1 Tincin Gram: permite identificar que tipo de pared tienen las bacterias, clasificandolas en positivas o negativas

-Gram positivas: retiene el cristal violeta (colorante bsico). No se decoloran con el alcohol (color morado)
-Gram negativas: no resisten la decoloracin con el alcohol, por lo que pierden la coloracin.. Para este caso se usa safranina que teir todo lo
NO teido de color rojo.
2 Tincin Ziehl-Neelsen: permite identificar otra estructura de la pared bacteriana, llamada cido miclico.
Este tipo de bacterias, tambin resiste la decoloracin con alcohol, ahora la diferencia con las Gram positivas, es que al verlas al microscopio,
pareciera que hay tanto Gram negativas, como Gram positivas y bacterias no teidas.
-fucsina: colorante utilizado para teir el acido micolico de la pared
- azul de metileno: utilizado como medio de contraste. Tie todo lo no teido.
3 Por ultimo existe una tincin modificada para una bacteria llamada Campylobacter.
Aqui se utiliza_ 1 - azul de metileno como colorante 2 -cristal violeta como medio de contraste. a esta tincin se le conoce como Tincin BB.
Coloracin GRAM Juego de soluciones para la coloracin diferencial de GRAM para microscopa
PRINCIPIO La coloracin de Gram ha constituido, desde los albores de la Bacteriologa, un elemento fundamental para la taxonoma e
identificacin.
Luego del descubrimiento casual realizado por el investigador dans Christian Gram, pasaron muchos aos durante los cuales se efectuaron las
ms variadas especulaciones sobre el mecanismo de esta coloracin.
Resultaba indudable, sin embargo, su practicidad a los fines de la identificacin. El conocimiento de las estructuras de las membranas
bacterianas, tanto en el aspecto fsico como en su composicin molecular que fueron logrados a partir de la dcada del sesenta, demostraron
que la coloracin de Gram distingue dos grupos de bacterias totalmente diferentes. Las bacterias Gram positivas que presentan una gruesa capa
de peptidoglicano como estructura fundamental por sobre la membrana citoplasmtica, y las Gram negativas, que encima desta, presentan una
delgada capa de peptidoglicano, a la que se superpone una capa de lipopolisacridos-lipoprotena, denominada membranaexterna. La presencia
de esta membrana diferencia actualmente dos divisiones en sistemtica bacteriana: las que no lo poseen, Firmicutes (Gram +) y las que s,
Gracilicutes (Gram -). La diferencia entre ambos grupos es pues de enorme importancia taxonmica. El comportamientocomo patgenos y en la
sensibilidad antibacteriana difieren sustancialmente; de ah que la realizacin rpida de una coloracin de Gram, reviste enorme importancia en
Bacteriologa Clnica.
Esta coloracin permite la clasificacin de las bacterias en GRAM
POSITIVAS Y GRAM NEGATIVAS SEGN LA COMPOSICION DE SU PARED CELULAR.
Por esto el complejo de color formado con la pared de las bacterias gram positivas no puede ser removido con el agente de colorante que es el
alcohol acetona.
La clula permanece de color azul violeta, en cambio las bacterias gram negativas, al decolorarse con el alcohol acetona, se dejan colorear con
la fuscina safranina, quedando de color rosado.
CONDICIONES DE ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD
Las soluciones deben almacenarse entre 15C y 30Cy protegidos de la luz. Despus de abierto el contenido almacenado entre 15C y 30C y
protegidos de la luz es estable hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta.
Temperaturas inferiores a 15C puede precipitar colorantes de las soluciones colorantes.
Los frascos deben mantenerse siempre bien cerrados.
PRECAUCIONES Y ADVERTENCIAS
La solucin R1 Violeta Cristal (Violeta de Genciana) y la solucin R4 Fuscina bsica o Safranina son irritantes en contacto con piel, ojos y
mucosas.
La solucin R3 Alcohol acetona y la solucin R4 Fuscina bsica o safranina son inflamables, por lo tanto se deben tomar los cuidados
requeridos para el manejo de productos inflamables en el laboratorio.
Observe la simbologa en los rtulos de las soluciones.
Las soluciones usadas y las caducadas deben eliminarse como desechos especiales, debiendo cumplir las regulaciones locales para el desecho
de compuestos peligrosos.
El azul de metileno se usa como tintura para teir ciertas partes del cuerpo antes o durante la ciruga. Su uso es principalmente como
antisptico y cicatrizante interno. Tambin se utiliza como colorante en las tinciones para la observacin en el microscopio, y para teir resultados
en los laboratorios.
La empresa farmacutica TauRx Therapeutics ha comprobado que el uso del azul de metileno (Rember) retrasa el deterioro de las funciones
cognitivas de los enfermos de Alzheimer. De todas maneras, la formulacin empleada en los ensayos clnicos no es la utilizada para teir las
clulas y, por tanto, no debe utilizarse.
Aunque el mecanismo es la inhibicin de la agregacin de Tau, parece que mejora la funcin mitocondrial. Por ello, se ha propuesto que tambin
podra ser utilizado en la lucha contra la enfermedad de Parkinson.
Tincin de Ziehl-Neelsen


La tincin de Ziehl-Neelsen (BAAR) es una tcnica de tincin diferencial rpida y econmica, para la identificacin de microorganismos
patgenos, por ejemplo M. tuberculosis, gnero Apicomplexa (coccidios intestinales), entre otros.
Fue descrita por primera vez por dos mdicos alemanes, Franz Ziehl, un bacterilogo y Friedrich Neelsen, un patlogo.
Fundamento Las paredes celulares de ciertos parsitos y bacterias contienen cidos grasos (cidos miclicos) de cadena larga (50 a 90 tomos
de carbono) que les confieren la propiedad de resistir la decoloracn con alcohol-cido, despus de la tincin con colorantes bsicos. Por esto
se denominan cido-alcohol resistente. Las micobacterias como M. tuberculosis y M. marinum y los parsitos coccdeos como Cryptosporidium,
Ciclosporidium e Isospora Belli se caracterizan por sus propiedades de cido-alcohol resistencia. La coloracin clsica de Ziehl-Neelsen requiere
calentamiento para que el colorante atraviese la pared bacteriana que contiene ceras. Al suspender el calentamiento y enfriar con agua, provoca
una nueva solidificacin de lo cidos grasos de modo que el colorante ya no puede salir de las bacterias. Por otro lado, el calentamiento aumenta
la energa cintica de las molculas del colorante lo cual tambin facilita su entrada a las bacterias. Las bacterias que resisten la decoloracin
son de color rojo y las que no, se ven de color azul ya que se utiliza azul de metileno como tincin de contraste.
Tincin de Ziehl-Neelsen Tambin es una tincin diferencial. Se denomina tincin cido-alcohol resistente y es especfica para una serie de
bacterias con estructura de pared particular, las micobacterias. La pared de las micobacterias no est basada en peptidoglicano como las
bacterias gram positivas y gram negativas, sino en cidos miclicos. Esta particularidad las hace resistentes a la decoloracin con cido y alcohol
que no se produce en casi ningn otro tipo bacteriano. La tincin de Ziehl-Neelsen utiliza tres reactivos. El colorante primario es la fucsina que
tie toda la preparacin de rojo brillante. Como mordiente se utiliza flameado de la preparacin con el colorante. La solucin decolorante elimina
el colorante primario excepto en los bacilos cido alcohol resistentes. (BAAR). Por ltimo el azul de metileno tie de azul el resto de la
preparacin.
Esta tincin es til en la deteccin de bacterias del gnero Micobacterium en muestras de esputo. La presencia de bacilos rojos sobre fondo azul
constituye un diagnstico casi definitivo de tuberculosis.
Tincin de gram A pesar de que fue desarrollada en el siglo XIX la tincin de gram es la ms utilizada en el diagnstico microbiolgico. De
hecho la informacin que ofrece relativa a la composicin de la pared bacteriana es la base de todas las taxonomas en este reino.
Se trata de una tincin diferencial que distingue entre bacterias con pared gruesa (gram positivas) y bacterias con pared fina y membrana externa
(gram negativas). La mayora de las bacterias presentan una de estas dos morfologas generales. La tincin de gram utiliza vi oleta de genciana
como colorante primario. Tras su aplicacin todos los microorganismos se tien de violeta. Despus el lugol acta como mordiente, acentuando
la penetracin del colorante primario. El tercer paso consiste en la aplicacin del decolorante, una mezcla de alcohol y acetona que elimina el
violeta excepto en las bacterias con pared gruesa. Por ltimo el colorante secundario o de contraste, la safranina, tie de rojo las bacterias
decoloradas, es decir las de pared fina. En resumen las bacterias gram positivas quedan teidas de violeta y las gram negativas de rojo.
http://www.danival.org/600%20microbio/5000micro_dvf/micro_dvf_222b.html http://es.wikipedia.org/wiki/Tinci%C3%B3n_de_Ziehl-Neelsen
http://es.wikipedia.org/wiki/Azul_de_metileno http://www.ihrdiagnostica.com/tecnicas/pdf/ColoracionGRAMv2.pdf