REBIOL. Vol.

29, N 1: enero - junio, 2009

Organo oficial de la Facultad de Ciencias Biolgicas. Universidad Nacional de Trujillo. Trujillo-Per

Nota Cientfica


Desarrollo in vitro de plntulas de
Epidendrum sp. (Orchidaceae) utilizando
carbn activado y 6-bencil-amino purina
(BAP)

In Vitro growt of Epidendrum sp (Orchidaceae) plants utilizing
activated coal and 6-bencil-amino purine (BAP)

Shirley Valderrama Alfaro, Paola Tejada-Castillo, Raquel Snchez-
Marn, Cynthia Parimango-Quispe, Ana Santa Mara-Reyes, Amelia
Vega-Huamn, Julio Chico-Ruiz

Laboratorio de Fisiologa y Cultivo de Tejidos Vegetales
Universidad Nacional de Trujillo

RESUMEN

La importancia de las orqudeas radica exclusivamente en la belleza, fragancia y exotismo de sus
flores. Su crecimiento en condiciones naturales es muy lento por lo que la obtencin de las
florestambin demora, sin embrago esta dificultad se puede superar con los medios de cultivo
artificiales. Con el objeto de obtener numerosas plntulas in vitro, se formul un medio nutritivo
utilizando carbn activado y 6-bencil aminopurina (BAP) para evaluar el desarrollo de yemas
axilares, protocormos y races de Epidendrum sp. (Orchidaceae). Se utilizaron plntulas germinadas
in vitro de un ao de edad, e introducidas en el medio basal Knudson suplementado con 0.5% de
carbn activado y 4 mg/l de BAP. Se obtuvieron 75% de plntulas con formacin de
yemas axilares, 45% de plntulas enraizadas, 17% de plntulas con desarrollo de
protocormos y 8% de plntulas con formacin de races y protocor mos a la vez. La
formacin de yemas axilares y protocormos se inici a los 40 das despus de la siembra,
se obtuvo 13 protocormos de un solo individuo y de 2 a 4 yemas axilares, como mximo,
al final de esta experiencia. Con respecto a las races se obse rv de 1 a 2 races a los 30
das de iniciada la siembra y de 2 a 4 races a los 60 das. Se concluye que el medio
nutritivo utilizado favorece el desarrollo de taces, protocormos y yemas axilares en
plntulas de Epidendrum sp.
Palabras claves: Epidendrum sp, enraizamiento, protocormos, Yemas axilares, BAP,
carbn activado.

ABSTRACT

The importance of orchids lies solely in the beauty, fragrance and exotic flowers. Its growth in
natural conditions is very slow in obtaining the delay florestambin, no clutch this difficulty can be
overcome with artificial culture media. In order to obtain numerous seedlings in vitro, was
formulated nutrient media using activated charcoal and 6-benzyl aminopurine (BAP) to evaluate the
development of axillary buds and roots protocorms Epidendrum sp. (Orchidaceae). Germinated
seedlings were used in vitro than a year old, and introduced into the basal medium supplemented
with 0.5% Knudson activated carbon and 4 mg / l BAP. We obtained 75% of seedlings with axillary
bud formation, 45% of rooted plantlets, 17% of seedlings with development of PLB and 8% of
seedlings with root formation and PLB at a time. The formation of axillary buds and PLB was
initiated 40 days after sowing, we obtained 13 protocorms of a single individual and 2-4 axillary
buds than at the end of this experience. With respect to the roots was observed from 1-2 roots at 30
days into the seed and 2-4 roots at 60 days. We conclude that the nutrient medium used will
facilitate the development of Taico, PLB and axillary buds in seedlings of Epidendrum sp.
Key words: Epidendrum sp, rooting, PLB, axillary buds, BAP, activated charcoal.

La familia Orchidaceae, est constituida aproximadamente por 37 000 especies repartidas
en 750 gneros y nuevas variedades se descubren cada ao, ocupando de esta manera el
segundo lugar entre las plantas superiores
6
. Son plantas herbceas que forman rizomas o
seudobulbos sobre los cuales se desarrollan las hojas; aunque hay un buen nmero de
especies terrestres, la gran mayora son epfitas, es decir que se han adaptado para vivir
sobre los rboles
1
. Epidendrum sp. (Orquidaceae) es un gnero representante de las epifitas,
de inters ornamental y ampliamente cultivado, pueden producir hasta 30 flores en
sucesin durante todo el ao, se encuentran distribuidas en Centroamrica y Sudamrica
9
.
Las orqudeas son fcilmente propagadas aplicando cultivo de tejidos, stas tcnicas han
mostrado resultados poco exitosos en nuestro pas, limitndose a la extraccin y
comercializacin directa en el campo, lo cual reduce significativamente el nmero de stas
en su hbitat, por lo tanto es necesario establecer pautas acerca de su conservacin o
manejo sostenible, puesto que constituyen uno de nuestros patrimonios nacionales
2,3,5,12,15

El uso de reguladores de crecimiento como alternativa para el incremento de la
proliferacin de brotes y races ha sido ensayado con diferentes concentraciones de
auxinas y citoquininas en diferentes gneros como Cattleya aurantiaca, Cymbidium aloifolium,
Dendrobium aphyllum, Phalaenopsis sp, Vanda spathulata, Catasetum fimbriatum y Dendrobium
moschatum, obteniendo buenos resultados
5,7,8,11,13,14,16

El inters por las orqudeas , apreciadas por sus vistosos colores, formas de sus flores y
por la durabilidad de las mismas; es que requieren de condiciones especiales para la
germinacin de las semillas y de perodos vegetativos largos antes de su floracin, las
cuales son necesarias diferentes tcnicas para su propagacin. Conociendo esta realidad, el
objetivo de este trabajo fue inducir el desarrollo in vitro de yemas axilares, protocormos y
raices de Epidendrum sp. (orchidaceae) utilizando carbn activado y 6-bencil aminopurina
(BAP)
La experiencia se realiz en el Laboratorio de Fisiologa y Cultivo de Tejidos Vegetales
(UNT). Se utilizaron plntulas in vitro de seis meses de edad (Fig. 2b) que fueron obtenidas
de semillas germinadas in vitro. Las cpsulas fueron colectadas del BOSQUE DE CACHIL
y posteriormente determinadas en el Herbarium Truxillense (HUT) (Fig. 2a ). Se utiliz el
medio basal de Knudson, suplementado con 4 mg/l de 6-bencil aminopurina (BAP),
0.5% de carbn activado, 2% de sacarosa y agar agar al 1%. Los medios tuvieron un
pH ajustado a 6. Se esterilizaron en una autoclave durante 30 minutos con 15 libras de
presin y 121C. Los explantes de 6 meses de edad fueron introducidos en frascos de vidrio
con 4 ml de medio de cultivo y se incubaron a 25 1C, y fotoperiodo 16:8 utilizando tres
fluorescentes de luz blanca (40 w). Se utilizaron 65 unidades experimentales y hubo tres
repeticiones. La evaluacin se realiz a los 70 das y se anot la presencia y nmero de
yemas axilares, races y protocormos.
El desarrollo de yemas axilares se inicio a los 15 das de iniciada la siembra, se obtuvo de
1 a 2 yemas en el primer mes y de 2 a 3 yemas completamente desarrolladas a los 70 das
de iniciada la siembra (75%, Tabla 1, Fig. 2c1), considerando el desarrollo de solo 2 yemas
axilares por plntula, se recuper el doble de plntulas que lo inicial. Hubo 1 a 2 races en
el primer mes de induccin, las races color verde claro aumentaron en nmero a los 70
das (45%, Tabla 1, Fig.2c2).
Con respecto a la formacin de protocormos, se inici a los 30 das del contacto con el
medio inductor, el porcentaje de plntulas con protocormos (17%) fue relativamente bajo,
pero esto fue compensado con el nmero de protocormos obtenidos por plntula, se pudo
observar la formacin de hasta 13 protocormos en algunas plntulas y en promedio 5
protocormos por plntula a los 70 das, solo con este porcentaje se recuper el doble de
plntulas utilizadas en la experiencia (Tabla 1, Fig. 2d). Luo et al
10
trabajando con
Dendrobium densiflorum encontraron resultados similares pero con BAP a 5 mg/l y si
aumenta la concentracin inhibe el desarrollo de yemas axilares pero a la concentracin de
BAP que utilizamos (4 mg/l) encontramos alta respuesta en la formacin de yemas axilares
Slo 8% de plntulas presentaron races y protocormos a la vez (Tabla1). Esto se explica
por el carbn activados utilizado (0.5%) el cual se usa ampliamente en cultivo de tejidos de
plantas para estimular enraizamiento en propagacin de yemas puesto que puede adsorber
la citoquinina favoreciendo un balance endgeno auxina/citoquinina que facilite la
iniciacin de las races (Cheruvatour y col., 2010; Luo y col., 2008)
En la fig. 1., se comparan el desarrollo de las yemas, races y protocormos a los
30, 50 y 70 das de iniciada la siembra, vemos como las barras van en aumento.
En esta experiencia se obtuvieron mayor nmero de yemas axilares, que
formacin de protocormos,

Fig. 1. Comparacin del desarrollo (%) de yemas axilares, protocormos y raices de Epidendrum sp. a los 30, 50
y 70 das de siembra in vitro.
















0
10
20
30
40
50
60
70
80
30 Das 50 Das 70 Das
Yemas
Races
Protocormos
a
b


Fig. 2: (a) Cpsulas de Epidendrum sp. , (b) plntulas in vitro de seis meses de edad, (c) 1. yema axilar, 2. raz, (c)
protocormos
Tabla 1: Resultados promedios (%) de la obtencin de yemas axilares, protocormos y races de
Epidendrum sp. a los 70 das de siembra in vitro.









REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

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Plantas con:

Porcentaje (%)

N por planta (x)

Yemas axilares

75

3 1

Races

45

2 1

Protocormos

17

5 1

Races y Protocormos

8

---
c d
1
2
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Correspondencia: Shirley Valderrama Alfaro
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