Mus musculus como modelo animal para estudio de leucemias
Silvia Elena Sánchez Mendoza
Estudiante de Doctorado
Programa de Oncologia Clinica, Celulas-Tronco e Terapia Celular
Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto-Universidade de São Paulo
Original Title
2014 Mus musculus como modelo animal para estudio de leucemias_FACEN Biotecnología.pdf
Mus musculus como modelo animal para estudio de leucemias
Silvia Elena Sánchez Mendoza
Estudiante de Doctorado
Programa de Oncologia Clinica, Celulas-Tronco e Terapia Celular
Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto-Universidade de São Paulo
Mus musculus como modelo animal para estudio de leucemias
Silvia Elena Sánchez Mendoza
Estudiante de Doctorado
Programa de Oncologia Clinica, Celulas-Tronco e Terapia Celular
Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto-Universidade de São Paulo
estudio de leucemias Silvia Elena Snchez Mendoza Estudiante de Doctorado Programa de Oncologia Clinica, Celulas-Tronco e Terapia Celular Faculdade de Medicina de Ribeiro Preto-Universidade de So Paulo Clasificacin de las leucemias Clasificacin de las lecucemias Leucemia Linaje Celular Porcentaje de Blastos Linfoide Mieloide Crnica Aguda http://www.cancer.gov/espanol/tipos/necesita-saber/leucemia/page3 Clasificacin de la OMG Informacin Morfolgica, citoqumica, inmunofenotpica y gentica se conjugan com las caractersticas clnicas del paciente para definir el dignstico. Clasificacin de la OMG Informacin Morfolgica, citoqumica, inmunofenotpica y gentica se conjugan com las caractersticas clnicas del paciente para definir el dignstico. Clasificacin de la OMG Informacin Morfolgica, citoqumica, inmunofenotpica y gentica se conjugan com las caractersticas clnicas del paciente para definir el dignstico. Clasificacin de la OMG Informacin Morfolgica, citoqumica, inmunofenotpica y gentica se conjugan com las caractersticas clnicas del paciente para definir el dignstico. Clasificacin de la OMG Clasificacin de la OMG Clasificacin de la OMG Desarrollo de modelos animales transgnicos a partir de Mus musculus Algunas definiciones Animal transgnico Todo animal que posee genoma de otra especie o de la misma especie por medio de la tecnologia de ADN recombinante. Inbred Individuos de una espcie en particular que son casi idnticos desde el punto de vista gentico. Apareamiento por 20 generaciones. C57BL/6J 129/SvImJ BALB/cJ Datos interesantes Ratones y humanos comparten 95% de sus genes por lo cual los ratones son modelos eficientes para el estudio de enfermedades humanas. En 1929, Clarence Cook Little funda el Laboratorio Roscoe B. Jackson Memorial en Bar Harbor, Maine. Em 1933, ratones del Jackson Laboratory son vendidos por primera vez a otras instituciones. Tcnicas para produccin de animales transgnicos Inyeccin en proncleos. Vectores virales. Transferencia de DNA exgeno mediada por esperma durante la fertilizacin (SMGT, sperm mediated gene transfer). Inyeccin, en la cavidad de blastocistos, de clulas madre embrionarias previamente modificadas genticamente mediante la tcnica de gene targeting. Transferencia nuclear. Inyeccin en proncleos Vectores virales Sperm mediated gene transfer Gene targeting Gene targeting http://ki.mit.edu/sbc/escell/services/details 129S1/SvIm J C57BL/6J BALB/cJ Gene targeting http://www.addgene.org/13442/ Gene targeting: Knock-in http://ki.mit.edu/sbc/escell/models/kno ck Gene targeting: Knock-out http://ki.mit.edu/sbc/escell/models/kno ck Gene targeting: condiotional Knock-out http://ki.mit.edu/sbc/escell/models/kno ck Transferencia nuclear Modelo doble knock-in de leucemia mieloide aguda Mutacin Mll PTD Mll -> Mixed lineage leukemia Es uma duplicacin parcial em tandem (Partial Tandem Duplication) dentro del marco de lectura de los exones 5 a 11. La insercin puede producirse antes del exon 11 o 12 12. Nature Reviews Cancer 7, 823-833 (November 2007) Mutacin Mll PTD Presente em 4-7% de los pacientes com leucemia mieloide aguda y cariotipo normal. Considerada de mal pronstico. El gen Mll codifica uma protena de unin al ADN. En modelo in-vitro, regula la expresin de algunos genes HOX mediante modificaciones de regiones cis regulatorias: Acetilacin de histonas H3/H4. Metilacin de lisina 4 en H3. Mutacin Flt3 ITD La mutacin es una duplicacin interna en tandem (3-400 pb) en el dominio juxtamembrana del receptor Flt3. http://asheducationbook.hematologylibrary.org/content/2006/1/178/F1.expansion Ratn knock-in Mll PTD 15 clulas madre embrionarias fueron inyectadas en blastocistos de 3,5 das de edad en hembras C57BL/6. Ratn knock-in Flt3 ITD Ratn doble knock-in Mll PTD y Flt3 ITD Fmeas C57BL/6J Flt3 WT:ITD Machos BALB/cJ Flt3 WT:ITD Mll WT:PTD Mll WT:PTD Flt3 WT:ITD Mutacin Mll PTD Ratones con mutacin Mll PTD presentan: Alteracin de los lmites normales de expresin de genes homeobox (Hoxa9) durante la embriognesis. Mutacin Mll PTD Ratones con mutacin Mll PTD presentan: Defectos del esqueleto axial. Mutacin Mll PTD Ratones con mutacin Mll PTD presentan: Nmero aumentado de clulas hematopoyticas progenitoras. BFU-E: burst forming unit-erythroid GEMM-CFU: granulocyte, erythroid cell, monocyte, and megakaryocyte colony forming unit GM-CFU: granulocyte/macrophage colony forming unit Mutacin Mll PTD Ratones con mutacin Mll PTD presentan: Aumento de la expresin de genes Hoxa7, Hoxa9 e Hoxa10 en mdula sea, bazo y sangre perifrica. Mutacin Flt3 ITD Ratones con la mutacin Flt3 ITD presentan: Una enfermedad mieloproliferativa parecida a Leucemia Mielomonoctica Crnica. Mac-1: monocitos y granulocitos. Gr-1: granulocitos. Mutacin Flt3 ITD Ratones con la mutacin Flt3 ITD presentan: Nmero aumentado de clulas madre multipotentes y clulas progenitoras (LSK Lin - Sca1 + ckit + ). GMP: granulocyte- monocyte progenitors MEP: megakaryocyteerythroid progenitors CMP: Common myeloid progenitor Mutacin Flt3 ITD Ratones con la mutacin Flt3 ITD presentan: Nmero aumentado de clulas madre multipotentes y clulas progenitoras (LSK Lin - Sca1 + ckit + ). GMP: granulocyte- monocyte progenitors MEP: megakaryocyteerythroid progenitors CMP: Common myeloid progenitor Mutacin Flt3 ITD Ratones con la mutacin Flt3 ITD presentan: Nmero aumentado de clulas madre multipotentes y clulas progenitoras (LSK Lin - Sca1 + ckit + ). GMP: granulocyte- monocyte progenitors MEP: megakaryocyteerythroid progenitors CMP: Common myeloid progenitor Mutacin Flt3 ITD Ratones con la mutacin Flt3 ITD presentan: Aumento de proporcin de clulas LSK em fase S/G2/M. Mutacin Flt3 ITD Ratones con la mutacin Flt3 ITD presentan: Disminucin de la apoptosis en clulas LSK y clulas progenitoras. Modelo Mll PTD:WT Flt3 ITD:WT Modelo Mll PTD:WT Flt3 ITD:WT Modelo Mll PTD:WT Flt3 ITD:WT Modelo Mll PTD:WT Flt3 ITD:WT Modelo Mll PTD:WT Flt3 ITD:WT Modelo Mll PTD:WT Flt3 ITD:WT Modelo Mll PTD:WT Flt3 ITD:WT Modelo Mll PTD:WT Flt3 ITD:WT 1. DNA de camundongos de 4 semanas de idade extrado da cauda para genotipagem. 2. DNA extrado do MO antes do sacrifcio (50-80 semanas de idade). 3. Blastos AML de transplante secundrio. Modelo Mll PTD:WT Flt3 ITD:ITD Modelo Mll PTD:WT Flt3 ITD:ITD Modelo Mll PTD:WT Flt3 ITD:ITD Gracias por la atencin