GLICLISE

DQB/FCUL
Bioqumica II: 2013/2014
Tpicos
Glucose: papel central no metabolismo
Breves apontamentos histricos
Etapas da gliclise
Balano energtico da gliclise
Papel central da glucose no metabolismo
Armazenamento
Glucognio
Amido
Oxidao via
gliclise
Piruvato
5-fosfato de ribose
NADPH
Oxidao via
dos fosfatos de
pentose
CO
2
+ H
2
O
G = - 2 840 KJ/mol
Fonte de energia
Fonte de carbono
Papel central da glucose no metabolismo
Organismos fotossintticos
(a partir do CO
2
)
Organismos no fotossintticos
(a partir de C3 e C4)
Trioses
Glucose
Gluconeognese
Gliclise
do grego: glykys doce ou aucar
lysis lise
G = - 2 840 kJ/mol
Fermentao
degradao anaerbia da glucose (ou outros nutrientes) para obter ATP
importante fonte industrial de etanol e cido lctico
Gliclise: alguns apontamentos histricos
1860 Louis Pasteur
descobriu que os microrganismos so
responsveis pela fermentao
1897 Eduard Buchner
PN Qumica 1907
demonstrou que extractos de leveduras livres de clulas tambm
eram capazes de realizar a fermentao alcolica
golpe importante na teoria do vitalismo: no era necessrio a
presena de clulas vivas para que ocorresse a libertao de CO
2
Gliclise: alguns apontamentos histricos
foi a primeira via metablica a ser elucidada
demorou ~ 40 anos !
o estudo dos vrios passos envolvidos na via glicoltica em
- extractos de levedura
- extractos de msculos
desempenhou um papel central no desenvolvimento da disciplina
da Bioqumica
as principais dificuldades encontradas residiram:
- nos tempos de vida muito curtos
- e nas concentraes reduzidas
dos vrios intermedirios da via glicoltica
acumulava-se um difosfato de hexose (ster de Harden-Young =
1,6-bisfosfato de frutose) 1 intermedirio da via a ser descoberto
aps dilise, o extracto de levedura apresentava duas fraces:
- apenas uma era sensvel ao calor
s ocorria fermentao com as duas fraces presentes
PN 1929
1905-1910 Harden e Young
realizaram estudos sistemticos de
produo de etanol a partir de
glucose em anaerobiose
(fermentao) com extractos de
levedura
o processo era estimulado pelo P
i
Alguns apontamentos histricos
PN 1931
1926 Otto Warburg e W. Christian
relao entre oxidao-reduo e fosforilao
natureza da fraco estvel ao calor
1932 C. Neuberg
purificao e identificao do 6-P-frutose
1936 G.T. Cori, C.F. Cori (PN 1947) e S.P. Collowick
purificao e identificao do 1-P-glucose
Alguns apontamentos histricos
Caracterizao dos enzimas envolvidos no processo (ex aldolase)
Identificao de intermedirios
Elucidao da sequncia de reaces
PN 1922
PN 1929
Gliclise = via Embden-Meyerhof-Parnas & Warburg
Alguns apontamentos histricos
Da elucidao da gliclise ...
conceito de via metablica
desenvolvimento das metodologias de purificao
e caracterizao de enzimas
descoberta e reconhecimento do papel importante
dos coenzimas (NADH)
descoberta do papel central do ATP e de outros
metabolitos fosforilados
A gliclise ...
a via central (quase) universal do catabolismo da glucose
a via com maior fluxo em (quase) todas as clulas
a nica via de fornecimento de energia em certos tipos de
clulas de mamfero (crebro, eritrcitos, esperma, ...)
existem microrganismos anaerbios que dependem
exclusivamente desta via para obter energia
via extremamente conservada ao longo da evoluo, tanto
do ponto de vista da qumica das reaces, como em termos
de homologia estrutural dos enzimas da via
a via difere entre os vrios organismos principalmente ao nvel
da sua regulao e no destino final do piruvato
A gliclise ocorre
no citosol e tem
duas fases
Fase I: fase endergnica (fase de preparao)
fosforilao da glucose e sua
converso em fosfatos de
triose: 3-P-gliceraldedo
investe-se ATP mas
aumenta o contedo
energtico dos
metabolitos
Fase II: fase exergnica Pay off
Oxidao do 3-P-
gliceraldedo a
piruvato
ocorre formao de
NADH + H
+
e ATP
(fosforilo ao nvel
de substrato)
Passo 1. Fosforilao da glucose
Glucose 6-P-Glucose
Hexocinase
ster de Robinson
ocorre em C-6
o io magnsio essencial para a actividade do hexocinase
passo irreversvel na clula ponto importante de regulao da via
reaces acopladas
Passo 1. Reaces acopladas
Passo 1. Fosforilao da glucose
substrato do hexocinase:
complexo Mg
2+
-ATP
no h
transportadores para
os compostos
fosforilados
O io magnsio essencial para a actividade do hexocinase
Passo 2. Converso a 6-P-frutose
isomerizao reversvel de uma aldose a cetose
este passo tem um papel crtico na qumica da via glicoltica:
o re-arranjo molecular essencial para garantir os passos seguintes
6-P-Glucose
6-P-Frutose
Fosfohexose
isomerase
ster de Neuberg
Passo 2. Converso a 6-P-frutose
Fosfohexose
isomerase
Passo 3. Fosforilao a 1,6-bisP-frutose
1,6-bisP-Frutose
6-P-Frutose
Fosfofrutocinase 1
PFK-1
ster de Harden & Young
Reaco essencialmente irreversvel na clula o ponto mais importante
de regulao da via glicoltica
PFK1 um dos enzimas de regulao mais complexos:
a sua actividade diminui quando a [ATP] elevada (!)
Passo 3. Fosforilao a 1,6-bisP-frutose
o passo do compromisso
o 1,6-bisP-frutose est de forma definitiva na via glicoltica
1,6-bisP-
frutose
Fosfofrutocinase
PFK-1
Passo 4. Rutura do 1,6-bisP-frutose
1,6-bisP-Frutose
fosfato de
dihidroxiacetona
1,6-bisP-frutose
aldolase
3-P-gliceraldedo
ster de
Fischer
GLICLISE
reaco reversvel com produo de dois fosfatos de triose
embora G

seja positivo, a reaco ocorre no sentido directo nas

condies intracelulares
Passo 5. Interconverso das trioses
Fosfato de
dihidroxiacetona
Fosfato de
triose
isomerase
3-P-gliceraldedo
s o 3-P-gliceraldedo pode seguir na via glicoltica
reaco de isomerizao rpida e reversvel
Final da fase preparatria da gliclise
A molcula de aldohexose foi fosforilada em C1 e C6 e sofreu
rutura, formando-se duas molculas de 3-P-gliceraldedo
Passos 4 e 5 da fase I da gliclise
Fosfato de triose
isomerase
Passo 6. Oxidao a 1,3-bisfosfoglicerato
1,3-bisfosfoglicerato
3-P-gliceraldedo
desidrogenase
3-P-gliceraldedo
fosfato
inorgnico
ster de Warburg-
Negelein
X 2
reaco de oxidao e fosforilao
produo do coenzima reduzido NADH
(regenerado anaerobicamente a NAD
+
durante a fermentao)
Alguns dos intermedirios fosforilados da gliclise
Formado no passo 6
G= - 49.3 kJ/mol
Passo 7. Transferncia do grupo fosforilo
1,3-bisfosfoglicerato
Fosfoglicerato
cinase
3-fosfoglicerato
ster de
Nilson
X 2
o nome do enzima
reflecte a reaco inversa
juntamente com o passo
anterior, forma um passo
de acoplamento
energtico cujo
G

= - 12.5 kJ/mol
ocorre formao de ATP:
fosforilao ao nvel do
substrato
Passo 8. Converso a 2-fosfoglicerato
2-fosfoglicerato
Fosfoglicerato
mutase
3-fosfoglicerato
X 2
a reaco enzimtica depende da existncia de 2,3-bisfosfoglicerato em
quantidades vestigiais
este metabolito necessrio para o incio do ciclo cataltico do enzima
Passo 9. Desidratao a fosfoenolpiruvato
2-fosfoglicerato
Enolase
fosfoenolpiruvato
X 2
remoo reversvel de uma molcula de H
2
O a partir do 2-fosfoglicerato
a perda de molcula de H
2
O leva redistribuio de energia no susbtrato,
aumentando significativamente a energia que resultar da hidrlise do grupo
fosforilo
Alguns dos intermedirios fosforilados da gliclise
Formado no passo 9
G= - 61.9 kJ/mol
Passo 10. Transferncia do grupo fosforilo
piruvato
Piruvato
cinase
fosfoenolpiruvato
X 2
o nome do enzima reflecte a
reaco inversa
o enzima requer Mg
2+
e K
+
ocorre formao de ATP:
fosforilao ao nvel do
susbtrato
a reaco irreversvel e
constitui um ponto importante
de regulao da via
DCA-inibidor
Passo 10. Hidrlise do fosfoenolpiruvato
o produto piruvato surge primeiro na sua forma enlica
o piruvato tautomeriza no enzimaticamente na sua forma ceto (pH 7.0)
Passo 10. Reaces acopladas
Sumrio da gliclise: 10 passos
...
...
Hexocinase
Fosfohexose
isomerase
Fosfofrutocinase
Aldolase
Triose fosfato
isomerase
3-P-gliceraldedo
desidrogenase
Fosfoglicerato
cinase
Fosfoglicerato
mutase
Enolase
Piruvato
cinase
...
Glucose + 2 NAD
+
+ 2 ADP + 2 P
i
2 piruvato + 2 NADH + 2 H
+
+ 2 ATP + 2 H
2
O
ATP
Via de Embden-Meyerhof-Parnas & Warburg