Los fenotipos determinados por mltiples loci con alelos que contribuyen en dosis al fenotipo se aproximan a una distribucin continua. Se dice que este tipo de rasgos exhiben una variacin continua, cualitativa o mtrica. 1.- Variacin Fenotpica continua: (cuantitativa) Caracteres continuos o cuantitativos son aquellos que muestran una distribucin continua de fenotipos, por lo tanto no existe una nica clasificacin fenotpica, sino, que esta se realiza agrupando los distintos valores en clases establecidas arbitrariamente segn la unidad de me- dida. Esta variacin es resultado de la participacin de genes de mltiples loci, los caracteres cuanti- tativos se denominan a menudo caracteres polignicos. La variacin fenotpica continua suele llamarse Variacin Polignica. (mltiples genes) los rasgos en los que se cree que la variacin esta causada por los efectos combinados de mlti- ples genes. Cuando se considera que los factores ambientales tambin provocan variacin en el rasgo, se emplea el trmino multifactorial. Estos rasgos multifactoriales tienden a mostrar una distribucin norman. Ne forma de campana de Gauss, en las poblaciones. El cuadro N 1 muestra la herencia de rasgos que varan en forma continua a medida que crece el rbol genealgico; mostrando rasgos dominantes en P, junto con pares de genes que se combinan para codificar rasgos en F 1, y finalmente la ulterior combinacin de estos genes en F 2 , teniendo en cuenta la variable de ambiente y como se expresa en la poblacin, es decir, que a mayor cantidad de rasgos con variantes continuas, mayor cantidad de individuos en una poblacin determinada van a presentar estos rasgos.
2.- Herencia Multifactorial La herencia multifactorial es aquella en la que tantos genes como la exposicin al ambiente desencadenan la expresin de un fenotipo observable y capaz de medirse con una escala con- tinua, y a menudo presentan una distribucin normal.
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Caractersticas de una herencia Multifactorial: Muchos genes codifican un rasgo. El ambiente modifica la expresin gnica. Tiene una distribucin norman en la poblacin Pueden medirse con una escala continua
RASGO POLIGNICO Donde la variacin del rasgo esta causada por los efectos combinados de mltiples genes. RASGO MULTIFACTORIAL: Donde se considera a los factores ambientales como causantes de la variacin en el rasgo.
3. La herencia de rasgos cuantitativos o continuos puede dar cuenta de la manifestacin de desordenes o enfermedades multifactoriales discontinuos.
MODELO DEL UMBRAL: Donde varias enfermedades no siguen una distribucin en campana o patrones esperados de enfermedades monognicas, se aplica una explicacin basada en una distribucin de la sus- ceptibilidad subyante a estn enfermedades en una poblacin. Donde las personas que se encuentran en el extremo bajo de la distribucin tiene pocas pro- babilidades de desarrollar la enfermedad. (pocos alelos o factores ambientales) Quienes se encuentran mas cerca del extremo alto, presentan un alto grado de susceptibilidad por mayor cantidad de genes o factores ambientales para desarrollar la enfermedad. Cuando aplicamos la distribucin de la susceptibilidad a una herencia multifactorial urge la ne- cesidad de destacar un umbral de susceptibilidad, el cual acta como barrera en la expresin o no de la enfermedad. Por ejemplo: estenosis pilrica. En este caso el umbral hace diferencia entre sexo; haciendo el umbral de susceptibilidad mas bajo hacia hombres y mas alto hacia las mujeres.
4. ENFERMEDADES MULTIFACTORIALES. En este tipo de enfermedades se hace ms complicado entender los riesgos de recurrencia, se debe a que se ignora el nmero de genes que contribuyen a la enfermedad, la constitucin alelica, grado de efectos ambientales, etc. Pero se estiman los riesgos empricos, basados en observacin directa de los datos, se exami- nan las familias y los hijos de un probando analizando que individuos, han expresado la enfer- medad. Son especficos para una poblacin determinada: Criterios para definir herencia multifactorial: El riesgo de recurrencia es ms elevado si est afectado ms un miembro de la familia. Si la expresin de la enfermedad es ms grave en el Probando, el riesgo de recurren- cia es mayor. El riesgo de recidiva es ms elevado en el probando que pertenece al sexo afectado con menor frecuencia. En general el riesgo de recurrencia para la enfermedad disminuye con rapidez en los familiares ms lejanos. Este emparejamiento explica la tabla N 1: Si la presencia de la enfermedad es F, el riesgos de los hijos y hermanos es f
5. GENOMA: Es la totalidad de la informacin gentica que posee un organismo o una especie en particular. Comprende el ADN contenido en el ncleo, organizado en cromosomas y el genoma mitocondrial. TRANSCRIPTOMA: Es el conjunto en total de transcriptos que posee un organismo o especia en particular. PROTEOMA: conjunto en su totalidad de protenas que posee un organismo o especie en par- ticular. 6. HERENCIA NUCLEAR: Consiste en la transmisin de genes contenidos en los cromosomas nucleares de padres a hijos. HERENCIA NO NUCLEAR O CITOPLASMATICA: Se denomina herencia NO nuclear o citoplasmtica a las porciones de ADN heredable que existen fuera del ncleo, en orgnulos celulares y tienen la capacidad de replicarse, transcribir- se y traducirse independientemente del ncleo. Presentes en mitocondrias y cloroplastos.
7 HERENCIA MITOCONDRIAL: El genoma mitocondrial codifica: o 2 ARN Ribosmicos o 22 ARN de transferencia o 13 Polipptidos implicados en la fosforilacion oxidativa Sus genes no contienen intrones La transcripcin de su DNA tiene lugar en la mitocondria independientemente del n- cleo. Se hereda exclusivamente por via materna La tasa de mutacin del mtDNA es 10 veces superior al DNA nuclear. Su genoma no posee mecanismos de reparacin. Cada clula contiene una poblacin de molculas de mtDNA Puede albergar alguna con la mutacin o si ella. (homoplasmia, heteroplasmia) Cuando mayor es el nmero de molculas de mtDNA afectada mayor ser la expresin fenotpica de la enfermedad. El SNC es el ms afectado por la enfermedad de herencia mitocondrial. Tipos de mutaciones: Se las afecta en duplicaciones, delecciones, cambio de sentido y mutaciones de una nica base. Herencia no mendeliana y uniparental
8. HOMOPLASMIA: situacin donde el mtDNA de cada clula o tejido es genticamente indenti- ca. HETEROPLASMIA: situacin donde existe una coexistencia de mtDNA normal y mutado de una clula. Estos conceptos se relacionan con las enfermedades de herencia mitocondrial en situaciones donde existe un umbral, un numero limite de mitocondrias capaces de estar enfermas sin per- judicar a la clula y por lo tanto no expresar la enfermedad o expresarla en menor medida, Adems a medida que progresan las generaciones, como las mitocondrias no poseen capaci- dad de autoreparacion, las enfermedades mitocondriales se hacen mas severas aparecen en estadios ms tempranos, afectan mayor nmeros de tejidos y aumenta su tasa o volumen de progresin, esto se debe a al exponencial expansin de mtDNA mutadas que se heredan.
9. MUTACIONES DINAMICAS. (mutaciones de expansin de repeticiones) Es la expansin de las secuencias repetitivas de trinucletidos. A medida que aumentan de tamao se hacen ms inestables. Las repeticiones de los tripletes por debajo de una cierta longitud en cada trastorno se transmiten de forma fiel y estable tanto en las mitosis como en las meiosis. Por encima de un nmero determinado de repeticiones en cada trastorno, es ms probable que se transmitan de forma inestables, habitualmente con un aumento o una disminu- cin en el nmero de repeticiones. La expansin en el nmero de tripletas tiene lugar, por lo general, en algunas generaciones dentro de una familia lo que explica algunos aspectos poco habituales en el patrn de herencia en las mutaciones dinamicas incluyendo el fenmeno de anticipacin. Ejemplo de enfermedad por tripletas son: Enfermedad de Huntington (tripleta CAG), distrofia miotnica tipo I (CTG), ataxias espinocerebelosas (en la mayora es CAG).
10. epigenetica Es la rama de la biologa que estudia la interaccion casual entre los genes y sus productos, de los cuales emerge el fenotipo final (Conrad Waddington) Resulta de la transmisin de secuencias de informacin no-ADN a travs de la meiosis o mito- sis. La informacin epigentica modula la expresin de los genes sin alterar la secuencia de ADN. Y lo hace a travs de diferentes mecanismos. Involucra cabios heredables en la expresin gentica NO por secuencia de ADN El estudio de todos aquellos factores NO genticos que intervienen en la determinacin de la endogena o desarrollo del organismo. Interviene en la regulacin heredable de la expresin gnica. La epigentica hace referencia, entonces, a cualquier mecanismo que utilice un organismo para traspasar informacin hereditaria de una generacin a otra Existen las denominadas marcas Epigeneticas que regulan el estado abierto o cerrado de las regiones del genoma y por tanto controlan el estado activado o inactivado de los genes. De estos tipos existen tres mecanismos bsicos referidos como fenmenos epigeneticos que son: 1. Metilacin del DNA: son los mejores estudiados y entendidos como marcadores de fe- nmenos epigenticos. La metilacin de la citosina del ADN: Es una modificacin del ADN, en la que un grupo metilo es trasferido desde S-adenosilmetionina a una posicin C-5 de citosina por una ADN-5 metiltrasferasa. La metilacin del ADN ocurre, casi ex- clusivamente, en dinucletidos CpG , teniendo un importante papel en la regulacin de la expresin del gen. 2. Modificacin de las Histonas: alteran conformacin de la cromatina. incluyendo acetila- cin, metilacin y fosforilacin. 3. Intervencin de secuencias de pequeos ARN no codificantes: pueden causar silen- ciamiento gnico a travs de los denominados ARN de interferencia.
11- IMPRINTING GENOMICO O IMPRONTA GENOMICA. Proceso de silenciacin gnica por medio de la Metilacin de regiones especficos del ADN. Los genes silenciados trasncripcionalmente se denominan GENES IMPRINTADOS. Unin de grupos metilos a las regiones 5de los genes junto con la hipoactilacion de la histona y con la condensacin de la cromatina, inhiben la unin de protenas que activan la trancripcion. Cuando hablamos de Imprinting, nos referimos a genes que pueden modificar su funcionamien- to sin necesidad de un cambio en la secuencia del ADN. Este cambio en su forma de manifestarse que tienen los genes imprintados esta generalmen- te ligado a su origen parental. Un gen imprintado se manifiesta de una manera cuando su origen es paterno y de otra cuando proviene del gameto materno. Parece ser que existe un mecanismo celular que de algn modo marca o deja una impronta sobre todos los genes imprintables de acuerdo al sexo del individuo. Esto quiere decir que todos los genes imprintables, y de cada gen sus alelos, tendrn un imprinting paterno si provie- nen de un hombre. De igual modo suceder con aquellos genes provenientes de una mujer, el imprinting ser materno. Tenemos por lo tanto un cdigo gentico, pero tambin un cdigo epigentico, constituido por un sistema de molculas unidas al complejo ADN/histonas, que gobiernan la expresin de los genes. Las colas proteicas de las de las histonas catalizan una gran variedad de mecanismos qumi- cos, como la acetilacin y la metilacin, que amplifican la expresin de genes vecinos. Los patrones de metilacin de ADN son los mejores estudiados y entendidos como marcadores de fenmenos epigenticos
12 DISOMIA UNIPARENTAL: Trastorno en el cual la persona hereda dos copias de un cromosoma de progenitor y ninguna del otro. En general, heredamos una copia de cada par de cromosomas de nues- tra madre biolgica y la otra copia del par de cromosomas de nuestro padre biolgico. Hay 3 posibles mecanismos que conducen a una disoma uniparental: Rescate trismico: fenmeno consistente en la prdida de un cromosoma por parte de un cigoto trismico. Es el mecanismo ms comn que da lugar a la disoma uniparental. En este caso, se habla de una heterodisoma, pues los dos cromosomas homlogos provienen del mismo progenitor. Se produce como consecuencia de la no disyuncin de la pareja de cromosomas durante la meiosis I. Rescate monosmico: duplicacin de un cromosoma llevada a cabo por un cigoto mo- nosmico. Este fenmeno conlleva a lo que se define como isodisoma: presencia del mismo cromosoma por duplicado. Se produce como consecuencia de una no disyuncin durante la meiosis II. Complementacin de los gametos: fenmeno consistente en la fertilizacin de un game- to con dos copias de un cromosoma con otro que careca de esos dos cromosomas. puede ocurrir durante la formacin del ovocito o clula espermtica o en el desarrollo temprano del feto. Puede tambin tener lugar durante el rescate trismico.
Dos ejemplos de enfermedades ocasionadas por disomia uniparental son el sndrome de An- gelman, donde aparecen dos alelos paternos y sin metilacin, y el sndrome de Prader-Willi, donde aparecen dos alelos maternos que tienen metilacin.
DELECCION: Trastorno en el cual el brazo largo del cromosoma 15 es eliminado y se prosigue con la mitosis. Esto significa una perdida significativa del material gentico Las delecciones provocan graves alteraciones del cdigo gentico y en ocasiones se manifiestan en for- ma de retrasos mentales, microcefalia, epicantus, labio leporino e hipertelorismo, entre otras. Entre stas destacan las siguientes: Sndrome del maullido del gato-Cri du chat (deleccin del brazo corto del cromosoma 5) Sndrome de Prader-Willi (deleccin del brazo largo del cromosoma 15) Sndrome de Angelman (deleccin de una regin del cromosoma 15) Sndrome delecin 22q13 o de Phelan-McDermid(deleccion del extremo distal del bra- zo largo del cromosoma 22)
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Tp 16 1POLIFORMISMO. (son heredados segn las leyes de Mendel) Definicin: Son variaciones de las secuencias de ADN de dos o mas alelos que se repiten en varios individuos de una poblacin y cuando se repiten en mas del 1% se consideran POLI- FORMISMOS. Las variantes de las secuencias de DNA que son mas frecuentes en las poblaciones (en que dos alelos o ms de un locus presentan frecuencias superiores al 1%. Estos loci se denominan Poliformismos. La mayora de los polimorfismos no tienen efecto sobre el fenotipo (caen en regiones no codificantes). Algunos pocos afectan nuestro fenotipo (Estatura: alta/baja; Cabello: claro/oscuro; Co- lor de ojos) Un numero muy pequeo de polimorfismos son responsables de enfermedades genti- cas (Ej: 1/20 Habitantes de Europa del Norte portan el gene de la Fibrosis Qustica)
Loci: El locus se refiere a la posicin o localizacin de un gen en el genoma Alelos: Un alelo es la versin de un gen que est presente en un locus dado
2. En gentica un marcador es cualquier diferencia en el ADN, sin importar como se detecte, cuyo patrn de transmisin de generacin en generacin puede ser trazado. Cada individuo que lleva el marcador tambin lleva una extensin de cromosoma a cada lado de l, de modo de marcar una regin particular del genoma. Un Gen mutante o alguna porcin de un Gen Mutante puede servir como marcador. Estos marcadores como cualquier diferencia entre individuos, son generalmente inocuos por si mismo, permiten conocer la posicin de genes que causan enfermedades y que su secuencia de ADN sea aislada, identificada y estudiada. Los marcadores genticos que son detectados por anlisis directo del ADN son llamados mar- cadores de ADN. Estos son importantes en gentica debido a que sirven de puntos de referen- cias en largas molculas de ADN. MARCADOR GENETICO: es decir, toda secuencia reconocible en el ADN de un individuo que pueda ser identificada y separada segn diferentes individuos para su estudio. Existen muchos marcadores polifrmicos que pueden ser detectados en el genoma situado baste cerca de los genes causantes de enfermedad.
3ORGANISMO MODELO: Es una especie muy estudiada para entender fenmenos particulares, que pueden darnos una idea de cmo funcionan esos procesos en otros organismos, son ampliamente usados para analizas las causas de enfermedades humanas y posibles tratamientos Caractersticas: Fcil mantencin y manipulacin en el laboratorio. Ciclos de vida cortos Gran numero de descendencia Disponibilidad de variabilidad fenotpica y genotpica. Fenotipo de inters sencillo de observar y medir. Tcnicas de estudio puestas a punto para estas especies. Hay muchos organismos modelo. Uno de los primeros fue Escherichia coli, un componente comn en el sistema digestivo humano. Muchos organismos eucariotas tales como Saccharomyces cerevisiae, han sido ampliamente utilizados en gentica y en biologa molecular debido a que son muy fciles de cultivar. El ciclo celular en una levadura es muy similiar al ciclo celular en los seres humanos y estn regulados por protenas homlogas. La mosca de la fruta (Drosophila melanogaster) se estudia debido a que es muy fcil de cultivar y tiene muchas caractersticas congnitas visibles
4. Existen diferentes mtodos que permiten identificar marcadores de ADN, los procedimientos se pueden agrupar en dos categoras: a) Aquellos que permiten identificar un fragmento de ADN especifico presente en un di- gesto de ADN genmico basndose en el hecho de que secuencias de ADN de hebra simple pueden, bajo ciertas condiciones formar una molcula bacteriana con otra se- cuencia complementaria. b) Aquellos que requieren previo conocimiento de la secuencia de ADN en los extremos de fragmentos de inters para poder, especificar y repetidamente replicar este solo fragmento a partir de un digesto de ADN genmico, esos procedimientos se basan en la replicacin selectiva de ADN (amplificacin) por medio de la Reaccin en cadena de la Polimerasa (PCR) Para obtener fragmentos de ADN se utiliza la tcnica de Southern Blot (hibridizacin) Esta consiste, mediante la combinacin de distintas tcnicas detectar las presencia de una secuencia de ADN en una mezcla completa de estas molculas. (utiliza endonucleasas de res- triccin y sirve para identificar sitios de restriccin); consiste en: a) Extraccin del DNA. b) Digestion del DNA con una endonucleasa (produce mas de un milln de fragmentos e idntica sitios de restriccin) de restriccin. c) Electroforesis con Gel de Agarosa d) Preparacin de un ensayo de Southern e) Tras la electroforesis las molculas de ADN separadas se neutralizan impregnando el gen con una disolucin alcalina que rompe los puentes de hidrogeno. Tras la neutrali- zacin esta, el DNA monocatenario resultante se transfiere a la superficie de una membrana de nylon o nitrocelulosa, realizando una copia. f) Hibridacin con sonda radiactiva: una sonda es una molcula pequea de ADN o ARN, marcada con nucletidos radiactivos, que es una capa de hibridar con un fragmento especfico de ADN. g) Deteccin de los fragmentos de ADN mediante autorradiografia: a. Delecciones Duplicaciones b. VNTP (nmero variable de repeticiones en tndem) c. RFLP (poliformismos en la longitud de los fragmentos de restriccion9 d. STRP (poliformismo en repeticiones cortas en tndem. e. SNP (poliformismo de un nico nucletido)
PCR: reaccin en cadena de la Polimerasa Utiliza un proceso natural como la duplicacin del DNA para multiplicar exponencialmente el nmero de molculas de DNA de una muestra desconocida de tamao nfimo. El proceso requiere: a) 2 cebadores (pequeas secuencias de DNA que se denominan oligonucletidos.) b) DNA polimerasa c) Un gran nmero de nucletidos de DNA libres. d) DNA genmico de un individuo. PROCEDIMIENTO: Consiste en ciclos de calentamiento o enfriamiento de la molcula de ADN de manera que se desnaturaliza y la molcula pasa a ser monocatenaria. Primeramente se calienta, desnaturaliza y se presenta a grandes cantidades de cebadores monocatenarios, estos se hibridan en ubicaciones especficas de DNA. A continuacin se calienta de nuevo y se presentan los nucletidos libres de DNA, luego se presenta la DNA polimerasa que comienza a sintetizar los fragmentos dicatenarios a partir de los cebadores. Esta cadena neoformada bicatenaria se desnaturaliza nuevamente y se repite el ciclo. Esto da como resultado la produccin de forma exponencial de la cadena de DNA especifica.
5ORGANIZACIN DEL GENOMA HUMANO. Se caracteriza por: Secuencias repetitivas en tndem, microsatlites y minisatlites. Secuencias repetidos dispersos. Secuencias no repetidas: codificantes y no codificantes.
6RFLP Poliformismos en la longitud de los Fragmentos de restriccin. : Se basa en la actividad de endonucleasas de restriccin que reconocen secuencias especficas del genoma. Dichas secuencias de restriccin se pueden encontrar en los exones, en los intrones, o en el ADN que separa un gen del otro. Presenta usualmente patrones de distancia, longitud y disposicin diferentes en el ADN de diferentes individuos de una poblacin. (poliformismo para los fragmentos restric- cin). Utilidad: son usados como marcadores moleculares (genticos); son segmentos de ADN con una ubicacin gentica identificable (locus en un crokosma y ruta gerencia genrica se puede rastrear.
MICROSATLITES: STR s , (Short Tandem Repear) S s R s :, (simple, sequence repeat) Son secuencias de AND en las que un fragmento (cuyo tamao va desde 2 hasta 6 pa- res de bases) se repite de manera consecutiva entre dos regiones flanqueantes. Generalmente se encuentran en zonas no codificantes del ADN, son neutros, codomi- nantes y poseen una alta tasa de mutacin. Diferentes personas tienen diferentes nmeros de unidades de repeticin. (poliformis- mo) MINISATELITES: VNTR. (Varible Numver On Tandem Repeats) Son repeticiones de secuencias de 9 a 100 pares de bases. El nmero de repeticiones es variable pero en general es menor a 1000 Deteccin por hibridacin o por tcnicas de PCR. (mismo principio que para STR S ), di- ferentes sonda (mismo principio que para RFLP) SNP S: ( Single nucleotide polymorfishims) Consiste en variantes de un nucletido nico en un cromosoma. Representan entre 3 millones de diferencias. Pueden causar enfermedades hereditarias, aunque la mayora son inocuas. Detectados por mtodo de micromatrices.
7. NUCLEASAS: Enzimas especializadas en hidrolizar las uniones fosfodiester que mantienen unidos a los nucletidos de los cidos nuclecos (ADNasa, ARNasa). Las nucleasas se pueden emplear en el tratamiento de enfermedades producidas por virus, hongos, bacterias y algunos tipos de cncer. Si el grupo cataltico est unido a un oligonucletido antisentido pueden produ- cir la rotura del ARNm lo cual impide la sntesis de la protena codificada por el gen respectivo. EXONUCLEASAS: Actan en un extremo de la molcula (3o 5) Las exonucleasas degradan los cidos nucleicos desde un extremo de la molcula. Algunas actan en la direccin 5' 3'y otras en la direccin 3'>5', eliminando nucletidos del extremo 5'o del 3'respectivamente. ENDONUCLEASAS: actan en regiones internas de la molecula. Cuando reconocen secuen- cias especificas de corte (secuencias de reconocimiento. Se las llama Enzimas de Restric- cin. Las endonucleasas actan en posiciones internas de la cadena, reducindola a fragmen- tos cada vez ms pequeos
7. CANCER DE MAMA FAMILIAR. Fragmento de ADN con marcador Tiene un patrn de herencia dominante ligada al cromosoma X, por ser expresad en mujeres. Para identificar los del alelo mutante se puede utilizar la tcnica de Hibridizacion y Sothern Blot para identificar por marcas VNTR y RFLP. Adems pueden utilizarse hibridaciones genmicas comparadas con fluorescencia como Fish. La utilidad de identificar un fragmento como este nos da la posibilidad de detectar y tratar la enfermedad antes de expresarse o disminuir expresin.
APLICACIONES PRACTICAS DE LOS POLIFORMISMOS Identificacin de grupos de personas con riesgo de contraer ciertas enfermedades ge- nticas. Estudios de compatibilidad en donaciones de rganos. Pruebas de paternidad. Comparacin de sospechosos con muestras de sangre, cabello, saliva o semen. identi- ficacin por ADN, Dactiloscopia del ADN). Identificacin de restos humanos por comparacin con muestras de familiares. Estudios de evolucin de poblaciones animales salvajes. Generacin de hiptesis sobre las migraciones humanas en la migracin. Identificacin de inmigrantes.
8. ADN Recombinante o clonacin: La ingeniera gentica hace referencia a la manipulacin de genes en laboratorio. Una altera- cin que tiene un importancia especial en la gentica mdica es la creacin de clones.(copia idntica de una secuencia de ADN) El objetivo es insertar una secuencia de ADN humano en un organismo de reproduccin rpida para poder crear copias de ADN con rapidez. El sistema utilizado es el plsmido, un pequeo fragmento circular y autoreplicativo de DNA que reside en muchas bacterias. Para insertar el DNA humano en el plsmido necesitamos una manera de cortar el DNA en fragmentos para poder manipularlo, las enzimas de restriccin. Cuando se divide el DNA pls- mido o humano con EcoRI, los fragmentos consultantes de DNA contienen extremos expuestos que pueden someterse a emparejamiento de bases complementarias entre s. Entonces, una vez que el DNA humano y plsmido estn mezclados, se recombinan. Los plsmidos resultantes vuelven a insertarse en bacterias, donde se reproducen con rapidez a travs de divisin celular natural. Las etapas en la produccin de ADN recombinante son: Preparacin de la secuencia de ADN para su clonacin. Preparacin de un vector (portador de la secuencia de ADN que se desea clonar. con- tiene enzimas de restriccin) de clonacin. Formacin de ADN recombinante. Introduccin del ADN recombinante en la clula anfitriona. Prolongacin del cultivo. Deteccin y seleccin de clones recombinantes.
9. GENOTECA (banco de genes) Coleccin de clones, cada una de las cuales contiene en vector al que se ha insertado un fragmento de ADN, derivado del ADN o el ARN total de la clula o el tejido de inters. Para identificar el gen portador se dividen las muestras de ADN por medio de enzimas, de res- triccin y frecuentemente son los virus los medios de transporte de los fragmentos obtenidos.
10. VECTOR: Molculas de ADN cuyas caractersticas le permiten que la secuencia de ADN de inters se mantenga y replique en las clulas hospedadoras. Caractersticas: Origen de replicacin Tamao pequeo Sitios nicos de clonado Marcador de seleccin Ejejmplos: Plsmidos: pequeos fragmentos circulares de ADN, estn presentes prcticamente en todas las clulas bacterianas. Contienen de 2 a 30 genes Bacterifagos (son virus que infectan exclusivamente a las bacterias) y cosmidos (Los csmidos son vectores de clonacin, que han sido ampliamente usados en la ela- boracin de genotecas de DNA genmicos de gran tamao, ya que permiten la intro- duccin de insertos de DNA de hasta 45 kb, el doble que los vectores derivados de la eliminacin de parte del genoma del fago , los fagmidos.) Virus: es un agente infeccioso microscpico que slo puede multiplicarse dentro de las clulas de otros organismos.
11. SECUENCIACION DEL ADN : La secuenciacin consiste en un conjunto de mtodos y tcnicas bioqumicas que nos permiten determinar el orden de los nucletidos (A, C, G y T) en el ADN. La secuencia de ADN constituye la informacin gentica heredable del ncleo celular, los plsmidos, la mitocondria y cloroplastos (En plantas) que forman la base de los programas de desarrollo de los seres vivos. Mtodo SANGER, o de terminacin de la cadena por Dideoxi: Este mtodo se basa en el hecho que los didesoxinucleotidos se comportan de manera similar a los desoxinucleotidos normales, excepto en que una vez que se incorporan a la cadena de DNA la terminan. Asi, marcan las posiciones de bases especificas en una cadena monocatena- ria. La hibridacin se hace de forma similar al proceso de la PCR con el detalle de didesoxinucleo- tidos. La secuenciacin de ADN utilizando el mtodo didesoxi de Sanger emplea nucletidos modi- ficados (didesoxinucletidos), que no poseen el hidroxilo (OH) en el extremo 3 . El ADN se sintetiza in vitro utilizando un molde de la cadena que se desee secuenciar, un exceso de sus- tratos nucletidos desoxi, una pequea cantidad de didesoxi especfico (A, T, C o G), un ceba- dor o primer y polimerasa.
Ventajas del secuenciamiento: Secuenciamiento de genomas a bajo costo. No se necesita diseo de digonucleotidos. Deteccin y expresin diferencial de genes mas precisa. Anlisis de transcriptos alternativos. Estudio de SNPr y mutaciones Descubrimiento de mutaciones. Expresin especifica de un determinado alelo. Descubrimiento y anotacin de nuevos transcriptos (ncRNA) Deteccin de splicing alternativo Deteccin y cuantificacin de mRNA