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B BI IO OT TE EC CN NO OL LO OG GI IA A






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Agrobacterium tumefaciens


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INTRODUCCIN
Agrobacterium tumefaciens es una proteobacteria Gram negativa que
induce tumores en las plantas dicotiledneas conocidos como agallas o
tumores, generalmente en el cuello. Pertenece a la familia Rhizobiaceae
Posee un plsmido, denominado Plsmido Ti, el cual lleva un DNA, llamado
T-DNA, que al ser integrado en el cromosoma de alguna clula vegetal,
produce una proliferacin descontrolada, transformando a la clula, en
clula tumoral.
A. tumefaciens es una bacteria del suelo, un nicho ecolgico en el que el
nmero de especies bacterianas es muy elevado, y en el que se presume
an existe un gran nmero de especies no identificadas (Bakken, 1985;
Teyssier-Cuvelle et al., 1999). Incluso en el caso de entornos ms
restringidos se han encontrado poblaciones heterogneas de bacterias
(Anderson y Moore, 1979), como en los tumores producidos por este
patgeno, donde el ambiente en principio sera ms favorable para
agrobacterias patgenas que para cepas no patgenas del mismo
gnero Agrobacterium o para otras especies bacterianas. Esta preferencia
se explicara por la presencia en el medio de las opinas, sustancias
producidas por las plantas transformadas y que sirven de sustrato a las
cepas patgenas, las cuales poseen los genes del catabolismo de estos
compuestos. As, en un estudio llevado a cabo por Cubero (1998) en
tumores producidos de forma natural en nogal, se observ la presencia de
distintas cepas de A. tumefaciens patgenos en el interior de los tumores,
coexistiendo naturalmente. Todo ello muestra que la estructura de las
poblaciones de agrobacterias naturales es muy compleja y diversos
estudios han mostrado la presencia de mezcla de poblaciones que
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contienen cepas de Agrobacterium con diferentes cromosomas y con
diferentes tipos plasmdicos (Nesme et al., 1992; Pionnat et al., 1999).
JUSTIFICACION
La agalla de la corona es una enfermedad vegetal que genera tumores
en el cuello de plantas monocotiledneas y es producida por
Agrobacterium tumefaciens. Las agallas son tumores bulbosos que
sobresalen del tallo de muchas plantas como vides, rboles y arbustos
frutales entre otros, haciendo que las plantas crezcan mal de manera que
provocan prdidas en las cosechas.

Erwin Smith y C. O. Townsend en 1907, del Departamento de Agricultura de
EE.UU., descubrieron que la causa de las agallas de la corona, era una
bacteria del suelo con forma de bastoncillo, que posteriormente se
conocera como Agrobacterium tumefaciens.

Hasta ese momento se conocan otras bacterias que hacan que el tejido
vegetal muriera, se marchitara o se decolorara, pero A. tumefaciens tena
la extraa capacidad de promover la proliferacin de clulas vegetales
induciendo la formacin de tumores, desafortunadamente estas
investigaciones tuvieron importancia solo 40 aos ms tarde, cuando el
fitopatlogo Armin Braun de la Universidad Rockefeller, sinti curiosidad
por saber cmo una bacteria poda provocar esos tumores en las plantas.





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OBJETIVOS


OBJETIVO GENERAL

Concretar los aspectos biolgicos que intervienen en el comportamiento
patgeno de Agrobacterium tumefaciens.



OBJETIVOS ESPECIFICOS

Determinar los aspectos del comportamiento biolgico de A tumefansciens
que tiene implicaciones en su potencial biotecnolgico.

Reconocer las potenciales implicaciones biotecnolgicas de Agrobacterium
tumefaciens.







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AGROBACTERIUM TUMEFACIENS
Agrobacterium tumefaciens - sinnimo de
Rhizobium radiobacter - es una bacteria que
causa en las plantas dicotiledneas unos tumores
conocidos como "agallas" o "tumores del cuello",
que crecen en la zona donde se unen la raz y el
tallo (cuello).

Agrobacterium es una proteobacteria alpha de
la familia Rhizobiaceae, la cual tambin incluye
a las fijadoras de nitrgeno que viven en simbiosis con las legumbres. A
diferencia de stas, Agrobacterium es un parsito y causa grave dao a la
planta afectada.

Es de notar que Agrobacterium no es ni el nico ni el ms comn causante
de tumores en las plantas. Muchos pueden ser causados por insectos o
larvas que segregan ciertas sustancias que producen el mismo efecto
aparente.

MANERA DE INFECCIN
La bacteria se gua por las sustancias que la planta secreta (fenoles, entre
los ms conocidos acetosiringona, vainillina y p(OH)benzoico)de heridas
pequeas, por las que se introduce. Se ubica entonces en los espacios
intercelulares y desde all transfiere a las clulas de la planta un fragmento
de su material gentico, un plsmido (ADN circular extracromosmico
bacteriano) para transferir un segmento de ADN conocido como T-DNA o
ADN-T, que se integra en alguna zona del genoma de la planta.

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Este T-DNA inyectado por el Agrobacterium contiene genes que provocan
la produccin de reguladores del crecimiento vegetal, de lo cual resulta el
desarrollo del tumor.

El T-DNA tambin contiene genes codificadores de enzimas que causan
que la planta produzca aminocidos especializados llamados opinas. stas
son una fuente de energa especfica para A. tumefaciens, pero no para
otros organismos. Existen gran variedad de opinas, y cada cepa de A.
tumefaciens suele dar lugar a un nico tipo de opina. Por ejemplo, la cepa
C58 produce nopalina como opina.

BIOTECNOLOGA
La capacidad de transmisin de ADN por el Agrobacterium est siendo
extensamente explotada en biotecnologa, como medio de insertar genes
forneos dentro de las plantas y desarrollar organismos modificados
genticamente. Se trata entonces de un vehculo ptimo para
operaciones de ingeniera gentica. Entre los transgnicos creados por
este mtodo estn las plantas productoras del insecticida Bt, una toxina
originalmente producida por el Bacillus thuringiensis.

Los laboratorios del proyecto australiano CAMBIA obtuvieron relevancia al
desarrollar una versin de Agrobacterium tumefaciens modificada
mediante tecnologa de cdigo abierto.
Agrobacterium como patgeno de las plantas

Rhizobium radiobacter (= Agrobacterium tumefaciens) es la especie ms
comnmente estudiada de este grupo. En plantas causa la enfermedad
de las agallas del cuello, denominada as porque produce agallas o
tumores, a menudo en la zona donde se une la raz al tallo (cuello, o
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tambin llamado corona). Los tumores son producidos por la transferencia
de un segmento de ADN (ADN-T) del plsmido bacteriano Ti (abreviatura
de tumor-inductor). La especie prximamente relacionada, R. rhizogenes
(= A. rhizogenes), induce tumores en la raz, y presenta un plsmido distinto
Ri (abreviatura de raz-inductor). La especie R. vitis (= A. vitis), restringida
generalmente a la vid, puede presentar un plsmido Ti.

Cepas de otras especies bacterianas distintas de Agrobacterium, alisladas
en muestras ambientales, han presentado tambin plsmidos Ti. Adems,
muchas cepas ambientales de Agrobacterium no poseen plsmidos Ti ni Ri,
por lo que no son virulentas.

El plsmido ADN-T se integra semi-aleatoriamente en el genoma de la
clula husped,
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y los genes de virulencia del ADN-T se expresan causando
la formacin de una agalla. El ADN-T lleva genes de enzimas biosintticas
para la produccin de aminocidos inusuales, tpicamente octopina o
nopalina. Tambin lleva genes para la biosntesis de hormonas de las
plantas, auxinas y citoquininas. Estos alteran el equilibrio hormonal en la
clula, de forma que la planta no puede controlar la divisin de esas
clulas, formndose tumores. El cociente de auxina a citoquinina
determina la morfologa del tumor.

AGROBACTERIUM EN BIOTECNOLOGA
La capacidad de Agrobacterium para transferir genes a las plantas se ha
explotado en ingeniera gentica para la creacin de plantas trangnicas.
Pueden utilizarse plsmidos Ti o Ri modificados. El plsmido se desarma
eliminando los genes que inducen el tumor. Las nicas partes esenciales
del ADN-T son dos pequeas repeticiones (25 pares de bases) en los
extremos, por lo menos una de las cuales es necesaria para la
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transformacin de la planta. Marc Van Montagu y Jozef Schell en la
universidad de Gante (Blgica) descubrieron el mecanismo de
transferencia de genes entre Agrobacterium y las plantas, que permiten el
uso de esta bacteria en ingeniera gentica. Un equipo de investigadores
dirigido por Maria-Dell Chilton demostr que podan eliminarse los genes de
virulencia sin afectar a la capacidad de la bacteria para insertar su propio
ADN en el genoma de la planta (1983).

Los genes que se desea introducir en la planta son clonados en la regin
ADN-T del plsmido desarmado, junto con un marcador seleccionable (tal
como la resistencia antibitica) que ser usado para seleccionar a las
plantas que han sido modificadas con xito. Despus de la modificacin,
se hace crecer a las plantas en un medio que contiene el antibitico, de
forma que las que no tienen el ADN-T integrado en su genoma morirn. Un
mtodo alternativo es la agroinfiltracin.

La modificacin gentica mediante Agrobacterium se puede realizar de
dos formas. Una consiste en la incubacin de protoplastos u otros tejidos de
la planta con la bacteria y la posterior regeneracin de las plantas
completas. Otra forma (comn para modificacin de Arabidopsis se
denomina"floral dipping": las flores se sumergen en un cultivo de
Agrobacterium, y la bacteria transforma las clulas de la lnea germinal
que producen los gametos femeninos. Agrobacterium no infecta a todas
las especies de plantas, pero se han desarrollado otras tcnicas eficaces
para la modificacin gentica de la plantas tales como la biobalstica




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SINTOMATOLOGA.
La bacteria se caracteriza por formar agallas o tumores, principalmente en
la base de los tallos a nivel de la superficie del suelo. Inicialmente forma
pequeos crecimientos esfricos con la apariencia de callos, los cuales
crecen rpidamente hasta constituirse en grupos de protuberancias
fcilmente distinguibles. En rboles de dos a tres aos, los tumores pueden
llegar a alcanzar dimetros superiores al de hospedador.

Estas agallas son leosas y mantienen la coloracin y la textura del resto de
la corteza. Con el tiempo, la superficie se rompe y toma una coloracin
oscura; en algunas ocasiones las agallas terminan por desintegrarse. Las
plntulas de vivero y rboles muy jvenes atacados pueden presentar
retrasos en el crecimiento y desarrollo normales, susceptibilidad a otras
enfermedades y, en pocos casos, muerte por anillamiento. rboles de ms
de dos aos de edad presentan las agallas generalmente en la base del
fuste, pero en algunos casos se han observado a lo largo de ste en los
puntos de poda o en las ramas. Generalmente los rboles adultos logran
desarrollarse con la presencia de la enfermedad sin efectos aparentes; sin
embargo, otros patgenos de suelo pueden penetrar por las agallas
decadentes y producir otras enfermedades.

CICLO DE LA ENFERMEDAD
A. TUMEFACIENS
Es una bacteria en forma de bacilo, flagelada, habitante del suelo.
Penetra a la planta a travs de heridas frescas producidas durante las
labores de trasplante o mantenimiento o por insectos y nematodos del
sistema radical. Una vez dentro del hospedador, la bacteria lo estimula a
producir una gran cantidad de clulas. Estas clulas continan
dividindose mucho ms rpido de lo normal y aumentan
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considerablemente su tamao. Por tanto, el rea afectada se transforma
en un tumor o agalla.

Estas alteraciones producidas en las clulas pueden continuar dndose,
aunque la bacteria ya no se encuentre presente. Cuando los tejidos
superficiales de las agallas se deterioran y desecan, generalmente caen al
suelo junto con la bacteria, completndose de este modo su ciclo

DISPERSIN
La bacteria se dispersa en el suelo por la remocin de ste, el agua de
riego, la escorrenta y por la maquinaria utilizada para las labores de
manejo (tractores, chapeadoras, etc.). Se ha observado su dispersin en el
mismo rbol o entre rboles de la plantacin por medio de instrumentos
contaminados como cuchillos y podadoras. Las heridas innecesarias
causadas por el cuchillo durante las deshijas y las rodajas, as como el
maltrato de races por pisaduras, son los principales sitios de entrada de
la bacteria en los rboles.









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CONCLUSION

El modelo de transformacin vegetal por medio de A. tumefaciens junto
con sus modificaciones genticas que utilizan el plasmido Ti, permite
delimitar los genes produciendo una prdida de poder patgeno en las
plantas modificadas.

Se obtuvo una importante recoleccin bibliogrfica donde se enmarcan
las diferentes investigaciones que se han realizado a travs de los aos con
A. tumefaciens poniendo en evidencia su importancia en aspectos
biolgicos en la biotecnologa; los documentos indagados apuntan a
reconocer y comprender las implicaciones biotecnolgicas que A.
tumefaciens le aporta a diferentes campos en ciencia agrcola.
En la actualidad existen varios mtodos utilizados con diferentes cepas de
A tumefaciens, con los cuales se pueden obtener buenos resultados de lo
que realmente se busca. El estudio de A. tumefaciens ha sobrepasado
barreras inimaginables que tal vez el hombre y la agricultura jams imagino
con el uso de la biotecnologa.
Se han realizado experimentos de infeccin de diversos huspedes
vegetales y, de los tumores producidos, se han aislado colonias de las que
se ha estudiado el fenotipo patgeno, para comprobar la frecuencia de
aparicin de este fenmeno estudiando cambios a nivel molecular y las
modificaciones que han sufrido. Tambin se han llevado a cabo
experimentos in vitro, mediante siembras sucesivas en un medio general,
para ver si la prdida del fenotipo patgeno se produce de forma
espontnea. El gnero Agrobacterium contiene un plsmido caracterstico
llamado Ti donde la mayora de los genes que contiene juegan papeles
directos o indirectos en la tumorognesis en las plantas.
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ANEXOS




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BIBLIOGRAFIA

http://es.wikipedia.org/wiki/Agrobacterium_tumef
aciens

















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INDICE

CARATULA
INTRODUCCIN
JUSTIFICACION
OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL
OBJETIVOS ESPECIFICOS
AGROBACTERIUM TUMEFACIENS
MANERA DE INFECCIN
BIOTECNOLOGA
AGROBACTERIUM EN BIOTECNOLOGA
SINTOMATOLOGA.
CICLO DE LA ENFERMEDAD.
A. TUMEFACIENS
DISPERSIN.
CONCLUSION
ANEXOS
BIBLIOGRAFIA

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