PRACTICA # 5

FENOTIPIFICACIN DE OTROS GRUPOS SANGUNEOS

La presente prctica tiene por finalidad:
Identificar el fenotipo de los diferentes grupos sanguneos, adems del ABO
y el Rh
Aprender a diferenciar el procedimiento entre un Reactivo monoclonal y un
Suero de origen humano.
Entrenar en procedimientos de Fenotipificacinque lleguen hasta la fase de
Antiglobulina Humana.
Identificar el fenotipo de los Glbulos Rojos de los estudiantes voluntarios.

Muestras
Cada grupo de trabajo, contar con dos variedades de muestras de sangre:
El primero, lo conformarn las muestras provenientes de cada uno de los
miembros del grupo.
El segundo, conformado por las muestras problemas proporcionadas por la
ctedra para la prctica.

Material y Equipo
Bao Mara a 37
o
C
Tubos con anticoagulante (EDTA)
Jeringas descartables de 3cc.
Agujas 20 x 1, descartables
Tubos de vidrio, de 12 x 75
Pipetas pasteur, chupn de goma
Solucin Salina Fisiolgica
Pisceta de plstico
Ligadura de jebe, algodn, alcohol al 70%.
Baguetas de vidrio.
Reactivo anti C, anti E, anti c, anti e, de origen humano y monoclonal
Reactivo anti K, k, Jka, Jkb, Fya, Fyb, M, N, S, s, Dia, entre otros.
Antiglobulina Humana (Reactivo de Coombs)
Lpiz de cera.
Papel parafinado (Parafilm)



Procedimiento
1. A partir de las muestras problema, se proceder a obtener suspensiones de
trabajo uniformes al 5%, tal como se indic en la primera prctica.
2. Rotular tubos con el nombre nmero de la muestra y adems rotular con
el smbolo del antgeno a identificar.
3. Identificar en el antisuero, la procedencia del mismo. Si este es monoclonal
es de origen humano.

Procedimiento con reactivos monoclonales:
1. Agregar a cada tubo marcado, una gota del reactivo que corresponda.
2. Agregar una gota de nuestra suspensin de hemates al 5 % a cada tubo.
3. Centrifugar a 3,500 r.p.m. el tiempo previamente establecido para la lectura
directa.
4. Retirar los tubos, y proceder a leer, anotar sus resultados.

Procedimiento con reactivosen los que se usa fase de Coombs:
1. Agregar a cada tubo marcado, una gota del reactivo que corresponda.
2. Agregar una gota de nuestra suspensin de hemates al 5 % a cada tubo.
3. Agregar dos gotas de albumina bovina al 22%
4. Agitar e incubar en Bao Mara a 37
o
C por 15 a 30 minutos
5. Lavar 3 veces con SSF, luego de la ltima lavada decantar sobre papel
absorbente.
6. Agregar dos gotas de Antiglobulina Humana (AGH)
7. Centrifugar a 3,500 r.p.m. el tiempo previamente establecido para la lectura
directa.
8. Retirar los tubos, y proceder a leer, anotar sus resultados.

Interpretacin
Una reaccin positiva nos indicar presencia del antgeno correspondiente
al antisuero, una reaccin negativa indicara ausencia del antgeno.
En sistemas que comparten alelos, es frecuente hallar el alelo a, el b o
los dos (heterocigotos), tener cuidado con fenotipos que arrojen negativo
para ambos alelos, podra indicarnos alguna deficiencia en el proceso.

Cuestionario
1. Qu utilidad tiene conocer el fenotipo del glbulo rojo?
2. Porque algunos antisueros necesitan llegar hasta la fase de Coombs y otros
no?
3. En qu casos se puede presentar ausencia de ambos alelos?
4.- En qu situaciones clnicas es importante conocer el fenotipo extendido del
paciente o donante?