You are on page 1of 9

PROTOCOLO PARA LA DETERMINACIN DE AMONIO

GL PL 19 Pgina 1 de 9
REV. 0/ JUN/13




COD. GL PL 19




3
2
1
0 Documento inicial
Martha
Garca
Ing. Qumica
Carlos Doria
Coordinador lab. de
calidad ambiental
Leanis Pitre
Dir.SILAB
17-06-2013
REV. No. DESCRIPCION ELABOR REVIS APROB FECHA




APROBADO: _______________________





PROTOCOLO PARA LA DETERMINACIN DE AMONIO





GL PL 19 Pgina 2 de 9
REV. 0/ JUN/13
CONTENIDO


1. OBJETO ............................................................................................................ 3
2. APLICACIN ..................................................................................................... 3
3. DEFINICIONES ................................................................................................. 3
4. FUNDAMENTO DEL MTODO ........................................................................ 3
5. INTERFERENCIAS Y LIMITACIONES ............................................................. 3
6. TOMA DE MUESTRA, ALMACENAMIENTO Y PRESERVACIN ................... 4
7. MATERIALES Y EQUIPOS ............................................................................... 4
8. REACTIVOS Y SOLUCIONES .......................................................................... 5
9. PROCEDIMIENTO ............................................................................................ 6
10. CLCULOS .................................................................................................... 7
11. AUTORIDAD .................................................................................................. 8
12. FORMATOS ................................................................................................... 8
13. REFERENCIAS .............................................................................................. 8




PROTOCOLO PARA LA DETERMINACIN DE AMONIO





GL PL 19 Pgina 3 de 9
REV. 0/ JUN/13


1. OBJETO

Describir la metodologa a seguir para determinar Amonio en aguas.


2. APLICACIN

El mtodo del Fenato (SM 4500 NH3 F), conocido tambin como la tcnica
colorimtrica de cuantificacin del Azul de Indofenol, es aplicable tanto para agua
dulce como para agua de mar y es lineal para 0.6 mg NH3-N/L.

3. DEFINICIONES

Amonio: Es un catin poliatmico cargado positivamente de frmula qumica
NH
4
+
. Se produce por la reaccin del amonaco, que es una base dbil con cidos
de Bronsted (donantes de protones).

4. FUNDAMENTO DEL MTODO

El in amonio resulta de la reduccin de nitratos u oxidacin de materia orgnica,
sin embargo, dependiendo del pH del medio, sus concentraciones pueden variar
transformndose en amonaco, lo cual quiere decir, que a pH superiores a 9.2, el
amoniaco (NH
3
) tiende a incrementar pero el amonio (NH
4
) disminuye, mientras
que a pH menores, el amonio (NH
4
+
) se aumenta y el amonaco disminuye.

El mtodo de Fenato conocido tambin como la tcnica colorimtrica de amonio
(azul de indofenol), se basa en que un compuesto de color azul intenso, indofenol,
se forma por la reaccin del amonio, con el fenol favorecido por el in hipoclorito
en condiciones alcalinas, catalizada por el nitroprusiato de sodio el cual favorece
la intensidad del color en la reaccin, y puede ser leda a 640 nm.

5. INTERFERENCIAS Y LIMITACIONES

Complejos de Mg
++
y Ca
++
con citrato de sodio eliminan interferencias producidas
por la precipitacin de estos iones a un pH alto, ya que el citrato sirve como
quelante. El nitrgeno trivalente no produce interferencias.


PROTOCOLO PARA LA DETERMINACIN DE AMONIO





GL PL 19 Pgina 4 de 9
REV. 0/ JUN/13

Las interferencias producidas por turbidez se remueven con destilacin o filtracin.

Si el sulfuro de hidrgeno est presente, eliminar por acidificacin de la muestra a
pH 3 con HCl diludo y airear vigorosamente hasta que el olor de sulfuro ya no se
pueda detectar.

Otras interferencias las causan durezas mayores a 400 mg CaCO
3
MgCO
3
/L; al
igual que alcalinidad mayor a 500 mg CaCO
3
/L.


6. TOMA DE MUESTRA, ALMACENAMIENTO Y PRESERVACIN

Las muestras se recolectan en botellas Niskin, Nansen u otras adecuadas, y de
stas, se transfieren a una botella plstica de 500 ml, previamente lavada y
purgada. Generalmente, la cantidad colectada en la ltima botella, sirve para
efectuar todos los anlisis de nutrientes.

Previo al anlisis es necesario filtrar la muestra para evitar las interferencias por el
material suspendido. Si las muestras van a ser analizadas dentro de las 24 horas
de colectadas se debe refrigerar a 4C sin acidificar. Si esto no es posible se
deben almacenar por un tiempo mximo de 28 das en un sitio oscuro y
congeladas a 20C sin acidificacin, o acidifique a pH menor a 2 y refrigere a
4C. Si preserva acidificando, neutralice la muestra con NaOH o KOH
inmediatamente antes de realizar la determinacin. Es preferible el uso de
congelacin instantnea con CO
2
.

Nota: Aunque la acidificacin es adecuada para ciertos tipos de muestras, produce interferencias
cuando amonio intercambiable est presente en slidos sin filtrar.


7. MATERIALES Y EQUIPOS

- Espectrofotmetro VIS con un rango de 400 900 nm
- Celdas de vidrio con 10 1 cm de paso ptico
- Dosificadores o pipetas de 1 mL
- Dosificadores o pipetas de 2 mL
- Pipetas aforadas de 25, 10, 5, 2 y 1 mL
- Probetas de 100 y 50 mL

PROTOCOLO PARA LA DETERMINACIN DE AMONIO





GL PL 19 Pgina 5 de 9
REV. 0/ JUN/13

- Matraces aforados de diferentes capacidades
- Vasos de precipitado (beaker o erlenmeyer) de 100 o 250 mL
- Bomba de vaco
- Filtro de nitrocelulosa con dimetro de poro de 0.45 m
- Papel aluminio o pelcula plstica transparente (envoplast)


8. REACTIVOS Y SOLUCIONES

- Agua desionizada: Debe utilizarse agua recientemente desionizada para la
preparacin de reactivos, estndares y blancos, la cual se debe almacenar
en recipiente de vidrio bien tapado. El incumplimiento de esta precaucin
conduce invariablemente a una cuantificacin deficiente del amonio.

- Solucin de fenol: Disolver 25 g de fenol (C6H5OH) R.A. en 250 ml de
etanol (C2H5OH) al 95%. Almacenar la solucin refrigerada a 4C en frasco
mbar

- Solucin de nitropruciato de sodio [Na2Fe(CN)5 NO.2H2O](0.5% p/v):
Disolver 0.5 g de Nitropruciato de sodio en 100 ml de agua desionizada.
Almacenar refrigerada en botella de color mbar por un tiempo mximo de
Un (1) mes.

- Reactivo alcalino: Disolver 100 g de citrato de sodio (C6H5Na3O7.2H2O)
R.A. y 5 g de hidrxido de sodio (NaOH) en agua desionizada. Diluya hasta
500 ml. Almacenar en recipiente de vidrio (La solucin es estable durante
varios meses).

- Hipoclorito de sodio (NaClO): Solucin comercial cercana al 5%. Esta
solucin de descompone lentamente una vez destapado la botella.
Reemplazar cada 2 meses.

- Solucin oxidante: Mezclar 60 ml del reactivo alcalino y 15 ml de hipoclorito
de sodio al 5%.. Es preciso mantener la solucin tapada mientras no est
en uso. Debe prepararse esta mezcla nicamente el da que se va a utilizar,
los sobrantes deben descartarse.


PROTOCOLO PARA LA DETERMINACIN DE AMONIO





GL PL 19 Pgina 6 de 9
REV. 0/ JUN/13

- Solucin estndar de amonio: Disolver 0.0535 g de cloruro de amonio
(NH4Cl) grado analtico (previamente seco a 104 C durante dos horas), en
100 mL de agua desionizada. Adicionar 50 L de cloroformo como
preservante y almacenar refrigerada; la solucin bien sellada es estable
por varios meses. La concentracin de esta solucin es de 10000 g-at
N./L.


9. PROCEDIMIENTO

CALIBRACIN
- Stock secundario: Medir 1 mL de la solucin patrn y diluir hasta 100 mL
con agua desionizada; la concentracin de esta solucin es de 100 mol/L

- Tomar 0.25, 0.50, 0.75, 1.00 y 1.25 mL del stock secundario y completar a
25 mL con agua desionizada. Las concentraciones de estas soluciones son:
1.0; 2.0; 3.0; 4.0 y 5.0 g-at N/L respectivamente; o seleccionar
concentraciones que estn en el rango de trabajo de las muestras.

- Aplicar el proceso descrito para la muestra y el blanco.

- Aplicar regresin lineal a los resultados y calcular la concentracin de la
siguiente forma. Determine la pendiente (m) y el intercepto (b) de la curva
de calibracin (Y= mX + b)

Abs = C * m + b

Y= Abs = valor de la absorbancia del estndar
X = C = Concentracin estndar ( g-at N/L)
b = intercepto

Nota: La curva de calibracin se realiza una vez, y cuando se presente un cambio significativo en
el ensayo. Se recomienda renovar cada 2 meses


ANALISIS
- Homogenizar la muestra y filtrarla antes de proceder al anlisis, si hay
presencia de material en suspensin

PROTOCOLO PARA LA DETERMINACIN DE AMONIO





GL PL 19 Pgina 7 de 9
REV. 0/ JUN/13


- Tomar 25 mL de muestra y verterla en un beaker o erlenmeyer

- Adicionar 1 mL de solucin de fenol, agitar y mezclar completamente.

- Agregar 1 mL de nitroprusiato de sodio, agitar y mezclar completamente.

- Adicionar 2.5 mL de solucin oxidante, agitar y mezclar completamente.

- Mantener el recipiente que contiene la muestra tapado con papel aluminio o
pelcula plstica y en la oscuridad, en una habitacin entre 20 y 27C
durante 1 hora.
- La muestra tornar azul y la intensidad del color es proporcional a la
concentracin de amonio en la muestra. El color es estable por 24 horas.
- Leer la absorbancia a 640 nm para todas las muestras. En caso que la
lectura de absorbancia en la muestra exceda el rango espectrofotomtrico,
diluirla con agua destilada y procesar nuevamente.
- Siga el mtodo descrito para la muestra usando 25 mL de agua
desionizada.
Nota: Se deben usar guantes y gafas protectoras cuando manipule fenol; ya que es un veneno
protoplasmtico (provoca la destruccin generalizada de clulas, seguida de falla de los rganos) y
es extremadamente corrosivo en su forma lquida o polvillo. Ingresa al organismo por la piel o por
ingestin. El contacto con los ojos puede provocar incluso la ceguera y la ingestin de 1g puede
ser fatal. Es irritante al tracto respiratorio, sin embargo, su baja volatilidad hace que la inhalacin
sea un riesgo menor. Aplique ventilacin adecuada para minimizar la exposicin del personal a
estas sustancias txicas voltiles.


10. CLCULOS

De la curva de calibracin se obtiene directamente la concentracin de la muestra,
as:


m
b Abs
C


PROTOCOLO PARA LA DETERMINACIN DE AMONIO





GL PL 19 Pgina 8 de 9
REV. 0/ JUN/13


C = Concentracin de la muestra en g-at.N/L (microgramo-tomo de N/L)
Abs = Absorbancia de la muestra corregida (menos la absorbancia del blanco)
b = Intercepto
m = Pendiente de la curva de regresin

Nota: Si realiz dilucin debe tener en cuenta el factor de correccin, por el cual se multiplicar el
resultado obtenido al sustituir valores en la ecuacin.



11. AUTORIDAD

Director tcnico: Posee autoridad para decidir acerca del uso de equipos y la
realizacin, suspensin, reanudacin o reprogramacin de una prueba.

Responsable de calidad: Decide sobre la repeticin de una prueba.

Tcnico Analista titular o suplente y/o Auxiliares: Autoridad para decidir el
encendido de equipos, si se requiere, tomar las muestras, realizar las lecturas
pertinentes y repetir las pruebas cuando sea necesario.


12. FORMATOS

Datos de Anlisis Espectrofotomtricos GL F 23


13. REFERENCIAS

Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. Phenate
Method 4500 NH
3
F. American Public Health Association, American Water Works
Association, Water Pollution Control Federation. 21st ed., New York, 2005.pp 4-
114.

INSTITUTO DE INVESTIGACIONES MARINAS Y COSTERAS-INVEMAR.
Manual de tcnicas analticas para la determinacin de parmetros fisicoqumicos
y contaminantes marinos (Aguas, Sedimentos y Organismos). Santa Marta, 2003.
p.40. Disponible en:

PROTOCOLO PARA LA DETERMINACIN DE AMONIO





GL PL 19 Pgina 9 de 9
REV. 0/ JUN/13

<http://www.invemar.org.co/redcostera1/invemar/docs/7010manualTecnicasanalitic
as.pdf >

ORDUZ, Sergio y ERAZO Edna. Anlisis de las caractersticas Fsicoqumicas de
aguas y suelos de cultivos acucolas intensivos y superintensivos. CENIAGUA -
COLCIENCIAS. Bogot, 2009. p.29 Disponible
en:<http://www.ceniacua.org/archivos/CARTILLA_FORTALECIMIENTO_2009.pdf>

You might also like