REPORTE N 5: EXTRACCIN DE ADN

PROCEDIMIENTO REALIZADO:
1) Se tom una muestra de vegetal (brcoli) y se redujo el tamao en un mortero.
2) Se agreg sal y luego agua. Se prosigui a colarlo.
3) Se recogi la solucin obtenida. Se agreg detergente lquido y se agit la mezcla.
4) Se dej reposar la mezcla en lo que se preparaba el jugo de Pia.
5) Se pas a los 5 tubos de ensayo la mezcla de solucin inicial.
6) Una vez obtenido el jugo de pia, se adicion a los tubos unos 4mL de solucin.
7) Se agit y luego se adicion alcohol por las paredes, en proporcin 1:1 con la solucin.
8) Dejando reposar, se observ la precipitacin de un material fibroso blanco en la interfase,
lo cual es el ADN.
RESULTADOS OBTENIDOS:
El ADN pudo ser extrado de una manera casi casera, debido a que no se utiliz reactivo de
laboratorio. Para extraerlo, fue necesario romper las paredes celulares y las membranas
respectivas, para poder acceder al ncleo de la clula y poder extraer el ADN, el cual se pudo
observar gracias a la adicin del alcohol debido a que el ADN precipita en ello.

CUESTIONARIO N 5: EXTRACCIN DE ADN
1. EN QUE CONSISTE EL EFECTO CAOTROPICO DEL DODECIL SULFATO DE SODIO
Un agente caotrpico es una sustancia que altera la estructura de, y desnaturaliza,
macromolculas tales como protenas y cidos nucleicos, entonces, el SDS acta
rompiendo enlaces no covalentes en las protenas, desnaturalizndolas, provocando que
estas molculas proteicas pierdan su conformacin nativa. Esto ocurre porque el SDS se
une a las zonas apolares del polipptido. Adems, la cantidad de SDS unido es similar para
muchas protenas: una molcula de SDS por cada dos residuos aminocidos,
correspondiendo a unos 1,4 g SDS/g protena. Ello proporciona al polipptido una carga
negativa que resulta proporcional a la longitud de la cadena (el nmero de aminocidos) y,
por tanto, a la masa molecular de la protena. Este aporte de carga negativa es
sustancialmente mayor que la carga original de la protena. La repulsin electrosttica
creada por la unin del SDS a la protena es uno de las causas de que la protena pierda su
conformacin nativa, eliminndose de este modo las diferencias en conformacin de las
diferentes protenas que han de ser separadas en el gel.

2. CONSULTE OTRAS TCNICAS DE EXTRACCIN DEL ADN Y EXPLIQUE EL FUNDAMENTO DE
TRES DE ESTAS, ESPECIFICANDO EL USO DE REACTIVOS CLAVES
Salting-Out: Tcnica inorgnica; permite visualizar la malla de ADN. En este
mtodo se utiliza un buffer que contiene Proteinasa K ( Tris-HCl, pH 8.3, Tween 20,
Nonidet P40, Proteinasa K), la cual destruye las membranas nucleares, liberando a
la solucin los cidos nucleicos. El paso siguiente consiste en la precipitacin de
los cidos nucleicos, ya que el DNA presente en soluciones con alta concentracin
de sales acetato de sodio (AcONa) puede precipitarse mediante la adicin de
alcohol etlico a dichas soluciones.
CHELEX: Tcnica inorgnica; previene de la degradacin del ADN por quelacin de
los iones metlicos durante la ebullicin al 5%. Tiene copolmeros de estireno
dibenceno-iones imidodiactico.
Fenol-Cloroformo: Tcnica orgnica; se obtiene ADN de muy Buena calidad y
cantidad. Pptidos y protenas son extradas en la fase orgnica (fenol) despus se
realiza la digestin con proteinasa K. El cloroformo permite que todo el fenol
pueda ser lavado.

3. POR QUE EL ALCOHOL DEBE ESTAR A BAJA TEMPERATURA
Porque as permite que la membrana exista, forma complejos de lpidos y protenas
hacindolos precipitar en la solucin de alcohol.

4. PARA QUE SE UTILIZA EL ABLANDADOR DE CARNE
El ablandador de carne tiene enzimas proteolticas (proteasas), es decir, pueden desdoblar
las protenas en sus aminocidos.

5. PARA QUE SE UTILIZA LA SAL
La accin del detergente es causar que las membranas se rompan por disolucin de los
lpidos y las protenas de la clula, esto rompe los enlaces que permiten que la membrana
exista como tal. Ms tarde forma complejos de lpidos y protenas hacindolos precipitar.

La accin de la sal es cubrir los terminales fosfatos negativos, permitiendo as que los
extremos se unan y el ADN precipite en la solucin de alcohol.

6. CUAL ES LA ACCION DEL ALCOHOL
El alcohol se utiliza para precipitar el ADN que es soluble en agua pero, cuando se
encuentra en alcohol se desenrolla y precipita en la interfase entre el alcohol y el agua.

7. CUAL ES LA ACCION DE LOS JUGOS DE PIA Y PAPAYA SOBRE LOS TEJIDOS BIOLGICOS
ESTUDIADOS
La accin del jugo de pia en este caso, fue el de eliminar las protenas que puedan
contaminar al ADN, debido a la papana, que es una enzima capaz de realizar dicha accin.

8. POR QUE EL ADN PRECIPITA EN UNA SOLUCIN DE ALCOHOL Y NO EN UNA DE AGUA
El ADN precipita en alcohol porque este forma una capa visible de lisado e
inmediatamente se comienzan a formar burbujas alrededor de las hebras de ADN cosa
que en el agua no ocurre.