Galeria API 20E

(Sistemas de identificacin multipruebas)

La batera de pruebas API20E es un sistema de identificacin rpida
para bacterias de la familia Enterobacteriaceae y otras bacterias
Gram -. Bsicamente consta de 21 tests bioqumicos estandarizados
y miniaturizados, y una base de datos. Este sistema presenta las
ventajas de ser rpido, eficaz y de permitir realizar numerosas
pruebas a la vez. Cada tira de API 20E contiene 20 microtubos o
pocillos con distintos sustratos deshidratados. Cada tubo es una
prueba bioqumica distinta. La prueba nmero 21, la oxidasa, se hace
de forma independiente a la tira.


Las pruebas de que consta la galeria son las siguientes:

Prueba Reaccin / Enzimas
ONPG Beta-galactosidasa
ADH Arginina deshidrolasa
LDC Lisina descarboxilasa
ODC Ornitina descarboxilasa
CIT Utilizacin del citrato
H2S Produccin de H 2 S
URE Ureasa
TDA Triptfano desaminasa
IND Produccin de indol
VP Produccin de acetona (Voges-Proskauer)
GEL Gelatinasa
GLU Fermentacin/oxidacin de glucosa
MAN Fermentacin/oxidacin de manitol
INO Fermentacin/oxidacin de inositol
SOR Fermentacin/oxidacin de sorbitol
RHA Fermentacin/oxidacin de ramnosa
SAC Fermentacin/oxidacin de sacarosa
MEL Fermentacin/oxidacin de melobiosa
AMY Fermentacin/oxidacin de amigdalina
ARA Fermentacin/oxidacin de arabinosa
OX Citocromo oxidasa


A patir de una colonia bien aislada del microorganismo, hacer una
suspensin en 5 mL de solucin salina (1% de NaCl) o 5 mL de agua
estril.



Llenar con la suspensin de bacterias los tubos, no la cpula (cada
pocillo tiene un tubo y una cpula, parte aerobia), de todos los
pocillos.


Llenar la cpula de los pocillos CIT , VP, GEL con la suspensin de
bacterias.



Cubrir con parafina las cpulas de los pocillos ADH, LDC, ODC, URE,
H
2
S para obtener anaerobiosis.



Poner la tira en su propia cmara hmeda de incubacin. Previamente
poner agua en los alvolos de la cmara para proporcionar una
atmsfera hmeda durante la incubacin.



Incubar a 37 C durante 18-24 h.



Tras la incubacin se anotan los resultados inmediatos, es decir, los
que no requieren ser revelados.

Determinadas pruebas requieren ser reveladas, para el revelado se
tienen que tener en cuenta dos criterios:

Si la glucosa da negativo y los tests positivos son dos o menos de dos, no
hay que aadir reactivos. Cuando sto ocurre se hacen otros tipos de API
como el API 20NE, API OF, el API M o el API 10S para ver determinados
metabolismos especiales.

Si la glucosa es positiva y/o tres o ms tests son positivos se revelan los test
que requieren reactivos:
TDA

Aadir una gota de FeCl
3
10 %.

VP

Aadir una gota del reactivo 1 (KOH al 40%) y una gota del reactivo 2
(C
2
H
5
OH).

IND

Aadir una gota de reactivo de Kovacs o de Dimetilamino-
cinamaldehido.

Oxidasa

Aadir una gota del reactivo (tetrafenilendiamina) recin preparado.

Interpretacin

La lectura de los resultados se lleva a cabo por comparacin de los
colores de cada pocillo con los de las tablas de lectura, y anotando el
resultado como positivo o negativo (ms adelante se explicar con
detalle).

Prueba Reaccin / Enzimas Negativo Positivo
ONPG Beta-galactosidasa sin color amarillo
ADH Arginina deshidrolasa amarillo rojo o naranja
LDC Lisina descarboxilasa amarillo rojo o naranja
ODC Ornitina descarboxilasa amarillo rojo o naranja
CIT Utilizacin del citrato verde
azul oscuro o
turquesa
H2S Produccin de H 2 S
sin precipitado
negro
precipitado negro
URE Ureasa amarillo rojo o naranja
TDA Triptfano desaminasa amarillo marrn-rojo
IND Produccin de indol amarillo
color rosa o anillo
rosa-rojo
VP
Produccin de acetona (Voges-
Proskauer)
sin color rosa-rojo
GEL Gelatinasa sin difusin
difusin de
pigmento
GLU
Fermentacin/oxidacin de
glucosa
azul o verde amarillo
MAN
Fermentacin/oxidacin de
manitol
azul o verde amarillo
INO
Fermentacin/oxidacin de
inositol
azul o verde amarillo
SOR
Fermentacin/oxidacin de
sorbitol
azul o verde amarillo
RHA
Fermentacin/oxidacin de
ramnosa
azul o verde amarillo
SAC
Fermentacin/oxidacin de
sacarosa
azul o verde amarillo
MEL
Fermentacin/oxidacin de
melobiosa
azul o verde amarillo
AMY
Fermentacin/oxidacin de
amigdalina
azul o verde amarillo
ARA
Fermentacin/oxidacin de
arabinosa
azul o verde amarillo
OX Citocromo oxidasa




Del conjunto de reacciones y resultados se obtiene un perfil numrico
de 7 cifras. Los pocillos estn separados en grupos de tres: en total
tenemos 7 grupos de tres tubos o tripletes (el test nmero 21
corresponde al test de la oxidasa).

Para obtener el perfil nmerico de 7 cifras, a cada pocillo se le dar el
valor 0, 1, 2 4, de acuerdo a los siguientes criterios:

Si la reaccin es negativa se pone 0.

Si la reaccin es positiva se pone: 1 si es el primer pocillo de un triplete, 2 si
es el segundo, 4 si es el tercero.

Se suman los valores de cada triplete, con las sumas de los siete tripletes se
obtiene un cdigo de 7 cifras.

Con este cdigo se busca en la tabla de identificacin la especie de
que se trata, para realizar esta operacin hay programas informticos.

Perfiles numricos.


0104140 Shigella flexneri
0104452 Salmonella paratyphi A
0104504 Pasteurella multocida
0104521 Yersinia enterocolitica
0140004 Pasteurella multocida
0144042 Shigella boydii
0206042 Acinetobacter calcoaceticus
0210004 Achromobacter sp.
0210004 Alcaligenes faecalis
0210004 Alcaligenes sp.
0314000 Proteus mirabilis
0504512 Salmonella paratyphi A
0676001 Proteus vulgaris
0776000 Proteus mirabilis
1000004 Pasteurella sp.
1014743 Klebsiella ozaenae
1104112 Shigella sonnei
1214012 Yersinia pseudotuberculosis
1214773 Klebsiella pneumoniae
2206004 Pseudomonas aeruginosa
2504752 Salmonella spp.
3005573 Enterobacter cloacae
3246527 Aeromonas hydrophilia
4004550 Salmonella cholerasuis
4004550 Salmonella typhi
4104100 Salmonella gallinarun
4357106 Vibrio parahemolyticus
4404112 Salmonella gallinarum
4404510 Salmonella cholerasuis
4404540 Salmonella tiphy
4504010 Salmonella pullorum
4604552 Salmonella spp.
4704500 Salmonella cholerasuis
5004024 Pseudomonas cepacea
5044124 Vibrio cholerae
5046753 Serratia odorifera
5100100 Yersinia ruckeri
5104111 Hafnia alvei
5104542 Salmonella arizonae
5144572 Escherichia coli
5207323 Serratia rubidae
5255573 Klebsiella oxytoca
5346761 Serratia marcescens
5314173 Enterobacter gergoviae
5317761 Serratia marcescens
5704412 Salmonella arizonae
5704552 Salmonella arizonae
6004540 Salmonella typhi
6144204 Plesiomonas shigelloides
6404112 Salmonella spp.
6504750 Salmonella spp.
6604512 Salmonella spp.
6704342 Salmonella spp.
6704532 Salmonella spp
6704752 Salmonella gallinarum
7244126 Aeromonas hydrophila
7305773 Enterobacter cloacae
7704752 Salmonella arizonae
7704752 Salmonella spp.