La materia prima fue lavada y desgrasada con eter de petrleo.

Se
emplearon dos mtodos de extraccin de la protena soluble por
hidrlisis alcalina: a) Sulfuro de Sodio o b) Hidrxido de Sodio. Las
soluciones de queratina obtenidas se dializaron durante 12-24 horas
para la eliminacin de sales. Para impedir la reformacin de las
uniones disulfuro se realizaron dos modificaciones: a) Alquilacin con
cido Monocloroactico; b) Sulfitolisis oxidativa con Peroxido de
Hidrogeno y Sulfito de Sodio. Los productos obtenidos mediante las
diversas tcnicas se llevaron a su punto isoelctrico (pH=4.2) y los
precipitados se liofilizaron. Para determinar el grado de modificacin
de las muestras despus de la alquilacin o la sulfitolisis oxidativa, se
midi la concentracin de sulfhidrilos en las soluciones dializadas con
el reactivo DTNB (5-5ditiobis(2-acido 2 nitrobenzoico) y con el ensayo
NTSB (2-nitro5 tiosulfobenzoato de sodio) se determin el contenido
de disulfuros en las muestras liofilizadas. Las muestras de las
distintas partes de las plumas (raquis, clamo y barbas) y los
productos liofilizados secos y con distintos grados de humedad se
analizaron por Calorimetra Diferencial de Barrido. Se determinaron en
todos los casos las temperaturas y entalpas de desnaturalizacin de
las queratinas. Asimismo se desarrollaron films a base de queratina
por el mtodo de moldeo incluyendo glicerol como plastificante. Las
pelculas se secaron a 40 C durante 24 horas y se obtuvieron los
correspondientes espectros Infrarrojo.
Background
Hair is composed mainly of keratin protein and a small
amount of lipid. Protein hydrolysates, in particular those with
low molecular weight distribution have been known to protect
hair against chemical and environmental damage. Many types
of protein hydrolysates from plants and animals have been
used in hair and personal care such as keratin hydrolysates
obtained from nails, horns and wool. Most of these
hydrolysates are obtained by chemical hydrolysis and
hydrothermal methods, but recently hydrolyzed hair keratin,
feather keratin peptides, and feather meal peptides have been
obtained by enzymatic hydrolysis using Bacillus spp in
submerged fermentation.
Results
Keratin peptides were obtained by enzymatic hydrolysis of
keratinases using Bacillus subtilis AMR. The microorganism was
grown on a feather medium, pH 8.0 (1% feathers) and
supplemented with 0.01% of yeast extract, for 5 days, at
28C with agitation. The supernatant containing the
hydrolysates was colleted by centrifugation and ultra filtered
in an AMICON system using nanomembranes (Millipore
YC05). The Proteins and peptides were analyzed using HPTLC
and MALDI-TOF-MS. Commercial preparations of keratin
hydrolysates were used as a comparative standard. After five
days the feather had been degraded (90-95%) by the
peptidases and keratinases of the microorganism. MALDI-TOF
mass spectrometry showed multiple peaks that correspond to
peptides in the range of 800 to 1079 Daltons and the
commercial hydrolysate was in the range of 900 to 1400 Da.
HPTLC showed lower molecular mass peptides and amino
acids in the enzymatic hydrolysate when compared with the
commercial hydrolysate . A mild shampoo and a rinse off
conditioner were formulated with the enzymatic hydrolysate
and applied to hair fibers to evaluate the hydration, with and
without heat, using a Corneometer CM 825. The hydration
was more efficient with heat, suggesting a more complete
incorporation of hydrolysates into the fibers. Scanning
Electron Microscopy showed deposits of organic matter in the
junction of the cuticles that probably collaborates to the
sealing of the cuticles, increasing the brightness and softness.
Conclusions
These results show that the enzymatic method to produce
keratin peptides for hair care products is an attractive and
eco- friendly method with a great potential in the cosmetic
industry.
Keywords:
Keratin; Hydrolysate enzymatic; Peptides

A determinao das isotermas de soro de umidade (curva
de adsoro) foi realizada pelo mtodo esttico. A queratina
foi condicionada em diferentes atmosferas obtidas com vrias
solues salinas saturadas. Solues de NaOH, MgCl
2
, K
2
CO
3
,
Mg(NO
3
)
2
, NaNO
2
, NaCl, KCl foram utilizadas para se obter
umidades relativas (atividades de gua) na faixa de 6 a 96 %.
As isotermas foram obtidas nas temperaturas de 25 e 35C e
o modelo de GAB (Guggenhein-Anderson-de Boer) foi
utilizado para ajustar os dados experimentais de soro de
umidade. A representao matemtica do modelo de
GAB, Equao 1, foi descrita na literatura como adequada
para a representao dos contedos de umidade das
amostras de filmes de queratina (W) condicionados a
diferentes atividades de gua (umidades relativas do ar, em
decimal) [13].

Sendo:
A: o contedo de umidade (base seca) na monocamada; B: a
constante de Guggenheim associada ao calor de soro na
primeira camada; C: a constante associada ao calor de soro
das multicamadas; A
w
: a atividade de gua (umidade relativa
do ar).
2.6 - Preparo e caracterizao de filmes de queratina
A queratina extrada foi utilizada para a preparao de filmes
pela tcnica de espalhamento em placas de poliestireno
(casting). Para a formao de cada filme, 50 mL de soluo
de queratina foram utilizadas diretamente ou com a adio de
0,30 g glicerol/g queratina. Todas as solues foram mantidas
sob agitao mecnica constante por 1 h, para promover a
homogeneizao do glicerol na mistura.
Aps essa etapa, a mistura foi espalhada em uma placa de
poliestireno de 0,177 m
2
de rea e posteriormente secada a
30C por 24 h, em estufa com ventilao e renovao de ar.
Os filmes foram em seguida removidos das placas e
condicionados em dessecadores a 35C, com umidade relativa
igual a 75%, obtida com uma soluo saturada de cloreto de
sdio. Esse condicionamento foi realizado por pelo menos 48
h, antes da determinao das propriedades dos filmes de
queratina. As espessuras mdias dos filmes foram calculadas
a partir de medidas das espessuras em quatro diferentes
pontos do filme, com um micrmetro digital Mitutoyo Co.,
Japo, com exatido de 0.001 mm.
Micrografias dos filmes foram obtidas com um microscpio
eletrnico de varredura, Philips XL-30. Para a obteno das
mesmas, as amostras foram cobertas por uma camada de
ouro. Todas as micrografias foram obtidas com uma voltagem
de acelerao de 10 kV. As propriedades mecnicas de tenso
de ruptura e alongamento na ruptura foram determinadas
com o analisador de textura TA-XT2 Stable Micro System
Inglaterra. Os ensaios foram realizados com a velocidade de
0,3 mm/s e a separao inicial das presilhas foi de 70 mm.
Dez corpos de prova de 25 mm de largura e 100 mm de
comprimento foram utilizados nos ensaios de trao, para
cada formulao usada na preparao do filme. Antes dos
ensaios, as amostras foram condicionadas em ambiente com
umidade relativa de 75%, obtido com o uso de uma soluo
saturada de NaCl em um cmara hermtica.