Webster y Lucas, 1997; Caruso et al., 1996; Kurian
et al., 1996). Los tratamientos fueron: homoinjertos en etapa de defoliacin, homoinjertos en
etapa de refoliacin, heteroinjertos en etapa de defoliacin y heteroinjertos en etapa de
refoliacin. Las variables evaluadas fueron: nmero de hojas por injerto durante 60 das y
84
porcentaje de injertos con xito a los 60 das despus de injertar (Quilantan, 1979; Ponce,
1979; Howard y Oakley, 1997; Oda et al., 1996).

3.3.4 Anlisis de datos

Los resultados obtenidos no posibilitan el anlisis estadstico de los datos, ya que
nicamente el tratamiento homoinjertos en defoliacin tuvo xito y los dems tratamientos
terminaron en ceros.

IV RESULTADOS

4.1 Compatiblilidad entre homoinjertos de mamey (C. sapota)

4.1.1 Etapa fenolgica de defoliacin

En la etapa fenolgica de defoliacin (Marzo), a los 6 das despus de injertar, el pice
de las varetas present aspecto turgente, hermticamente cerrado y de color caf ferruginoso,
a partir de los 10 das en promedio, empezaron los foliolos a diferenciarse presentando
coloracin verde claro y despus de 12 das en promedio (Abril), abri el fascculo en su
conjunto, pudiendo ya nombrarse propiamente como hojas y por lo tanto, si existi
compatibilidad y se obtuvieron injertos con xito (Cuadro 5, Fig. 3), el 27 de Mayo se dio por
terminado el experimento.

Figura 3. Homoinjerto con xito en la etapa fenolgica de defoliacin.

86
4.1.2 Etapa fenolgica de refoliacin

En la etapa fenolgica de refoliacin (Mayo), 20 das despus de injertar las varetas
presentaron deshidratacin, enjutamiento y coloracin caf clara; los patrones ya tenan
nuevos brotes (seal de actividad) debajo de la zona del injerto, 35 das despus de injertar
(J unio), se dio por terminado el experimento, ya que progresivamente el total de las varetas
presentaron sntomas extremos de incompatibilidad; deshidratacin, coloracin necrtica,
distorsin, muerte y finalmente, cada de foliolos (Fig. 4).

Figura 4. Homoinjerto sin xito en la etapa fenolgica de refoliacin.

Se procedi a hacer el aserrado de la zona de unin portainjerto-injerto y se observaron
ambas partes (patrn y vareta) secas y necrticas (Fig. 5), lo que corresponde al tipo de
incompatibilidad E o uniones que se rompieron al forzarlas y que presentaron elevado grado
de discontinuidad en los haces vasculares y madera, segn la clasificacin de Herrero (1962).

87

Figura 5. Aserrado de la unin portainjerto-injerto de un homoinjerto sin xito en la
etapa fenolgica de refoliacin.

4.2 Compatibilidad entre heteroinjertos de C.sapota / A. sapota

4.2.1 Etapa fenolgica de defoliacin

En la etapa fenolgica de defoliacin (Marzo), 7 das despus de injertar, no exista
ninguna seal de actividad cambial en los injertos, las varetas iniciaron a deshidratarse y a
enjutarse, 20 das despus de injertar (Abril), las varetas mostraban signos evidentes de
incompatibilidad y los patrones iniciaron a emitir brotes nuevos por debajo de la zona del
injerto (seal de actividad), 37 das despus de injertar (Mayo) se dio por terminado el
experimento, ya que la totalidad de las varetas murieron.

Nuevamente se realiz el aserrado de la zona de unin portainjerto-injerto y se
observaron ambas partes (patrn y vareta) secas y necrticas (Fig. 6), lo que corresponde al
88
tipo de incompatibilidad E o uniones que se rompieron al forzarlas y que presentaron
elevado grado de discontinuidad en los haces vasculares y madera, segn Herrero (1962).

Figura 6. Aserrado de la unin portainjerto-injerto de un heteroinjerto sin xito en la
etapa fenolgica de defoliacin.

4.2.2 Etapa fenolgica de refoliacin

Durante la etapa fenolgica de refoliacin (Mayo), 20 das despus de injertar, las
varetas presentaron deshidratacin, enjutamiento y coloracin caf clara; los portainjertos ya
tenan nuevos brotes (seal de actividad) debajo de la zona del injerto, 35 das despus de
injertar (J unio), se dio por terminado el experimento, ya que progresivamente el total de las
varetas presentaron sntomas extremos de incompatibilidad; deshidratacin, coloracin
necrtica, distorsin, muerte y finalmente, cada de foliolos.

De nueva cuenta se practic el aserrado de la zona de unin portainjerto-injerto y se
observaron tambin ambas partes (patrn y vareta) secas y necrticas (Fig. 7), lo que
corresponde al tipo de incompatibilidad E o uniones que se rompieron al forzarlas y que
89
presentaron elevado grado de discontinuidad en los haces vasculares y madera, segn la escala
de Herrero (1962).

Figura 7. Aserrado de la unin portainjerto-injerto de un heteroinjerto sin xito en la

4.3 Determinacin de catequinas por HPLC en heteroinjertos

4.3.1 Portainjerto chicozapote (A. sapota) injertado en la etapa fenolgica de
defoliacin

En las muestras de portainjerto chicozapote tomadas al inicio del experimento, que se
injertaron en la etapa de defoliacin, el anlisis por cromatografa lquida de alta resolucin
(HPLC), determin la concentracin de 17.5 mg/g promedio de dos muestras decatequina y
32.3 mg/g de epicatequina (Cuadro 4, Fig. 8).

90

Figura 8. Cromatograma de la muestra del portainjerto chicozapote (A. sapota)
injertado en la etapa fenolgica de defoliacin.

4.3.2 Portainjerto chicozapote (A. sapota) Injertado en la etapa fenolgica de
refoliacin

Para las muestras del portainjerto chicozapote tomadas al inicio del experimento e
injertado en la etapa de refoliacin, el anlisis por cromatografa lquida de alta resolucin
(HPLC), dio como resultado la concentracin de 14.1 mg/g promedio de dos muestras de
catequina y 24.7 mg/g de epicatequina, respectivamente (Cuadro 4, Fig. 9).

Unidades de
absorbancia

Tiempo (minutos)
Epicatequina 32.3
Catequina 17.5

91

Figura 9. Cromatograma de la muestra del portainjerto chicozapote (A. sapota)
injertado en la etapa fenolgica de refoliacin

4.4 Determinacin de catequinas por HPLC en homoinjertos

4.4.1 Portainjerto mamey (C. sapota) injertado en la etapa fenolgica de
refoliacin

Las muestras del portainjerto mamey tomadas al inicio del experimento e injertado en
etapa de refoliacin, analizadas por cromatografa lquida de alta resolucin (HPLC), dieron
como resultado 7.2 mg/g promedio de dos muestras de concentracin de catequina y 13.2
mg/g de epicatequina, respectivamente (Cuadro 4, Fig. 10).

Unidades de
absorbancia
Tiempo (minutos)
Epicatequina 24.7
Catequina 14.1

Epicatequina 13.2
92

Figura 10. Cromatograma de la muestra del portainjerto mamey (C. sapota) injertado
en la etapa fenolgica de refoliacin.

4.4.2 Portainjerto mamey (C. sapota) injertado en etapa fenolgica de
defoliacin y con xito

Respecto a las muestras de los portainjerto mamey (C. sapota) injertados en etapa de
defoliacin y los nicos con xito en el experimento y tomadas a los 60 das despus de
injertar, el anlisis del HPLC, report la concentracin de 7.1 mg/g promedio de dos muestras
decatequina y 10.8 mg/g de epicatequina, respectivamente (Cuadro 4, Fig. 11).

Catequina 7.2

Unidades de
absorbancia

Tiempo (minutos)

Epicatequina 10.8
93

Figura 11. Cromatograma de la muestra del portainjerto mamey (C. sapota) injertado en
la etapa fenolgica de defoliacin y con xito.

4.4.3 Portainjerto de mamey (C. sapota) injertado en la etapa fenolgica de
defoliacin.

En lo que corresponde a las muestras del portainjerto mamey (C. sapota) injertado en
la etapa de defoliacin y tomadas al inicio del experimento, el anlisis del HPLC, indic la
concentracin de 6.8 mg/g promedio de dos muestras de catequina y 11.9 mg/g de
epicatequina, respectivamente (Cuadro 4, Fig. 12).

Catequina 7.1
Unidades de
absorbancia
Tiempo (minutos)

Epicatequina 11.9
94

Figura 12. Cromatograma de la muestra del portainjerto mamey (C. sapota) injertado en
la etapa fenolgica de defoliacin.

4.4.4 Vareta de mamey (C. sapota) injertada en la etapa fenolgica de refoliacin.

En lo concerniente a las muestras de vareta de mamey (C. sapota) injertadas en la
etapa de refoliacin y tomadas al inicio del experimento, el anlisis del HPLC, marc la
concentracin de 6.4 mg/g promedio de dos muestras de catequina y 12.4 mg/g de

Catequina 6.8
Unidades de
absorbancia
Tiempo (minutos)

Epicatequina 12.4
95

Figura 13. Cromatograma de la muestra de vareta de mamey (C. sapota) injertada en la

4.4.5 Vareta de mamey (C. sapota) injertada en la etapa fenolgica de defoliacin.

Despus de analizar las muestras de varetas de mamey (C. sapota) sin hojas,
injertadas en la etapa de defoliacin y tomadas al inicio del experimento, el anlisis del HPLC,
report la cantidad de 5.1 mg/g de catequina promedio de dos muestras y 9.5 mg/g de

Tiempo (minutos)
Unidades de
absorbancia
Catequina 6.4
Epicatequina 9.5
96

Figura 14. Cromatograma de la muestra de vareta de mamey (C. sapota) injertada en la
etapa fenolgica de defoliacin.

Cuadro 4. Deteccin de catequina y epicatequina en extractos de tallos y varetas de
mamey (C. sapota) y chicozapote (A. sapota) por HPLC (mg/g de muestra)
en dos etapas fenolgicas.
Muestra Concentracin mg/g
Catequina Epicatequina

Catequina 5.1
Unidades de
absorbancia
Tiempo (minutos)
97
Portainjerto chicozapote (A. sapota) injertado en etapa de defoliacin 17.5 32.3
Portainjerto chicozapote(A. sapota) injertado en etapa de refoliacin 14.1 24.7
Portainjerto mamey (C. sapota) injertado en etapa de refoliacin 7.2 13.2
Portainjerto mamey (C. sapota) injertado en etapa de defoliacin
y con xito 7.1 10.8
Portainjerto mamey (C. sapota) injertado en etapa de defoliacin 6.8 11.9
Vareta de mamey (C. sapota) injertada en etapa de refoliacin 6.4 12.4
Vareta de mamey (C. sapota) injertada en etapa de defoliacin 5.1 9.5

4.5. Nmero de hojas en injertos con xito

Solo en los homoinjertos de C. sapota y en la etapa fenolgica de defoliacin se
obtuvieron resultados positivos, la emisin de nuevas hojas, seal de actividad cambial vareta-
portainjerto fue heterognea, inici a los 3 das, en promedio requiri 12 das y necesit un
mximo de 16. El nmero de hojas o brotes nuevos, inici con 5 hojas, en promedio tuvo 6 y
como mximo 8 hojas. A los 30 das de injertadas, el nmero menor de hojas fue de 11, el
promedio result de 13 y como mximo existieron 15. A los 60 das despus de injertar
finaliz el experimento con 18 hojas como mnimo, 20 en promedio y 23 hojas como mximo
(Cuadro 5).

Cuadro 5. Orden de brotacin y nmero de hojas en homoinjertos de mamey (C. sapota)
con xito .
No. de Orden de Das a No. de hojas No. de hojas No. de hojas total
Planta brotacin brotacin en brotacin a 30 das a 60 das

98
1 4 13 7 14 21
2 - - - - -
3 7 15 5 11 18
4 1 3 6 13 20
5 6 14 5 11 18
6 3 11 8 15 23
7 2 9 7 14 21
8 5 13 6 12 19
9 8 16 5 11 18
10 - - - - -
_
X 12 6 13 20

4.6. Porcentaje de homoinjertos y heteroinjertos con xito

Solo en los homoinjertos C. sapota efectuados en la etapa fenolgica de defoliacin
se obtuvieron resultados exitosos; de las diez plantas consideradas como unidades
experimentales, ocho restablecieron los tejidos vasculares en la zona del injerto desde los
primeros seis das despus de injertar y los injertos se mantuvieron activos hasta el final del
experimento, lo que representa el 80% de homoinjertos con xito (Cuadro 5).

En la etapa fenolgica de refoliacin con los homoinjertos C. sapota, la respuesta de
los injertos fue heterognea e incierta los primeros seis das; el 70% de los injertos abri sus
nuevas hojas y paulatinamente se fueron secando; a los diez das, solo el 20% permanecan
vivos y a los 15 das el total de los injertos muri, esto indica que existi un intento de
actividad cambial en la unin del injerto, que disminuy en pocos das hasta que ces y las
varetas agotaron sus reservas, perdieron vigor, se deshidrataron y por ltimo murieron en su
totalidad.

En la etapa fenolgica de defoliacin, los heteroinjertos de C. sapota / A. sapota,
durante los primeros seis das mostraron el 30% de injertos activos, sin llegar a abrir las hojas,
99
despus disminuy gradualmente la actividad vegetativa a los diez das, hasta que ces y por
ltimo la totalidad de varetas se deshidrataron y murieron a los 15 das.

En la etapa fenolgica de refoliacin ocurri algo similar con los heteroinjertos de C.
sapota / A. sapota; el 20% de los injertos permanecieron vivos durante los primeros seis das
y fueron perdiendo vigor, de tal forma que a los 15 das, el total de los injertos se
deshidrataron y murieron.
V DISCUSIN

5.1 Concentracin de catequina y epicatequina en heteroinjertos de C. sapota/A.
sapota y homoinjertos de C. sapota en dos etapas fenolgicas.

La deteccin de catequinas como responsables de incompatibilidad en injertos de
sapotaceas no tiene precedente en la investigacin formal a nivel mundial. Las
concentracines de catequina (mg/g de muestra) y epicatequina en los heteroinjertos,
cuando el patrn de chicozapote (A. sapota), se injert con vareta de mamey (C. sapota),
sin hojas, resultaron las ms altas del experimento, esto coincide con los resultados que
obtienen Feucht y Schmid (1979) al analizar el floema de brotes maduros de Prunus y
determinar que las flavonas (catequina, epicatequina y material oligomrico) son los
componentes predominantes en cerezo dulce (P. avium), cerezo comn (P. cerasus) y
cerezo rojo (P. fruticosa).

Asimismo se coincide con Gebhardt y Feucht (1982) quienes analizan segmentos de
homoinjertos de P. cerasus y heteroinjertos de P. avium sobre P. cerasus y encuentran una
cantidad oscilante de polifenoles. Tambin con Tarnai et al., (1994) que reportan la
presencia de 10 polifenoles en corteza, floema y xilema de rboles de cerezo (P. avium), y
con Feucht (1994) que al analizar tejidos del floema y xilema de kiwi (Actinidia deliciosa)
y cereza (Prunus cerasus), detecta flavonoides, principalmente catequina y epicatequina
como responsables de la incompatibilidad.

Por otra parte, las concentraciones de catequinas en el patrn de chicozapote (A.
sapota), cuando se injert con vareta de mamey (C. sapota), con hojas, fueron las segundas
ms altas de las muestras, estos indicadores dan bases para afirmar que la epicatequina y la
catequina presentes en los patrones de chicozapote (A. sapota), son las responsables de las
fallas en los heteroinjertos de mamey (C. sapota)/chicozapote (A. sapota), ya que las
concentraciones de epicatequina y catequina en las varetas de mamey (C. sapota) con
hojas, y las varetas sin hojas son las que tienen la mnima concentracin de dichas

101
sustancias y se descarta cualquier tipo de efecto gentico, ya que segn Miege (1954)
tienen el mismo nmero cromosmico: 2n=26.

Tambin se puede afirmar que la presencia de las hojas y su reactivacin fisiolgica
y bioqumica est relacionada con la sntesis de nuevas sustancias como las catequinas que
actan como inhibidores de la unin patrn-injerto. Esto concuerda con los estudios en
heteroinjertos de caducifolios; como los efectuados por Feucht y Schmid (1979) en cerezo
dulce (Prunus avium) injertado sobre clones de cerezo comn (P. cerasus) y cerezo rojo
(P. fruticosa), de la misma manera, con Gebhardt y Feucht (1982) quienes estudian esta
relacin en hetroinjertos formados por cerezo dulce (P. avium) como variedad y cerezo
comn (P. cerasus) como patrn.

De igual forma se coincide con Feucht y Treutter (1991) que analizan la relacin de
portainjertos de cerezo comn (Prunus cerasus) y varetas de cerezo dulce (P. avium,) con
Errea et al., (1994a) que examinan muestras de floema de chabacano (Prunus armeniaca)
como variedad y algunas especies de Prunus usadas como portainjertos y detectan de siete
a nueve picos de flavonoles causantes de la incompatibilidad, entre ellos la catequina,
tambin con Errea, et al., (1994b) que reportan concentraciones de catequinas como
respuesta al estrs por incompatibilidad al injertar dos variedades de chabacano (Prunus
armeniaca) sobre varios portainjertos de ciruelo Miroboln (Prunus cerasifera), con
Salvatierra et al., (1999) quienes examinan los compuestos fenlicos extrados de la unin
de heteroinjertos de durazno (P. persica) sobre cerezo Nanking (P. tomentosa) y con
Musacchi et al,. (2000) que investigan el papel de los polifenoles en la incompatibilidad de
heteroinjertos de pera (Pyrus communis)/membrillo (Cydonia oblonga) y detectan
incremento en catequina y epicatequina en los portainjertos incompatibles de membrillo.

De igual manera se coincide con Errea et al., (2001) quienes estudian la
incompatibilidad de injertos in vitro de chabacano (Prunus armeniaca) sobre Prunus spp.
y encuentran compuestos fenlicos solo en algunas reas de la superficie de las

102
combinaciones compatibles, pero en las combinaciones incompatibles detectan una alta
acumulacin de fenoles y con Gulen et al., (2002) quienes realizan estudios para
identificar las isoenzimas peroxidasas que pueden ser usadas como marcadores para
predecir la incompatibilidad entre pera (Pyrus communis) y varios clones de membrillo
(Cydonia oblonga).

Por otra parte, las menores concentraciones de catequina y epicatequina se
encontraron en los portainjertos mamey (C. sapota), en los homoinjertos con hojas y en los
homoinjertos sin hojas. La combinacin portainjerto mamey (C. sapota) injertado con
vareta en defoliacin report la concentracin ms baja de catequina y epicatequina y por
lo tanto la nica que tuvo xito y coincide con lo reportado por Quilantn (1979) y Salcedo
(1985) en homoinjertos de mamey (C. sapota), con lo que se corrobora lo ya expuesto
anteriormente, que la presencia de las catequinas tiene efecto inhibitorio en el desarrollo de
la unin patrn injerto.

5.2 Porcentaje de homoinjertos de C. sapota y de heteroinjertos de C. sapota/A. sapota
con xito.

En relacin al xito de los homoinjertos de mamey (C. sapota) se puede afirmar
que bajo las condiciones ptimas de manejo que se le proporcionaron en el experimento, se
finaliz con un 80% de xito cuando se injert en la etapa fenolgica de defoliacin de la
planta donadora de vareta, esto coincide parcialmente con Salcedo (1985) quien obtiene el
50% de prendimiento y los mejores resultados con varetas de mamey cortadas a
principios de la defoliacin de la planta madre, y con Quilantn (1979), que con el tipo de
injerto enchapado lateral y varetas defoliadas naturalmente, colectadas durante los meses
de febrero a abril, que es cuando los rboles donadores de varetas estan defoliados.

En lo que respecta a la etapa fenolgica de refoliacin de la planta donadora, y
desechando cualquier manejo inadecuado del experimento que pudiera presentar alguna
influencia en los resultados, se finaliz con cero por ciento de xito, esto difiere a lo

103
reportado por Salcedo (1985) quien alcanza el 25% de prendimiento injertando por
enchapado lateral en esta poca, y por Quilantn (1979) quien obtiene el 10% de
prendimiento con el mismo tipo de injerto enchapado lateral y colecta la vareta durante esta
etapa fenolgica.

Sin duda, que es marcado el efecto que tiene la refoliacin en las fallas de los
homoinjertos de mamey (C. sapota) y su relacin con sustancias inhibitorias del desarrollo
de los injertos, en estas condiciones, se puede afirmar que las catequinas y epicatequinas
son las principales responsables del fenmeno de incompatibilidad que se presenta en los
homoinjertos de C. sapota.

5.3 Compatibilidad en homoinjertos de C. sapota y heteroinjertos de C. sapota/A.
sapota.

Los homoinjertos de mamey (C. sapota) que se efectuaron en la etapa de
defoliacin de la planta donadora de vareta, fueron los nicos que tuvieron xito, y por lo
tanto, presentaron compatibilidad, esto coincide con lo reportado por Quilantn (1979) y
Salcedo (1985) quienes realizan experimentos similares al presente y toman varetas de
mamey defoliadas naturalmente; y con Fonseca

y Gonzlez (1999) quienes prueban tres
tipos de homoinjerto en tamarindo (Tamarindus indica L.) que tambin tiene un perodo de
muda o defoliacin, para tal efecto emplean vareta defoliada de forma natural, y reportan
que algo similar ocurre en esta especie y que esta caracterstica est relacionada con la
ausencia de sustancias inhibitorias en la zona del cambium de ambos componentes del
injerto y tambin con el aprovechamiento del vigor interno de la vareta, (la cual se cort e
injert el mismo da para evitar deshidratacin y prdida de viabilidad), ya que despus de
salir de un perodo de reposo, se diferencan vigorosamente las clulas del cambium,
producen rpidamente callo y los tejidos vasculares (floema y xilema) internos, y en el
exterior las yemas vegetativas se transforman en hojas que empiezan a realizar fotosntesis,
a sintetizar fotosintatos y a conducirlos hacia la raz evitando as que esta muera, y por lo
tanto estimula que la formacin del injerto tenga xito.

104
Este fenmeno es denominado por Wrigth et al., (1994) como "el efecto del apogeo
estacional de la radiacin" en las selvas tropicales. Igualmente Oribe et al., (1993) afirman
que las variaciones estacionales estimulan la actividad interna del tallo, la brotacin de
renuevos y posteriormente su desarrollo.

Asimismo, Guglielmino et al., (1997) asocian los cambios estacionales con el
modelo de pectinas metilesterasas, ya que durante la estacin de descanso, el extracto de las
paredes celulares contiene muchas isoformas alcalinas, y durante el perodo de alta
actividad meristemtica, predominan los extractos de isoformas neutras, en los inicios de
la actividad cambial y en sus derivados inmediatos, las enzimas se localizan
exclusivamente en las dictosomas de clulas viejas, y en las uniones de las paredes. Por su
parte, Velez et al., (1998) y Walkovszky (1998) asocian la disminucin de la produccin de
follaje con la ocurrencia de las temperaturas mnimas anuales.

As pues, la incompatibilidad detectada en los homoinjertos en la etapa fenolgica
de defoliacin de la vareta, corresponde a la categora de incompatibilidad localizada, "A"
de la clasificacin de Herrero (1962), que la define como uniones perfectas y la lnea de
unin entre patrn y variedad es imperceptible y por lo tanto no existi incompatibilidad.

Por su parte, los homoinjertos de mamey (C. sapota) que se realizaron en la etapa de
refoliacin de la planta donadora de vareta, resultaron completamente incompatibles y
presentaron el tipo de incompatibilidad E o uniones que se rompen al forzarlas y que
presentan elevado grado de discontinuidad en los haces vasculares y madera, esto coincide
con lo reportado por Herrero (1962). Asimismo es coincidente con Quilantn (1979) y
Salcedo (1985) en C. sapota; con Mosse (1962), Soule (1971), Hartmann y Kester
(1992), Santamour (1988b), Oraguzie et al., (1998), Ermel et al., (1999) y Oraguzie et al.,
(1999), quienes mencionan que las caractersticas intrnsecas de las especies caducifolias
son responsables de la incompatibilidad de los injertos; entre ellas, la discontinuidad del
cambium y la presencia de sustancias que inhiben la unin de los tejidos y la restauracin
de los haces vasculares, principalmente en las varetas, ya que al refoliarse empiezan a
sintetizar nuevas sustancias. Independientemente de que el nmero cromosmico del

105
portainjerto y la vareta sea el mismo (Miege, 1954).

En lo referente a los heteroinjertos de mamey (C. sapota) sobre chicozapote (A.
sapota), en ambas etapas fenolgicas presentaron un estado completo de incompatibilidad,
que corresponde a la incompatibilidad E en la clasificacin de Herrero (1962), que la
define como uniones patrn- injerto que se rompen al forzarlas y que presentan elevado
grado de discontinuidad en los haces vasculares y madera. No existen antecedentes
experimentales al respecto, por lo que la nica explicacin bioqumica y fisiolgica, es la
presencia de metabolitos inhibidores de la actividad cambial y la diferenciacin celular en
la vareta, que al insertarla al patrn le elimina cualquier posibilidad de desarrollarse, las
reservas de la vareta se agotan, se deshidrata y por ltimo se seca, esto coincide con varios
autores en el caso de caducifolios: pera/membrillo, (Mosse y Herrero, 1950); durazno/
ciruelo, (Herrero, 1951); chabacano/ciruelo y manzano/membrillo, (Herrero, 1955a);
durazno/ciruelo, (Herrero 1955b); pera/membrillo, (Mosse y Scaramuzzi, 1956); cereza/
pera y manzana, (Larsen et al., 1987); ciruelo, almendro y chabacano/cereza (Tabuenca y
Moreno, 1988).

De igual forma, se coincide con lo mencionado por Cambra (1990), en la
combinacin ciruelo/ciruelo "Miroboln B"; con Feucht y Treutter (1991), que unen cerezo
dulce/cerezo comn, ciruelo/hbrido de almendro x durazno; con Moreno et al., (1994), en
la combinacin durazno/ciruelo Miroboln; con Moreno et al., (1993), al combinar ciruelo/
almendro x durazno; con Moreno et al., (1994) y Errea et al., (1994c), que injertan
chabacano/ciruelo; con Ermel et al., (1999) y Errea et al., (2001), que trabajan con
chabacano/ciruelo in vitro; y con Wood (1997) y Gulen et al., (2002), que investigan la
combinacin pera/membrillo.

Igualmente se coincide con otros investigadores en perennifolios, como Ponce
(1979) que detecta incompatibilidad entre Annona sp./Rollinia jimenenezii, Annona sp./A.
lutescens, Annona sp./A. diversifolia y Annona sp./A. cherimola. De la misma manera con

106
Vidal et al., (1999) quienes encuentran incompatibilidad entre Annona muricata/A.
purpurea, A.spinosa y A. squamosa.

Contrariamente, este fenmeno no ocurre con los homoinjertos de A. sapota que
tienen porcentajes de xito cercanos al 100%, segn trabajos que realizan Barreto et al.,
(1995) que prueban diferentes alturas de injerto y Gonzlez et al., (1999) que prueban
cinco tipos de injerto.

Las futuras investigaciones sobre incompatibilidad en sapotceas, deberan
considerar, el incrementar el nmero de repeticiones o unidades experimentales vareta-
portainjerto, asimismo aumentar los muestreos en ambos componentes del injerto y hacerlo
diariamente durante 15 das. Estos muestreos seran dirigidos a la zona del injerto del
portainjerto y la vareta, y a la zona superior e inferior del injerto.

VI CONCLUSIONES

Bajo las condiciones en que se realiz el experimento, y con los resultados
obtenidos, se afirma que la concentracin de catequinas est asociada a la incompatibilidad
en los homoinjertos de mamey (C. sapota) en la etapa fenolgica de refoliacin de la planta
donadora y de los heteroinjertos de mamey (C. sapota) injertados sobre chicozapote (A.
sapota) en las dos etapas fenolgicas de defoliacin y refoliacin de la planta donadora.

Con estas consideraciones, se acepta la hiptesis planteada, de que la acumulacin
de catequina y epicatequina es responsable de la incompatibilidad en los homoinjertos de
C. sapota y en los heteroinjertos deC. sapota/A. sapota.

VII LITERATURA CITADA

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DOCTORADO EN CIENCIAS, REA: BIOTECNOLOGA

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