OBTENCIN DE ETANOL POR FERMENTACIN A PARTIR DE SACAROSA

Lucero, L., Ramrez, E., Rozo, W. Facultad de Ciencias Tcnicas e Ingeniera.

Departamento de Alimentos. Bogot. 2013.

RESUMEN
La fermentacin alcohlica es una bioreaccin que permite degradar azcares en
alcohol y dixido de carbono., las principales responsables de esta transformacin
son las levaduras (Vzquez, 2007). Para esta prctica se realiz la prctica con el
fin de evaluar panela como sustrato en la produccin etanol por fermentacin
alcohlica. Se prepararon cinco muestras de solucin de sacarosa como fuente de
carbono con diferentes concentraciones de levadura Saccharomyces cerevisiae,
se ajust el pH hasta un rango de 3,4 3,6, se hizo seguimiento durante 8 das,
donde se evalu el comportamiento de Brix, pH, Acidez, y nmero de clulas. Se
obtuvo una fermentacin alcohlica con produccin de CO
2
, se pudo observas la
reduccin de solidos solubles y del pH, de la misma manera el aumento en la
acidez y el crecimiento de levaduras. La fermentacin es ms favorable cuando
hay mayor cantidad de inoculo.
Palabras claves: Biomasa, etanol, fomentacin, sacarosa, Saccharomyces
cerevisiae.
ABSTRACT
Alcoholic fermentation is a bioreactor that allows degrade sugars into alcohol and
carbon dioxide., Primarily responsible for this transformation are yeasts (Vzquez,
2007). For this practice, the practice was performed in order to evaluate the sugar
cane production as a substrate for fermentation ethanol. Five samples were
prepared sucrose solution as a carbon source with different concentrations of yeast
Saccharomyces cerevisiae, the pH was adjusted to a range of 3.4 to 3.6, was
followed for 8 days, which evaluated behavior Brix, pH, acidity, and cell number.
Fermentation was obtained with CO2 production could observe the reduction of
soluble solids and pH, in the same way an increase in acidity and yeast growth.
Fermentation is more favorable when there is greater amount of inoculum.
Keywords: Biomass, ethanol, fomentation, sucrose, Saccharomyces cerevisiae.

INTRODUCCIN
La fermentacin es un proceso de
transformacin catablica que sufren
ciertas sustancias orgnicas bajo la
influencia de mnimas cantidades de
otros llamados fermentos orgnicos,
en otros ms simples que se produce
por la accin de enzimas o
microorganismos en determinadas
circunstancias para permanecer
inalterados durante varios periodos
de tiempo, y se produce por una
oxigenacin o una hidratacin. Las
fermentaciones ms importantes son
producidas por levaduras o por
bacterias, que la industria
procesadora de alimentos la adquiere
en el comercio interno o externo, la
reacciones incluye generalmente la
descomposicin de los azucares y
almidones y de esta manera producir
defensas para ciertos
microorganismos indeseables en el
alimento, tambin producen alcohol
etlico y dixido de carbono, siendo el
producto final un compuesto orgnico
que caracteriza los diversos tipos de
fermentaciones. Con el advenimiento
de la ciencia del estudio de la
microbiologa y en particular la
fermentacin, se puede cuantificar y
cualificar las actividades antiguas y
tradicionales usadas por los egipcios
como desarrollo social que era
empleada en los rituales (Garrido J,
2004).
En la industria de las fermentaciones,
el costo, la disponibilidad y la
estabilidad de los sustratos de
fermentacin, son motivo de
investigacin, ya que pueden
representar hasta el 68 % del costo
de produccin de los productos
obtenidos por fermentacin, siendo
las materias primas ms importantes
las fuentes de carbono y de
nitrgeno. En referencia a la fuente
de carbono, la melaza de caa de
azcar y la panela, estas presentan
buena fuente de azcares
fermentables y no requiere
pretratamiento complejo.
Tradicionalmente la urea es la
principal fuente de nitrgeno, y el
fsforo, es adicionado en la forma de
fosfato diamnico por su demostrada
facilidad de absorcin por parte de
las clulas microbianas, favoreciendo,
al igual que la fuente de nitrgeno, el
desarrollo celular (Serna y col. 2008)
METODOLOGA
En un baln de un litro se prepararon
500 mL de una solucin de panela
molida Doa Panela al 16%w/v. se
ajust el pH de la solucin preparada
adicionando cido sulfrico 1N hasta
llegar a un pH entre 3,4 y 3,6, este
parmetro se midi con un pH-metro.
Despus preparada la mezcla se
tom una muestra para ser analizada.
Se midi la cantidad de solidos
solubles por medio del refractmetro,
luego en un vaso de precipitados de
100mL se tomaron 10mL de la
solucin y se titul con Hidrxido de
sodio 0,4983N con la ayuda de una
bureta de 25mL con el fin de
determinar %acidez como acido
pirvico. Posteriormente se pes en
una balanza analtica el inoculo
levadura Saccharomyces cerevisiae
de Levapan y se adicion 0,1; 0,5; 1;
1,5 y 2% a cada una de las
soluciones preparadas. Despus de
tener la mezcla preparada de ajito
bien buscando una suspensin
homognea de las clulas en el
medio, se tom 1mL de la solucin y
se hizo una dilucin 1/100 y se mont
en la cmara de neubauer, se mont
al microscopio observ y se
determin la cantidad de clulas por
mL presentes en la mezcla. Durante
los das siguientes se hizo
seguimiento al 0; 1; 2 y 8 das
midiendo Bx; pH; Acidez y Recuento
de clulas.
RESULTADOS Y DISCUSIN
A continuacin se presentan los
resultados obtenidos en la prctica,
se determinaron cuatro parmetros
Bx, pH, Acidez y #cell/mL.


En la grfica 1 se observa la
reduccin de solidos solubles con el
tiempo, en la concentracin de 1,5%
de inoculo hubo un aumento de 1,4 a
3,8 Bx, donde se observa una
medida de solidos muy pequea, al
0
5
10
15
0 1 8

B
x

Dia
COMPORTAMIENTO Bx EN LA
SOLUCIN DE SACAROSA
0,1% Inculo 0,5% Inculo 1% Inculo
1,5% Inculo 2% Inculo
Grfica 1. Comportamiento de Bx en
solucin de Sacarosa durante 8 das de
incubacin.
parecer no se calcul bien la
correccin de los Bx.
Grfica 2. Comportamiento del pH en
solucin de Sacarosa durante 8 das de
incubacin.
El pH representado en la grfica 2,
disminuye con el tiempo de
incubacin al producirse etanol,
acidificando el medio. La muestra con
1% de inculo presento la mayor


reduccin de pH llegando hasta 2,83
y la muestra de 1,5% de inoculo fue
la de pH ms alto donde se obtuvo un
resultado de 3,37..
Hubo una diferencia significativa en la
muestra de 0,5% de inoculo, con una
diferencia de 3,06% de acidez,
comparada con la muestra de 1,5%
de inoculo. En todas las muestras
aumento la acidez desde el da 0 al
da 8.


En el crecimiento de levaduras en la
muestra con 0,1% tuvo una cantidad
muy baja de levaduras, un recuento
de 10.100 cel/mL y aument hasta
5.100.000 cel/mL en el da 8. La
muestra de 0,5% de inoculo presento
un recuento de 11.550 cel/mL en el
da 0. Disminuy el recuento en el da
1 a 4.850 y aument de nuevo en el
da 8 hasta 76.000 cel/mL. En la
muestra con 1% de inoculo hubo un
2,5
2,7
2,9
3,1
3,3
3,5
3,7
0 1 8
p
H

Dia
COMPORTAMIENTO pH EN LA
SOLUCIN DE SACAROSA
0,1% Inculo 0,5% Inculo 1% Inculo
1,5% Inculo 2% Inculo
0,E+00
2,E+08
4,E+08
6,E+08
8,E+08
1,E+09
1,E+09
1,E+09
0 1 8
#
c
e
l
l
/
m
L

Dia
RECUENTO DE LEVADURAS EN
LA SOLUCIN DE SACAROSA
0,1% Inculo 0,5% Inculo 1% Inculo
1,5% Inculo 2% Inculo
Grfica 4. Crecimiento de Saccharomyces
cerevisiae en solucin de Sacarosa durante 8
das de incubacin.
0%
1%
2%
3%
4%
5%
6%
0 1 8
%
A
c
i
d
e
z

Dia
COMPORTAMIENTO %ACIDEZ EN
LA SOLUCIN DE SACAROSA
0,1% Inculo 0,5% Inculo 1% Inculo
1,5% Inculo 2% Inculo
Grfica 3. Comportamiento de la acidez en
solucin de Sacarosa durante 8 das de
incubacin
aumento de 4.8E+8 cel/mL. Se
present un recuento ms bajo en la
solucin con 1,5% de inoculo en
relacin con las muestra con la
muestra del 1% durante los 8 das de
fermentacin, pudo inocularse una
muestra con un nmero menor de
clulas vivas. En la muestra del 2%
hubo un aumento en el da 1 de
1,15E+8 y disminuyo el recuento para
el da 8 con una diferencia de 5,1E+8,
posiblemente la disminucin de
levaduras debido a la produccin de
Etanol.
CONCLUSIONES
La fermentacin de la sacarosa
presente en la panela es favorecida
por concentraciones iniciales de altas
de Inoculo. Donde forma un alto
recuento de clulas y disminuye el
pH.
En el proceso de fermentacin hay
muerte de clulas fermentativas de
acuerdo al tiempo de fermentacin, a
las condiciones de pH y a la ausencia
de nutrientes como lo es el Carbono.
Los mejores resultados de obtuvieron
en las muestras de concentraciones
de 0,5; 1; 2% de inculo donde se
observaron comportamientos
similares de acuerdo a los
parmetros evaluados.
BIBLIOGRAFA
GARRIDO J. 2004. Industrias
Qumicas y Agroalimentarias, Anlisis
y Ensayos, Universidad Politcnica
de Valencia.
PEARSON. 1996. Composicin y
Anlisis de Alimentos de Pearson,
Mxico.
SERNA L., Mera D. y col. 2008.
Cintica de Fermentacin Alcohlica
Utilizando como fuente de Nitrgeno
Harina de Semilla de Guayaba
Psidium Guajava. Universidad
Nacional de Colombia, sede Palmira.
Colombia. En lnea:
http://www.unalmed.edu.co/biofab/me
morias/Ponencias/Bioetanol_lignocelu
losicos/Cinetica_fermentacion_alcoho
lica.pdf.
VSQUEZ H. Dacosta O. 2007.
Fermentacin Alcohlica: Una Opcin
Para La Produccin De Energa
Renovable A Partir De Desechos
Agrcolas. En lnea: http://www.
scielo.org.mx/scielo.php?pid=S1405-
77432007000400004&script=sci_artte
xt


ANEXO
Cuestionario
1. cul es la composicin bromatolgica de la panela y/o melaza?
Tabla 1. Composicin de la Panela.
Componente Contenido
Solidos Solubles 94 -97 Bx
Azucares reductores 83 - 89%
Proteinas (N*6,25) 0,50%
Humedad 2,5 - 12%
Solidos sedimentables 3,0%
Cenizas 0,8 - 1,9%
Nitrogeno 0,12%
Grasa 0,90%
Magnesio 50 - 90 mg
Fosforo 50 - 65 mg
Sodio 2 - 7 mg
Potasio 150 - 230 mg
Calcio
80 -150
mg

2. Qu son levadura y cul es su utilizacin en la industria alimentaria?
La levadura es un pequeo microorganismos de caractersticas vegetales que se
utiliza para hacer crecer la masa del pan y/o elaborar bebidas alcohlicas, como el
vino, la sidra y la cerveza. Es en s un alimento muy nutritivo, rico en protenas y
vitaminas del grupo B. Los residuos de levaduras procedentes de la fermentacin
se procesan para elaborar pastas untables e ingredientes para una amplia
variedad de productos, desde aperitivos hasta carnes procesadas.
Se ha utilizado durante miles de aos en la elaboracin de pan y bebidas
alcohlicas. Desde los albores de la humanidad, las semillas han constituido uno
de los pilares de nuestra alimentacin. Nuestros ancestros descubrieron que el
grano molido y cocinado resultaba mucho ms apetecible. Todava se utiliza esta
tcnica hoy en da en la preparacin del pan zimo y las tortas.


3. Cul es la composicin del medio selectivo para Saccharomyces
cerevisae?
Saccharomyces cerevisae a la especie de levadura utilizada por excelencia
para la obtencin de etanol a nivel industrial debido a que es un microrganismo
de fcil manipulacin y recuperacin, no es exigente en cuanto a su cultivo no
presenta alto costo, tolera alta concentraciones de etanol, en la fermentacin
produce el bajo niveles es osmotolerante . Capaz de utilizar alta
concentraciones azucares presenta alta viabilidad celular reciclado y
caracterstica floculacin y sedimentacin para el procesamiento posterior.
4. Cules variables deben medirse y controlarse durante este proceso de
fermentacin?
Para controlar la incubacin se necesita un control preciso de distintos
parmetros. Los ms importantes son: la temperatura, el pH, el suministro de
oxgeno u oxidacin-reduccin, la agitacin, la presin, el control de espuma, la
alimentacin auxiliar o una combinacin de estos controles
5. Qu procesos de la industria alimentaria se fundamenta en el principio de
fermentacin alcohlica?
La fermentacin alcohlica se debe a una enzima soluble que produce las
levaduras zimasa, es un complejo de enzimas.
6. Cul es la aplicacin de las enzimas en el procesamiento de alimentos?
Las enzimas tienen muchas aplicaciones en diversos tipos de industrias, entre
las que se destaca la alimenticia. En algunos casos, como la obtencin de
yogur, o la produccin de cerveza o de vino, el proceso de fermentacin se
debe a las enzimas presentes en los microorganismos que intervienen en el
proceso de produccin. Sin embargo, otros procesos de produccin de
alimentos, pueden realizarse mediante la accin de las enzimas aisladas, sin
incluir a los microorganismos que las producen.
Desde hace unas dcadas se dispone de enzimas relativamente puras
extradas industrialmente de bacterias y hongos, y algunas de ellas de las
plantas y los animales y con una gran variedad de actividades para ser
utilizadas en la elaboracin de alimentos.