Metodos Analiticos I

1
Guia de Mtodos Analticos

Sumrio
Pgina
Introduo ........................................................................................................................... ...........................3
Normas de amostragem.......................................................................................................................5
I - MTODOS FSICO-QUMICOS
Mtodo
01 ndice de Acidez I - Acidez Alcolica......................................................................................................17
02 ndice de Acidez II - leos e Gorduras............................................................................................21
03 ndice de Acidez III - Melao de Cana..............................................................................................25
04 ndice de Acidez em Leite...............................................................................................................28
05 Determinao de cidos Graxos Totais ( AGT).....................................................................................31
06 Atividade Uretica........................................................................................................................34
07 Determinao de Clcio EDTA............................................................................................................37
08 Clcio - Oxidimetria...........................................................................................................................41
09 Carotenos e Xantofilas........................................................................................................................45
10 Determinao de Cloretos Solveis...............................................................................................48
11 Cobalto (VIA MIDA) - Complexometria de EDTA....................................................................................................52
12 Determinao de Cobre - Via mida.............................................................................................55
13 Enxofre Total por Oxidao e Turbidimetria..........................................................................................58
14 Determinao de Extrato Etreo - Mtodo SOXHLET......................................................................62
15 Determinao de Extrato Etreo - Hidrlise cida..........................................................................65
16 Determinao de Extrato Etreo - Hidrlise Alcalina.......................................................................68
17 Ferro - Via mida.........................................................................................................................71
18 Ferro - Mtodo Volumtrico...........................................................................................................74
19 Fibra Bruta...................................................................................................................................78
20 Fibra Detergente cido ( F.D.A.).....................................................................................................81
21 Fibra Detergente Neutro ( F.D.N )..........................................................................................................84
22 Flor - Mtodo Potenciomtrico I..................................................................................................87
23 Flor - Mtodo Potenciomtrico II..................................................................................................91
24 Fsforo Solvel em cido Ctrico 2%............................................................................................95
25 Determinao de Fsforo Total - Colorimtrico I..............................................................................98
26 Determinao de Fsforo Total - Colorimtrico II.............................................................................102
27 Glicdios (Acares Redutores em Glicose, no Redutores em Sacarose, Amido e Lactose)..............106
28 Granulometria .............................................................................................................................111
29 Hidrlise cida - Mtodo Direto...................................................................................................113
30 ndice de Dispersibilidade Proteica..............................................................................................116
31 ndice de Iodo............................................................................................................................120
32 Determinao de Iodo - Via mida................................................................................................124
2
33 Lignina......................................................................................................................................127
34 Mangans - Colorimetria.............................................................................................................130
35 Matria Insaponificvel................................................................................................................133
36 Cinzas ou Matria Mineral...........................................................................................................137
37 Matria Pr-Seca.......................................................................................................................139
38 Determinao de Materiais por Espectofotometria de Absoro Atmica (EAA) ou Plasma de Argnio
Indutivamente Acoplado (ICP)...........................................................................................................141
39 Micotoxinas (Aflatoxinas B1, B2, G1 e G2, Ocratoxina, Zearalenona e Esterigmatocistina).......145
40 Espectofotometria de Reflectncia no Infra Vermelho Prximo (NIR).............................................152
41 Nitrognio no Proteico..............................................................................................................155
42 Nitrognio Insolvel em Detergente cido (NIDA)............................................................................157
43 Nitrognio Insolvel em Detergente Neutro (NIDIN)........................................................................160
44 ndice de Perxido - Mtodo a Frio.............................................................................................163
45 ndice de Perxido - Mtodo a Quente...............................................................................................167
46 Digestibilidade Protica em Pepsina no Sobrenadante.................................................................171
47 Protena - Mtodo Dumas.................................................................................................................176
48 Protena Bruta - Mtodo KJELDAHL.................................................................................................179
49 Resduo Insolvel em HCI...........................................................................................................187
50 Determinao de Selnio por Via mida - Volumetria Iodomtrica......................................................190
51 Solubilidade Protica em KOH....................................................................................................194
52 Tanino.......................................................................................................................................197
53 Teste de Rancidez - Reao de Kreiss.........................................................................................200
54 Umidade - Mtodo Direto..............................................................................................................203
55 Umidade e Volteis em Gros.........................................................................................................205
56 Umidade e Volteis.......................................................................................................................208
57 Uria.........................................................................................................................................210
58 Determinao de Zinco - Via mida............................................................................................214
II - MTODOS MICROBIOLGICOS
Mtodo
01 Contagem de Bacillus cereus.....................................................................................................221
02 Bolores e Leveduras.................................................................................................................226
03 Contagem de Clostridium Sulfito Redutores e Clostridium perfringens..............................................229
04 Coliformes Totais e Termotolerantes em Alimentos..............................................................................234
05 Contagem de Enterobactrias..........................................................................................................238
06 Pesquisa de Salmonella............................................................................................................241
07 Contagem E. coli - Mtodo I.......................................................................................................248
08 Contagem E. coli - Mtodo II..........................................................................................................252
Instrues Normativas
IN 62 - Anexo II - Diluies e Solues...............................................................................................257
IN 62 - Anexo IV - Procedimento para Contagem de Colnias.............................................................266
IN 62 - Anexo V - Preparo, Pesagem e Descarte de Amostras...........................................................274
IN 62 - Anexo VII - Procedimentos de Colorao...............................................................................279
IN 62 - Anexo IX - Meios de Cultura..................................................................................................286
3
III - MICROSCOPIA
01 - Deteco de Subprodutos de Origem Animal em Misturas de Ingredientes para Alimentao de
Ruminantes.........................................................................................................................333
IV - VITAMINAS
Vitaminas ............................................................................................................................................339
Frmulas Estruturais............................................................................................................................340
Fatores de Converso de Vitaminas...................................................................................................343
Abreviaes....................................................................................................................................346
HPLC Column Selection by USP Listing..............................................................................................349
Estabilidade das Vitaminas.................................................................................................................351
Exemplos de Cromatogramas................................................................................................................352
Mtodo
01 Vitamina E Acetato.......................................................................................................................357
V - DESVIOS ANALTICOS.............................................................................................................361
VI - SISTEMA DE GESTO DA QUALIDADE E A COMPETNCIA DO LABORATRIO.......................367
5
Introduo
H
mais de duas dcadas, objetivando a melhor qualidade e a uniformizao das matrias-primas
empregadas na fabricao de alimentos para animais, a Comisso de Mtodos Analticos formada
por tcnicos que atuam nos laboratrios das indstrias de alimentao animal e de servios
especializados, tcnicos dos laboratrios do Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento dos
Laboratrios de Referncia Animal e da CATI e ADAESP, vem trabalhando continuamente na discusso e
validao de mtodos analticos e controles interlaboratoriais e questes tcnicas sobre qualidade e
segurana de alimentos, incluso, modificao e eliminao de metodologias de anlise.
A publicao deste Guia de Mtodos Analticos um dos mritos de todo esse investimento de tempo e
mo-de-obra em torno da qualidade das matrias-primas para alimentao animal. Seguramente, esse
material refletir nos padres dos ingredientes e dos produtos acabados, alm de constituir valioso subsdio
para os profissionais que atuam nos institutos de pesquisas e universidades.
O anexo de Desvios Analticos, a partir dos controles interlaboratoriais cujos resultados possibilitaram a
escolha das metodologias mais adequadas s condies brasileiras tambm podero constituir a base
para estabelecimento dos desvios analticos e sero continuamente revisados e atualizados.
Contamos nesta edio com uma nova formatao, com base em referncias tcnicas e conceitos sobre
Boas Prticas de Laboratrio, indispensveis para a garantia da SEGURANA DE ALIMENTOS.
7
Consideraes gerais
Fatores importantes que determinam o esquema e implementao de um programa
de amostragem envolvem o tamanho da embalagem final, a variedade de ingredientes,
acurcia do laboratrio, o custo da anlise e o valor do produto. Entretanto, quando se define
o procedimento de amostragem, deve ser considerado o seu propsito, as anlises de
laboratrio a que a amostra ser submetida e as caractersticas dos ingredientes e produtos
finais.
Procedimentos de amostragem dependem da natureza dos lotes de matria-prima, produto em
processo ou acabado, transporte e equipamento de amostragem. O conhecimento prvio dos dados do
produto e recursos de amostragem permite estabelecer procedimentos adequados.
O uso de mtodos de amostragem reconhecidos internacionalmente garante uma abordagem
tcnica e administrativa padronizada e facilita a interpretao dos resultados de anlises relativos aos lotes
ou embarques de produtos destinados alimentao animal.
ORIENTAES PARA AMOSTRAGEM
Definio de objetivos, propsitos e condies de amostragem
Os objetivos e propsitos de amostragem a serem alcanados devem estar claros quando do
desenvolvimento do procedimento de amostragem. Exemplos de objetivos que devem ser levados em
considerao so:
Aceitao de cargas embarcadas ou desembarcadas;
Teste para liberao de lote;
Controle de matrias-primas;
Controle de produtos em processo;
Controle de produtos acabados;
Liberao de produtos no conformes;
Obteno de amostras de reteno;
Disputas legais;
Ensaios inter-laboratoriais;
Validao de mtodos analticos;
Validao de medidas de controle.
A amostragem deve ser feita em rea definida para evitar dificuldades na execuo dos
procedimentos, reduzir riscos de contaminao e contaminao cruzada, permitir a correta execuo das
anlises laboratoriais e incluir todas as precaues de segurana e de sade necessrias para a amostrador
e o ambiente.
Normas de Amostragem
8
O pessoal responsvel pela amostragem deve ser treinado nos procedimentos aplicveis e ter o
conhecimento necessrio do produto a ser amostrado, das ferramentas usadas na amostragem, de
adequao e limpeza do ambiente e do recipiente de conteno da amostra para no permitir a sua
contaminao ou deteriorao.
Procedimento de amostragem e equipamentos
Para a execuo do procedimento de amostragem, ferramentas e materiais apropriados devem
estar disponveis para permitir:
A abertura de bags, embalagens, barris, tambores, containers, caminhes, etc.;
O fechamento de embalagens;
A rotulagem indicativa de que uma amostra foi removida;
A estocagem, reteno e preservao da amostra;
A rotulagem do recipiente de estocagem e reteno;
As precaues de amostragem requeridas para os mtodos de anlise qumicos e
microbiolgicos.
Todas as ferramentas e materiais auxiliares devem ser inertes e estar em condies de limpeza
antes e depois do uso. Da mesma maneira, a limpeza da embalagem a ser amostrada deve ser considerada
antes da amostragem.
A indstria de alimentao animal usa uma combinao de ferramentas para a coleta de amostras.
Caminhes e vages graneleiros ou de farelo de soja so frequentemente amostrados usando uma
sonda de mo (calador). Cargas a granel podem ser estratificadas e mltiplas amostras coletadas se
houver diferentes pores de gros a serem amostradas.
Sondas perfuradas podem ser usadas para coletar uma amostra representativa de gros, farelo
de soja ou rao final. A sonda deve ser longa o suficiente para penetrar ao menos da profundidade do
material. Amostras oficiais de gros so coletadas usando uma sonda de 4,13 cm de dimetro que consiste
em dois tubos, um dentro do outro. O tubo interno dividido em compartimentos e permite a coleta
individual da amostra para deteco de inconsistncia na qualidade dos gros ao longo da carga. Este
procedimento mais trabalhoso, pois o contedo da sonda deve ser esvaziado e inspecionado antes do
gro ser transferido para um recipiente. Sondas manuais abertas, nas quais o tubo interno no dividido
em compartimentos, so usadas para amostragem de matrias-primas incluindo gros. O contedo da
sonda esvaziado e ocorre mistura, tornando difcil proceder a uma inspeo visual para checar
inconsistncias da carga em sua extenso. Uma sonda manual em espiral foi projetada de forma que as
aberturas no tubo interno girem e abram primeiro na parte inferior e ento em passos graduais at o topo.
Isto assegura que uma poro adequada de amostra seja coletada em todo o perfil do material. Entretanto,
o uso incorreto desta sonda pode resultar num efeito oposto se o tubo interno girar na direo oposta,
acarretando numa quantidade desproporcional de amostra coletada a partir do topo. A sonda deve ser
inserida no gro ou rao num ngulo de 10 da vertical, com a face das aberturas voltada para cima e
completamente fechada. Um ngulo de 10 usado para obter uma seo transversal do material, inserindo
a extremidade da sonda o mais perto possvel do fundo da carga. As fendas devem ser mantidas fechadas
at que a sonda seja inserida o mais fundo possvel. Se as fendas da sonda forem abertas enquanto ela
penetra nos gros, uma quantidade desproporcional de material do topo encher a sonda. Aps a sonda
ser totalmente inserida, as fendas devem ser abertas e a sonda movida para cima e para baixo rapidamente
em dois movimentos. As fendas so, ento, fechadas completamente, a sonda removida pelo tubo
externo e retirada da carga amostrada.
9
O amostrador de gros tipo Pelicano usado para amostragem do gro em linha. A sonda uma
bolsa de couro de aproximadamente 0,46 m de comprimento, com uma haste de ferro inserida ao longo
da borda para manter a bolsa aberta. A bolsa presa a uma longa vara. A soda Pelicano foi desenhada
para colher amostras enquanto a bolsa colocada e puxada ao longo de uma cascata de gros. O
amostrador Pelicano til na amostragem de gros, farelo de soja ou produto acabado que est sendo
descarregado de caminhes.
Sacarias de premixes e produtos com medicamentos devem ser amostrados com uma sonda
para bags.Sondas afuniladas so usadas para amostrar bags fechados de ps e granulados.
Sondas duplas para sacarias so construdas de ao inoxidvel ou lato cromado. Estas sondas esto
disponveis em vrios comprimentos e dimetros, em modelos com extremidade aberta ou fechada e
podem ser usados para amostrar sacos abertos ou fechados de ingredientes ps e granulados.
Sondas de tubo nico e extremidade aberta so construdas de ao inoxidvel e usadas para amostrar
sacos abertos de materiais secos e em p, quando necessrio remover uma amostra do meio do
material.
Gorduras, melao e outros ingredientes lquidos armazenados em tambores ou barris podem ser
amostrados com um tubo de vidro ou ao inoxidvel. Recipientes de lquidos podem requerer uma bomba
de amostragem. Em todos os casos, o lquido deve ser agitado antes da retirada da amostra para garantir
a homogeneizao do material.
Amostras de forragem devem conter quantidade substancial do material. O procedimento de amostragem
e a preparao da amostra vo variar conforme o material seja forragem seca, silagem, pastagem, forragem
verde picada ou forragem no campo. A amostra deve ser coletada em vinte diferentes pontos usando um
amostrador de profundidade. Se a ferramenta no estiver disponvel, pode ser usada amostragem manual.
Tomar cuidado para evitar perda de folhas quando utilizar este ltimo procedimento.
A coleta de amostras de silagem deve ser feita pela remoo de uma coluna de 0,15m de
profundidade por 0,30 m de largura na face aberta. A silagem deve ser misturada, colocada em um saco
plstico, fechada e acondicionada hermeticamente para remover o ar.
A amostragem de pastagem est sujeita a variaes da fertilidade do solo e teor de umidade,
portanto deve ser feita com cuidado. De oito a dez pontos devem ser selecionados para amostragem,
removendo aproximadamente 0,1 m
2
na altura da forragem de cada local. A composio de sub-amostras
deve ser misturada e o material reduzido a 1 kg como a amostra de trabalho. Amostras de pastagem verde
devem ser imediatamente secas para evitar alteraes qumicas.
Amostras de gua devem ser coletadas diretamente em um recipiente limpo, de lagoas, lagos,
tanques ou outras fontes. O recipiente deve ser imerso, segurando-o de boca para baixo a 0,30 m da
superfcie. Ento, virado de boca para cima para ser preenchido com a amostra. A gua de tubulaes
extensas deve ser amostrada aps escoamento de dois a quatro minutos, para garantir que no ficou
parada na tubulao. Quando for executada anlise microbiolgica, deve ser utilizado recipiente estril na
amostragem da gua.
O produto acabado pode ser amostrado enquanto transferido para o veculo de transporte, se
estiver na forma granel.
10
Qualquer sinal de material no uniforme, que inclui diferenas em formato, tamanho ou cor das
partculas em material cristalino, granular ou p, crosta de umidade em substncias higroscpicas, depsito
de material slido ou estratificado em produtos lquidos, deve ser detectado durante o procedimento de
amostragem. Pores de material de rea no homognea devem ser amostradas separadamente e no
devem ser misturadas para que no mascarem problemas de qualidade.
Reduo de amostras
Redues de amostras podem ser feitas atravs do quarteamento da amostra para uma quantidade
conveniente para a anlise. A amostra composta deve ser espalhada em um plstico ou papel limpo,
formando uma camada uniforme. O papel marcado em quadrantes e dois quadrantes opostos so
misturados. Esta etapa deve ser repetida por trs vezes. O material , ento, novamente dividido em
quatro partes e uma diagonal eliminada. O processo completo deve ser repetido at que dois quadrantes
selecionados resultem no tamanho desejado de amostra. O resultado final deste processo deve gerar
uma amostra de trabalho de 0,5 a 1 Kg.
A quantidade de material deve ser suficiente para a realizao de toda a rotina analtica, bem
como armazenamento de amostra de reteno, destinada reviso e percia. Para esta ltima, adotar, no
mnimo, amostras de 1 kg. Para produtos cuja homogeneidade possa comprometer o resultado analtico
(raes e concentrados que contenham uria, farelo de algodo, etc.), a amostra deve conter no mnimo
2 kg ou, em casos especiais (anlises microbiolgicas, micotoxinas, etc.), conforme especificao do
laboratrio.
Figura1 Quarteamento manual
11
Quando necessrio, moer a amostra em moinho especfico, passando-a integralmente em peneira
com malha de 1 mm (16 mesh). Homogeneizar e acondicionar em recipiente adequado. Sacos de plstico
duro, sacos com fechamento (tipo zip lock), sacos plsticos ou recipientes plsticos so excelentes
embalagens para amostras ingredientes ou produtos acabados secos. O recipiente deve proteger a
amostra da luz, ar, umidade como requerido pelas condies de estocagem.
Freqncia de amostragem e reteno
Com poucas excees, todos os ingredientes recebidos devem ser amostrados no recebimento
e inspecionados quanto identidade, pureza e comparado com uma amostra de referncia e especificaes
padro. O procedimento de amostragem deve incluir inspeo da documentao do transportador para
garantir que o material correto e a documentao, que pode incluir um certificado de anlise, foram
entregues.
Quando do recebimento de ingredientes a granel, os documentos de transporte devem ser
analisados para identificao da origem da carga. Um relatrio de recebimento de matrias-primas ir
complementar o programa de amostragem. Este relatrio deve incluir a data, identificao da matria-
prima, fornecedor, transportador, declarao de mercadorias embarcadas, ordem de compra, nmero da
nota fiscal, tempo de recebimento, peso, estoque onde o material foi colocado, nmero do certificado de
anlises do fornecedor, propriedades fsicas e sensoriais verificadas no recebimento dos materiais e
assinatura da pessoa responsvel pelo recebimento.
Amostras devem ser retidas at que todo o produto tenha sido consumido pelo animal ou at que
a responsabilidade sobre o produto exista. Amostragem e avaliao de produtos medicamentosos devem
estar conformes com os requisitos regulatrios.
Planos de amostragem para matrias-primas e produtos acabados
Mtodos internacionais de amostragem devem ser usados para garantir que procedimentos vlidos
de amostragem so aplicados quando a rao testada quanto conformidade com padres ou objetivos
particulares. O Codex General Guidelines on Sampling CAC/GL 50-2004 (FAO/WHO, 2004) d informaes
para facilitar a implementao destes objetivos.
Tabela 1 Recomendaes para a seleo de planos de amostragem
Os seguintes itens so pontos essenciais que o usurio deve seguir para a seleo de planos apropriados
de amostragem.
1. Existncia (ou no) de documentos nacionais ou internacionais de referncia na amostragem dos
produtos considerados.
2. Natureza do controle
Caractersticas aplicveis de cada item individual do lote.
Caractersticas aplicveis ao lote todo (tratamento estatstico).
3. Natureza da caracterstica de controle
Caracterstica qualitativa (caracterstica medida por aprovado/reprovado ou base similar, por exemplo,
presena de micro-organismos patognicos).
12
Caracterstica quantitativa (caracterstica medida numa escala contnua, por exemplo de composio).
Escolha do nvel de qualidade (NQA)De acordo com os princpios descritos no Manual de Procedimentos
do Codex e com o tipo de risco: no conformidades crticas/no-crticas.
4. Natureza do lote
Granel ou pr-embalados.
Tamanho, homogeneidade e distribuio relacionados ao controle de caractersticas.
5. Composio da amostra
Amostra composta de uma nica unidade.
Amostra composta de mais de uma unidade.
6. Escolha do tipo de plano de amostragem
Planos de amostragem de aceitao para controle estatstico da qualidade.
Para o controle da mdia da caracterstica;
Para o controle do percentual de itens no conformes no lote;
Definio e enumerao de itens no conformes na amostra (planos de atributos);
Comparao do valor mdio dos itens que formam a amostra com relao a uma frmula algbrica
(planos de variveis).
Fonte: The Codex General Guidelines on Sampling CAC/GL 50-2004 (FAO/WHO, 2004).
Numerosos planos de amostragem esto disponveis e nenhum pode garantir que todo item de
um lote esteja conforme com os parmetros estudados. Eles so, todavia, teis para garantir um nvel de
qualidade aceitvel acordado entre as partes para controles especificados.
Um procedimento de amostragem deve estipular as condies com base nas quais um lote deve
ser inspecionado e classificado. Estas condies incluem procedimentos de inspeo (inspeo normal,
aumentada ou reduzida), troca de procedimentos (de inspeo normal para aumentada, de aumentada
para normal e de normal para reduzida), nveis de inspeo (I, II e III, S-1, S-2, S-3, S-4), Nveis de
Qualidade Aceitveis NQAs, nmeros de itens a serem randomicamente selecionados do lote e que
iro compor a amostra, nmeros de aceitao e rejeio.
Vrias normas ISO esto disponveis no caso de situaes de controle no tratadas no The Codex
General Guidelines on Sampling CAC/GL 50-2004 (FAO/WHO, 2004).
ISO 2859-1:1999: Procedimentos de amostragem para inspeo por atributos Parte 1: Esquemas de
amostragem indexados pelo nvel de qualidade aceitvel (NQA) para inspeo lote a lote.
ISO 2859-2:1985: Procedimentos de amostragem para inspeo por atributos Parte 2: Planos de
amostragem indexados pelo limite de qualidade para inspeo em lote isolado.
ISO 2859-3:2005: Procedimentos de amostragem para inspeo por atributos Parte 3: Procedimentos
de amostragem para skip-lot.
ISO 2859-4:2002: Procedimentos de amostragem para inspeo por atributos Parte 4: Procedimentos
para avaliao de nveis de qualidade declarados.
ISO 2859-5:2005: Procedimentos de amostragem para inspeo por atributos Parte 5: Sistema de planos
de amostragem seqenciais indexados pelo nvel de qualidade aceitvel (NQA) para inspeo lote a lote.
13
ISO 2859-10:2006: Procedimentos de amostragem para inspeo por atributos Parte 10: Introduo
srie de normas ISO 2859 para amostragem para inspeo por atributos.
ISO 3951-1:2005: Procedimentos de amostragem para inspeo por variveis Parte 1: Especificao
para planos de amostragem simples indexados pelo nvel de qualidade aceitvel (NQA) para inspeo
lote a lote para caracterstica nica de qualidade e nico NQA.
ISO 3951-2:2006: Procedimentos de amostragem para inspeo por variveis Parte 2: Especificao
geral para planos de amostragem nicos indexados pelo nvel de qualidade aceitvel (NQA) para inspeo
lote a lote de caractersticas de qualidade independentes.
ISO 3951-3:2007: Procedimentos de amostragem para inspeo por variveis Parte 3: Esquemas duplos
de amostragem indexados pelo nvel de qualidade aceitvel (NQA) para inspeo lote a lote.
ISO/WD 3951-4: Procedimentos de amostragem para inspeo por variveis Parte 4: Procedimentos
para avaliao de nveis declarados de qualidade.
ISO 3951-5:2006: Procedimentos de amostragem para inspeo por variveis Parte 5: Planos de
amostragem seqencial indexados pelo nvel de qualidade aceitvel (NQA) para inspeo por variveis
(desvio padro conhecido).
ISO 5555:2001: Gorduras e leos vegetais e animais Amostragem.
ISO 6497:2002: Alimentos para animais Amostragem.
ISO 7002:1986: Produtos agrcolas Layout para mtodo padro de amostragem de um lote.
ISO 8422:2006: Planos de amostragem seqenciais para inspeo por atributos.
ISO 8423:1991: Planos de amostragem seqenciais para inspeo por variveis para percentual de no
conformidades (desvio padro conhecido).
ISO/TR 8550-1:2007: Guia para seleo e uso de sistemas de amostragem de aceitao para inspeo
de discretos itens em lotes Parte 1: Amostragem de aceitao.
de discretos itens em lotes Parte 2: Amostragem por atributos.
de discretos itens em lotes Parte 3: Amostragem por variveis.
ISO 10576-1:2003: Mtodos estatsticos Guias para avaliao de conformidade com os requisitos
especificados Parte 1 Princpios gerais.
ISO 10725:2000: Planos de amostragem por aceitao e procedimentos para a inspeo de materiais a
granel.
ISO 11648-1:2003: Aspectos estatsticos de amostragem de materiais a granel Parte 1: Princpios gerais.
ISO 11648-2:2001: Aspectos estatsticos de amostragem de materiais a granel Parte 1: Amostragem de
materiais particulados.
ISO 14560:2004: Procedimentos de amostragem de aceitao por atributos Nveis de qualidade
especificados em itens no conformes por milho.
BIBLIOGRAFIA
FAMI-QS, EU Guide to Good Practice for Feed Additives and Premixtures Operators, 2007, Version 2.
FAO/WHO, The Codex General Guidelines on Sampling CAC/GL 50-2004, 2004.
FAO/WHO, Guidelines for Food Import Control Systems, 2006.
FAO/WHO, Assessing Quality and Safety of Animal Feeds, 2004.
Garfield, F.M., Quality Assurance Principles for Analytical Laboratories, 1991.
ISO/IEC 17025:2005. General Requirements for the Competence of Testing and Calibration Equipment,
2005.
15
Mtodos Fsico-Qumicos
I
17
Mtodos Analticos
ndice de Acidez I -
Acidez Alcolica
MTODO N 1
Reviso: 2009
4 pginas
1. Introduo
Os cidos graxos livres (AGL) presentes em leos e gorduras (ou produtos que os contenha) so resultantes
da hidrlise de alguns triglicerdios (TAG), na ligao ster entre o glicerol e o cido graxo. A acidez est
associada caracterizao do estado de conservao de gros e da deteriorao de leos e gorduras,
por conseguinte a ocorrncia de cidos graxos livres indica a perda da integridade da molcula, antes
neutra e totalmente apolar (1). A hidrlise dos lipdios pode ocorrer por diversos fatores como: condies
imprprias de armazenamento (temperatura e umidade elevadas), ataque enzimtico de microrganismos
ou de lipases naturais existentes no material.
Como os cidos graxos so cidos fracos, necessrio usar uma base forte como o hidrxido de sdio
para titul-los. Pelo mesmo motivo, o ponto de equivalncia estequiomtrica, quando titulados com uma
base forte, est no lado alcalino (pH=7) (2). Por isso a acidez causada pelos cidos graxos livres
estimada pela titulao com hidrxido de sdio em soluo alcolica, usando fenolftalena como indicador.
2. Recomendaes
Antes da aplicao do mtodo imprescindvel observar as condies de segurana e manuseio dos
produtos qumicos.
3. Escopo
Aplicvel a produtos e subprodutos de origem animal e vegetal, raes e concentrados.
4. Referncias Normativas
No aplicvel.
5. Definies
No aplicvel.
6. Reaes
6.1. Hidrlise de uma molcula de triglicerdio (formao dos AGL):
18
6.2. Reao de neutralizao do biftalato de Sdio com hidrxido de potssio:
6.3. Reao de neutralizao dos cidos graxos livres (AGL) com hidrxido de sdio
7. Reagentes e Materiais
7.1. lcool Etlico Absoluto p.a.
7.2. Biftalato de Potssio p.a.
7.3. Fenolftalena p.a.
7.4. Hidrxido de Sdio p.a.
7.5. lcool Etlico Absoluto neutralizado
O lcool etlico absoluto neutralizado deve ser preparado momentos antes do uso.
Manter o frasco de lcool absoluto bem fechado para evitar a formao de cido carbnico.
7.5.1. Preparo: Adicionar 4 gotas de soluo indicadora de fenolftalena 1% e com agitao constante,
gotejar a soluo de NaOH 0,1 M at colorao levemente rsea;
7.6. Soluo alcolica indicadora de Fenolftalena 1%
7.6.1. Preparo: Dissolver 1,0g de fenolftalena p.a. em 60 mL de lcool etlico p.a. Transferir para balo
volumtrico de 100 mL, completar o volume e homogeneizar.
7.7. Soluo volumtrica padronizada de NaOH 0,1M
7.7.1. Preparo: Pesar aproximadamente 4,1 g de NaOH, em bquer de 250 mL e dissolver em gua
destilada. Transferir quantitativamente para balo volumtrico de 1000 mL, completar o volume e
homogeneizar.
7.7.2. Padronizao: Pesar aproximadamente 0,400 g de biftalato de potssio p.a., previamente seco em
estufa a 105C por 3 horas. Transferir para um erlenmeyer de 250 mL , dissolver com 75 mL de gua
destilada quente, esfriar e adicionar 4 gotas de soluo indicadora de fenolftaleina a 1% e titular com a
soluo de hidrxido de sdio 0,1 M.
Clculo da molaridade real:
19
Onde:
MR Molaridade real
P Peso do Biftalato de Potssio, em mg
Mol Unidade molar do Biftalato de Potssio (204,2 g/mol)
V Volume de NaOH gasto na titulao, em mL
7.8. Carvo ativado
7.9. Papel de filtro qualitativo
7.10. Balo volumtrico de 100 e 1000 mL
7.11. Bquer de 250 ou 300 mL
7.12. Bureta de 25 mL (diviso 0,1 mL)
7.13. Erlenmeyer de 250 ou 300 mL
7.14. Funil analtico
8. Equipamentos
8.1. Balana analtica (resoluo de 0,0001 g)
9. Amostragem
Para a retirada de amostras na Produo, vide captulo Amostragem.
A amostra no deve ser previamente moda, usar matria original.
10. Procedimento
10.1. Pesar 5 g de amostra em erlenmeyer ou bquer de 250 mL;
10.2. Adicionar 150 mL de lcool etlico absoluto neutralizado e deixar em repouso por 30 minutos, agitando
ocasionalmente (5 em 5 minutos);
10.3. Filtrar o sobrenadante sobre papel de filtro para erlenmeyer de 300 mL. Caso o sobrenadante se
apresente turvo ou colorido, adicionar carvo ativado no papel de filtro antes da filtragem;
10.4. Adicionar ao resduo mais 100 mL de lcool etlico absoluto neutralizado e deixar em repouso por 15
minutos, agitando ocasionalmente;
10.5. Filtrar sobre o mesmo papel de filtro, juntando ao filtrado obtido no item 3;
10.6. Adicionar 4 a 5 gotas de soluo indicadora de fenolftalena e titular com soluo de NaOH 0,1 M at
colorao rsea persistente por 30 segundos;
10.7. Conduzir prova em branco para testar os reagentes empregados.
11. Clculo
Onde:
VA Volume de NaOH 0,1 M gasto na titulao da amostra, em mL
VB Volume de NaOH 0,1 M gasto na titulao da prova em branco, em mL
20
MR Molaridade real da soluo de NaOH
P Peso da amostra, em grama
40 Unidade molar do NaOH (g/mol)
12. Bibliografia
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz: Mtodos qumicos e fsicos para
anlise de alimentos. 4. ed. So Paulo: PROL, 2005. v. 1. p. 809-810.
(1) MEHLENBACHER, V. C. The analysis of fats and oils. Champaign: Garrard Press, 1960. Stability, c. 4. p.
188-235
(2) BACCAN, N.; ANDRADE, J.C.; GODINHO, O. E. S.; BARONE, J. S. Qumica analtica quantitativa
elementar. So Paulo: Edgard Blcher, 2001. Prticas de laboratrio, c. 8. p. 191-270.
21
Mtodos Analticos
ndice de Acidez II -
leos e Gorduras
MTODO N 2
Reviso: 2009
4 pginas
1. Introduo
Os cidos graxos livres (AGL) presentes em leos e gorduras (ou produtos que os contenha) so resultantes
da hidrlise de alguns triglicerdios (TAG), na ligao ster entre o glicerol e o cido graxo. A acidez est
associada caracterizao do estado de conservao de gros e da deteriorao de leos e gorduras,
por conseguinte a ocorrncia de cidos graxos livres indica a perda da integridade da molcula, antes
neutra e totalmente apolar (1). A hidrlise dos lipdios pode ocorrer por diversos fatores como: condies
imprprias de armazenamento (temperatura e umidade elevadas), ataque enzimtico de microrganismos
ou de lipases naturais existentes no material.
Como os cidos graxos so cidos fracos, necessrio usar uma base forte como o hidrxido de sdio
para titul-los. Pelo mesmo motivo, o ponto de equivalncia estequiomtrica, quando titulados com uma
base forte, est no lado alcalino (pH=7) (2). Por isso a acidez causada pelos cidos graxos livres
estimada pela titulao com hidrxido de sdio em soluo alcolica, usando fenolftalena como indicador.
2. Recomendaes
produtos qumicos.
3. Escopo
Aplicvel a leos brutos e refinados, vegetais e animais e gorduras animais.
No aplicvel.
5. Definies
No aplicvel.
6. Reaes
22
6.2. Reao de neutralizao do biftalato de Sdio com hidrxido de potssio:
6.3. Reao de neutralizao dos cidos graxos livres (AGL) com hidrxido de sdio
7.2. ter Etlico p.a.
7.6. Soluo reagente ter-lcool (2+1) neutralizada
A soluo reagente ter-lcool (2+1) neutralizada deve ser preparada momentos antes do uso.
Importante manter o frasco da soluo reagente ter- lcool neutralizada bem fechado para evitar a formao
de cido carbnico.
7.6.1. Preparo: Misturar 2 partes de ter etlico p.a. com 1 parte de lcool etlico absoluto. Adicionar 4
gotas de soluo indicadora de fenolftalena 1% e com agitao constante, gotejar a soluo de NaOH 0,1
M at colorao levemente rsea;
7.7.1. Preparo: Dissolver 1,0g de fenolftalena p.a. em 60 mL de lcool etlico p.a.. Transferir para balo
7.8.1. Preparo: Pesar aproximadamente 4,1 g de NaOH p.a., em bquer de 250 mL e dissolver em gua
homogeneizar.
23
Onde:
MR Molaridade real
Mol Unidade molar do Biftalato de Potssio (204,2 g/mol)
7.10. Basto de vidro
7.11. Bquer de 250 ou 300 mL
7.14. Proveta de 100 e 250 mL
8. Equipamentos
9. Amostragem
Importante agitar bem o frasco contendo amostra, para obter uma amostra bem homognea e lquida,
antes de realizar a pesagem.
10. Procedimento
10.1. Pesar 5 g de amostra em erlenmeyer ou bquer de 250 mL; Para amostras de colorao escura,
pesar apenas 1 g;
10.2. Adicionar 100 mL da soluo ter-lcool 2+1 neutralizada e agitar at completa dissoluo. Para
amostras de difcil dissoluo, levar ao banho-maria, evitando excesso de aquecimento que pode provocar
elevao do valor de cidos graxos livres;
11. Clculo
24
Onde:
VB Volume de NaOH 0,1 M gasto na titulao da prova em branco, em mL
0,282 1 mL de NaOH 0,1M equivale a 0,282 g de cido olico
12. Bibliografia
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. Mtodos qumicos e fsicos para
anlise de alimentos, V.1. 4. ed. So Paulo: PROL, 2005. p. 591-593
AMERICAN OIL CHEMISTS SOCIETY (AOCS). Official and recommended practices. 5. ed. Champaign,1997.
2v. Ca 5a 40
KRISHNAMURTY, R. G. Cooking oils, salad oils and salad dressings. In: SWERN, D. Baileys industrial oil
and fat products. 4 ed. New York: Wiley-Interscience, 1982. v. 2. p. 320-326
(1) MEHLENBACHER, V. C. The analysis of fats and oils. Champaign: Garrard Press, 1960. Stability, c. 4. p.
188-235
(2) BACCAN, N.; ANDRADE, J.C.; GODINHO, O. E. S.; BARONE, J. S. Qumica analtica quantitativa
elementar. So Paulo: Edgard Blcher, 2001. Prticas de laboratrio, c. 8. p. 191-270
25
Mtodos Analticos
ndice de Acidez III -
Melao de Cana
MTODO N 3
Reviso: 2009
3 pginas
1. Introduo
O melao um subproduto da fabricao do acar de cana que se apresenta na forma lquida viscosa e
no cristalizvel de acares, tais como glicose e frutose. Ele utilizado na pecuria como elemento
energtico e palatabilizante de alto valor na alimentao animal. O melao apresenta-se naturalmente
contaminado com microrganismos, principalmente dos gneros Saccharomyces cerevisiae, Acetobacter
ou Gluconobacter, possveis de transformar os acares em lcool e conseguinte em cido actico, por
isso a importncia do controle de acidez, que se fundamenta na neutralizao com soluo alcalina padro
dos cidos extrados por solvente.
2. Recomendaes
produtos qumicos.
3. Escopo
Aplicvel a melao de cana e seus semelhantes.
No aplicvel.
5. Definies
No aplicvel.
6. Reaes
26
6.2. Reao de neutralizao dos cidos orgnicos com hidrxido de sdio:
7.5. Soluo reagente gua-lcool (1+1) neutralizada
A soluo reagente gua-lcool (1+1) neutralizada deve ser preparada momentos antes do uso.
Manter o frasco de soluo reagente gua-lcool (1+1) neutralizada bem fechado para evitar a formao
de cido carbnico.
7.5.1. Preparo: Misturar 1 parte de gua destilada com 1 parte de lcool etlico absoluto. Adicionar 4 gotas
de soluo indicadora de fenolftalena 1% e com agitao constante, gotejar a soluo de NaOH 0,1 M at
colorao levemente rsea;
7.6.1. Preparo: Dissolver 1,0g de fenolftalena p.a. em 60 mL de lcool etlico p.a. Transferir para balo
homogeneizar.
destilada quente, esfriar e adicionar 4 gotas de soluo indicadora de fenolftalena a 1% e titular com a
Onde:
MR Molaridade real
Mol Unidade molar do Biftalato de Potssio (204,2)
7.9. Basto de vidro
7.10. Bquer de 250 ou 300 mL
27
8. Equipamentos
9. Amostragem
10. Procedimento
10.1. Pesar 2 g de amostra em erlenmeyer ou bquer de 250 mL;
10.2. Adicionar 100 a 150 mL de soluo gua-lcool (1+1) neutralizada e agitar at completa dissoluo;
11. Clculo
Onde:
V B Volume de NaOH 0,1 M gasto na titulao da prova em branco, em mL
P Peso da amostra em grama
0,06 1 mL de soluo de NaOH 0,1M equivale a 0,06 g de cido Actico
12. Bibliografia
PORTARIA n 108, de 04 de setembro de 1991. Mtodos analticos para controle de alimentos para uso
animal. Dirio Oficial da Unio, Seo 1, 17 set 1991. p. 19813
28
Mtodos Analticos
ndice de Acidez
em Leite
MTODO N 4
Reviso: 2009
3 pginas
1. Introduo
Este mtodo consiste na determinao da acidez do leite utilizando-se indicador e soluo alcalina, onde
os resultados so expressos em % de cido ltico.
2. Recomendaes
produtos qumicos.
3. Escopo
Aplicvel em leite em p integral, desnatado e soro de leite.
No aplicvel.
5. Definies
No aplicvel.
6. Reaes
No aplicvel.
7.1.1. Preparo: Dissolver 1,0g de fenolftalena p.a. em 60 mL de lcool etlico p.a.. Transferir para balo
homogeneizar.
29
Onde:
MR Molaridade real
7.3. Erlenmeyer de 250 mL
7.5. Proveta de 50 mL
8. Equipamentos
9. Amostragem
10. Procedimento
10.1. Pesar de 5 g de amostra em erlenmeyer de 250 mL.
10.2. Dissolver em 35 ml de gua destilada, adicionar 10 gotas da soluo de fenolftalena 1%.
10.3. Titular com NaOH 0,1 M at colorao rsea persistente por 30 segundos.
11. Clculo
Onde:
V Volume de NaOH 0,1 M gasto na titulao da amostra, em mL
90 Unidade molar do cido Lctico
30
12. Bibliografia
INSTRUO NORMATIVA n 68, de 12 de dezembro de 2006. Dirio Oficial da Unio n 239, Seo 1, 14/
12/06, p.15
31
Mtodos Analticos
Determinao de cidos
Graxos Totais (AGT)
MTODO N 5
Reviso: 2009
3 pginas
1. Introduo
Os cidos graxos, unidades fundamentais da maioria dos lipdios, so cidos orgnicos, possuindo de
4 tomos a 24 tomos de carbono. Eles podem ser de cadeias curtas (4 a 6 tomos de carbono), de
cadeias mdias (8 a 12 tomos) e de cadeias longas (mais do que 12). Alm do tamanho da cadeia de
carbono, os cidos graxos se diferenciam pelo nmero e pela posio das duplas ligaes. Quase todos
possuem nmero par de tomos de carbono. Os mais abundantes so os com 16 carbonos ou 18 carbonos,
o palmtico e esterico, respectivamente. Os de cadeias curtas so mais abundantes na manteiga e na
gordura de coco.
2. Recomendaes
produtos qumicos.
3. Escopo
Aplicvel a leos e gorduras de origem vegetal e animal.
No aplicvel.
5. Definies
No aplicvel.
6. Reaes
So vrias as reaes que ocorrem no processo e no sero descritas neste mtodo.
7.1. cido clordrico (HCl) p.a.
7.2. lcool etlico (C
2
H
5
OH) absoluto.
7.3. ter de petrleo p.a.
7.4. Hidrxido de potssio (KOH) p.a.
7.5. Soluo reagente de cido clordrico 1+1
32
7.5.1. Preparo: Diluir uma parte de HCl p.a. em uma parte de gua destilada.
7.6. Soluo indicadora de alaranjado de metila 0,1% (p/v)
7.6.1. Preparo: Dissolver 0,1 g de alaranjado de metila p.a. em aproximadamente 60 mL de gua destilada.
Transferir para balo volumtrico de 100 mL, completar o volume e homogeneizar.
7.7. Soluo reagente de hidrxido de potssio 50% (p/v)
7.7.1. Preparo: Dissolver 100 g de KOH p.a em gua destilada, esfriar e completar o volume para 200 mL.
7.8. Alaranjado de metila p.a.
7.9. Balo de Soxhlet 250 mL
7.10. Bquer de 250 mL
7.11. Condensador de refluxo
7.12. Funil de separao de 500 mL
7.13. Funil de vidro haste curta
7.14. Pipeta graduada de 25 mL
7.17. Vidro de relgio
8. Equipamentos
8.2. Estufa de secagem a 100C (preciso 5C)
8.3. Banho termosttico 80
o
C 90
o
C
9. Amostragem
Se usar mais de 1 g de amostra, manter a proporo de no mnimo 1,4g de KOH para cada grama de
amostra.
10. Procedimento
10.1. Pesar 1 g de amostra em bquer de 250 mL.
10.2. Adicionar 50 mL de lcool etlico p.a. e 5 mL de soluo de KOH 50%.
10.3. Tampar com vidro de relgio e aquecer em banho termosttico em ebulio por 30 minutos ou at
completa saponificao (pastoso), agitando freqentemente. A completa saponificao determinante,
devendo-se tomar cuidados para que no ocorra a queima da amostra.
10.4. Adicionar 100 mL de gua destilada e aquecer em banho termosttico at completa dissoluo da
amostra saponificada.
10.5. Adicionar 3 a 5 gotas de soluo indicadora de alaranjado de metila 0,1% e neutralizar com soluo
de HCl 1+1 at permanncia da colorao vermelha.
10.6. Homogeneizar agitando lentamente e acrescentar 1 mL de soluo de HCl 1+1 em excesso.
10.7. Esfriar a temperatura ambiente e transferir para funil de separao, lavando o bquer com pores
de ter de petrleo para retirada de toda a amostra.
10.8. Adicionar 50 mL de ter de petrleo, agitar lentamente o funil de separao aberto para a liberao
dos gases e depois agitar vigorosamente durante 1 minuto. Deixar em repouso at a separao das
fases.
33
10.9. Recolher a camada inferior (vermelha) em bquer para nova extrao e transferir a camada superior
(amarela) para um segundo funil de separao.
10.10. Repetir os itens 7 e 8 por mais quatro vezes ou at que a fase etrea esteja lmpida.
10.11. Filtrar os extratos combinados da fase etrea (superior) sobre papel de filtro qualitativo, para balo
de Soxhlet previamente tarado. Lavar com ter de petrleo o funil de separao e o papel de filtro at a
completa transferncia dos cidos graxos retidos.
10.12. Recuperar o ter de petrleo em conjunto Soxhlet e evaporar o solvente remanescente em banho
termosttico ou rotaevaporador.
10.13. Transferir o balo para estufa 100C por 1 hora.
10.14. Esfriar em dessecador at equilbrio com a temperatura ambiente. Pesar e repetir a operao de
secagem durante 30 minutos, at peso constante.
11. Clculos
Onde:
A Peso do balo de Soxhlet + resduo, em grama.
B Peso do balo de Soxhlet, em grama.
C Peso da amostra, em grama.
12. Bibliografia
AMERICAN OIL CHEMISTS SOCIETY. Official methods and recommended practices of the American Oil
Chemists Society. AOCS, 1997. AOCS Official method, Ca 5b-71.
ASSOCIATION OF OFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS. Official methods of analysis of the Association of
Analytical Chemists Arlington: A.O.A.C., 1995. method 972.28.
34
Mtodos Analticos Atividade Uretica
MTODO N 6
Reviso: 2009
3 pginas
1. Introduo
Determina-se atividade uretica em sementes leguminosas. No farelo de soja a atividade uretica utilizada
para indicar o grau de tostagem do farelo. A alta atividade de urase indica a falta de tostagem.
A analise se baseia na variao de pH em funo da amnia liberada pela ao enzimtica da urase.
2. Recomendaes
produtos qumicos.
3. Escopo
Aplicvel a gro de soja e outros feijes e seus subprodutos.
No aplicvel.
5. Definies
Soluo tampo: solues que possuem a capacidade de resistir a variaes de pH, pela adio a ela de
cidos ou de bases. Elas so constitudas geralmente por sistemas de doadores e receptores de prtons,
dissolvidos no mesmo solvente.
6. Reaes
7.1. Fosfato Monobsico de Potssio p.a. (KH
2
PO
4
)
7.2. Fosfato Di-bsico de Potssio p.a. (K
2
HPO
4
)
7.3. cido Fosfrico p.a. (H
3
PO
4
)
35
7.5. Uria
7.6. Soluo Tampo de Fosfato pH=7 / 0,05 M
7.6.1. Preparo: Pesar exatamente 3,4022g de Fosfato Monobsico de Potssio p.a. (KH
2
PO
4
) e 4,3545g
de Fosfato Dibsico de Potssio (K
2
HPO
4
) e dissolver a 1000 mL em balo volumtrico. Ajustar o pH a 7,0,
com uma soluo concentrada de cido fosfrico ou hidrxido de potssio antes de utiliz-la.
7.7. Soluo Tampo de Uria pH 7,0
7.7.1. Preparo: dissolver 1,5 g de Uria p.a. em 50mL de Soluo Tampo de Fosfato pH 7,0. Ajustar o pH
a 7,0, com uma soluo concentrada de cido fosfrico ou hidrxido de potssio antes de utiliz-la.
Preparar esta soluo momentos antes do uso.
7.8. Pincel de Pelo
7.9. Esptula
7.10. Canoa para pesar
7.11. Tubo de ensaio com tampa de rosca
7.12. Pipeta volumtrica de 10mL e 50ml
7.13. Copo de Bquer 600ml
8. Equipamentos
8.1. Balana analtica (resoluo de 0,0001g)
8.2. Banho termosttico
8.3. Potencimetro
9. Amostragem
Moer a amostra, evitando aquecimento, de modo que pelo menos 60% passe em peneira de 0,420mm
(35 tyler - mesh)
10. Procedimento
Recomenda-se que o eletrodo fique imerso em soluo de pepsina 1% v/v.
O pH das solues, tempo e reaes enzimticas e a temperatura da prova devem ser observadas
rigorosamente, pois so fatores crticos na preciso da anlise.
10.1. Pesar 0,2 g de amostra moda e homognea para uma prova real e para uma prova em branco.
10.2. Transferir a amostra para um tubo de ensaio e adicionar 10 mL de Soluo Tampo de Fosfato de
pH=7. Esta ser a prova em branco.
10.3. Transferir a amostra para o outro tubo de ensaio e adicionar 10mL de Soluo Tampo de Uria
pH=7. Esta ser a prova real.
10.4. Tampar os tubos e coloc-los em banho termostatizado durante 30 minutos, temperatura de 30C.
Os tubos devem ser agitados de 5 em 5 minutos sem invert-los.
10.5. Decorrido este tempo deve-se retirar os tubos do banho termostatizado, esperar mais 5 minutos e
medir o pH no potencimetro.
36
11. Clculos
Atividade Uretica igual variao do pH
12. Bibliografia
Chemists Society. 40. ed. AOCS, 1993. Official method Ba9-58.
AMERICAN ASSOCIATION OF CEREAL CHEMISTS. Aproved Methods of Analysis of AACC. 9. ed. 1999.
Official Method 22-90
NOGUEIRA, A. R. de A. et. al. Manual de Laboratrios: Solo, gua, Nutrio Vegetal, Nutrio Animal e
Alimentos. 1. ed. So Carlos: Embrapa Pecuria Sudeste, 2005. 313 p.
37
Mtodos Analticos
Determinao de Clcio
EDTA
MTODO N 7
Reviso: 2009
4 pginas
1. Introduo
Fundamenta-se no ataque qumico fortemente cido e a quente da amostra, visando extrair todo o seu
contedo de Clcio.
A concentrao se d atravs da complexometria, utilizando o E.D.T.A. (cido etilenodiamino tetra-ctico)
como agente complexante, na presena do indicador Calcon.
2. Recomendaes
produtos qumicos.
3. Escopo
Aplica-se a calcrio e fontes de clcio puro.
Este mtodo mais indicado para a avaliao de produtos com o teor de clcio de ordem de grandeza
de 5% ou acima. No indicado para amostras com altos teores de fsforo ou magnsio menor que 2%.
(AOAC).
No aplicvel
5. Definies
No aplicvel
6. Reaes (representando EDTA por H
2
Y
2-
)
7.2. cido ntrico (HNO
3
) p.a.
38
7.4. Cianeto de potssio (KCN) p.a.
7.5. Sulfato de Ferro III e Amnio (FeNH
4
(SO
4
)
2
.12H
2
O) p.a.
7.6. Trietanolamina ( N(CH
2
CH
2
OH)
3
) p.a.
7.7. Calcon (C
20
H
13
N
2
NaO
5
S) p.a.
7.8. EDTA (cido etilenodiamino tetra-ctico)
7.9. Soluo de KOH 200 g/L (20%)
7.9.1. Preparo: Transferir 100 g de KOH para bquer de 500 mL. Adicionar aproximadamente 300 mL de
gua destilada. Esfriar. Transferir para balo volumtrico de 500 mL. Completar o volume com gua destilada
e homogeneizar.
7.10. Soluo de HCl 0,5M
7.10.1. Preparo: Transferir 42,5 mL de cido clordrico para balo volumtrico de 1000 mL. Completar o
volume com gua destilada e homogeneizar.
7.11. Soluo de Sulfato de Ferro III e Amnio 136 g/L
7.11.1. Preparo: Transferir 136 g de FeNH
4
(SO
4
)
2
.12H
2
O para bquer de 500 mL. Adicionar aproximadamente
300 mL de gua destilada e 5 mL de cido sulfrico p.a.. Aquecer para dissolver o FeNH
4
(SO
4
)
2
.12H
2
O.
Esfriar. Transferir para balo volumtrico de 1000 mL. Filtrar em papel filtro Whatman n 40 ou equivalente.
Armazenar esta soluo em frasco mbar.
7.12. Soluo de KOH (280 g/L) + KCN (66 g/L)
7.12.1. Preparo: Transferir 70 g de KOH e 16,5 g de KCN para bquer de 500 mL. Adicionar aproximadamente
200 mL de gua destilada. Esfriar. Transferir para balo volumtrico de 250 mL. Completar o volume com
gua destilada e homogeneizar.
7.13. Soluo de Trietanolamina 1:1 v/v (N(CH
2
CH
2
OH)
3
)
7.13.1. Preparo: Transferir 100 mL de trietanolamina para bquer de 300 mL. Adicionar 100 mL de gua
destilada. Homogeneizar com o auxlio de uma baqueta.
7.14. Soluo de Calcon 5 g/L
7.14.1. Preparo: Transferir 0,1g de Calcon para bquer de 300 mL. Adicionar 10 mL de trietanolamina.
Utilizar uma baqueta para ajudar a dissolver. Adicionar 10 mL de alcool etlico.
7.15. Soluo de CaCO
3
0,01 M
7.15.1. Preparo: Transferir 0,5005 g para bquer de 300 mL. Adicionar aproximadamente 150 mL de gua
destilada e 10 mL de HCl p.a. Aquecer sem deixar entrar em ebulio at solubilizar todo o sal. Esfriar.
Transferir para balo volumtrico de 500 mL. Completar o volume com gua destilada e homogeneizar.
7.16. Soluo volumtrica padronizada de EDTA 0,01 M
7.16.1. Preparo: Transferir 3,7224 g de EDTA para bquer de 1000 mL. Adicionar aproximadamente 500 mL
de gua destilada. Agitar para dissolver com o auxilio de um agitador magntico. Transferir para balo
volumtrico de 1000 mL. Completar o volume com gua destilada e homogeneizar.
7.16.2. Padronizao: Transferir 10 mL de soluo de CaCO
3
0,01 M para bquer de 250 mL. Adicionar 100
mL de gua destilada, 10 mL de KOH+KCN, 10 gotas de trietanolamina e 12 gotas de calcon. Titular com
EDTA 0,01 M at mudana de cor, vinho para azul puro.
Clculo
39
Onde
F
Fator de correo da soluo de EDTA 0,01 M

M
Molaridade da soluo de EDTA 0,01 M

V
Volume gasto de EDTA 0,01 M na titulao da soluo de CaCO

3
0,01 M, em mL.
F
Fator de correo da soluo de CaCO

3
0,01 M
M
Molaridade da soluo de CaCO

3
0,01 M
V
Volume gasto de CaCO

3
0,01 M na titulao, em mL.
7.17. Bales volumtricos
7.19. Bquer
7.20. Cadinho de porcelana ou quartzo
7.23. Pipetas graduadas ou pipetador automtico
7.24. Pipetas volumtricas para vrios volumes
7.25. Provetas
8. Equipamentos
8.2. Forno mufla
8.3. Placa aquecedora
8.4. pHmetro
9. Amostragem
10. Procedimento
O fsforo atua como mascarador do indicador, impedindo a reao deste com o on do elemento a ser
determinado. Portanto, adiciona-se sulfato de ferro amoniacal, que reage com o fsforo, formando
Fe(OH)
3
.PO
4
. Com esta reao, o fsforo precipitado e extrado por filtrao.
Os ons Al
+3
, Mn
+2
e Fe
+3
reagem com E.D.T.A., por este motivo devem ser complexados com trietanolamina.
10.1. Para ingredientes e misturas minerais
10.1.1. De acordo com a concentrao estimada do Clcio na amostra, pesar de 2,0 a 3,0 g com aproximao
de 0,1 mg.
10.1.2. Transferir para bquer de 300 mL.
10.1.3. Adicionar 30 mL de cido ntrico p.a., 10 mL de HCl p.a. e 10 mL de gua destilada e/ou deionizada.
10.1.4. Fazer digesto por 30 minutos em placa aquecedora.
10.1.5. Esfriar.
10.1.6. Transferir para balo volumtrico de capacidade para 250 mL ou mais adequado. Completar o
volume e homogeneizar.
40
10.1.7. Filtrar em papel de filtro qualitativo.
10.1.8. Transferir alquota de volume adequado para bquer de 300 mL.
10.1.9. Ajustar o pH em 4,0 0,1 usando hidrxido de Potssio 20% ou cido clordrico 0,5 M.
10.1.10. Adicionar sulfato de ferro III e amnio de acordo com o teor de fsforo na amostra (5 mL para
materiais com teor menor que 3% de fsforo, 10 mL para teores de 3 a 7% de fsforo, 15 mL para teores
de 7 a 13% e quantidades proporcionais para amostras com mais de 13% de fsforo).
10.1.11. Ajustar o pH em 5,0 0,1 usando hidrxido de Potssio 20% ou cido clordrico 0,5 M.
10.1.12. Transferir para balo volumtrico de capacidade adequada. Completar o volume e homogeneizar.
10.1.13. Filtrar em papel de filtro qualitativo.
10.1.14. Transferir uma alquota de volume adequado para bquer de 300 mL, acrescentar gua destilada
e/ou deionizada at o volume de 100 mL.
10.1.15. Adicionar 10 mL de hidrxido de potssio + cianeto de potssio, 10 gotas de soluo de
trietanolamina e 12 gotas soluo de calcon.
10.1.16. Titular com EDTA 0,01M at viragem de vinho para azul puro.
10.2. Para produtos e subprodutos de origem animal e vegetal, raes e concentrados:
10.2.1. Proceder conforme o item 10.1, porm, realizar a pesagem da amostra em cadinho de porcelana
ou quartzo e calcinar por quatro horas a 550C.
11. Clculos
Onde
V Volume da soluo de EDTA 0,01M gasto na titulao da amostra, em mL
M Molaridade real do EDTA 0,01 M
mol mol do Ca (40)
V
Volume do primeiro balo de diluio, em mL

V
Volume do segundo balo de diluio, em mL

p Peso da amostra, em grama
A
Volume da pipeta utilizada na primeira alquota, em mL

A
Volume da pipeta utilizada na segunda alquota, em mL

12. Bibliografia
ASSOCIATIONS OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS, Official Methods of Analyses. 14. ed. Airlington:
A.O.A.C., 1984.
INSTRUO NORMATIVA SDA n. 28, de 27 de julho de 2007. Manual de Mtodos Analticos Oficiais para
Fertilizantes Minerais, Orgnicos, Organominerais e Corretivos. p. 40-43.
41
Mtodos Analticos Clcio - Oxidimetria
MTODO N 8
Reviso: 2009
4 pginas
1. Introduo
O clcio precipitado sob a forma de oxalato a pH 4,0 para impedir interferncias dos ons fosfatos e o
precipitado lavado e dissolvido em cido sulfrico diludo. O cido oxlico gerado , ento, titulado
com a soluo padro de permanganato de potssio.
2. Recomendaes
Vide precaues de segurana dos reagentes: cido clordrico, cido sulfrico e hidrxido de amnio.
Realizar o preparo das solues em capela de exausto.
3. Escopo
Mtodo aplicvel a produtos ou subprodutos de origem animal, vegetal, mineral, raes e concentrados.
No aplicvel.
5. Definies
No aplicvel.
6. Reaes
7.2. cido sulfrico (H
2
SO
4
) p.a.
42
7.3. Hidrxido de amnio (NH
4
OH) p.a.
7.4. Oxalato de amnio ((NH
4
)
2
C
2
O
4
.H
2
O) p.a.
7.5. Oxalato de sdio (Na
2
C
2
O
4
) p.a.
7.6. Permanganato de potssio (KMnO
4
) p.a.
7.7.1. Preparo: Diluir uma parte de HCl p.a. em uma parte de gua destilada.
7.8.1. Preparo: Diluir uma parte de HCl p.a. em trs partes de gua destilada.
7.9. Soluo reagente de cido sulfrico 1+1
7.9.1. Preparo: Diluir uma parte de H
2
SO
4
p.a. em uma parte de gua destilada.
7.10. Soluo reagente de hidrxido de amnio 1+1
7.10.1. Preparo: Diluir uma parte de NH
4
OH p.a. em uma parte de gua destilada.
7.11. Soluo reagente de oxalato de amnio saturada
7.11.1. Preparo: Pesar 70g de oxalato de amnio p.a. e transferir para bquer de 2000ml, completar o
volume com gua destilada para 1000ml, aquecer at a completa dissoluo, esfriar temperatura ambiente.
7.12. Soluo reagente de hidrxido de amnio 1+50
4
OH p.a. em 50 partes de gua destilada.
7.13. Soluo volumtrica padronizada de permanganato de potssio 0,01 M.
7.13.1. Preparo: Dissolver 1,6g de KMnO
4
p.a. em bquer contendo aproximadamente 300/400ml de gua
destilada e aquecer a 60/70
0
C por duas horas. Esfriar, transferir quantitativamente para balo volumtrico
de 1000ml, completar o volume e homogeneizar. Deixar em repouso por no mnimo 12 horas ao abrigo
da luz. Filtrar sobre o cadinho de vidro sinterizado, amianto ou l de vidro e estocar em frasco mbar.
7.13.2. Padronizao: Pesar exatamente 3,35g de oxalato de sdio (Na
2
C
2
O
4
) p.a. previamente seco em
estufa a 105C por 2 horas. Dissolver em bquer com aproximadamente 100ml de gua destilada, transferir
para balo volumtrico de 1000ml, homogeneizar e completar o volume. Pipetar 20ml de soluo de
oxalato de sdio, transferir para erlenmeyer de 250ml, adicionar 10ml de cido sulfrico 1+1, aquecer a
70-80C e titular nessa temperatura gotejando a soluo de permanganato de potssio 0,01M, numa
velocidade de 2 a 3 gotas por segundo at colorao levemente rsea persistente por 30 segundos.
Onde:
V Volume de KMnO
4
, em mL
P Peso do oxalato de sdio na alquota, em mg
M Mol do oxalato de sdio (grama/mol)
MR Molaridade real (mol/L)
7.14. Soluo alcolica indicadora de vermelho de metila 0,1%
7.14.1. Preparo: Dissolver 0,1g de vermelho de metila p.a., em aproximadamente 40ml de gua destilada.
Transferir para balo volumtrico de 100ml, completar o volume com etanol e homogeneizar.
7.15. Vermelho de metila p.a.
43
7.19. Bquer de 250ml ou 300ml
7.20. Bureta mbar de 50ml (div. 0,05ml)
7.22. Cadinho de vidro borossilicato com placa porosa (10 a 16 micra) ou cadinho de Gooch (capacidade
40ml-50ml) com fibras de silicato de alumnio ou fibras de xido de alumnio
7.24. Pipetas graduadas (ou pipetador automtico)
7.25. Pipetas volumtricas
7.26. Proveta de 50ml
8. Equipamentos
8.2. Forno Mufla
8.3. Placa Aquecedora
8.4. Estufa
9. Amostragem
No calcinar amostras inorgnicas, alteraes na estrutura molecular elevam o resultado esperado.
10. Procedimento
A presena de sulfatos eleva o resultado em uma nica precipitao.
Metais que formem oxalatos pouco solveis (Cu, Pb e Zn) devem estar ausentes.
Na presena de grandes quantidades de sdio e magnsio aconselhvel fazer-se uma segunda
precipitao.
A ps-precipitao do oxalato de magnsio pode introduzir erros apreciveis, quanto mais tempo ficar o
precipitado em contato com a soluo.
A soluo de permanganato de potssio deve ser armazenada ao abrigo da luz.
As solues de oxalato atacam o vidro.
O mangans reduzido pelo oxalato em meio cido, de +7 para +2, tornando a soluo de permanganato
incolor. A primeira gota que no for reduzida dar a mesma uma tonalidade rosa.
10.1. Pesar de 1 a 3g da amostra em cadinho. Levar mufla e gradualmente aumentar a temperatura (550-
600C) at obteno de cinzas claras (3 horas no mnimo). Retirar a 250-300C e esfriar em dessecador.
Opcionalmente poder ser efetuada pr-queima em placa aquecedora ou bico de Bunsen, transferindo
em seguida para o forno mufla (500-600C).
10.2. Com o auxlio de basto de vidro, transferir as cinzas obtidas para bquer de 250 ou 300ml. Lavar o
cadinho com pequenas pores de soluo de HCl 1+1 totalizando 40ml, em seguida lavar com gua
destilada, cobrir com vidro de relgio e levar placa aquecedora at que haja reduo de 1/3 do volume.
Esfriar.
10.3. Transferir para balo volumtrico adequado. Completar o volume com gua destilada e homogeneizar.
Esse material constituir a Soluo Estoque, ser utilizado para a determinao de clcio por oxidimetria
e de fsforo por colorimetria.
44
10.4. Filtrar e pipetar volumetricamente uma alquota adequada, para bquer de 250 ou 300ml. Adicionar 2
a 3 gotas de vermelho de metila 0,1% e diluir com gua destilada at aproximadamente 50ml.
10.5. Aquecer brandamente em placa aquecedora at prximo fervura. Acrescentar sob agitao constante
25ml de soluo saturada de oxalato de amnio quente. Adicionar NH
4
OH 1+1, gota a gota sob agitao
constante, at que a colorao mude de vermelho para rosa. Se houver mudana da colorao para
amarelo, gotejar HCl 1+3 at retorno para rosa. Deixar em repouso no mnimo 1 hora e no mximo 3 horas.
10.6. Filtrar sob vcuo em cadinho de vidro borossilicato com placa porosa. Lavar o bquer e o precipitado
3 vezes com NH
4
OH 1+50 ou at que algumas gotas do filtrado no reajam com soluo de nitrato de prata
acidulado com cido ntrico.
10.7. Transferir o cadinho de vidro borossilicato com o precipitado para o bquer original. Adicionar gua
destilada at cobrir o cadinho e 10ml de soluo de cido sulfrico 1+1. Opcionalmente, poder ser
realizada a dissoluo do precipitado contido no cadinho com sucessivas lavagens de cido sulfrico
1+1 a quente, at 150 ml.
10.8. Aquecer at completa dissoluo do precipitado (prximo ebulio) e titular com permanganato de
potssio 0,01M sob constante agitao at colorao rsea clara, persistente por 30 segundos. Cuidar
para que durante a titulao a temperatura fique abaixo de 60C.
11. Clculos
Onde:
V Volume de KMnO
4
0,01M, em mL
M Molaridade real da soluo KMnO
4
0,01M
S Volume da soluo estoque, em mL
A Volume da alquota utilizado, em mL
0,02004 1 mL de permanganato de potssio 0,01M equivale a 0,02004 g de clcio.
12. Bibliografia
anlise de alimentos. 3. ed. So Paulo, 1985. Determinaes Gerais, c.4. p.37
ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS; HELRICH, Kenneth; AOAC INTERNATIONAL. Official
methods of analysis. 14. ed. Ed. Arlington, 1984
AMERICAN SOCIETY FOR TESTING AND MATERIALS. Philadelphia. ASTM. 1990 annual book of ASTM
standards,1990.
VOGEL, Arthur Israel. Anlise qumica quantitativa. Rio de Janeiro: LTC, 1992.
INSTRUO NORMATIVA n 28, de 27 de julho de 2007, Mtodo 4.3.
45
Mtodos Analticos
Carotenos e
Xantofilas
MTODO N 9
Reviso: 2009
3 pginas
1. Introduo
O mtodo apresentado baseia-se na extrao com solventes orgnicos, saponificao e separao dos
carotenides por cromatografia em coluna e lidos por espectros na regio UV/VIS.
2. Recomendaes
produtos qumicos.
3. Escopo
Aplicvel a forrageiras, milho e subprodutos, alfafa e produtos que contenham alguns desses ingredientes
combinados.
No aplicvel.
5. Definies
Xantofila o nome genrico dos agentes pigmentantes da famlia dos carotenides, naturalmente
encontrados em alguns vegetais como milho, alfafa, etc.
Os agentes pigmentantes so utilizados em raes para conferir uma pigmentao adequada pele de
frangos de corte e gema de ovos comerciais.
Os pigmentos carotenides so facilmente destrudos pelo calor, luz, umidade e oxidao causada pelo
oxignio do ar, da a necessidade de manter esses produtos protegidos atravs do uso de embalagens.
O caroteno a maior frao obtida de beta caroteno e a xantofila corresponde a todos os hidrocarotenides.
6. Reaes
7.1. Hexano p.a.
7.2. Acetona p.a.
46
7.4. Metanol p.a.
7.5. Sulfato de sdio anidro p.a.
7.6. xido de alumnio (ref: 1097 Merck)
7.7. Hidrxido de potssio p.a.
7.8. Soluo de hexano : acetona (7:3)
7.8.1. Preparo: Misturar 70 mL de hexano e 30 mL de acetona.
7.9. Soluo metanlica de KOH 40%
7.9.1. Preparo: Misturar 40 g de hidrxido de potssio em 100 mL de metanol.
7.10. xido de alumnio
7.10.1. Preparo: Calcinar por 8 horas a 750C, resfriar em dessecador e guardar em vidro fechado. Para
cada 91 g de xido de alumnio misturar 9 mL de gua destilada, agitar manualmente com todo vigor e
conservar em frasco de vidro por 12 horas.
7.11. Coluna de vidro
7.11.1. Preparo: Colocar pequena poro de l de vidro, 25 gramas de xido de alumnio, 2 gramas de
sulfato de sdio anidro. (preparar a coluna com vcuo no permitir formao de bolhas de ar).
7.12. L de vidro
7.13. Balo volumtrico de 100 mL (mbar)Basto de vidro
7.14. Coluna de vidro com torneira
7.15. Pipeta volumtrica de 2mL
8. Equipamentos
8.2. Agitador magntico
8.3. Espectrofotmetro UV/VIS
8.4. Evaporador rotativo ou banho-maria
9. Amostragem
A amostra deve estar moda finamente.
10. Procedimento
10.1. Extrao
10.1.1. Pesar amostra previamente moda (finamente): 2 gramas para alimentos, 2 gramas para milho, 1
grama para glten 60.
10.1.2. Transferir para balo volumtrico de 100 mL. Adicionar 30 mL da mistura de hexano-acetona (7:3).
10.1.3. Agitar por 2 minutos em agitador magntico em velocidade mxima. Repousar por 16 horas ao
abrigo da luz.
10.1.4. Adicionar 2 mL de KOH 40%. Agitar vigorosamente por 2 minutos. Repousar por 30 minutos.
10.1.5. Adicionar 2 mL de gua e agitar vigorosamente por 2 minutos. Completar o volume com hexano
p.a. Guardar ao abrigo da luz por uma hora.
10.1.6. Pipetar 25 mL do sobrenadante e transferir para balo de fundo redondo e evaporar em evaporador
rotativo ou banho-maria.
10.2. Cromatografia
10.2.1. Passar 30 mL de ter de petrleo pela coluna, controlar a vazo (2 a 3 gotas) por segundo.
47
10.2.2. Transferir o resduo dissolvido em ter de petrleo para o topo da coluna, eluir os carotenos com
100 mL de ter de petrleo.
10.2.3. Recolher o eluido em balo volumtrico de 100 mL (no deixar a coluna secar). Da mesma forma,
eluir as xantofilas com lcool etlico a 96%, recuperando 100 mL em balo volumtrico.
Nota: A absorbncia da soluo medida em espectrofotmetro a 450nm, adotando o ter de petrleo
como branco para o caroteno e lcool etlico 96% para as xantofilas.
11. Clculos
Onde
m Massa da amostra, em grama
1d Primeira diluio
al Alquota
2d Segunda diluio
ABSA Absorbncia da amostra
250 e 260 Densidade ptica
12. Bibliografia
Mtodo France-Luzerne proposto pol Melle Valdeouze para C.E.E. - Mtodo original fornecido pela:
Anfar
48
Mtodos Analticos
Determinao de
Cloretos Solveis
MTODO N 10
Reviso: 2009
4 pginas
1. Introduo
A anlise de cloretos realizada pelo Mtodo de Mohr, cujo princpio fundamenta-se na precipitao dos
cloretos sob a forma de cloreto de prata, em pH 8,3, em presena de cromato de potssio como indicador.
O final desta reao dado pela formao do precipitado vermelho tijolo de cromato de potssio.
2. Recomendaes
produtos qumicos.
Realizar o preparo das solues em capela de exausto.
3. Escopo
Aplicvel a produtos ou subprodutos de origem animal, vegetal, mineral, raes e concentrados. O mtodo
aplicvel somente para cloretos solveis em gua.
No aplicvel.
5. Definies
No aplicvel.
6. Reaes
3
) p.a.
7.2. Nitrato de prata (AgNO
3
) p.a.
7.3. Carbonato de clcio (CaCO
3
) p.a
7.4. Cloreto de sdio (NaCl) p.a.
49
7.5. Cromato de potssio (K
2
CrO
4
) p.a.
7.6. Soluo reagente de cido ntrico 20 mL/L
7.6.1. Preparo: Medir 20 mL de HNO
3
p.a. e transferir para balo volumtrico de 1000 mL, contendo
aproximadamente 500 mL de gua destilada. Esfriar e completar o volume.
7.7. Soluo reagente de cromato de potssio 5 g/L
7.7.1. Preparo: Pesar exatamente 50g de K
2
CrO
4
p.a. em bquer e adicionar aproximadamente 500 mL de
gua destilada. Dissolver e transferir quantitativamente para balo volumtrico de 1000 mL, completando o
volume com gua destilada. Armazenar em frasco mbar ao abrigo da luz, no mximo por 30 dias.
7.8. Soluo volumtrica padronizada de nitrato de prata 0,05 M
7.8.1. Preparo: Pesar exatamente 4,2469 g de AgNO
3
e transferir para balo volumtrico de 500 mL mbar
ou envolto com folha de alumnio. Dissolver com gua destilada, completar o volume e homogeneizar.
7.8.2. Padronizao: Pesar exatamente 0,700 g de NaCl p.a., previamente seco em forno mufla a 300C
por 1 hora. Transferir para erlenmeyer de 125 mL e dissolver com aproximadamente 30 mL - 40 mL de
gua destilada. Acrescentar 1 mL de soluo de K
2
CrO
4
5 g/L e titular com AgNO
3
0,05 M at viragem para
colorao vermelho tijolo clara.
Onde:
MR Molaridade real da soluo de AgNO
3
P Peso do NaCl em grama
V Volume da soluo de AgNO
3
gasto na titulao, em mL
0,0585 Massa molar do NaCl
7.9. Bales volumtricos (500 mL e 1000 mL)
7.11. Erlenmeyer de 125 mL e 500 mL
7.12. Papel Tornassol
7.13. Bquer de 250 mL e 1000 mL
7.14. Bureta de 50ml (div. 0,05ml)
7.17. Pipetas graduadas (ou pipetador automtico)
7.19. Proveta de 50ml
8. Equipamentos
8.2. Forno Mufla
50
8.4. Estufa
9. Amostragem
Para a retirada de amostras na Produo, vide captulo Amostragem
Para amostras com altos teores de cloretos (sais e misturas minerais), proceder diluies adequadas.
No calcinar amostras inorgnicas, alteraes na estrutura molecular elevam o resultado esperado.
10. Procedimento
10.1 Pesar 5 g da amostra em cadinho ou cpsula de porcelana e levar ao forno mufla a 550C por quatro
horas. Retirar e esfriar at equilbrio com a temperatura ambiente;
10.2 Adicionar aproximadamente 5 mL da soluo de HNO
3
20 mL/L e levar para placa aquecedora at
atingir ebulio;
10.3 Filtrar a quente sobre papel de filtro qualitativo recebendo o filtrado em erlenmeyer de 500 mL.
Fazer lavagens com pores de gua destilada quente at um volume aproximado de 300 mL;
10.4 Neutralizar com CaCO
3
p.a. utilizando tira de papel tornassol como indicador, depositada no fundo
do frasco. Adicionar excesso de 0,5 g de CaCO
3
p.a.;
10.5 Aquecer em placa aquecedora at ebulio por aproximadamente 10 minutos ou at desprendimento
completo do CO
2
formado. Esfriar;
10.6 Adicionar 1 mL da soluo de K
2
CrO
4
5% e titular com soluo de AgNO
3
0,05 M at viragem para
colorao vermelho tijolo clara;
10.7 Proceder paralelamente prova em branco dos reagentes utilizados.
11. Clculos
O clculo do NaCl % considera que todo cloreto seja proveniente de NaCl.
Onde:
Va Volume da soluo de AgNO
3
0,05 M gasto na titulao, em mL
Vb Volume da soluo de AgNO
3
0,05 M gasto na prova em branco, em mL
0,0355 1 mL de AgNO
3
0,05M equivale a 0,0355 g de cloreto
0,0585 1 mL de AgNO
3
0,05M equivale a 0,0585 g de cloreto de sdio
P Peso original da amostra, em grama
51
12. Bibliografia
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. Mtodos qumicos e fsicos para
anlise de alimentos, V.1. 3. ed. So Paulo: PROL, 1985. p. 36-37
52
Mtodos Analticos
Cobalto (VIA MIDA) -
Complexometria de
EDTA
MTODO N 11
Reviso: 2009
3 pginas
1. Introduo
A determinao de Cobalto realizada por complexometria de EDTA, usando-se murexida como indicador,
em meio alcalino.
2. Recomendaes
Seguir as precaues de segurana descritas para os reagentes: cido clordrico, hidrxido de sdio,
trietanolamina, hidrxido de amnio.
3. Escopo
Aplicvel na determinao do teor de Cobalto em Sulfato de Cobalto.
No aplicvel.
5. Definies
Sulfato de Cobalto o sal proveniente da reao do Cobalto e do cido Sulfrico. Poder ser usado na
forma monohidratada (CoSO
4
. H
2
O) ou Heptahidratada (CoSO
4
. 7H
2
O). O Sulfato de Cobalto monohidratado
apresenta colorao rosa choque e o heptahidratado apresenta colorao mais avermelhada.
6. Reaes
7.1. Acetato de amnio (CH
3
COONH
4
) p.a.
7.2. cido clordrico (HCl) p.a
7.3. Calcon p.a.
7.4. Carbonato de clcio (CaCO
3
) p.a.
7.5. EDTA (C
10
H
14
N
2
Na
2
O
8
.2H
2
O) p.a.
4
OH) p.a.
7.7. Hidrxido de sdio (NaOH) p.a.
53
7.8. Trietanolamina p.a.
7.9. Soluo reagente de hidrxido de sdio 4 M
7.10. Soluo reagente de cido clordrico 10%
7.11. Soluo reagente de trietanolamina 20%
7.12. Soluo volumtrica padronizada de EDTA 0,1 M
7.12.1. Preparo: Pesar com exatido 37,22 g de EDTA, dissolver e transferir quantitativamente para balo
volumtrico de 1000 mL. Completar o volume com gua destilada e homogeneizar. Armazenar esta soluo
em frasco de polietileno.
7.12.2. Padronizao: Pesar exatamente 2,5275 g de carbonato de clcio p.a., previamente seco em
estufa a 105C por duas horas. Transferir para erlenmeyer de 250 mL. Adicionar 30 mL de soluo de
cido clordrico 10%. Transferir quantitativamente para balo volumtrico de 250 mL com gua destilada,
completar o volume e homogeneizar. Pipetar volumetricamente uma alquota de 25 mL para erlenmeyer
de 300 mL e adicionar 5 mL da soluo de trietanolamina 20% e 3 mL da soluo de hidrxido de sdio
4 M. Adicionar uma pitada de calcon e titular com soluo de EDTA 0,1 M
Calculo da molaridade real:
Onde:
P Peso do CaCO
3
em mg
V Volume de EDTA gasto na titulao, em mL
mol Unidade molar do CaCO
3
MR Molaridade real da soluo de EDTA 0,1M
7.13. Indicador Murexida p.a.
7.15. Balo Volumtrico 500 mL
7.16. Bquer 400 mL
7.17. Bureta (diviso de 0,05mL)
7.18. Pipeta volumtrica 25 mL
7.19. Erlenmeyer 500mL
8. Equipamentos
9. Amostragem
Moer e homogeneizar em almofariz, se necessrio.
No secar a amostra, para evitar perda de gua de hidratao.
54
10. Procedimento
10.1. Pesar, com aproximao de 0,1 mg, aproximadamente 5g da amostra previamente moda e
homogeneizada em um bquer de 400 mL.
10.2. Dissolver em gua destilada com leve aquecimento.
10.3. Esfriar e filtrar, se necessrio, sobre papel de filtro qualitativo, recolhendo em balo volumtrico de
500 mL. Completar o volume com gua destilada e homogeneizar.
10.4. Transferir, com auxlio de pipeta volumtrica, uma alquota de 25 mL para erlenmeyer de 500 mL.
10.5. Adicionar 5 g de acetato de amnio p.a. e ajustar o pH, com hidrxido de amnio p.a, para um valor
prximo de 12.
10.6. Adicionar uma pitada de murexida e titular com soluo de EDTA 0,1 M, com auxlio de bureta, at
viragem de amarelo para lils, passando pela colorao vinho intermediria.
11. Clculos
Onde:
Co% Porcentagem de Cobalto da amostra
V Volume da soluo de EDTA 0,1M gasto na titulao, em mL
M Molaridade real da soluo de EDTA 0,1M
ma Massa da amostra na alquota, em grama
0,05893 1 mL de EDTA 0,1M equivale a 0,05893 g de cobalto
12. Bibliografia
ACS COMMITTEE ON ANALYTICAL REAGENTS. American Chemical Society Specifications. Reagent
chemicals. 10. ed. 2006. p. 265
FOOD CHEMICAL CODEX . 2.ed. 1972
55
Mtodos Analticos
Determinao de Cobre
VIA MIDA
MTODO N 12
Reviso: 2009
3 pginas
1. Introduo
A determinao de Cobre por volumetria utilizada como alternativa metodologia por Espectrofotometria
de Absoro Atmica
Os sais cpricos, quando tratados com iodeto de potssio liberam iodo. O iodo cuproso formado
insolvel em cido actico e solvel em excesso de iodeto de potssio. O iodo liberado pela ao do
acetato cprico sobre o iodeto de potssio determinado por titulao com tiossulfato de sdio.
2. Recomendaes
produtos qumicos.
3. Escopo
Mtodo aplicvel em Sulfato de Cobre
No aplicvel.
5. Definies
No aplicvel.
6. Reaes
7.1. cido Actico Glacial (CH
3
COOH) p.a.
56
7.2. cido Ntrico (HNO
3
) p.a.
7.3. cido Clordrico (HCl) p.a.
7.4. Amido solvel (C
6
H
10
O
5
) p.a.
7.5. Dicromato de Potssio (K
2
Cr
2
O
7
) p.a.
7.6. Hidrxido de Amnio (NH
4
OH) p.a.
7.7. Iodeto de Potssio (KI) p.a.
7.8. Tiossulfato de sdio (Na
2
S
2
O
3
.5H
2
O) p.a.
7.9. Carbonato de Sdio Anidro (Na
2
CO
3
) p.a.
7.10. Soluo de cido Ntrico 1+3
7.10.1.Preparo: Adicionar lentamente 25 mL de cido Ntrico p.a. em 75 mL de gua destilada.
7.11. Soluo de Hidrxido de Amnio 1+1
7.11.1. Preparo: Adicionar lentamente 50 mL de Hidrxido de Amnio p.a. em 50 mL de gua destilada.
7.12. Soluo de Amido 10 g/L
7.12.1. Preparo: Pesar 1,0 g de amido solvel, acrescentar pequena quantidade de gua, formando uma
pasta. Dissolver esta pasta em aproximadamente 80 mL de gua destilada em ebulio. Deixar em fervura
por 1 minuto. Resfriar e avolumar a 100 mL. S se deve usar solues de amido recentemente preparadas.
Quando apresentar alguma turbidez, desprezar a soluo.
7.13. Soluo de cido Clordrico 1M
7.13.1. Preparo: Medir 85 mL de cido Clordrico p.a. em proveta de 100 mL e transferir para balo
volumtrico de 1000 mL, contendo aproximadamente 500 mL de gua destilada. Esfriar, completar o volume
com gua destilada e homogeneizar.
7.14. Soluo Volumtrica Padronizada de Tiossulfato de Sdio 0,1M
7.14.1. Preparo: Pesar 24,82 g de Tiossulfato de Sdio p.a. para balo volumtrico de 1000 mL. Dissolver
com gua destilada fervida e adicionar 0,2 g de Carbonato de Sdio Anidro. Transferir quantitativamente
para balo volumtrico de 1000 mL, completar o volume com gua destilada, fervida e fria. Homogeneizar
e deixar em repouso por 24 horas antes da padronizao. Estocar em frasco mbar.
7.14.2. Padronizao: Pesar 0,2 g de Dicromato de Potssio p.a. previamente seco em estufa por 2 horas
a 105C. Transferir para erlenmeyer de 250 mL com tampa esmerilhada. Acrescentar 70 mL de gua
destilada, fervida e fria. Adicionar 2 g de Potssio Iodeto p.a. e solubilizar. Adicionar 20 mL de cido
Clordrico 1M. Tampar o erlenmeyer e estocar imediatamente ao abrigo da luz por 10 minutos. Titular
gotejando a soluo de Tiossulfato de Sdio 0,1M at quase desaparecimento da colorao amarela.
Acrescentar 1 mL da soluo indicadora de amido 10g/l e continuar a titulao at o desaparecimento da
colorao azul.
Clculo
Onde
MR Molaridade real da soluo de tiossulfato de sdio
P Peso do dicromato de potssio, em mg
V Volume de tiossulfato de sdio 0,1M gasto na titulao, em mL
m Massa do dicromato de potssio p.a., em mg
1 mL de tiossulfato de sdio 0,1 M, equivale a 0,04904 g do dicromato de potssio p.a.
57
7.15. Bureta
7.16. Erlenmeyer.
7.17. Provetas graduadas
7.18. Balo volumtrico
8. Equipamentos
8.2. Agitador magntico e barras magnticas
8.3. Chapa aquecedora
8.4. Estufa
9. Amostragem
10. Procedimento
10.1. Pesar 0,2 g de amostra, previamente moda e homogeneizada. Transferir para erlenmeyer.
10.2. Adicionar 12,5 mL de soluo de cido Ntrico 1+3 e dissolver.
10.3. Adicionar 12,5 mL de gua destilada e adicionar soluo de Hidrxido de Amnio 1+1 gota a gota at
colorao azul escuro, formando um precipitado de Cu(OH)
2
.
10.4. Ferver em chapa aquecedora durante 3 minutos.
10.5. Acrescentar 4 mL de cido Actico Glacial p.a. para dissolver o precipitado. Esfriar.
10.6. Adicionar 1,0 g de Iodeto de Potssio p.a. e titular com soluo de Tiossulfato de Sdio 0,1M at
mudana da colorao marrom para amarelo. Titular rapidamente para que no ocorra perda por oxidao.
10.7. Adicionar 1 mL de soluo de Amido 10g/L e prosseguir a titulao cuidadosamente at que a
colorao azul desaparea.
11. Clculos
Onde
F Fator de correo
M Molaridade real da soluo de tiossulfato de sdio 0,1M
MA Massa da amostra, em grama
1 mL de tiossulfato de sdio 0,1 M, equivale a 0,06355 g de Cobre.
12. Bibliografia
ASSUMPO, Rosely M. Viegas; MORITA, Tokio. Manual de Solues Reagentes e Solventes padronizao,
preparao, purificao. 2. ed. 1972
58
Mtodos Analticos
Enxofre Total por
Oxidao e
Turbidimetria
MTODO N 13
Reviso: 2009
4 pginas
1. Introduo
O enxofre elementar insolvel na maioria das solues. O elemento reage com hidrxido de potssio
formando tiossulfatos e sulfetos. Pela ao do perxido de hidrognio, estes compostos so oxidados a
sulfatos que posteriormente so precipitados pela reao com cloreto de brio. O precipitado poder ser
quantificado gravimetricamente aps secagem a 250C. A precipitao realizada em condies adequadas
de tamponamento gera uma turbidez que poder ser quantificada em colormetro a 450 nm de comprimento
de onda.
2. Recomendaes
produtos qumicos.
3. Escopo
Aplica-se a misturas contendo fonte de enxofre elementar.
No aplicvel
5. Definies
Enxofre elementar: enxofre na forma S normalmente originrio do produto mineral amarelo (bright ou
dark) ou borra de enxofre. Ainda no est oxidado e insolvel.
Sulfato: condio de formao de alguns sais (Xx SO
4
), que so utilizados como matrias primas. Os
sulfatos (SO
4
-2
), em sua grande maioria so solveis em gua.
As principais excees so: CaSO
4
, SrSO
4
, BaSO
4
e PbSO
4
.
6. Reaes
59
7.1. Cloreto de brio (BaCl
2
. 2H
2
O) p.a.
7.3. Sulfato de potssio (K
2
SO
4
) p.a.
7.4. lcool etlico (C
2
H
5
OH) p.a.
7.5. Soluo alcolica de Hidrxido de potssio (KOH) 100 g/L
7.5.1. Preparo: Pesar 100 g do KOH e solubilizar com 1000 mL de lcool etlico. Deixar de repouso de um
dia para outro e filtrar em papel de filtro.
7.6. Soluo de Perxido de hidrognio (H
2
O
2
) a 130 volumes ou 400 mL/L
7.6.1. Preparo: Aconselhvel a aquisio da soluo pronta.
7.7. Soluo de cido clordrico 1:1 v/v
7.7.10. Preparo: Diluir 1 parte de HCl p.a. em 1 parte de gua destilada.
7.8. Soluo tampo de Cloreto de sdio e cido clordrico
7.8.1. Preparo: Em recipiente de 2 litros, adicionar 900 mL de gua destilada. Adicionar lentamente e sob
agitao 240g de cloreto de sdio p.a. Adicionar 20 mL de cido clordrico p.a. e homogeneizar.
7.9. Soluo padro de Sulfato - 500 mg/L
7.9.1. Preparo: Pesar exatamente 0,4534 g de sulfato de potssio p.a. previamente seco em estufa por 2
horas de 105 a 110C. Transferir o sal quantitativamente para balo volumtrico de 500 mL. Completar o
volume com gua destilada e homogeneizar. Guardar em frasco de polietileno identificado. 1 mL desta
soluo contm 500 ppm de sulfato.
7.10. Papel filtro qualitativo e faixa branca.
8. Equipamentos
8.3. Estufa
8.4. Dessecador com slica-gel
8.5. Espectrofotmetro Visvel (450 nm)
8.6. Cronmetro
8.7. Agitador magntico e barras magnticas de tamanhos aproximados
9. Amostragem
10. Procedimento
De acordo com os teores esperados sero feitas as adequaes nas massas e diluies.
Produto originalmente na forma de Sulfato, dispensam os itens 10.2.2 e 10.2.3 do Procedimento.
10.1. Preparao da curva de calibrao de Sulfato
10.1.1. Transferir para bqueres de 250 mL, com auxlio de bureta volumtrica, os volumes respectivos da
Soluo padro de sulfato (500 ppm) : 6,0, 5,0, 4,0, 3,0, 2,0, e 1,0 mL e completar o volume at 100 mL
com gua destilada (94, 95, ... etc). As solues assim preparadas apresentam em ppm de sulfato
respectivamente: 3000, 2500, 2000, 1500, 1000, e 500.
60
10.1.2. Adicionar a cada bquer, 20 mL de soluo de cloreto de sdio e cido clordrico e um basto
magntico.
10.1.3. Adicionar 1,0 g de cloreto de brio p.a. e agitar exatamente 1 minuto. Deixar em repouso por 4
minutos. Durante o repouso acertar o equipamento em 450 nm de comprimento de onda e ajustar a leitura
em 0,000 de absorbncia com gua destilada. Ler a absorbncia dos padres.
OBS.: podem ser realizadas as agitaes e leituras de forma seqencial, respeitando-se sempre o tempo
de 1 minuto de agitao e 4 minutos de repouso.
10.1.4. Introduzir seqencialmente as solues padres, aps agitao de 1 minuto e repouso de 4
minutos, anotando os valores de absorbncia obtidos.
10.1.5. Com os valores de absorbncia (x) versus ppm de sulfato dos padres, calcular a equao da reta
por regresso linear (y = ax + b), obtendo as constantes a e b.
10.2. Anlise da amostra
Fazer em paralelo um branco com os reagentes.
10.2.1. Pesar 1,0g de amostra em copo de 400mL, forma alta.
10.2.2. Adicionar 50 mL da soluo alcolica de hidrxido de potssio e levar para aquecimento, deixando
sob fervura at reduzir a 1/3 do volume.
10.2.3. Esfriar e acrescentar lentamente 40mL (de 10 em 10 mL) da soluo de perxido de hidrognio.
Cuidar da formao de espuma e se for excessiva, adicionar gotas de lcool.
10.2.4.Lavar as paredes com gua e deixar sob aquecimento em Banho Maria a 80C por 01 hora.
10.2.5. Adicionar 10 mL de cido clordrico concentrado e gua at aproximadamente 100 mL. Ferver por
10 minutos, retirar do aquecimento e resfriar.
10.2.6. Transferir para balo volumtrico de 250 mL, completar o volume com gua destilada e homogeneizar.
10.2.7. Pipetar alquota que contenha de 5 a 30 ppm de SO
4
e transferir para copo de 250 mL. Pipetar
volume similar do branco.
10.2.8. Adicionar volume de gua destilada para completar 100 mL e 20 mL da soluo tampo de cloreto
de sdio e cido clordrico.
10.2.9. Sob agitao, iniciando pelo branco, adicionar 1,0 g de Cloreto de brio e agitar exatamente 1
minuto. Deixar em repouso por 4 minutos. Durante o repouso acertar o equipamento em 450 nm de
comprimento de onda. Aps exatamente 4 minutos de repouso, ajustar a leitura em 0,000 de absorbncia
com o branco e ler a absorbncia da amostra, aguardando os 4 minutos de repouso.
OBS. - Podem ser realizadas as agitaes e leituras de forma seqencial, respeitando-se sempre o
tempo de 1 minuto de agitao e 4 minutos de repouso.
11. Clculos
Onde
LA Leitura da amostra em absorbncia (x na equao da reta)
aeb Constantes da equao da reta
100 Valor da simplificao realizado na execuo da regresso
PA Peso da amostra, em grama
61
12. Bibliografia
FARMACOPIA BRASILEIRA: oficializada pelo governo federal, decreto nmero 78840 de 25/11/76. So
Paulo: Andrei, 1977. 3. ed. rev e compl. p. 417
MELLOR, J.W.; PARKERS, G.D. Modern Inorganic Chemistry. Long Mans, Green and C.O.
62
Mtodos Analticos
Determinao de
Extrato Etreo Mtodo
SOXHLET
MTODO N 14
Reviso: 2009
3 pginas
1. Introduo
Este mtodo determina o total de substncias solveis em solventes orgnicos, sendo essas substncias
os acilgliceris, os cidos graxos livres, o colesterol, a lecitina, a clorofila, os lcoois volteis, os leos
volteis e as resinas.
2. Recomendaes
produtos qumicos.
3. Escopo
Aplicvel a produtos e subprodutos de origem animal ou vegetal, raes e concentrados, desde que no
submetidos a processo de extruso. No aplicvel para produtos lcteos e glten de milho.
No aplicvel.
5. Definies
No aplicvel.
6. Reaes
No aplicvel.
7.1. ter de petrleo p.a ou hexano p.a.
7.2. Balo de fundo chato ou copo tipo reboiler
7.3. Dessecador com slica gel ou cloreto de clcio anidros
7.4. Papel de filtro qualitativo previamente desengordurado ou cartucho extrator de cermica ou celulose
8. Equipamentos
8.1. Aparelho extrator tipo Soxhlet ou Goldfisch
63
8.3. Estufa de secagem 105C (preciso 5C)
9. Amostragem
Para amostras acima de 18% de umidade necessrio proceder secagem prvia do cartucho contendo
amostra por no mnimo 1 hora temperatura de 105C.
10. Procedimento
10.1. Pesar com preciso 2g de amostra, em seguida transferir para cartucho extrator ou cartucho preparado
com papel de filtro.
10.2. Secar o balo ou copo em estufa a 105C, por uma hora, esfriar em dessecador at a temperatura
ambiente e pesar.
10.3. Introduzir o cartucho no extrator.
10.3.1. Para o equipamento Soxhlet onde o cartucho fique imerso, adicionar quantidade de solvente
suficiente para manter o cartucho imerso durante a anlise.
10.3.2. Para o equipamento Soxhlet convencional, adicionar quantidade suficiente para obter um refluxo
e mais 50% do volume de solvente, aproximadamente.
10.4. Proceder extrao.
10.4.1. No equipamento com imerso, extrair 1 hora e meia com o cartucho submerso e o solvente em
ebulio, aps este perodo suspender o cartucho e deixar em refluxo com o solvente por 1 hora
velocidade de 2 a 4 gotas por segundo.
10.4.2. Para o equipamento convencional extrair por um perodo mnimo de 3 horas com o solvente em
ebulio e a velocidade de condensao de 2 a 4 gotas por segundo.
10.5. Recuperar o solvente.
10.6. Secar o balo ou copo em estufa a 105C por 1 hora e meia a 2 horas. A estufa de secagem pode ser
com circulao de ar forado.
10.7. Esfriar em dessecador at temperatura ambiente e pesar.
10.8. Repetir a operao de secagem at que a diferena entre duas pesagens sucessivas no seja
superior a 0,1% do peso da amostra.
10.9. Conduzir sempre uma prova em branco, testando a qualidade do solvente utilizado e fazer a correo,
se necessrio.
11. Clculos
Onde:
A Peso do balo ou copo + resduo, em grama
B Peso do balo ou copo vazio, em grama
P Peso da amostra inicial, em grama
64
12. Bibliografia
INSTITUTO ADOLFO LUTZ . Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. Mtodos qumicos e fsicos para
anlise de alimentos, V.1. 4.ed. So Paulo: PROL, 2005. p. 118-119
Analytical Chemists. Arlington: A.O.A.C., 1995, chapter 33. (method 920.39, C). p.10-1
65
Mtodos Analticos
Determinao de
Extrato Etreo
Hidrlise cida
MTODO N 15
Reviso: 2009
3 pginas
1. Introduo
2. Recomendaes
produtos qumicos.
Todo o procedimento analtico deste mtodo deve ser realizado em capela de exausto, por risco de
incndio.
3. Escopo
Aplicvel a produtos e subprodutos extrusados, lcteos e outros que exijam hidrlise cida devido ao
sistema de processamento empregado.
No aplicvel.
5. Definies
No aplicvel
6. Reaes
7.2. ter etlico p.a.
7.3. cido clordrico p.a.
7.4. lcool etlico p.a.
7.5. Soluo de cido clordrico 70% (v/v)
7.5.1. Preparo: Misturar 7 partes de HCl p.a. em 3 partes de gua destilada.
66
7.6. Soluo de ter de petrleo ter etlico 1+1
7.6.1. Preparo: Misturar 1 parte de ter de petrleo em 1 parte ter etlico.
7.7. Bquer 250mL
7.9. Erlenmeyer com tampa esmerilhada 250mL (ou outro recipiente equivalente, com tampa)
7.11. Pipetas graduadas de 5mL
7.12. Proveta de 50mL
7.13. Algodo hidrfilo
8. Equipamentos
8.3. Banho maria
9. Amostragem
A amostra deve ser previamente moda.
10. Procedimento
10.1. Pesar 2g de amostra, em seguida transferir para erlenmeyer de 250mL.
10.2. Adicionar 2mL de lcool etlico p.a. e agitar de maneira a umedecer todas as partculas da amostra.
10.3. Adicionar 10 mL de cido clordrico 70%, tampar e agitar vigorosamente.
10.4. Levar ao banho maria a temperatura de 70C - 80C, manter por 40 minutos, agitando a cada 10
minutos.
10.5. Remover o frasco do banho maria e deixar a temperatura ambiente.
10.6. Adicionar 10mL de lcool etlico p.a., e agitar vigorosamente.
10.7. Adicionar 50mL da soluo de ter de petrleo-ter etlico, tampar e agitar vigorosamente durante 30
segundos.
10.8. Remover cuidadosamente a tampa e deixar os vapores sarem.
10.9. Lavar a tampa com pequenas pores de soluo de ter de petrleo-ter etlico, transferindo para
dentro do frasco a gordura e partculas aderidas.
10.10. Tampar e deixar em repouso at que o sobrenadante esteja praticamente lmpido.
10.11. Filtrar o sobrenadante sobre algodo firmemente adaptado em funil, para bquer de 250mL
previamente seco em estufa a 105C e tarado.
10.12. Lavar o bico do frasco e tampa, aps a transferncia com pequenas pores de soluo de ter de
petrleo-ter etlico.
10.13. Repetir no mnimo por 3 vezes os itens 10.7 a 10.11, usando 25mL da soluo de ter de petrleo-
ter etlico.
10.14. Completadas todas as extraes, lavar com soluo de ter de petrleo-ter etlico o bico do
frasco, a tampa, o algodo (at o desaparecimento da cor amarela), o funil e a haste do funil.
10.15. Evaporar a mistura de teres em banho-maria na temperatura mxima de 60C e levar o bquer na
estufa a 105C por 30 minutos ou at peso constante.
10.16. Esfriar em dessecador e pesar.
67
11. Clculo
Onde:
A Peso do bquer com gordura, em grama
B Peso do bquer vazio, em grama
P Peso da amostra inicial, em grama
12. Bibliografia
Analytical Chemists Arlington: A.O.A.C., 1995. method 954.02
68
Mtodos Analticos
Determinao de
Extrato Etreo
Hidrlise Alcalina
MTODO N 16
Reviso: 2009
3 pginas
1. Introduo
2. Recomendaes
produtos qumicos.
incndio.
3. Escopo
Aplicvel a produtos e subprodutos extrusados, lcteos e outros que exijam hidrlise alcalina devido ao
No aplicvel.
5. Definies
No aplicvel
6. Reaes
7.1. lcool etlico absoluto
7.5. Hidroxido de amnio p.a.
7.6. Soluo alcolica indicadora de fenolftalena 1%
69
7.6.1. Preparo: Dissolver 1 g de fenolftalena p.a. em aproximadamente em 40 mL de lcool etlico, transferir
para balo volumtrico de 100 mL, completar o volume com lcool etlico e homogeneizar.
7.7. Soluo de ter de petrleo ter etlico 1+1
7.7.1. Preparo: Misturar 1 parte de ter de petrleo em 1 parte ter etlico.
7.8. Bquer 250mL
7.10. Erlenmeyer com tampa esmerilhada 250mL (ou outro recipiente equivalente, com tampa)
7.12. Pipetas graduadas de 5mL
7.13. Proveta de 50mL
7.14. Algodo hidrfilo
8. Equipamentos
8.3 Banho-maria
9. Amostragem
A amostra deve ser previamente moda.
10. Procedimento
10.1. Pesar 1g da amostra e transferir para erlenmeyer de 250mL que dever conter 10 mL de gua
destilada pr aquecida a 65C.
10.2. Adicionar 1,5mL de hidrxido de amnio p.a., tampar e agitar de maneira que todas as partculas da
amostra fiquem midas.
10.3. Adicionar 10 mL de lcool etlico p.a., e 3 gotas de fenolftaleina 1%, tampar e agitar vigorosamente.
10.4. Adicionar 25 mL de ter etlico p.a., tampar e agitar vigorosamente durante 1 minuto.
10.6. Adicionar 25mL de ter de petrleo p.a., tampar e agitar vigorosamente durante 1minuto.
10.8. Lavar a tampa com pequenas pores de soluo de ter, transferindo para dentro do frasco a
gordura e partculas aderidas.
10.9. Tampar e deixar em repouso at que o sobrenadante esteja praticamente lmpido.
10.10. Filtrar o sobrenadante sobre algodo firmemente adaptado em funil, para bquer de 250mL
previamente seco em estufa a 105C e tarado.
10.11. Lavar o bico do frasco e tampa, aps a transferncia com pequenas pores de soluo de ter.
10.12. Repetir no mnimo por 3 vezes os itens 10.3 a 10.8, sendo que a partir da segunda extrao no
usar lcool etlico absoluto.
10.13. Colocar o bquer em banho-maria na temperatura mxima de 60C ou sobre corrente moderada de
ar at a completa evaporao da soluo de ter.
10.14. Levar o bquer na estufa a 105C ate peso constante.
10.15. Esfriar em dessecador ate equilbrio com temperatura ambiente e pesar.
70
11. Clculo
Onde:
A Peso do bquer com gordura, em grama.
B Peso do bquer vazio, em grama.
P Peso da amostra inicial, em grama.
12. Bibliografia
Analytical Chemists. Arlington: A.O.A.C., 1995. method 989.05
71
Mtodos Analticos
Ferro -
Via mida
MTODO N 17
Reviso: 2009
3 pginas
1. Introduo
Fundamenta-se na solubilizao do ferro em meio cido e a quente e posterior reduo do Fe
+++
a Fe
++
pelo cloreto estanhoso. Sua concentrao medida por volumetria de oxi-reduo com permanganato
de potssio.
2. Recomendaes
produtos qumicos.
3. Escopo
Mtodo aplicvel para sulfato de ferro.
No aplicvel.
5. Definies
No aplicvel.
6. Reaes
7.2. cido fosfrico (H
3
PO
4
) p.a.
2
SO
4
) p.a.
7.4. Cloreto estanoso (SnCl
2
) p.a.
7.5. Cloreto mercrico (HgCl
2
) p.a.
7.6. Oxalato de sdio (Na
2
C
2
O
4
) p.a.
72
7.7. Permanganato de potssio (KMnO
4
) p.a.
7.8. Sulfato de mangans monohidratado (MnSO
4
. H
2
O) p.a.
7.9. Soluo reagente de cido sulfrico 1+1
7.9.1. Preparo: Diluir uma parte de H
2
SO
4
p.a. em uma parte de gua destilada.
7.10. Soluo reagente de cido clordrico 1 + 2
7.10.1. Preparo: Diluir uma parte de HCl p.a. em duas partes de gua destilada.
7.11. Soluo reagente de cloreto estanoso 150g/L
7.11.1. Preparo: Pesar 7,5 g de cloreto estanoso p.a. e dissolver em bquer com aproximadamente 20
mL da soluo de cido clordrico 1 + 2. Transferir para balo volumtrico de 50 mL, completar o volume
com soluo de cido clordrico 1 + 2 e homogeneizar. Preparar esta soluo momentos antes da utilizao.
7.12. Soluo reagente de cido clordrico 200 g/L
7.12.1. Preparo: Medir 47,5 mL de HCl p.a. e transferir para balo volumtrico de 100 mL, contendo
aproximadamente 40 mL de gua destilada. Esfriar, completar o volume e homogeneizar.
7.13. Soluo de Zimmermann-Reinhardt
7.13.1. Preparo: Dissolver 70 g de MnSO
4
.H
2
O p.a. em 500 mL de gua destilada. Adicionar 125 mL de
H
2
SO
4
e 125 mL de H
3
PO
4
. Agitar e completar o volume para 1000 mL com gua destilada.
7.14. Soluo reagente de cloreto mercrico 50g/L
7.14.1. Preparo: Dissolver 5 g de HgCl
2
p.a. em bquer contendo aproximadamente 70 mL de gua
destilada. Transferir quantitativamente para balo de 100 mL, completar o volume e homogeneizar.
7.15. Soluo de Oxalato de sdio 0,05 M
7.15.1. Preparo: Pesar exatamente 6,70 g de oxalato de sdio (Na
2
C
2
O
4
) p.a. previamente seco em estufa
a 105C por duas horas. Dissolver em bquer com aproximadamente 100 mL de gua destilada, transferir
para balo volumtrico de 1000 mL, homogeneizar e completar o volume.
.7.16. Soluo volumtrica padronizada de permanganato de potssio 0,02 M
7.16.1. Preparo: Dissolver 3,16 g de permanganato de potssio (KMnO
4
) p.a. em bquer contendo
aproximadamente 300/400 mL de gua destilada e aquecer a 60/70C por duas horas. Esfriar, transferir
quantitativamente para balo volumtrico de 1000 mL, completar o volume e homogeneizar. Deixar em
repouso no mnimo por 12 horas ao abrigo da luz.
Filtrar sobre cadinho de vidro sinterizado, amianto ou l de vidro e estocar em frasco mbar.
7.16.2. Padronizao: Pipetar 20 mL da soluo de oxalato de sdio 0,05 M, transferir para erlenmeyer,
adicionar 10 mL de cido sulfrico 1+1, aquecer a 70
C - 80C e titular nessa temperatura gotejando a

soluo de permanganato de potssio 0,02 M numa velocidade de 2 a 3 gotas por segundo at colorao
levemente rsea persistente por 30 segundos.
OBS: 5 moles de Na
2
C
2
O
4
reagem com 2 moles de

KMnO
4
Onde:
MR Molaridade real
P Massa de Na
2
C
2
O
4
na alquota, em mg
V Volume gasto de KMnO
4
, em mL
m Massa molar do Na
2
C
2
O
4
, em g
73
7.17. Erlenmeyer
7.20. Bureta graduada
7.21. Provetas
7.22. Bqueres
8. Equipamentos
8.2. Agitador magntico
9. Amostragem
10. Procedimento
10.1. Pesar 0,3 g da amostra previamente preparada e homogeneizada. Transferir para erlenmeyer de 500
mL.
10.2. Adicionar 50 mL da soluo de HCl 200g/L, aquecer em placa e evaporar at quase secura.
10.3. Gotejar soluo de cloreto estanoso 150 g/L quente at tornar-se incolor. Esfriar.
10.4. Adicionar 10 mL da soluo de cloreto mercrico 50 g/L, 100 mL de gua destilada e 25 mL da
soluo de Zimmermann-Reinhardt.
10.5. Deixar em repouso por 5 minutos. Adicionar 25 mL de gua destilada.
10.6. Titular com soluo de KMnO
4
0,02 M at colorao levemente rsea persistente.
11. Clculos
Onde
V Volume da soluo de KMnO
4
0,02 M gasto na titulao, em mL
F Fator de correo da soluo de KMnO
4
0,02 M
M Molaridade real da soluo de KMnO
4
0,02 M
m Massa da amostra, em grama
5 Estequiometria da reao
1 mL de KMnO
4
0,02 M equivale a 0,05585 g de ferro
12. Bibliografia
VOGEL, Arthur Israel. Anlise qumica quantitativa. 5. ed. 1992. p. 646-654.
74
Mtodos Analticos
Ferro -
Mtodo Volumtrico
MTODO N 18
Reviso: 2009
4 pginas
1. Introduo
Podemos encontrar o elemento ferro no sulfato ferroso, em dois estados de oxidao, nas formas de
Ferro II e III. O sulfato ferroso determinado atravs da titulao com permanganato de potssio e o sulfato
frrico, presente em quantidades pequenas, determinado atravs da titulao com tiossulfato de sdio.
Com a somatria dos dois teores obtm-se o teor de ferro total.
2. Recomendaes
produtos qumicos.
3. Escopo
Aplicvel a sulfato ferroso anidro, monohidratado e outros sulfatos de ferro hidratados.
No aplicvel.
5. Definies
No aplicvel.
6. Reaes
75
A soluo de permanganato de potssio utilizada na determinao de ferro II deve ser estocada em frasco
mbar.
7.1. Permanganato de potssio p.a.
7.2. Oxalato de sdio p.a.
7.3. cido sulfrico p.a.
7.4. Tiossulfato de sdio p.a.
7.5. Carbonato de sdio p.a.
7.6. Dicromato de potssio p.a.
7.8. Iodeto de potssio p.a.
7.9. Amido solvel p.a.
7.10. Soluo volumtrica padronizada de permanganato de potssio 0,1 M
7.10.1. Preparo: Pesar 3,2 g de permanganato de potssio p.a. e transferir para um bquer de 1000 mL e
completar para 800 mL com gua destilada. Aquecer por 2 horas a 60 / 70C. Resfriar e transferir para um
balo volumtrico de 1000 mL. Completar o volume com gua destilada e homogeneizar. Filtrar com
papel de filtro qualitativo e armazenar em frasco mbar.
7.10.2. Padronizao: Pesar exatamente 0,066 g de oxalato de sdio p.a. seco em estufa a 120C por 2
horas. Transferir para um erlenmeyer e avolumar para 50 mL com gua destilada. Adicionar 5 mL de cido
sulfrico p.a. e aquecer at 60C. Titular vagarosamente com a soluo de permanganato de potssio
0,1M

at viragem do incolor para rosa.
Clculo:

Onde
FC
Fator de correo da soluo de permanganato de potssio 0,1M

MO Massa do oxalato de sdio, em grama
0,066 Unidade molar do oxalato de sdio
V Volume da soluo de permanganato de potssio 0,1M gasto na titulao, em mL
7.11. Soluo volumtrica padronizada de tiossulfato de sdio 0,1 M
7.11.1. Preparo: Pesar 24,82 g de tiossulfato de sdio p.a. para balo volumtrico de 1000 mL. Dissolver
com gua destilada fervida e adicionar 0,2 g de Carbonato de Sdio Anidro. Transferir quantitativamente
e deixar em repouso por 24 horas antes da padronizao. Estocar em frasco mbar.
7.11.2. Padronizao: Pesar 0,2 g de dicromato de potssio p.a. previamente seco em estufa por 2 horas
a 105C. Transferir para erlenmeyer de 250 mL com tampa esmerilhada. Acrescentar 70 mL de gua
destilada, fervida e fria. Adicionar 2 g de potssio iodeto p.a. e solubilizar. Adicionar 20 mL de cido
clordrico 1M. Tampar o erlenmeyer e estocar imediatamente ao abrigo da luz por 10 minutos. Titular
gotejando a soluo de tiossulfato de sdio 0,1M at quase desaparecimento da colorao amarela.
76
Acrescentar 1 mL da soluo indicadora de amido 10 g/l e continuar a titulao at o desaparecimento da
colorao azul.
Clculo:
Onde
FC2 Fator de correo da soluo de tiossulfato de sdio
MD Massa do dicromato de potssio, em grama
0,004904 Unidade molar do dicromato de potssio
VT Volume gasto de tiossulfato de sdio, em mL
7.12. Soluo de Amido 10 g/L
7.12.1. Preparo: Pesar 1,0 g de amido solvel, acrescentar pequena quantidade de gua, formando uma
pasta. Dissolver esta pasta em aproximadamente 80 mL de gua destilada em ebulio. Deixar em fervura
por 1 minuto. Resfriar e avolumar a 100 mL. S se devem usar solues de amido recentemente preparadas.
Quando apresentar alguma turbidez, desprezar a soluo.
7.14. Bquer
7.15. Bureta
7.16. Funis analticos
8. Equipamentos
8.1. Estufa de secagem ajustvel para 105C
8.4. Eletrodo de pH
8.5. Eletrodo de referncia
8.6. Eletrodo on especfico para flor
8.7. Cronmetro
8.8. Agitador magntico.
9. Amostragem
10. Procedimento
A determinao do teor de ferro total realizada em duas etapas envolvendo a titulao de solues
contendo ferro II e ferro III.
77
10.1. Determinao do Ferro II
10.1.1. Pesar 5,000 g da amostra em um bquer. Anotar o peso. Adicionar 50 mL de gua destilada e 20
mL de cido sulfrico p.a. Levar ao aquecimento em placa aquecedora at que todo o material seja
solubilizado.
10.1.2. Deixar esfriar e transferir para um balo volumtrico de 250 mL. Completar com gua destilada e
homogeneizar.
10.1.3. Transferir uma alquota de 20 mL para um erlenmeyer. Adicionar 50 mL com gua destilada e titular
com a soluo de permanganato de potssio 0,1M at viragem do incolor para rosa.
10.2. Determinao do Ferro III
10.2.1. Pesar 0,700 g da amostra, transferir para erlenmeyer com tampa e anotar o peso. Adicionar 50 mL
de gua destilada e 5 mL de cido sulfrico p.a., agitar at que todo o material seja solubilizado.
10.2.2. Adicionar 3,0 g de iodeto de potssio p.a., tampar o erlenmeyer e repousar ao abrigo da luz por 30
minutos.
10.2.3. Deixar esfriar e transferir para um balo volumtrico de 250 mL. Completar com gua destilada e
homogeneizar.
10.2.4. Titular com tiossulfato de sdio 0,1M at viragem do caramelo para a cor anteriormente encontrada.
11. Clculos
Onde
S Volume de permanganato de potssio gasto na determinao do Ferro II, em mL
FC1 Fator de correo da soluo de Permanganato de Potssio
M1 Massa da amostra de ferro II, em grama
L Volume de tiossulfato de sdio gasto na determinao do Ferro III, em mL
FC2 Fator de correo da soluo de Tiossulfato de Sdio
M2 Massa da amostra de ferro III, em grama
12. Bibliografia
MORITA, Tokio; ASSUMPO, Rosely M.V.; Manual de solues, reagentes e solventes: Padronizao
Preparao Purificao. 12. ed. reimp. 2003. p.28-29,104,106-107, 118, 120-121
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Mtodos fsico-qumicos para anlise de alimentos. 4. ed. (1. ed. digital). 2008.
p. 934, 936
78
Mtodos Analticos
Fibra Bruta
MTODO N 19
Reviso: 2009
3 pginas
1. Introduo
Fibra Bruta o resduo insolvel que se obtm aps o tratamento sucessivo da amostra com cidos e
lcalis diludos a quente, que representa a frao que contm celulose, hemicelulose, lignina e suberina
dos ingredientes. O teor de fibra bruta est relacionado frao indigestvel e por conseqncia energia,
entretanto por si s no representa o valor nutricional do ingrediente. A fibra bruta tem relao com a
qualidade do ingrediente para processamento e com a densidade.
2. Recomendaes
produtos qumicos.
3. Escopo
Aplicvel em forrageiras, produtos e subprodutos de origem vegetal, raes e concentrados.
No aplicvel.
5. Definies
No aplicvel
6. Reaes
No aplicvel
7.1. Acetona (C
3
H
6
O) p.a.
2
SO
4
) p.a. (96% - 98%)
7.3. Alcool etlico (C
2
H
5
OH) p.a.
7.4. lcool octlico (C
8
H
18
O) ou lcool amlico (C
5
H
12
O) ou soluo antiespumante
7.5. ter de petrleo
7.6. Fibras de xido de alumnio ou de silicato de alumnio
79
7.8. Soluo reagente de cido sulfrico 1,25% (0,51 M)
7.8.1. Preparo: Medir 7,0 mL de cido sulfrico p.a. e transferir para balo volumtrico de 1000 mL, contendo
aproximadamente 500 mL de gua destilada. Esfriar, completar o volume e homogeneizar. Padronizar
esta soluo com NaOH 0,2 M e considerar adequada se estiver entre 0,504 M e 0,516 M.
7.9. Soluo reagente de hidrxido de sdio 1,25% (0,313 M)
7.9.1. Preparo: Pesar exatamente 12,5 gramas de NaOH p.a. em bquer, solubilizar com gua e transferir
quantitativamente para balo volumtrico de 1000 mL Esfriar, completar o volume e homogeneizar. Padronizar
esta soluo com cido sulfrico 0,4 M e considerar adequada se a molaridade estiver entre 0,310 M e
0,316 M.
7.10. Balo fundo chato 250 mL junta esmerilhada 24/40
7.11. Cadinho de Gooch capacidade 40/50 mL ou cadinho de vidro borossilicato com placa porosa 1 (90
a 150 micra)
7.12. Condensador de bolas
7.13. Dessecador com cloreto de clcio ou slica gel anidros
7.14. Funil de Bchner 10 cm de dimetro
7.15. Kitassato de 500 mL
7.16. Papel de filtro qualitativo de 12,5 cm de dimetro
7.17. Tela de nylon de 100 mesh ou similar
7.18. Tubo digestor de fibra com capacidade de 350 mL
8. Equipamentos
8.1. Aparelho extrator de fibra
8.3. Bomba de vcuo
8.5. Manta aquecedora pequena
8.6. Mufla
9. Amostragem
Recomenda-se desengordurar amostras com teor de extrato etreo acima de 8%, utilizando-se para isso
balo de fundo chato 250 mL contendo aproximadamente 200 mL de ter de petrleo p.a, acoplado a
gotejador e condensador, onde os cartuchos devem ficar posicionados para receberem refluxo de ter
por 1 hora. Aps retirar do condensador, deixar na capela para evaporar o solvente por 20 a 30 minutos.
10. Procedimento
Para substituir a tela de naylon utilizada no procedimento podero ser utilizados tela de ao inox ou
polister.
10.1. Pesar 3 g da amostra e transferir para o tubo digestor, bquer, erlenmeyer ou cadinho de borossilicato
(sistema automtico). Adicionar 200 mL de cido sulfrico 1,25% (0,51M) para sistema automtico injetar
150 mL - e algumas gotas de antiespumante. Digerir em refluxo por exatamente 30 minutos a partir da
ebulio.
80
10.2. Filtrar quantitativamente a quente sob vcuo, em funil de Bchner provido de tela de naylon ou
cadinho de vidro borossilicato (sistema automtico). Proceder a lavagens sucessivas do resduo com
gua fervente at completa neutralizao.
10.3. Retornar o resduo ao tubo, bquer ou erlenmeyer, lavando a tela com 200 mL de hidrxido de
sdio 1.25% (0,313M) para sistema automtico, injetar 150 mL - e algumas gotas de antiespumante.
Digerir em refluxo por exatamente 30 minutos a partir do incio da ebulio.
10.4. Transferir quantitativamente a quente sob vcuo em funil Bchner provido de tela de naylon ou
diretamente em cadinho de vidro borossilicato
10.5. Transferir quantitativamente o resduo com auxilio de gua quente para cadinho de vidro borossilicato
ou cadinho de Gooch contendo camada densa de fibras de silicato de alumnio ou fibras de xido de
alumnio (que no permita a passagem do resduo durante a filtrao). Lavar com pores de gua quente
e em seguida com aproximadamente 20 mL de lcool etlico p.a. e 20 mL de acetona p.a..
10.6. Levar para estufa a 105C at peso constante (4 a 6 horas). Retirar, esfriar em dessecador at
equilbrio com a temperatura ambiente e pesar.
10.7. Incinerar em mufla 550C a 600C por 2 horas. Retirar temperatura de 250C - 300C. Esfriar em
dessecador at equilbrio com a temperatura ambiente e pesar.
11. Clculo
Onde:
A Peso do cadinho + resduo, em grama
B Peso do cadinho + cinzas, em grama
12. Bibliografia
Analytical Chemists. Arlington: A.O.A.C., 1997. Bc 6-49.
81
Mtodos Analticos
Fibra Detergente
cido (F.D.A.)
MTODO N 20
Reviso: 2009
3 pginas
1. Introduo
A amostra digerida em soluo de detergente cido que solubiliza o contedo celular, a hemicelulose,
os minerais solveis e a maior parte da protena insolvel, deixando inalteradas as fraes de lignina e
celulose.
Usado como estimador da frao de difcil digesto do alimento.
2. Recomendaes
produtos qumicos.
3. Escopo
No aplicvel.
5. Definies
No aplicvel
6. Reaes
No aplicvel
7.1. Acetona (C
3
H
6
O) p.a.
2
SO
4
) p.a. (96% - 98%)
7.3. CTAB (brometo de cetil-trimetilamnio / C
19
H
42
BrN) p.a.
7.4. Soluo reagente de cido sulfrico 2 M
7.4.1. Preparo: Medir 30 mL de H
2
SO
4
p.a. e transferir para balo volumtrico de 1000 mL contendo
aproximadamente 500 mL de gua destilada. Esfriar, completar o volume e homogeneizar. Corrigir a
molaridade, se necessrio.
7.5. Soluo detergente cido
82
7.5.1. Preparo: Pesar 20 g de CTAB (brometo de cetil-trimetilamnio / C
19
H
42
BrN) p.a e adicionar em 1 litro
de soluo de H
2
SO
4
2 M. Agitar at a completa dissoluo.
7.6. Bquer de 600 mL forma alta ou erlenmeyer de 500 mL com junta esmerilhada
7.7. Cadinho de vidro borossilicato com placa porosa (90 a 150 micra) cap. 50 mL
7.9. Frasco Kitassato
7.10. Pisseta
8. Equipamentos
8.2. Bomba de vcuo
8.3. Conjunto para determinao de fibra bruta (unidade de refluxo)
8.4. Estufa de secagem 105
o
C (preciso 5
o
C)
9. Amostragem
A amostra deve ser previamente moda, no mnimo em malha de 1 mm e homogeneizada.
10. Procedimento
10.1. Pesar aproximadamente 1 g de amostra e transferir para tubo digestor do aparelho extrator de fibra.
10.2. Adicionar 100 mL de soluo de detergente cido, escorrendo-a lentamente pela parede do tubo,
evitando assim formao de muita espuma.
10.3. Colocar o tubo no bloco digestor a 150C, acoplado ao condensador de refluxo.
10.4. Aps atingir ebulio, reduzir a temperatura do bloco para 100C e controlar para que no forme
muita espuma; digerir por 1 (uma) hora.
10.5. Durante a digesto, observar se partculas de amostra aderem a parede do tubo acima do nvel da
soluo. Se isto ocorrer, levantar os condensadores e, com mnimo de gua destilada possvel, lavar a
parede do tubo, levando amostra que estiver aderida novamente para a soluo.
10.6. Terminada a digesto, filtrar amostra sob vcuo em cadinho de placa porosa, previamente tarado,
utilizando kitassato como auxlio. Transferir o contedo do tubo para o cadinho utilizando pisseta com
gua quente, tomando o cuidado de lavar bem o tubo de fibra para que toda amostra passe para o
cadinho.
10.7. Lavar o filtrado no mnimo por 3 vezes com gua destilada quente, tomando o cuidado de fechar o
vcuo, a cada vez que a gua destilada quente for adicionada, permitindo que fique de molho por 2
minutos.
10.8. Lavar, igualmente, o filtrado 2 vezes com acetona (30-40 mL), interrompendo o vcuo cada vez que
a acetona for adicionada ao filtrado, permitindo que fique de molho por no mnimo 15 a 30 segundos (2
minutos o ideal).
10.9. Retirar o cadinho do kitassato e secar em estufa por 4 a 6 horas a 105C ou at peso constante.
Deixar esfriar em dessecador e pesar
83
11. Clculo
Onde:
B Peso do cadinho, em grama
C Peso da amostra, em grama
12. Bibliografia
SILVA, Dirceu Jorge. Anlise de Alimentos Mtodos qumicos e biolgicos. 3. ed. 2006. p. 100-107
PEREIRA, Joo Ricardo Alves; ROSSI JR., Paulo. Manual prtico de avaliao nutricional de alimentos.
Piracicaba: FEALQ, s.d. p 3-4
84
Mtodos Analticos
Fibra Detergente
Neutro (F.D.N.)
MTODO N 21
Reviso: 2009
3 pginas
1. Introduo
A amostra digerida em soluo de detergente neutro que solubiliza o contedo celular, formado
principalmente de protenas, gorduras, carboidratos solveis, pectina e outros constituintes solveis em
gua. FDN corresponde s fraes de celulose, lignina e hemicelulose que no so digeridas e
correspondem a fibra diettica para no ruminantes.
2. Recomendaes
produtos qumicos.
3. Escopo
No aplicvel.
5. Definies
No aplicvel
6. Reaes
No aplicvel
7.1. Acetona (C
3
H
6
O) p.a.
7.2. Alfa amilase (estvel ao calor)
7.3. Borato de sdio (B
4
Na
2
O
7
.10H
2
O) p.a.
7.4. E.D.T.A. dissdico (C
10
H
12
CaN
2
Na
2
O
8
) p.a.
7.5. Fosfato dissdico (Na
2
HPO
4
) p.a.
7.6. Lauril sulfato de sdio (C
12
H
25
NaO
4
S) p.a.
7.7. Trietilenoglicol (C
6
H
14
O
4
) p.a.
85
7.8. Soluo detergente neutro
7.8.1. Preparo:
7.8.1.1. Pesar 18,61g de E.D.T.A. dissdico e 6,81 g de borato de sdio, transferir para bquer de 500 mL
contendo cerca de 300 mL de gua destilada; aquecer at a dissoluo; adicionar 30 g de lauril sulfato de
sdio e 10 mL de trietilenoglicol.
7.8.1.2. Pesar 4,56 g de fosfato dissdico e transferir para outro bquer de 500 mL, contendo cerca de 300
mL de gua destilada, aquecer at a dissoluo.
7.8.1.3. Misturar as solues 7.8.1.1 e 7.8.1.2, completar o volume para 1000 mL com gua destilada e
homogeneizar. O pH deve estar entre 6,9 e 7,1. Corrigir se necessrio com soluo de HCl 10% ou
soluo de NaOH 10%
7.9. Bquer de 600 mL forma alta ou erlenmeyer de 500 mL com junta esmerilhada
7.10. Cadinho de vidro borossilicato com placa porosa (90 a 150 micra) cap. 50 mL
7.12. Frasco Kitassato
7.13. Pisseta
8. Equipamentos
8.2. Bomba de vcuo
8.3. Conjunto para determinao de fibra bruta (unidade de refluxo)
9. Amostragem
Recomenda-se desengordurar amostras com teor de extrato etreo acima de 3%.
Para amostras com valores elevados de amido, aumentar a quantidade de alfa amilase.
A amostra deve ser previamente moda, no mnimo em malha de 1 mm e homogeneizada.
10. Procedimento
10.1. Pesar aproximadamente 1 g de amostra e transferir para tubo digestor do aparelho extrator de fibra.
10.2. Adicionar 100 mL de soluo de detergente neutro e algumas gotas de soluo antiespumante,
escorrendo-as lentamente pela parede do tubo, evitando assim formao de muita espuma. Adicionar
tambm 0,5 mL de alfa amilase.
10.3. Colocar o tubo no bloco digestor a 150C, acoplado ao condensador de refluxo. Aps atingir ebulio
reduzir a temperatura do bloco para 100C e controlar para que no forme muita espuma; digerir por 1
(uma) hora.
10.4. Durante a digesto observar se partculas de amostra aderem a parede do tubo acima do nvel da
soluo. Se isto ocorrer, levantar os condensadores e, com mnimo de gua destilada possvel, lavar a
parede do tubo, levando amostra que estiver aderida novamente para a soluo.
10.5. Terminada a digesto, filtrar amostra sob vcuo em cadinho de placa porosa, previamente tarado,
utilizando kitassato como auxlio. Transferir o contedo do tubo para o cadinho utilizando pisseta com
gua quente, tomando o cuidado de lavar bem o tubo de fibra para que toda amostra passe para o
cadinho.
86
10.6. Lavar o filtrado no mnimo por 3 vezes com gua destilada quente, tomando o cuidado de fechar o
vcuo, a cada vez que a gua destilada quente for adicionada, permitindo que fique de molho por 2
minutos.
10.7. Lavar, igualmente, o filtrado 2 vezes com acetona (30-40mL) , interrompendo o vcuo cada vez que
a acetona for adicionada ao filtrado, permitindo que fique de molho por no mnimo 15 a 30 segundos.
10.8. Retirar o cadinho do kitassato e secar em estufa por 4 a 6 horas a 105C ou at peso constante.
Deixar esfriar em dessecador e pesar.
11. Clculo
Onde:
B Peso do cadinho, em grama
12. Bibliografia
VAN SOEST, P.J,; ROBERTSON J.B.; LEWIS, B.A. Methods for dietary fiber, neutral, s.d.
J. DAIRY SCI. Detergent fiber and non-starch polysaccharides inrelation to animal nutrition, v.74, 1991, p.
3583 3597
87
Mtodos Analticos
Flor - Mtodo
Potenciomtrico I
MTODO N 22
Reviso: 2009
5 pginas
1. Introduo
O eletrodo de fluoreto um sensor on seletivo. O elemento principal do eletrodo de fluoreto um
monocristal de fluoreto de lantnio, que estabelece um potencial entre a soluo de fluoreto interna do
eletrodo e a soluo cuja concentrao pretende-se determinar. O cristal entra em contato com a amostra
em uma face e uma soluo interna de referncia com a outra face. A atividade do on depende da fora
inica total, do pH e das espcies complexantes do on fluoreto na soluo. A adio de um tampo
adequado permite manter a fora inica uniforme e constante, ajustar o pH e liberar o on fluoreto dos
complexos existentes.
2. Recomendaes
produtos qumicos.
3. Escopo
Fosfatos naturais, industrializados e misturas que os contenham.
O mtodo potenciomtrico com eletrodo de on seletivo de fluoreto adequado para concentraes de
on fluoreto acima de 0,2 mg/L. A adio de soluo tampo elimina algumas interferncias e, nestes
casos, evita-se a destilao prvia. As vantagens deste mtodo so: alta seletividade, simplicidade e
rapidez.
No aplicvel.
5. Definies
No aplicvel.
6. Reaes
No aplicvel.
7.1. cido actico (C
2
H
4
O
2
) p.a.
88
7.2. CDTA - cido 1,2 ciclohexylenediamino tetra actico- (C
14
H
22
N
2
O
8
.H2O) p.a.
7.5. Verde de bromocresol (C
21
H
14
Br
4
O
5
S) p.a.
7.6. Fluoreto de sdio (NaF) p.a.
7.7. Etanol (C
2
H
5
OH) p.a.
7.8. Soluo reagente de hidrxido de sdio 6M
7.8.1. Preparo: Pesar 24,6 g de NaOH p.a. em bquer. Dissolver com gua destilada.
Transferir quantitativamente para balo volumtrico de 100 mL. Esfriar, completar o volume e homogeneizar.
7.9. Soluo reagente de cido clordrico 1:1 v/v
7.9.1. Preparo: Diluir uma parte de HCl p.a. em uma parte de gua destilada. Esfriar e homogeneizar.
7.10. Soluo reagente de cido clordrico 100 g/kg
7.10.1. Preparo: Transferir 8,4 mL de HCl p.a. para balo volumtrico de 100 mL, contendo aproximadamente
70 mL de gua destilada. Esfriar e completar o volume.
7.11. Soluo padro de flor 1000 mg/L
7.11.1. Preparo: Pesar 2,21 g de NaF, previamente seco em estufa a 105C por 2 horas, seco em dessecador
por 30 minutos e transferir para balo volumtrico de 1000 mL. Dissolver com gua destilada, completar o
7.12.1. Preparo: Pipetar 50 mL da soluo padro 1000 mg/L e transferir para balo volumtrico de 500 mL.
Completar o volume com gua destilada e homogeneizar.
7.13. Solues padres de trabalho
7.13.1. Preparo: Definir os valores a utilizar na curva padro do equipamento, conforme a faixa de
concentrao das amostras. Pipetar volume igual a cada valor definido acima, da soluo padro 100 mg/
L e transferir a balo volumtrico de 100 mL. Completar o volume com gua destilada e homogeneizar.
NOTA: para realizar curva em mV ou mV relativo, os padres devem ser em razo decimal entre eles
(Ex.: 0,20; 2,0 e 20,0 mg/L).
7.14. Soluo tampo TISAB IV pH 5,3-5,4
7.14.1. Preparo: Em bquer de 500 mL, dissolver em gua destilada e deionizada 145 g de NaCl p.a.,
142,5 mL de cido actico p.a., 10 g de CDTA. Ajustar o pH em 5,3-5,4 com NaOH 6M, transferir
quantitativamente para balo volumtrico de 1000 mL e completar o volume com gua destilada e deionizada.
O pH final dever ser 5,3 a 5,4.
Obs: No preparo da soluo tampo, a temperatura deve ser controlada, pois o CDTA decompe-se em
temperaturas superiores a 55C.
7.15. Soluo indicadora de verde de bromocresol 1 g/kg
7.15.1. Preparo: Dissolver 0,1 g de verde de bromocresol p.a. em Etanol p.a.. Transferir quantitativamente
para balo volumtrico de 100 mL e completar o volume (pH = 3,8 cor amarela; pH = 5,4 cor azul).
7.17. Bquer
8. Equipamentos
89
8.4. Potencimetro com escala em mV ou concentrao.
8.5. Eletrodo de pH
9. Amostragem
10. Procedimento
As condies de leitura potenciomtrica da amostra, tais como tempo de estabilizao, temperatura da
soluo e agitao so as mesmas utilizadas na preparao da curva de calibrao.
10.1. Confeco da curva padro do equipamento.
Proceder conforme abaixo, ou seguir orientaes especficas do Manual do equipamento.
10.1.1. Em balo volumtrico de 100 mL, adicionar 10 mL de soluo TISAB IV e completar o volume com
gua destilada e deionizada.
10.1.2. Transferir para bquer de 100 mL e mergulhar os eletrodos de on especfico e de referncia.
Manter velocidade de agitao constante (utilizar a mesma velocidade para leitura da amostra).
10.1.3. Utilizando micropipeta de 100 microlitros, acrescentar, sucessivamente, os volumes indicados na
tabela abaixo, anotando os potenciais desenvolvidos para cada volume adicionados.
Vol. Sol. padro (1000 mg/kg) Concentrao aps adio
100 microlitros 1 mg/kg
10.1.4. Traar a curva anotando os potenciais obtidos em ordenada e a concentrao em abcissa (papel
semilogartimico), ou ento, uma equao de regresso, na qual o coeficiente de correlao dever ser
prximo de 1000.
Havendo recurso no equipamento, as leituras e a curva podero ser realizadas diretamente em concentrao,
conforme orientao do fabricante.
10.1.5. Proceder prova de recuperao em fluoretos de clcio ou sdio, utilizando gua destilada e
deionizada.
10.2. Procedimento Analtico
10.2.1. Triturar e homogeneizar uma poro da amostra em gral. Pesar em cadinho de platina ou nquel de
0,25 a 0,5 g da amostra, dependendo do teor de flor esperado.
90
10.2.2. Adicionar aproximadamente 2,5 g de NaOH p.a.. Fundir a amostra (brandamente no incio) em
capela usando bico de Bunsen, at formao de uma pasta homognea. Tomar os cuidados necessrios
para evitar a projeo da amostra. Esfriar temperatura ambiente.
10.2.3. Transferir o cadinho com a amostra fundida para bquer de 600 mL, adicionar gua destilada e
deionizada de modo a cobri-lo e, aproximadamente 20 mL de HCl 1:1 v/v. Deixar em repouso at completa
solubilizao do resduo.
10.2.4. Transferir quantitativamente para balo de 250 ou 500 mL, sem filtrar. Acertar o pH no prprio balo,
com NaOH 6M e/ou HCl 100 g/kg, utilizando verde de bromocresol como indicador, de maneira que o pH
esteja entre 5,3 e 5,4. Completar com gua destilada.
10.2.5. Pipetar volumetricamente alquota de 50 mL para balo volumtrico de 100 mL. Adicionar 10 mL de
soluo TISAB IV. Completar o volume com gua destilada e deionizada. O pH desta soluo (soluo de
leitura) deve estar entre 5,3 e 5,4.
Transferir a soluo para bquer de 150 mL e proceder determinao potenciomtrica em escala mV,
com agitao constante e aps estabilizao (mnimo 3 minutos), fazer a leitura.
11. Clculos
O volume da alquota utilizado no considerado no clculo da concentrao do flor contido na amostra,
como tambm no considerado na preparao da curva.
Onde:
L Leitura de flor, obtida na curva de mV x conc, em mg/kg
S Volume do balo avolumado, em L
P Massa da amostra, em mg
A Volume da alquota utilizada da soluo estoque, em L
As leituras realizadas em mV so transformadas em mg/kg empregando o grfico ou a equao de
regresso.
12. Bibliografia
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Mtodos Fsico-Qumicos para Anlise de Alimentos. 4. ed. Braslia: Instituto
Adolfo Lutz, 2005. Minerais e Contaminantes Inorgnicos, c. XXIII. p. 737 -754
91
Mtodos Analticos
Flor Mtodo
Potenciomtrico II
MTODO N 23
Reviso: 2009
4 pginas
1. Introduo
O eletrodo de fluoreto um sensor on seletivo. O elemento principal do eletrodo de fluoreto um
monocristal de fluoreto de lantnio, que estabelece um potencial entre a soluo de fluoreto interna do
eletrodo e a soluo cuja concentrao pretende-se determinar. O cristal entra em contato com a amostra
em uma face e uma soluo interna de referncia com a outra face. A atividade do on depende da fora
inica total, do pH e das espcies complexantes do on fluoreto na soluo. A adio de um tampo
adequado permite manter a fora inica uniforme e constante, ajustar o pH e liberar o on fluoreto dos
complexos existentes.
2. Recomendaes
produtos qumicos.
3. Escopo
O mtodo potenciomtrico com eletrodo de on seletivo de fluoreto adequado para concentraes de
on fluoreto acima de 0,2 mg/L. A adio de soluo tampo elimina algumas interferncias e, nestes
casos, evita-se a destilao prvia. As vantagens deste mtodo so: alta seletividade, simplicidade e
rapidez.
No aplicvel.
5. Definies
No aplicvel.
6. Reaes
No aplicvel.
7.1. cido ctrico (C
6
H
8
O
7
. H
2
O) p.a.
92
4
OH) p.a.
7.4. Azul de bromotimol p.a.
7.5. Fluoreto de sdio (NaF) p.a.
7.6. Etanol (C
2
H
5
OH) p.a.
7.7. Soluo de citrato neutro de amnio - pH 7,0
7.7.1. Preparo: Dissolver 370 g de cido ctrico p.a. em 1,5 L de gua destilada. Neutralizar com 345 mL
de hidrxido de amnio p.a. Esfriar e acertar o pH em 7,0 com soluo de Hidrxido de amnio 1+1 v/v,
ou soluo de cido ctrico 70 g/L. Armazenar e conferir periodicamente o pH, aceitando uma variao de
6,97 a 7,03.
7.8. Soluo reagente de cido ctrico 70 g/L
7.8.1. Preparo: Pesar 7,0 g de cido ctrico p.a. para cada 100 mL de soluo. Dissolver em gua destilada,
transferir para balo volumtrico, completar o volume com gua deionizada/destilada e homogeneizar.
7.9. Soluo reagente de hidrxido de amnio 1+1 v/v
4
OH p.a. em uma parte de gua destilada.
7.10.1. Preparo: Pesar 2,21 g de NaF, previamente seco em estufa a 105C por 2 horas, seco em dessecador
por 30 minutos e transferir para balo volumtrico de 1000 mL. Dissolver com gua destilada, completar o
7.11.1. Preparo: Pipetar 50 mL da soluo padro 1000 mg/L e transferir para balo volumtrico de 500 mL.
Completar o volume com gua destilada e homogeneizar.
7.12.1. Preparo: Definir os valores a utilizar na curva padro do equipamento, conforme a faixa de
concentrao das amostras. Pipetar volume igual a cada valor definido acima, da soluo padro 100 mg/
L e transferir a balo volumtrico de 100 mL. Completar o volume com gua destilada e homogeneizar.
NOTA: para realizar curva em mV ou mV relativo, os padres devem ser em razo decimal entre eles
(Ex.: 0,20; 2,0 e 20,0 mg/L).
7.13. Soluo indicadora de azul de bromotimol 1,0 g/L
7.13.1. Preparo: Dissolver 0,1 g de azul de bromotimol em 20 mL de etanol p.a.. Transferir para balo
volumtrico de 100 mL, completar o volume com gua destilada/ deionizada e homogeneizar.
7.15. Bquer
8. Equipamentos
8.4. Potencimetro com escala em mV ou concentrao.
8.5. Eletrodo de pH
93
9. Amostragem
10. Procedimento
As condies de leitura potenciomtrica da amostra, tais como tempo de estabilizao, temperatura da
soluo e agitao so as mesmas utilizadas na preparao da curva de calibrao.
10.1. Confeco da curva padro do equipamento. Proceder conforme abaixo, ou seguir orientaes
especficas do Manual do equipamento.
10.1.1. Em mV ou mV Relativo
10.1.1.1. Adicionar 20 mL dos respectivos padres de trabalho em 3 bqueres de 50 mL identificados e 20
mL de soluo tampo de citrato neutro de amnio 1+1 v/v.
10.1.1.2. Acertar em zero com o padro intermedirio (relao mV), com agitao constante. Deixar
estabilizar e em seguida ler o padro inferior e superior, que sero respectivamente positivo e negativo.
10.1.1.3. Plotar as leituras em grfico (monolog) ou fazer uma equao de regresso (logaritmo da
concentrao x mV). O coeficiente de correlao deve estar prximo de 1,0000.
10.1.2. Em concentrao
10.1.2.1. Medir volumetricamente 20 mL dos respectivos padres de trabalho em, no mnimo 3 bqueres
de 50 mL identificados, outro com 20 mL de gua (zero) e adicionar 20 mL de soluo tampo de citrato
neutro de amnio 1+1 v/v.
10.1.2.2. Adicionar os padres em seqncia crescente, sob agitao constante. Aps a estabilizao,
realizar os ajustes necessrios nos valores.
10.1.3. Aps estabelecer a curva padro, conferir com uma amostra de controle, com teor conhecido.
10.2. Procedimento Analtico
10.2.1. Pesar de 0,5 a 5,0 g de amostra e transferir para bquer.
10.2.2. Adicionar 5 mL de HCl p.a., aquecer brandamente e adicionar gua destilada at 100 mL.
NOTA: no deixar entrar em ebulio.
10.2.3. Adicionar lentamente soluo de hidrxido de amnio 1+1 v/v para precipitao dos metais (at a
turvao da soluo).
10.2.4. Adicionar de 4 a 5 gotas de soluo indicadora de azul de bromotimol e soluo de cido ctrico 70
g/L para complexao dos metais, at a viragem de azul para amarelo.
10.2.5. Transferir quantitativamente para balo volumtrico, sem filtrar. Completar o volume com gua destilada
e homogeneizar.
10.2.6. Pipetar volumetricamente uma alquota de 20 mL, transferir para bquer e adicionar 20 mL de
soluo de citrato neutro de amnio pH 7,0.
10.2.7. Proceder leitura potenciomtrica em mV ou concentrao (mg/kg), com agitao constante e
aps estabilizao (mnimo 3 minutos).
11. Clculos
O volume da alquota utilizado no considerado no clculo da concentrao do flor contido na amostra,
como tambm no considerado na preparao da curva.
As leituras realizadas em mV so transformadas em mg/kg empregando o grfico ou a equao de
regresso.
94
Onde:
L Leitura de flor (mg/kg)
S Volume do balo utilizado, em mL
P Massa da amostra, em grama
12. Bibliografia
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Mtodos fsico-qumicos para anlise de alimentos. 4. ed. 2005. p. 364.
95
Mtodos Analticos
Fsforo Solvel em
cido Ctrico 2%
MTODO N 24
Reviso: 2009
3 pginas
1. Introduo
Consiste em solubilizar o fsforo da amostra numa soluo de cido ctrico a 20 g/L por agitao, com
posterior formao de complexo colorido entre o fosfato, vanadato e molibdato de amnio, de cor amarela,
cuja absorbncia ou transmitncia medida entre 400 e 430 nm.
2. Recomendaes
produtos qumicos.
3. Escopo
No aplicvel.
5. Definies
No aplicvel.
6. Reaes
No aplicvel
3
) p.a.
7.2. Fosfato de potssio monobsico (KH
2
PO
4
) p.a.
7.3. Metavanadato de amnio (NH
4
VO
3
) p.a.
7.4. Molibdato de amnio ( (NH
4
)6Mo
7
O
24
.4H
2
O ) p.a.
7.5. cido ctrico (C
6
H
8
O
7
. H
2
O ) p.a.
7.6. Soluo reagente de cido ctrico 20 g/Kg
7.6.1. Pesar 20 g de cido ctrico p.a., solubilizar em gua destilada e transferir para balo volumtrico de
1000 mL. Completar o volume e homogeneizar.
96
7.7. Soluo reagente de Metavanadato de amnio 2,5 g/L
7.7.1. Pesar 2,5 g de metavanadato de amnio p.a. e solubilizar em 500 mL de gua destilada quente.
Esfriar e adicionar lentamente com agitao 350 mL de HNO3 p.a. Esfriar e transferir para balo volumtrico
de 1000 mL, completar o volume e homogeneizar. Estocar ao abrigo da luz.
7.8. Soluo reagente de Molibdato de amnio 50 g/L
7.8.1. Pesar 50g de molibdato de amnio p.a. e solubilizar em 500 mL de gua destilada quente (60/
70C). Esfriar e transferir para balo volumtrico de 1000 mL, completar o volume e homogeneizar. Estocar
ao abrigo da luz.
7.9. Reagente misto
7.9.1. Juntar 1 parte da soluo de metavanadato de amnio com 1 parte da soluo de molibdato de
amnio e homogeneizar. Esta juno poder ser realizada durante a solubilizao dos reagentes.
Recomendao: observar a correta temperatura de preparao, evitando a precipitao de um dos
reagentes.
7.10. Soluo padro de fsforo - 0,1 mg /mL
7.10.1. Preparo: Pesar exatamente 0,4394 g de KH2PO4 p.a., previamente seco em estufa a 105C por
duas horas. Solubilizar e transferir quantitativamente para balo volumtrico de 1000 mL. Adicionar
aproximadamente 500 mL de gua destilada. Completar o volume e homogeneizar. Cada mL desta soluo
contm 0,1 miligrama de fsforo.
7.11. Bales volumtricos ou garrafas Stohlman
7.12. Papel de filtro quantitativo, filtrao mdia
7.13. Espectrofotmetro ou Colormetro
7.14. Pipetas graduadas
8. Equipamentos
8.2. Agitador tipo Wagner ou similar ou agitador magntico
9. Amostragem
A amostra deve apresentar granulometria correspondente no mximo 0,425 mm (ABNT).
10. Procedimento
10.1. Confeco da Curva Padro:
10.1.1. Efetuar pelo menos 5 diluies de maneira a obter o intervalo de concentraes desejadas.
10.1.2. Pipetar volumetricamente, para bales de 100 mL, alquotas das solues preparadas, seguindo
os itens 10.2.4, 10.2.5 e 10.2.6 do procedimento analtico.
10.1.3. Fazer a equao de regresso entre as leituras de absorbncia ou transmitncia versus a
concentrao (mg) das solues. O ideal que a correlao esteja no mnimo em 0,999.
10.2. Procedimento analtico:
A colorao amarela do complexo formado possui estabilidade limitada, devendo ser obedecido o tempo
de espera para realizao das medies.
10.2.1. Pesar 1,0 g de amostra e transferir para um balo volumtrico de 250 mL ou garrafa Stohlman.
10.2.2. Adicionar 100 mL de soluo de cido ctrico 20 g/Kg.
97
10.2.3. Agitar durante 30 minutos velocidade de 30 rpm - 40 rpm (agitador tipo Wagner). Empregando-se
outro sistema, a velocidade deve ser branda, mas suficiente para provocar revoluo completa do material.
10.2.4. Completar o volume, homogeneizar e filtrar em papel filtro mdio.
10.2.5. Pipetar volumetricamente, para balo de 100 mL, alquota da soluo estoque de maneira que a
leitura esteja em uma faixa de 40% a 71% de transmitncia ou 0,100 a 0,800 de absorbncia.
10.2.6. Adicionar 20 mL do reagente misto. Completar o volume com gua destilada, homogeneizar e
aguardar no mnimo 10 minutos e no mximo 30 minutos para efetuar a leitura.
10.2.7. Fazer a leitura em absorbncia ou transmitncia aps zerar com o branco, usando comprimento de
onda de 420 nm ou o estabelecido entre 400 e 430 nm por meio de varredura do melhor pico de absorbncia.
10.2.8. Calcular atravs curva padro previamente elaborada ou usar equao de regresso para obteno
da concentrao de fsforo (mg) na alquota.
11. Clculos
Onde:
LA Leitura da amostra (abs ou T)
LP Leitura do padro (abs ou T)
C Concentrao de P na alquota, em mg
B Volume do balo, em mL
P Peso da amostra, em mg
A Volume da alquota, em mL
Onde:
PS Fsforo Solvel
Pt Fsforo Total
12. Bibliografia
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Mtodos fsico-qumicos para anlise de alimentos. 4. ed., 2005. p. 748.
A.O.A.C. - ASSOCIATIONS OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS. Official Methods of Analyses of the
Association of Analytical Chemists. 14. ed.,1984. p. 167.
98
Mtodos Analticos
Determinao de
Fsforo Total -
Colorimtrico I
MTODO N 25
Reviso: 2009
4 pginas
1. Introduo
contedo de fsforo. Em seguida procede-se formao de um complexo colorido entre o fosfato e os
reagentes vanadato e molibdato de amnio, de cor amarela, cuja absorbncia medida na faixa de 400 a
430 nm.
2. Recomendaes
produtos qumicos.
3. Escopo
Produtos ou subprodutos de origem animal, vegetal e mineral, raes e concentrados.
No aplicvel.
5. Definies
No aplicvel.
6. Reaes
3
) p.a.
2
PO
4
) p.a.
7.4. Metavanadato de amnio (NH
4
VO
3
) p.a.
7.5. Molibdato de amnio ((NH
4
)
6
Mo
7
O
24
.4H
2
O ) p.a.
7.6. Soluo reagente de cido clordrico 1+3 v/v
7.6.1. Preparo: Diluir 1 parte de HCl p.a. em 3 partes de gua destilada.
7.7. Soluo reagente de Metavanadato de amnio 2,5 g/L
99
7.7.1. Preparo: Pesar 2,5 g de metavanadato de amnio p.a. e solubilizar em 500 mL de gua destilada
quente. Esfriar e adicionar lentamente com agitao 350 mL de HNO
3
p.a. Esfriar e transferir para balo
volumtrico de 1000 mL, completar o volume e homogeneizar. Estocar ao abrigo da luz.
7.8. Soluo reagente de Molibdato de amnio 50 g/L
7.8.1. Preparo: Pesar 50 g de molibdato de amnio p.a. e solubilizar em 500 mL de gua destilada quente
(60/70C). Esfriar e transferir para balo volumtrico de 1000 mL, completar o volume e homogeneizar.
Estocar ao abrigo da luz.
7.9. Reagente misto
7.9.1. Preparo: Juntar 1 parte da soluo de metavanadato de amnio com 1 parte da soluo de molibdato
de amnio e homogeneizar. Esta juno poder ser realizada durante a solubilizao dos reagentes.
Recomendao: observar a correta temperatura de preparao, evitando a precipitao de um dos
reagentes.
7.10. Soluo padro de fsforo - 0,1 mg /mL
7.10.1. Preparo: Pesar exatamente 0,4394 g de KH
2
PO
4
p.a., previamente seco em estufa a 105C por
duas horas. Solubilizar e transferir quantitativamente para balo volumtrico de 1000 mL. Adicionar
aproximadamente 500 mL de gua destilada. Completar o volume e homogeneizar. Cada mL desta soluo
contm 0,1 miligrama de fsforo.
7.13. Bquer
7.19. Provetas
8. Equipamentos
8.2. Forno mufla
8.3. Fotocolormetro ou espectrofotmetro (400 a 430 nm)
9. Amostragem
10. Procedimento
10.1. Confeco da Curva Padro de Fsforo (soluo padro de fsforo)
10.1.2. Pipetar volumetricamente, para bales de 100 mL, alquotas das solues preparadas, seguindo
os itens 10.2.8 e 10.2.9 do procedimento analtico.
10.1.3. Fazer a equao de regresso entre as leituras de absorbncia ou transmitncia versus a
concentrao (mg) das solues. O ideal que a correlao esteja no mnimo em 0,999.
100
10.2. Procedimento analtico
A colorao amarela do complexo formado possui estabilidade limitada, devendo ser obedecido o tempo
de espera para a realizao das medies.
10.2.1. Para ingredientes e misturas minerais
10.2.1.1. De acordo com a concentrao estimada do metal na amostra, pesar de 1,0 a 3,0 g com
aproximao de 0,1 mg. Desenvolver paralelamente uma prova em branco e amostra de verificao,
contendo os mesmos volumes de reagente misto e gua destilada.
10.2.2. Para produtos e subprodutos de origem animal e vegetal, raes e concentrados
10.2.2.1. Proceder conforme o item 10.2.1.1, porm, realizar a pesagem da amostra em cadinho de
porcelana ou quartzo e calcinar por quatro horas a 550C.
10.2.3. Transferir a massa pesada em 10.2.1.1 ou a Matria Mineral obtida em 10.2.2.1 aps a calcinao,
para copo bquer ou erlenmeyer e adicionar 50 mL de soluo de cido clordrico 1:3.
NOTA: usar a soluo de HCl 1:3 para transferir a Matria Mineral obtida em 10.2.2.1.
10.2.4. Levar placa aquecedora, aquecer e reduzir a at 1/3 do volume inicial.
10.2.5. Transferir para balo volumtrico de capacidade adequada. Lavar o material com pores de gua
destilada e/ou deionizada at a completa transferncia da amostra.
10.2.6. Completar o balo com gua destilada e/ou deionizada, avolumar e homogeneizar. Filtrar se
necessrio, em papel de filtro de porosidade mdia.
10.2.7. Pipetar volumetricamente, para balo de 100 mL, alquota da soluo estoque de maneira que a
10.2.8. Adicionar 20 mL do reagente misto. Completar o volume com gua destilada, homogeneizar e
aguardar no mnimo 10 minutos e no mximo 30 minutos para efetuar a leitura.
10.2.9. Fazer a leitura em absorbncia ou transmitncia aps zerar com o branco, usando comprimento de
onda de 420 nm ou o estabelecido entre 400 e 430 nm por meio de varredura do melhor pico de absorbncia.
10.2.10. Calcular atravs curva padro previamente elaborada ou usar equao de regresso para obteno
da concentrao de fsforo (mg) na alquota.
11. Clculos
Onde
LB Leitura do padro (abs ou T)
B Volume do balo inicial, em mL
101
12. Bibliografia
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Mtodos fsico-qumicos para anlise de alimentos. 4. ed, 2005. p. 748.
Association of Analytical Chemists. 14. ed.,1984. p. 167.
102
Mtodos Analticos
Determinao de
Fsforo Total -
Colorimtrico II
MTODO N 26
Reviso: 2009
4 pginas
1. Introduo
contedo de fsforo. Os ons ortofosfato e molibidato condensam em soluo cida para dar o cido
molibdofosfrico (cido fosfomolibdico) que, por reduo seletiva produz uma cor azul devido ao azul de
molibdnio, cuja composio incerta. A intensidade da cor azul proporcional quantidade de fosfato
inicialmente incorporada ao heteropolicido.
2. Recomendaes
produtos qumicos.
3. Escopo
Produtos ou subprodutos de origem animal, vegetal e mineral, raes e concentrados.
No aplicvel.
5. Definies
No aplicvel.
6. Reaes
7.2. cido ntrico (HNO3) p.a.
2
SO
4
) p.a. (96% - 98%)
2
PO
4
) p.a.
7.5. cido 1-amino 2-naftol 4-sulfnico (C
10
H
9
NO
4
S) p.a. ou sulfato de p-metilaminofenol (C
14
H
20
N
2
O
6
S) p.a.
7.6. Molibdato de amnio ((NH
4
)
6
Mo
7
O
24
.4H
2
O ) p.a.
7.7. Bissulfito de sdio (NaHSO
3
) p.a.
103
7.8. Sulfito de sdio (Na
2
SO
3
) p.a.
7.9. Soluo reagente de cido clordrico 1+1 v/v
7.9.1. Preparo: Diluir 1 parte de HCl p.a. em 1 parte de gua destilada.
7.10. Soluo reagente de cido sulfrico 500 g/L
7.10.1. Preparo: Transferir cuidadosamente 266,5 mL de H
2
SO
4
p.a. para balo volumtrico de 1000 mL,
contendo aproximadamente 700 mL de gua destilada. Esfriar, completar o volume e homogeneizar.
7.11. Soluo padro de fsforo 0,1 mg/mL
7.11.1. Preparo: Pesar exatamente 0,4394 g de KH
2
PO
4
p.a
.
, previamente seco em estufa a 105
o
C por duas
horas. Solubilizar e transferir quantitativamente para balo volumtrico de 1000 mL. Adicionar
aproximadamente 500 mL de gua destilada e 10 mL de H
2
SO
4
500 g/L. Completar o volume e homogeneizar.
7.12. Soluo reagente de molibdato de amnio 25 g/L
7.12.1. Preparo: Pesar 12,5 g de molibdato de amnio p.a. e solubilizar em 100 mL de gua destilada .
Medir 150 mL de H
2
SO
4
500 g/L e transferir para balo volumtrico de 500 mL. Adicionar a soluo de
molibdato de amnio sobre a de cido sulfrico. Completar o volume com gua destilada e agitar
vigorosamente. Estocar em frasco mbar sob refrigerao.
7.13. Soluo reagente de bissulfito de sdio 150 g/L.
7.13.1. Preparo: Pesar 15 g de bissulfito de sdio p.a., solubilizar em gua destilada, transferir para balo
volumtrico de 100 mL , completar o volume e homogeneizar.
7.14. Soluo reagente de sulfito de sdio 200 g/L.
7.14.1. Preparo: Pesar 10 g de sulfito de sdio p.a., solubilizar em gua destilada, transferir para balo
7.15. Soluo reagente de cido 1-amino 2-naftol 4-sulfnico ou sulfato de p metilaminofenol
7.15.1. Preparo: Pesar 250 mg do reagente em bquer. Adicionar uma ou duas gotas de soluo de
bissulfito de sdio 150 g/L para formar uma pasta. Adicionar, transferindo para um balo de 100 mL, 97 mL
de soluo de bissulfito de sdio 150 g/L e 2,5 mL de soluo de sulfito de sdio 200 g/L. No havendo
completa dissoluo, adicionar mais soluo de sulfito de sdio 200 g/L, evitando-se o excesso. Descansar
por uma noite, filtrar com papel de filtro qualitativo filtrao rpida e estocar em frasco mbar.
7.16. Bales volumtricos de 10, 25 e 250 mL
7.18. Bquer de 250 mL ou 300 mL
7.24. Provetas
8. Equipamentos
8.2. Forno mufla
8.3. Fotocolormetro ou espectrofotmetro (700 a 730 nm)
104
9. Amostragem
10. Procedimento
A colorao azul do complexo formado possui estabilidade limitada, devendo ser obedecido o tempo
para realizao das medies.
10.1. Confeco da Curva Padro de Fsforo (soluo padro de fsforo)
10.1.2. Pipetar volumetricamente, para bales de 50 mL, alquotas das solues preparadas, seguindo os
itens 10.2.5, 10.2.6 e 10.2.7 do procedimento analtico.
10.1.3. Fazer a equao de regresso ou plotar as leituras de absorbncia (grfico milimetrado) ou
transmitncia (grfico semilog) versus a concentrao (mg) das solues.
No calcinar amostras inorgnicas ou que tenham na sua composio fosfatos que sofrem reduo nesta
faixa de temperatura.
Opcionalmente ao item 10.2.1 do procedimento analtico, poder ser efetuada pr-queima em placa
aquecedora ou bico de Bunsen, transferindo em seguida para o forno mufla (550/600C).
10.2.1. Pesar de 1 a 3 g da amostra em cadinho. Levar mufla e gradualmente aumentar a temperatura
(550/600C) at obteno de cinzas claras (3 horas no mnimo). Retirar 250/300C e esfriar em dessecador.
10.2.2. Com o auxilio de basto de vidro, transferir as cinzas obtidas para bquer de 250 mL ou 300 mL.
Lavar o cadinho com pequenas pores de soluo de HCl 1+1 totalizando 40 mL, em seguida lavar com
gua destilada, cobrir com vidro de relgio e levar placa aquecedora at que haja reduo de 1/3 do
volume. Esfriar.
10.2.3. Filtrar sobre papel de filtro qualitativo para balo volumtrico de 200 mL ou mais adequado
concentrao. Completar o volume com gua destilada e homogeneizar (soluo estoque).
10.2.4. Pipetar volumetricamente, para balo de 50 mL, alquotas da soluo estoque de maneira que a
10.2.5. Adicionar cerca de 25 mL de gua destilada e 5 mL de soluo de molibdato de amnio 2,5%.
Misturar girando o balo.
10.2.6. Adicionar 2 mL de cido 1-2-4 aminonaftolsulfnico ou sulfato de p-aminofenol e marcar o tempo.
Completar o volume, tampar e agitar. Preparar um branco contendo os mesmos volumes de molibdato de
amnio, cido 1-2-4 aminonaftolsulfnico ou sulfato de p-metilaminofenol e gua destilada.
10.2.7. Decorridos exatos 20 minutos, fazer a leitura em absorbncia ou transmitncia aps zerar com o
branco, usando 720 nm de comprimento de onda ou o estabelecido por meio de varredura.
10.2.8. Plotar a absorbncia (grfico milimetrado) ou transmitncia (grfico semilog) na curva padro
previamente elaborada ou usar equao de regresso para obteno da concentrao de fsforo (mg) na
alquota.
11. Clculos
105
Onde
LB Leitura do padro (abs ou T)
B Volume do balo inicial, em mL
12. Bibliografia
VOGEL, A.J. Anlise Inorgnica Quantitativa. 4. ed. Rio de Janeiro: Ed. Guanabara, 1981. p. 561.
PORTARIA N. 108, de 04 de setembro de 1991. Dirio Oficial da Unio, Seo 1. p. 19813. 17 de
setembro de 1991.
106
Mtodos Analticos
Glicdios
(Acares Redutores em
Glicose, No Redutores em
Sacarose, Amido e Lactose)
MTODO N 27
Reviso: 2009
5 pginas
1. Introduo
Neste grupo de compostos, que so hidratos de carbono, tm-se os mais variados tipos de substncias,
desde os monossacardeos, representados pela glicose e frutose, os dissacardeos dos quais os mais
frequentes em alimentos so sacarose e lactose, at os polissacardeos, como amido e celulose.
Os monossacardeos, glicose e frutose so acares redutores (isto sofrem oxidao doam eltrons)
por possurem grupo carbonlico e cetnico livres, capazes de se oxidarem na presena de agentes
oxidantes em solues alcalinas. Os dissacardeos, que no possuem essa caracterstica sem sofrerem
hidrlise prvia da ligao glicosdica, so denominados de acares no redutores. Ao sofrerem hidrlise
por cidos diludos ou pela ao da enzima invertase, liberam a glicose e a frutose e passam a ser
denominados acares invertidos, que possuem maior poder adoante e no formam cristais.
No mtodo, o cobre do reativo de Fehling (soluo alcalina de sulfato de cobre em tampo de tartarato
duplo de sdio e potssio) reduzido a xido cuproso.
2. Recomendaes
produtos qumicos.
3. Escopo
Aplicvel a produtos ou subprodutos de origem vegetal, raes, concentrados e lcteos.
No aplicvel.
5. Definies
No aplicvel
6. Reaes
7.1. Acetato de zinco ou sulfato de zinco p.a.
107
7.3. Azul de metileno p.a.
7.4. Ferrocianeto de potssio p.a.
7.5. Glicose anidra p.a.
7.6. Hidrxido de sdio p.a.
7.7. Fehling A (sulfato de cobre pentahidratado p.a.)
7.8. Fehling B (tartarato duplo de sdio e potssio p.a + hidrxido de sdio p.a.)
7.9. Soluo padro de glicose
7.9.1. Preparo: Pesar exatamente 0,500g de glicose, previamente seca em estufa a 70C, durante uma
hora. Transferir quantitativamente para balo volumtrico de 100mL com auxilio de gua destilada. Dissolver
bem e completar o volume. A soluo de glicose deve ser recentemente preparada.
7.10. Soluo de Fehling
7.10.1. Preparo Fehling A: Dissolver 34,639g de sulfato de cobre pentahidratado em gua destilada.
Transferir quantitativamente para balo volumtrico de 1000mL. Completar o volume com gua destilada e
homogeneizar.
7.10.2. Preparo Fehling B: Dissolver exatamente 173g de tartarato duplo de sdio e potssio (sal de
Rochelle) e 125 g de hidrxido de sdio em gua destilada. Transferir quantitativamente para balo
volumtrico de 1000mL. Completar o volume com gua destilada e homogeneizar.
7.10.3. Padronizao: Colocar na bureta a soluo padro de glicose. Transferir com pipeta volumtrica,
10 mL de cada soluo de Fehling (A e B) para um erlenmeyer de 250 mL. Adicionar 40 mL de gua
destilada e aquecer at ebulio. Titular com a soluo padro de glicose, sem agitao, at o aparecimento
de um precipitado de cor vermelho tijolo e o desaparecimento total da cor azul original. Mantendo a
ebulio, adicionar uma gota de azul de metileno a 1%, continuar a titulao at nova viragem
(desaparecimento total da cor azul). O consumo estimado da glicose aproximadamente 10 mL.
O tempo de titulao no deve ultrapassar trs minutos
Clculo:
7.11. Soluo Hidrxido de sdio 40%
7.11.1. Preparo: Dissolver 40 g de Hidrxido de Sdio p.a. em gua destilada. Transferir quantitativamente
para um balo volumtrico de 100 mL, esfriar, completar o volume e homogeneizar.
7.12. Ferrocianeto de Potssio 15%
7.12.1. Preparo: Dissolver 15 g de Ferrocianeto de Potssio p.a. em gua destilada. Transferir
quantitativamente para um balo volumtrico de 100 mL, completar o volume e homogeneizar.
7.13. Acetato de Zinco 30%
Acrescentar o acetato de zinco gua aos poucos, assim, a sua dissoluo ser mais rpida.
7.13.1. Preparo: Dissolver 30g de Acetato de Zinco p.a. em gua destilada. Transferir quantitativamente
para balo volumtrico de 100 mL, completar o volume e homogeneizar.
7.14. Soluo Indicadora de Azul de Metileno 1%
7.14.1. Preparo: Dissolver 1,0 g de Azul de Metileno em 10 mL de lcool Etlico p. a. Transferir com gua
destilada para um balo volumtrico de 100 mL, completar o volume e homogeneizar.
108
7.15. Balo volumtrico de 250mL e 100mL
7.16. Bureta de 50 mL
7.19. Pipetas volumtricas de 10 e 5 mL
8. Equipamentos
8.2. Banho-maria (60C)
9. Amostragem
10. Procedimento
10.1. Glicdios Redutores em Glicose (GRG)
10.1.1. Pesar em balana analtica 5g da amostra em bquer de 150 mL e dissolver com cerca de 50 mL
de gua.
10.1.2. Transferir para balo volumtrico de 250 mL, lavando bem o bquer.
10.1.3. Adicionar 5 mL da soluo de ferrocianeto de potssio 15% e 5 mL de soluo de acetato de zinco
30%. Agitar, completar o volume com gua destilada e deixar sedimentar por 15 minutos.
10.1.4. Filtrar em papel de filtro seco e receber o filtrado em erlenmeyer seco.
10.1.5. Titulao: Em erlenmeyer de 250 mL, pipetar volumetricamente 10 mL das solues de Fehling (A
e B). Adicionar 40 mL de gua destilada e aquecer at ebulio.
10.1.6. Colocar a soluo amostra na bureta e gotejar no erlenmeyer sem agitao, at o desaparecimento
da colorao azul. Mantendo a ebulio, adicionar de 1 a 2 gotas de azul de metileno a 1% e continuar a
titulao at que se forme um precipitado vermelho tijolo e a colorao azul desaparea totalmente. A
titulao no deve ultrapassar de 2 a 3 minutos.
10.2. Glicdios no Redutores em Sacarose
10.2.1. Transferir 50 mL do filtrado (da amostra) para um bquer de 250 mL. Adicionar 2 mL de cido
clordrico concentrado e levar a banho-maria a 60C por 60 minutos.
10.2.2. Esfriar e neutralizar com soluo de hidrxido de sdio 10%, (pH 7), usando papel de tornassol
como indicador.
10.2.3. Esfriar e completar o volume a 100 mL em balo volumtrico.
10.2.4. Filtrar em papel de filtro qualitativo para erlenmeyer seco.
10.2.5. Titulao: Proceder como para Glicdios Redutores em Glicose.
10.3. Amido
10.3.1. Pesar 5 g de amostra, adicionar 100 mL de gua destilada e misturar.
10.3.2. Adicionar 10 mL de cido clordrico concentrado. Aquecer a ebulio por 30 minutos.
10.3.3. Esfriar e neutralizar com hidrxido de sdio 40%, usando papel de tornassol como indicador.
10.3.4. Transferir para balo volumtrico de 250 mL e adicionar 10 mL de ferrocianeto de potssio 15% e
10 mL de acetato ou sulfato de zinco 30%. Agitar, esfriar e completar o volume do balo volumtrico com
gua destilada.
109
10.3.5. Filtrar em papel de filtro qualitativo para erlenmeyer seco.
10.3.6. Titulao: Proceder como para Glicdios Redutores em Glicose.
10.4. Lactose
10.4.1. Seguir o procedimento descrito para Glicdios Redutores em Glicose.
11. Clculo
11.1. Glicdios Redutores em Glicose:
Onde:
100 Porcentagem
250 Volume da soluo da amostra, em mL
T Titulo da soluo de fehling em acar redutor
V Volume de amostra gasto na titulao, em mL
11.2. Glicdios no Redutores em Sacarose
Onde:
100 Porcentagem
P Peso da amostra, em gramas
GRG Glicdios Redutores em Glicose
0,95 Fator de transformao de hexoses para sacarose
110
11.3. Amido
Onde:
100 Porcentagem
11.3.1. Quando a amostra s contiver amido, multiplicar o resultado por 0,90, que o fator de transformao
da glicose em amido:
11.3.2. Se a amostra contiver Sacarose:

11.3.3. Se a amostra contm sacarose e glicose:

11.4. Lactose
Onde:
100 Porcentagem
T Ttulo da soluo de fehling em acar redutor
1,39 Constante da Lactose
12. Bibliografia
anlise de alimentos, v.1. 4. ed. So Paulo: PROL, 2005. p. 125-130.
111
Mtodos Analticos
Granulometria
MTODO N 28
Reviso: 2009
2 pginas
1. Introduo
Este mtodo baseia-se na determinao das propores com que as partculas de diferentes dimenses
entram na composio da amostra.
2. Recomendaes
produtos qumicos.
3. Escopo
Mtodo aplicvel a produtos ou subprodutos de origem animal, vegetal, mineral e misturas que os
contenham.
No aplicvel.
5. Definies
No aplicvel.
6. Reaes
No aplicvel.
7.1. Conjunto de peneiras metlicas com tampa e fundo, com 20,3 cm de dimetro
7.2. Ar comprimido ou pincis para limpeza das peneiras
8. Equipamentos
8.2. Aparelho vibrador para peneiras
112
9. Amostragem
Moer e homogeneizar em almofariz se necessrio.
10. Procedimento
O nmero de peneiras e o tamanho das malhas devero ser estabelecidos conforme o tipo do produto.
A secagem da amostra em estufa 105C e posterior equilbrio com a temperatura ambiente
(aproximadamente 2 horas) antes da pesagem evitam a aderncia de partculas finas nas malhas, que
obstruem a passagem da amostra.
10.1. Pesar individualmente as peneiras e fundo.
10.2. Montar o conjunto de peneiras no aparelho vibrador, sobrepondo-as em ordem crescente de abertura
das malhas.
10.3. Pesar aproximadamente de 100 a 200 g da amostra e transferir para peneira superior do conjunto.
10.4. Tampar e fixar o conjunto no vibrador.
10.5. Ajustar o reostato do equipamento na posio 10 ou na regulagem recomendada pelo fabricante,
correspondente a 750 vibraes/minuto.
10.6. Ligar e deixar por um perodo de 10 minutos.
10.7. Pesar individualmente as peneiras e fundo com as fraes retidas.
11. Clculos
Onde
A Peso da peneira ou fundo + amostra retida, em grama
B Peso da peneira ou fundo, em grama
12. Bibliografia
setembro de 1991
113
Mtodos Analticos
Hidrlise cida -
Mtodo Direto
MTODO N 29
Reviso: 2009
3 pginas
1. Introduo
os acilgliceris, os cidos graxos livres, o colesterol, a lecitina, a clorofila, os alcois volteis, os leos
2. Recomendaes
produtos qumicos.
incndio.
3. Escopo
Aplicvel a produtos e subprodutos extrusados, lcteos e outros que exijam hidrlise cida devido ao
No aplicvel.
5. Definies
No aplicvel
6. Reaes
7.1. cido Clordrico p.a.
7.2. Celite 545 ou areia de diatomcea
7.3. Soluo de cido clordrico 40% (v/v)
7.3.1. Preparo: Adicionar cuidadosamente 400 mL de cido clordrico p.a. em um balo volumtrico de
1000 mL j com aproximadamente 500 mL de gua destilada. Esperar esfriar a temperatura ambiente e
completar o volume com gua destilada.
114
7.4. Balo de fundo chato de 250 mL com junta 24 X 40 ou erlenmeyer de 250 ou 500mL com boca
esmerilhada
7.5. Papel de filtro quantitativo faixa branca = 12,5 cm
7.6. Funil de vidro 60
o
7.7. Papel de filtro qualitativo = 12,5 cm
7.8. Proveta de vidro 50 mL
7.9. Bquer de vidro
8. Equipamentos
8.1. Aparelho digestor adaptado com condensador de bolas
9. Amostragem
importante secar bem o papel com resduo, pois a umidade dificulta a extrao.
10. Procedimento
10.1. Pesar aproximadamente 3g de amostra, transferir para balo ou erlenmeyer de boca esmerilhada.
Com auxlio de uma proveta adicionar 50mL da soluo de cido clordrico 40% agitando vagarosamente
para solubilizao, tomando o cuidado de no deixar amostra aderida a parede do frasco.
10.2. Adaptar o balo ou erlenmeyer ao condensador de bolas, verificar se a gua para refrigerao dos
condensadores est aberta e colocar em refluxo no aparelho digestor por 45 minutos, aps a soluo
entrar em ebulio, com agitaes ocasionais.
10.3. Terminado o tempo de digesto, lavar o condensador com pequenas pores de gua destilada
quente, retirar o recipiente do aparelho e tampar.
10.4. Levar a capela de exausto de gases, destampar o frasco, adicionar pequena poro de celite ou
areia diatomcea (aproximadamente 1 g) na soluo e agitar lentamente.
10.5. Filtrar, evitando perdas, sobre papel de filtro qualitativo, previamente umedecido com gua, lavando
o erlenmeyer com pores de gua destilada quente para retirar toda soluo do frasco.
10.6. Lavar o resduo com gua destilada (~400mL) quente at que o filtrado torne-se lmpido, em seguida
colocar o papel com o resduo retido em um bquer e secar por uma hora em estufa a 105C.
10.7. Aps secar e esfriar a temperatura ambiente, dobrar o papel envolvendo-o com outro papel de filtro
qualitativo, evitando perda de resduo (pode-se usar um grampeador de papis para fech-lo).
10.8. Proceder extrao conforme metodologia de extrato etreo soxhlet deste compndio, a partir do
item 10.3 do mtodo.
11. Clculo
115
Onde:
A Peso do balo ou copo + resduo (gordura), em grama
B Peso do balo ou copo vazio, em grama
C Peso da amostra inicial, em grama
12. Bibliografia
PROCEDIMENTO B. Diretiva Europia 98/64/CE. Journal Officiel des Communauts Europennes. 19 de
setembro de 1998.
116
Mtodos Analticos
ndice de
Dispersibilidade
Proteica
MTODO N 30
Reviso: 2009
4 pginas
1. Introduo
O ndice de dispersibilidade protica determina o quanto a protena presente na soja solvel em gua
nas condies do mtodo. O mtodo de PDI internacionalmente reconhecido como sendo eficaz e de
alta repetibilidade e reprodutividade. Consiste na solubilizao das protenas hidrossolveis e em sua
quantificao pelo mtodo de Kjeldahl.
2. Recomendaes
O cido Sulfrico prejudicial sade se inalado ou se entrar em contato com a pele e olhos, portanto a
soluo de catalisador lquido deve ser preparada em capela com o uso de luvas adequadas e culos de
segurana.
3. Escopo
A presente metodologia aplicvel a gros de soja modos, farelo de soja, sojas extrusadas, integrais e
semi-integrais, com ou sem gordura.
No aplicvel
5. Definies
No aplicvel
6. Reaes
As reaes envolvidas dependero do procedimento para determinao de protena adotado.
Usar somente reagentes de grau analtico, a no ser que especificado em contrrio.
7.2. Sulfato de Sdio Anidro p.a.
7.3. Sulfato de Cobre pentahidratado p.a.
7.4. Selenito de Sdio p.a.
117
7.5. Biftalato de Potssio - Padro Primrio p.a.
7.7. cido actico p.a.
7.8. lcool etilco 99,5GL
7.10. Soluo Alcalina Diluda (KOH 3% utilizado para correo de pH)
7.10.1. Preparo: Dissolver em bquer 3g de KOH p.a. com gua destilada ou similar e transferir para
balo volumtrico de 100 mL. Completar o volume e homogeneizar.
7.11. Soluo de cido Actico 3% (utilizado para correo de pH)
7.11.1. Preparo: Pipetar 3 mL de cido Actico p.a para dentro de um bquer contendo aproximadamente
60 mL de gua destilada ou similar. Transferir para balo volumtrico de 100 mL e completar o volume com
gua destilada ou similar.
7.12. Vermelho de Metila p.a.
7.13. Bloco digestor
7.14. Funil de Buckner
7.15. Kitassato
7.16. Algodo
7.17. Erlenmeyer de 250 ml
7.18. Balo Volumtrico de 100 mL
7.19. Tubo de centrfuga
7.21. Bquer de 600 mL de plstico
7.22. Pipeta volumtrica de 15 mL
7.23. Tubo para macro
8. Equipamentos
8.1. Liquidificador ou agitador (Waring Blender)
8.2. Centrfuga
8.3. Balana analtica ou semi-analtica
8.4. Destilador de protena Kjeldahl
8.5. Microbureta ou bureta semi-automtica calibrada
8.6. Repipetador com dosagem regulvel (dispenser)
8.7. Bomba de vcuo
9. Amostragem
10. Procedimento
10.1. Pesar 20g de amostra em um bquer de 600 mL de plstico.
10.2. Adicionar com proveta 300 mL de gua destilada ou similar neutra (pH entre 6,8 7,2). A temperatura
da gua deve estar em 25C, pois a dispersibilidade protica est diretamente relacionada com a
temperatura.
10.3. Acoplar o bquer com amostra ao agitador Waring Blender e agitar a aproximadamente 8500 rpm
por 10 minutos.
118
10.4. Retirar o bquer do agitador e deixar em repouso at decantao da amostra.
10.5. Transferir aproximadamente 40 mL do sobrenadante para um tubo de centrfuga.
10.6. Centrifugar por 10 minutos ou at que o sobrenadante esteja isento de partculas em suspenso.
10.7. Pipetar volumetricamente 15 mL do sobrenadante para tubo de macro.
10.8. Seguir o procedimento Kjeldahl ou procedimento Dumas para determinao de protena bruta.
11. Clculo
11.1. Mtodo Dumas
Onde
PD Protena dispersvel
V
Volume de HCl 0,1M gasto na titulao da amostra, em mL

V
Volume de HCl 0,1M gasto na titulao do branco, em mL

6,25 Fator de transformao de nitrognio em protena
M Molaridade da soluo de HCl
14 Massa molar do nitrognio
m Massa da amostra na alquota, em mg
11.2. Mtodo Kjeldahl
Onde
PD Protena dispersvel
V
Volume de NaOH 0,2M gasto na titulao, em mL

Fc
Fator de correo do NaOH 0,2M

V
Volume de H
2
SO
4
0,1M gasto na titulao, em mL
Fc
Fator de correo do H
2
SO
4
M
Molaridade da soluo de NaOH

M
Molaridade da soluo de H
2
SO
4
m Massa da amostra na alquota, em mg
119
11.3. ndice de dispersibilidade protica
12. Bibliografia
Chemists Society. AOCS revised, 1993. v. 1. Method Ba 10-65 (modificado)
AMERICAN ASSOCIATION OF CEREAL CHEMISTS. 2. ed. AACC, 1995. v. 2. Method 46-24 (modificado)
120
Mtodos Analticos ndice de Iodo
MTODO N 31
Reviso: 2009
4 pginas
1. Introduo
O ndice de iodo de um leo ou gordura a medida do seu grau de insaturao, considerando que o iodo
reage com as duplas ligaes; verifica-se que quanto maior o grau de insaturao, maior ser
proporcionalmente o ndice de iodo e reciprocamente, quanto maior a quantidade de iodo adcionada,
maior o nmero de duplas ligaes. O mtodo de Wijs aplicvel a todos os leos e gorduras normais
que no contenham ligaes duplas conjugadas. Cada leo possui um intervalo caracterstico do valor do
ndice de iodo. A fixao do iodo ou de outros halognios se d nas ligaes etilnicas dos cidos
graxos.
Os resultados so obtidos em termos de nmero de miligramas de iodo absorvidos por grama de amostra.
2. Recomendaes
produtos qumicos.
3. Escopo
Aplicvel a leos e gorduras de origem vegetal e animal.
No aplicvel.
5. Definies
No aplicvel.
6. Reaes
7.3. Dicromato de potssio (K
2
Cr
2
O
7
) p.a.
121
7.4. Iodeto de potssio (KI) p.a.
7.5. Clorofrmio p.a.
7.6. Soluo de Wijs
2
S
2
O
3
.5H
2
O) p.a.
7.8. Soluo reagente de iodeto de potssio 15%
7.8.1. Preparo: Dissolver 15 g de KI p.a. em gua destilada, fervida e fria. Transferir para balo volumtrico
de 100 mL, completar o volume com gua destilada, fervida e fria e homogeneizar.
7.9. Soluo indicadora de amido 1%
7.9.1. Preparo: Pesar 1 g de amido p.a. e transferir para bquer de 250 mL. Adicionar aproximadamente
50 mL de gua destilada e aquecer at ebulio. Esfriar. Transferir para balo volumtrico de 100 mL,
completar o volume com gua destilada e homogeneizar. Preparar esta soluo momentos antes do uso.
7.10.1. Preparo: Pesar 24,82 g de Na
2
S
2
O
3
.5H
2
O e 0,2g de carbonato de sdio anidro (Na
2
CO
3
). Dissolver
em bquer contendo aproximadamente 100 mL de gua destilada, fervida e fria. Transferir quantitativamente
e deixar em repouso durante 24 horas. Padronizar e estocar em frasco mbar
7.10.2. Padronizao: Pesar exatamente 0,2 g de dicromato de potssio (K
2
Cr
2
O
7
) p.a. previamente seco
em estufa a 105C por duas horas. Transferir para erlenmeyer de 250 mL com tampa esmerilhada.
Acrescentar aproximadamente 70 mL de gua destilada, fervida e fria. Adicionar 2 g de KI e solubilizar.
Adicionar 20 mL de cido clordrico 1 M. Tampar o erlenmeyer e estocar imediatamente ao abrigo da luz
por 10 minutos. Titular gotejando a soluo de tiossulfato de sdio 0,1 M at quase desaparecimento da
colorao amarela. Acrescentar 1 mL da soluo indicadora de amido 1% e continuar a titulao at
desaparecimento da colorao azul.
Clculo do Fator:
Onde:
P Peso do K
2
Cr
2
O
7
na alquota, em mg
V Volume da soluo de tiossulfato de sdio 0,1M gasto na titulao, em mL
M Molaridade da soluo de tiossulfato de sdio
49 Massa molar do K
2
Cr
2
O
7
dividido pela variao do NOX do mesmo elemento.
7.11. Balo volumtrico de 100 mL
7.13. Bureta (div. 0,05 mL)
7.14. Frasco de iodo mbar ou erlenmeyer mbar de 500 mL
7.15. Papel vegetal
122
8. Equipamentos
9. Amostragem
10. Procedimento
Fazer no mximo 3 amostras e 1 branco para no ultrapassar o tempo de reao.
Titular inicialmente o branco cujo gasto de soluo de tiossulfato de sdio 0,1 M deve ser de 47 a 51 mL,
em condies normais.
Dobrar o papel vegetal de maneira a ter o formato de um recipiente.
Peso da amostra conforme ndice de iodo esperado:
ndice de iodo esperado Peso da amostra (g)
< 5 3,0000
5 - 20 1,0000
21 - 50 0,4000
51 - 100 0,2000
101 - 150 0,1300
151 - 200 0,1000
10.1. Pesar a amostra isenta de umidade e impurezas em papel vegetal, conforme a porcentagem de iodo
esperada (acima).
10.2. Transferir para erlenmeyer mbar de 500 mL contendo 20 mL de clorofrmio p.a. e agitar at a
completa dissoluo da amostra.
10.3. Adicionar volumetricamente 25 mL da soluo de Wijs. Tampar e agitar vagarosamente at completa
homogeneizao.
10.4. Paralelamente preparar e conduzir uma prova em branco.
10.5. Deixar em repouso por 30 minutos ao abrigo da luz e temperatura aproximada de 25
o
C.
10.6. Decorrido o tempo de reao adicionar volumetricamente 20 mL da soluo de iodeto de potssio
15% (recm-preparada). Havendo necessidade para melhor visualizao da viragem, adicionar 100 mL de
gua destilada recentemente fervida e fria.
10.7. Titular lentamente com soluo de tiossulfato de sdio 0,1 M, com agitao constante at uma fraca
colorao amarela.
10.8. Adicionar 1 mL de soluo de amido 1% recentemente preparada e continuar a titulao at o
11. Clculos
123
Onde:
V
Volume da soluo tiossulfato de sdio 0,1M gasto na titulao do branco, em mL

V
Volume da soluo tiossulfato de sdio 0,1M gasto na titulao, em mL

Fc Fator de correo da soluo tiossulfato de sdio 0,1M
1 mL de tiossulfato de sdio equivale a 0,1269 g de iodo
12. Bibliografia
INSTITUTO ADOLFO LUTZ . Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz.: Mtodos qumicos e fsicos para
anlise de alimentos. 4. ed. So Paulo: PROL, 2005. p. 597-599
AMERICAN OIL CHEMISTS SOCIETY. Official methods and recommended praticces of the American Oil
Chemists Society. AOCS, 1990. AOCS Recommended Practice, Cd 1 -25.
124
Mtodos Analticos
Determinao de Iodo -
Via mida
MTODO N 32
Reviso: 2009
3 pginas
1. Introduo
Determinao de Iodo em Iodato de clcio e potssio.
Os sais iodatos, quando tratados com iodeto de potssio em meio cido, liberam iodo. O iodo liberado
pela ao do iodeto de potssio e cido sulfrico determinado por titulao com o tiossulfato de sdio.
2. Recomendaes
produtos qumicos.
3. Escopo
Mtodo aplicvel para Iodato de clcio e potssio.
No aplicvel.
5. Definies
No aplicvel.
6. Reaes
2
SO
4
) p.a. (d = 1,84 g/mL)
7.2. cido Clordrico HCl 1M
7.4. Dicromato de potssio (K
2
Cr
2
O
7
) p.a.
2
S
2
O
3
.5H
2
O) p.a.
7.7. Soluo reagente de Iodeto de Potssio 100 g/L
125
7.7.1. Preparo: Dissolver 50 g de KI p.a. em gua destilada, previamente fervida e resfriada. Transferir
para balo volumtrico de 500 mL, completar o volume com gua destilada, fervida e resfriada e
homogeneizar.
7.8. Soluo reagente de cido clordrico 1M
7.8.1. Preparo: Medir 85 mL de HCl p.a. e transferir para balo volumtrico de 1000 mL, contendo
7.9. Soluo de cido sulfrico 100 g/L
7.9.1. Preparo: Medir 5,6 mL de H
2
SO
4
p.a. e transferir para balo volumtrico de 100 mL, contendo
2
S
2
O
3
.5H
2
O p.a. e 0,2g de carbonato de sdio anidro (Na
2
CO
3
).
Dissolver em bquer contendo aproximadamente 100 mL de gua destilada, fervida e resfriada. Transferir
quantitativamente para balo volumtrico de 1000 mL, completar o volume com gua destilada, fervida e
resfriada. Homogeneizar e deixar em repouso durante 24 horas. Padronizar e estocar em frasco mbar.
7.10.2. Padronizao: Pesar 0,2 g de Dicromato de Potssio p.a. previamente seco em estufa por 2 horas
a 105C. Transferir para erlenmeyer de 250 ml com tampa esmerilhada. Acrescentar 70 ml de gua destilada,
fervida e fria. Adicionar 2 g de Potssio Iodeto p.a. e solubilizar. Adicionar 20 ml de cido Clordrico 1M.
Tampar o erlenmeyer e estocar imediatamente ao abrigo da luz por 10 minutos. Titular gotejando a soluo
de Tiossulfato de Sdio 0,1M at quase desaparecimento da colorao amarela. Acrescentar 1 ml da
soluo indicadora de amido 10g/l e continuar a titulao at o desaparecimento da colorao azul
Clculo da molaridade real
Onde
MR Molaridade real
m Massa do Dicromato de Potssio p.a., em mg
V Volume de Tiossulfato de sdio gasto na titulao, em mL
1 mL de Tiossulfato de sdio 0,1 M, equivale a 0,04904 g do Dicromato de Potssio p.a.
7.11. Soluo indicadora de amido 10 g/L
7.11.1. Preparo: Pesar 1g de amido p.a. e transferir para bquer de 250 mL. Adicionar aproximadamente
completar o volume com gua destilada e homogeneizar. Preparar momentos antes do uso.
8. Equipamentos
8.2. Bureta
8.3. Erlenmeyer com tampa esmerilhada
8.4. Pipeta graduada
8.5. Proveta
8.6. Bales Volumtricos.
126
9. Amostragem
10. Procedimento
10.1. Pesar 0,1 g da amostra previamente moda e homogeneizada. Transferir para erlenmeyer de 300
mL com tampa esmerilhada.
10.2. Adicionar 100 mL da soluo de KI 100g/L.
10.3. Adicionar 10 mL da soluo de H
2
SO
4
100 g/L.
10.4. Agitar at dissoluo e deixar em repouso por 10 minutos ao abrigo da luz.
10.5. Titular lentamente com soluo de tiossulfato de sdio 0,1 M at uma fraca colorao amarela.
10.6. Adicionar 1 mL da soluo de amido 10 g/L recentemente preparada e continuar a titulao at o
11. Clculos
Onde:
V Volume de Tiossulfato de Sdio 0,1M gasto na titulao, em mL
M Molaridade real da soluo de Tiossulfato de Sdio 0,1M
1 mL de Tiossulfato de sdio 0,1 M, equivale a 0,02116 g de Iodo.
12. Bibliografia
FARMACOPEIA PORTUGUESA VII. 2002. Mtodo Iodo (I
2
), v.2. p.318
127
Mtodos Analticos
Lignina
MTODO N 33
Reviso: 2009
3 pginas
1. Introduo
A lignina um polmero tridimensional encontrado na maioria das plantas terrestres, e que associado
celulose na parede celular tem como funo conferir rigidez, impermeabilidade e resistncia a ataques
microbiolgicos e mecnicos aos tecidos vegetais. Na alimentao animal a frao menos digestvel
das forrageiras em geral, desta maneira a lignina no digerida forma uma barreira fsica digesto dos
nutrientes contidos no interior das clulas.
2. Recomendaes
produtos qumicos.
3. Escopo
No aplicvel.
5. Definies
No aplicvel
6. Reaes
7.1. cido Sulfrico p.a.
7.2. Soluo de cido sulfrico 72%
7.2.1. Preparo: Em um balo volumtrico de 250 mL, contendo aproximadamente 40 mL de gua destilada,
adicionar 180 mL de cido sulfrico p.a. Adicionar lentamente o cido pelas paredes do balo, deixar a
soluo esfriar e completar o volume com gua destilada.
128
7.4. Cadinho de vidro borossilicato n.2 (porosidade 90 a 150 micra), cap. 50 mL
7.5. Dessecador com slica gel
8. Equipamentos
8.2. Bomba de vcuo
8.4. Mufla
9. Amostragem
10. Procedimento
10.1. Colocar o cadinho filtrante com o resduo da fibra em detergente cido em um bquer de 100 mL,
contendo aproximadamente 10 mL de cido sulfrico 72%. Adicionar 30mL de H
2
SO
4
72% dentro do
cadinho para umedecer a amostra.
10.2. Com um pequeno basto de vidro, mexer ocasionalmente para misturar a amostra e o cido e
permitir que o cido entre em contato com todas as partculas da amostra. Manter sempre a amostra
coberta de cido, durante 3 horas.
10.3. Aps as 3 horas, filtrar sob vcuo at esgotar e enxaguar abundantemente com gua quente, at a
retirada total do cido.
10.4. Levar o cadinho para estufa a 105C por 3 horas. Esfriar o cadinho em dessecador e pesar.
10.5. Em seguida, colocar o cadinho filtrante na mufla a 550C e queimar por 3 horas.
10.6. Remover o cadinho da mufla quando estiver abaixo de 250C. Esfriar em dessecador e pesar
novamente.
11. Clculo
Onde:
A Peso do cadinho vazio, em grama
B Peso do cadinho + lignina, em grama
C Peso do cadinho + cinzas, em grama
129
12. Bibliografia
130
Mtodos Analticos
Mangans -
Colorimetria
MTODO N 34
Reviso: 2009
3 pginas
1. Introduo
A determinao de Mangans por colorimetria utilizada como alternativa metodologia por
Espectrofotometria de Absoro Atmica.
Fundamenta-se na oxidao do mangans em meio cido. O periodato oxida lentamente os sais de
mangans a permanganato, com colorao caracterstica que medida colorimetricamente.
2. Recomendaes
Observar as precaues de segurana dos reagentes cido clordrico, cido ntrico e cido fosfrico.
3. Escopo
Mtodo aplicvel em sulfato de mangans e xidos de mangans.
No aplicvel.
5. Definies
No aplicvel.
6. Reaes
3
PO
4
) p.a.
3
) p.a.
7.4. Metaperiodato de potssio (KIO
4
) p.a.
7.5. Sulfato de mangans monohidratado (MnSO
4
.H
2
O) p.a.
7.6. Ampola padro de Mangans (1,000g 0,002).
7.7. Soluo padro de mangans
131
7.7.1. Preparo: Pesar exatamente 0,3076 g de MnSO
4
.H
2
O, solubilizar e transferir quantitativamente para
balo volumtrico de 100 mL. Completar o volume e homogeneizar. Cada mL desta soluo contm 1,0
mg de mangans.
7.9. Bquer
7.10. Bureta
7.11. Pipeta volumtrica
8. Equipamentos
8.2. Fotocolormetro ou Espectrofotmetro
9. Amostragem
10. Procedimento
10.1. Confeco da Curva Padro:
10.1.1. Transferir volumetricamente alquotas de 0,5 mL; 1,0 mL; 2,0 mL e 3,0 mL da soluo padro para
bquer de 600 mL.
10.1.2. Adicionar em cada alquota 100 mL de gua destilada, 10 mL de HNO
3
p.a., 10 mL de H
3
PO
4
p.a. e
0,5 g de KIO
4
.
10.1.3. Ferver por 10 minutos at que a soluo adquira colorao semelhante do permanganato.
10.1.4. Esfriar e transferir para balo volumtrico de 200 mL, completar o volume e homogeneizar.
10.1.5. Fazer as leituras em absorbncia aps zerar com o branco (todos os reagentes utilizados no
preparo da curva, exceto a soluo padro), usando 530 nm de comprimento de onda ou o estabelecido
por meio de varredura.
A alquota a ser tomada da soluo a ser analisada dever estar na faixa da curva padro.
10.2.1. Pesar 0,5 g da amostra previamente moda e homogeneizada. Transferir para bquer de 250 mL.
10.2.2. Adicionar 8 mL de HCl p.a., aquecer em placa aquecedora e evaporar at quase secura.
10.2.3. Dissolver em gua destilada e transferir quantitativamente para balo volumtrico de 500 mL,
completar o volume e homogeneizar. Filtrar, desprezando os primeiros 10 mL.
10.2.4. Retirar do filtrado uma alquota de 5 mL e transferir para bquer de 600 mL e prosseguir conforme
os passos 10.1.2, 10.1.3, 10.1.4 e 10.1.5.
11. Clculos
132
Onde:
LA Leitura da Amostra (abs)
LP Leitura do Padro (abs)
P Peso da Amostra na alquota, em mg
12. Bibliografia
ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS; HELRICH, Kenneth; AOAC INTERNATIONAL. Official
methods of analysis. 14. ed. Ed. Arlington, 1984
133
Mtodos Analticos
Matria Insaponificvel
MTODO N 35
Reviso: 2009
4 pginas
1. Introduo
Matria insaponificvel so substncias que freqentemente se encontram dissolvidas nas gorduras e
leos e que no podem ser saponificadas por tratamento usual com soda (NaOH), mas so solveis em
solventes normais para gorduras e leos. Incluem-se neste grupo de componentes, alcois alifticos de
alto peso molecular, esteris (sitosterol, colesterol, tocoferis), pigmentos e hidrocarbonetos.
Geralmente os nveis encontrados e aceitveis so:
Teor em leos vegetais em geral, entre 1 a 2%
leo de abacate: at 7% (avocatinas)
leo de caf: at 12% (lcoois diterpnicos)
2. Recomendaes
produtos qumicos.
3. Escopo
O mtodo aplicvel a gorduras e leos animais e vegetais, no sendo adequado para gorduras e leos
contendo quantidade excessiva de matria insaponificvel, como os leos marinhos. Este mtodo tambm
no aplicvel para alimentos com elevado teor de gordura.
No aplicvel.
5. Definies
No aplicvel.
6. Reaes
7.1. Etanol 95% (C
2
H
5
OH) p.a.
134
7.6. Soluo reagente de hidrxido de potssio 50% (p/v)
7.6.1. Preparo: Dissolver 100g de KOH p.a em gua destilada, esfriar e completar o volume para 200 mL.
7.7. Soluo volumtrica padronizada de hidrxido de sdio 0,02 M
7.7.1. Preparo: Pesar cerca de 0,82g de NaOH p.a. e dissolver em gua destilada. Transferir
quantitativamente para balo volumtrico de 1000 mL, completar o volume e homogeneizar.
7.7.2. Padronizao: Pesar exatamente 1,5 g de biftalato de potssio p.a. previamente seco em estufa a
105
o
C por duas horas. Dissolver em erlenmeyer com aproximadamente 75 mL de gua destilada. Adicionar
4 gotas de soluo indicadora de fenolftalena e titular gotejando a soluo de NaOH 0,02 M at colorao
levemente rsea.

Onde:
V Volume da soluo de NaOH 0,02M gasto na titulao, em mL
7.8. Soluo alcolica indicadora de fenolftalena 1%
7.8.1. Preparo: Dissolver 1,0 g de fenolftalena p.a. em aproximadamente 40 mL de gua destilada. Transferir
para balo volumtrico de 100 mL, completar o volume com etanol e homogeneizar.
7.9. Soluo de etanol 10%
7.9.1. Preparo: Misturar 10 mL de etanol p.a. 95% em 90 mL de gua destilada.
7.12. Bureta (div. 0,05 mL)
7.13. Condensador de refluxo
7.14. Erlenmeyer ou balo Soxhlet de 250 mL
7.15. Funil de separao de 500 mL
7.16. Funil de vidro haste curta
8. Equipamentos
8.2. Banho termosttico
8.3. Estufa de secagem com circulao de ar forada 100
o
C (preciso 5
o
C)
135
9. Amostragem
10. Procedimento
10.1. Pesar em erlenmeyer ou balo Soxhlet, 5 g da amostra bem homogeneizada.
10.2. Adicionar 30 mL de etanol 95% p.a. e 5 mL da soluo de KOH 50%. Ferver brandamente sob refluxo
durante uma hora ou at completa saponificao.
10.3. Adicionar 40 mL de etanol p.a. 95% e 40 mL de gua destilada para solubilizar a amostra saponificada.
10.4. Transferir a amostra fria para um funil de separao de 500 mL, lavando as paredes do erlenmeyer
com pequenas pores de ter de petrleo p.a., para retirada de toda a amostra.
10.5. Adicionar 50 mL de ter de petrleo p.a.. Agitar antes de tampar o funil de separao para a liberao
dos gases e, aps tampar, agitar vigorosamente durante 1 minuto. Deixar em repouso at que as fases se
separem.
10.6. Recolher a camada inferior em bquer para nova extrao e transferir a camada superior para um
segundo funil de separao.
10.7. Repetir os itens 10.5 e 10.6 por mais 6 vezes.
10.8. Lavar os extratos combinados no segundo funil de separao no mnimo 5 vezes, com pores de
25 mL de soluo de etanol p.a. 10%, agitando vigorosamente e desprezando a camada alcolica (inferior).
10.9. Transferir a frao etrea (superior), filtrando sobre papel de filtro para balo Soxhlet ou erlenmeyer
previamente tarado. Lavar o papel de filtro com pores de ter de petrleo p.a.
10.10. Recuperar o ter de petrleo em conjunto Soxhlet e evaporar o solvente remanescente em banho
termosttico. Completar a secagem em estufa com circulao de ar forada a 100
o
C por uma hora. Esfriar
em dessecador at equilbrio com a temperatura ambiente e pesar. Repetir a operao de secagem
durante 30 minutos at peso constante.
10.11. Aps a pesagem, dissolver o resduo em 50 mL de etanol previamente neutralizado, usando soluo
de fenolftalena 1% como indicador e temperatura aproximada de 50
o
C. Titular com soluo de hidrxido
de sdio 0,02 M at colorao rsea. Corrija a massa do resduo para cidos graxos livres contidos,
usando a seguinte relao: 1 mL de soluo de NaOH 0,02 M equivale a 0,0056 g de cido olico.
11. Clculos
Onde:
A Massa do resduo obtido aps a secagem, em grama
B Massa do cido graxo determinado por titulao. Fazer converso conforme abaixo,
antes de fazer o clculo da matria insaponificvel:
Peso cidos graxos (g) = mL gasto da soluo de NaOH 0,02 M x MR x 0,0056
136
12. Bibliografia
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz.: Mtodos qumicos e fsicos para
anlise de alimentos. 4. ed. So Paulo: PROL, 2005. p. 606-608
Chemists Society. AOCS, 1990. AOCS Official method, Ca 6a-40.
137
Mtodos Analticos
Cinzas ou
Matria Mineral
MTODO N 36
Reviso: 2009
2 pginas
1. Introduo
o resduo inorgnico resultante da queima da amostra a uma temperatura de 550 a 600C, fornecendo
dados da quantidade de minerais totais contidos nos produtos de origem vegetal, animal ou de misturas.
2. Recomendaes
Antes da aplicao do mtodo imprescindvel observar as condies de segurana operacional do
mtodo.
3. Escopo
Aplicvel a produtos ou subprodutos de origem animal, vegetal ou mineral, raes e concentrados.
No aplicvel.
5. Definies
No aplicvel
6. Reaes
No aplicvel
7.1. HNO
3
p.a. ou gua oxigenada 30 volumes
7.2. Cadinho ou cpsula de porcelana
8. Equipamentos
8.2. Forno mufla
138
9. Amostragem
A amostra deve estar homognea, devendo-se avaliar a necessidade de moagem prvia.
10. Procedimento
O resduo obtido na queima da amostra, pode no representar toda a substncia inorgnica, pois alguns
sais sofrem reduo ou volatilizao nesta faixa de temperatura.
10.1. Pesar o cadinho ou cpsula de porcelana, limpo e previamente calcinado em mufla a 550C - 600C
por 30 minutos e resfriado em dessecador at equilbrio com a temperatura ambiente.
10.2. Pesar de 2 a 3 g da amostra no cadinho ou cpsula.
10.3. Levar mufla e gradualmente aumentar a temperatura (550C - 600C) at obteno de cinzas claras
(3 horas no mnimo). Opcionalmente pode-se efetuar pr-queima em placa aquecedora ou bico de Bunsen,
transferindo em seguida para o forno mufla (550C - 600C).
10.4. No se obtendo cinzas claras aps o perodo mnimo de calcinao, recomenda-se a adio de 2
a 3 gotas de HNO
3
p.a. ou gua oxigenada 30 volumes e retorno ao forno mufla por mais uma hora.
10.5. Retirar a 250C - 300C, esfriar em dessecador at equilbrio com a temperatura ambiente.
10.6. Pesar.
11. Clculo
Onde:
A Peso do recipiente + resduo, em grama
B Peso do recipiente, em grama
12. Bibliografia
anlise de alimentos, v.1. 4.ed. So Paulo: PROL, 2005. P. 105 106
Analytical Chemists . Arlington: A.O.A.C., 1995. method 900.02. c. 44. p. 3
139
Mtodos Analticos
Matria Pr-Seca
MTODO N 37
Reviso: 2009
2 pginas
1. Introduo
O mtodo utilizado para produtos ou subprodutos de Origem animal e vegetal que apresentam teores
elevados de umidade impossibilitando determinados procedimentos analticos ou quando alteraes de
nutrientes ou perdas em condies ambientes.
2. Recomendaes
No aplicvel.
3. Escopo
Aplicvel a produtos ou subprodutos de origem animal e vegetal que apresentem teores elevados de
umidade, impossibilitando determinados procedimentos analticos ou quando ocorrem alteraes de
nutrientes ou perdas em condies ambientes.
No aplicvel.
5. Definies
Peso da bandeja refere-se ao peso da bandeja de alumnio vazia.
6. Reaes
No aplicvel.
7.1. Bandejas de Alumnio (22 X 16 X 6 cm)
8. Equipamentos
8.2. Estufa de secagem com renovao e circulao forada de ar 55 5C
140
9. Amostragem
Forragens verdes, silagens e tubrculos devem ser cortados com instrumento inoxidvel, antes da pr-
secagem.
10. Procedimento
10.1. Pesar aproximadamente 300g de amostra, dispondo-a de forma homognea em bandeja de alumnio
previamente tarada.
10.2. Colocar em estufa com renovao e circulao forada de ar a 55 5C por um perodo de 48 a 72
horas ou at que o material apresente consistncia quebradia, permitindo a moagem.
10.3. Retirar da estufa e deixar esfriar a temperatura ambiente at equilbrio com a umidade.
10.4. Pesar o conjunto bandeja + amostra.
11. Clculos
Onde:
A Peso da bandeja + amostra aps secagem, em grama
B Peso da bandeja, em grama
12. Bibliografia
SILVA, Dirceu Jorge, QUEIROZ, Augusto Csar de. Anlise de Alimentos Mtodos Qumicos e Biolgicos.
3.ed. Viosa: Ed. UFV, 2006. p. 23-29
141
Mtodos Analticos
Determinao de Metais por
Espectrofotometria de
Absoro Atmica (EAA) ou
Plasma de Argnio
Indutivamente Acoplado (ICP)
MTODO N 38
Reviso: 2009
4 pginas
1. Introduo
Baseia-se na extrao, por calcinao e/ou digesto cida, do elemento mineral contido na amostra e a
determinao da sua concentrao por meio da tcnica de absoro atmica.
2. Recomendaes
produtos qumicos.
3. Escopo
Mtodo aplicvel para determinao de Clcio, Magnsio, Sdio, Potssio, Cobalto, Cobre, Zinco, Ferro,
Mangans, Nquel, Cromo, Cdmio e Chumbo em ingredientes minerais e suas misturas, produtos ou
subprodutos de origem animal e vegetal, raes e concentrados.
No aplicvel.
5. Definies
No aplicvel.
6. Reaes
No aplicvel.
Podem-se usar padres diludos certificados (ampolas ou similar) para preparao dos pontos da curva
analtica. Recomenda-se no utilizar a soluo padro de 1000 mg/L (soluo estoque) para preparar as
solues de trabalho. Usa-se somente para preparar a soluo de 100 mg/L.
7.1 Soluo de HCl - 1:3 v/v.
7.1.1 Preparo: Diluir uma (1) parte de HCl p.a. em trs (3) partes de gua destilada / deionizada e
homogeneizar. Proceder exatamente na ordem descrita.
142
7.2. Soluo Matriz do elemento - 1000 mg/L
7.2.1. Preparo: Preparar atravs de Ampola padro, Padres primrios ou similares do elemento de
interesse. Soluo padro pronta poder ser adquirida, preferencialmente com Certificado.
Seguir orientaes do fabricante, quando aplicvel.
7.3. Soluo Padro do elemento - 100 mg/L
7.3.1. Preparo: Soluo padro pronta poder ser adquirida, preferencialmente com Certificado. Partindo
da Matriz de 1000 mg/L, realizar diluies proporcionais de 1:10 v/v. Transferir para balo volumtrico,
completar o volume com gua deionizada e/ou destilada e homogeneizar. Armazenar em frasco de
polietileno.
7.4.1. Preparo: Pipetar da soluo padro 100 mg/L do elemento e transferir para bales volumtricos,
pelo menos 3 diferentes alquotas, estabelecidas de acordo com a faixa tima de trabalho do elemento,
conforme orientao do fabricante. Pode-se usar a seguinte equao para calcular o volume a pipetar,
para as solues de trabalho desejadas:

NOTA: Partindo da soluo de 100 mg/L e utilizando balo final de 100 mL, o volume a pipetar ser igual
ao valor desejado.
Adicionar cido clordrico a cada balo, para atingir concentrao final de aproximadamente 10 mL/L do
cido. Completar os volumes com gua destilada e/ou deionizada e homogeneizar.
7.5. Branco
7.5.1. Preparo: Diluir em balo volumtrico de 100mL a mesma quantidade de cido clordrico contido na
alquota final da soluo da amostra. Se tiver sido utilizada substncia supressora, esta tambm dever
ser adicionada ao balo na mesma quantidade. Completar o volume com gua destilada e/ou deionizada
e homogeneizar.
7.6. Soluo supressora de trixido de lantnio 50 g/L Soluo a ser adicionada nas determinaes de
clcio (Ca), magnsio (Mg) e sdio (Na)
7.6.1. Preparo: Pesar exatamente 58,65g de trixido de lantnio. Sob refrigerao, lenta e cuidadosamente,
adicionar 250 mL de cido clordrico p.a. Esfriar, transferir e completar o volume com gua destilada e/ou
deionizada em balo volumtrico de 1000mL. Homogeneizar.
NOTA: por questo de segurana, poder utilizar o volume de cido clordrico, diludo em gua.
7.8. Cadinho de porcelana ou quartzo de 50mL
7.9. Copo bquer ou Erlenmeyer
8. Equipamentos
8.1. Balana Analtica (resoluo de 0,0001g)
8.2. Espectrofotmetro de absoro atmica (EAA) ou Plasma de Argnio Indutivamente Acoplado (ICP)
8.3. Forno Mufla
143
9. Amostragem
10. Procedimento
10.1. Para ingredientes e misturas minerais
10.1.1. De acordo com a concentrao estimada do metal na amostra, pesar de 0,5 a 5,0g com aproximao
de 0,1 mg. Desenvolver paralelamente uma prova em branco e amostra de verificao.
10.2. Para produtos e subprodutos de origem animal e vegetal, raes e concentrados
10.2.1. Proceder conforme o item 10.1, porm, realizar a pesagem da amostra em cadinho de porcelana
ou quartzo e calcinar por quatro horas a 550C.
10.3. Transferir a massa pesada em 10.1.2 ou a Matria Mineral obtida em 10.2.2 aps a calcinao, para
copo bquer ou erlenmeyer e adicionar 50 mL de soluo de cido clordrico 1:3.
NOTA: usar a soluo de HCl 1:3 para transferir a Matria Mineral obtida em 10.1.2.
10.4. Levar placa aquecedora, aquecer e reduzir a at 1/3 do volume inicial.
10.5. Transferir para balo volumtrico de capacidade adequada. Lavar o material com pores de gua
destilada e/ou deionizada at a completa transferncia da amostra.
10.6. Completar o balo com gua destilada e/ou deionizada, avolumar e homogeneizar. Filtrar, se
necessrio, em papel de filtro de porosidade mdia.
10.7. Fazer outras diluies, se necessrio, adequando a concentrao do elemento na amostra curva
padro previamente estabelecida.
NOTA: igualar a adio de HCl entre os padres e a amostra.
Para as determinaes de clcio (Ca), magnsio (Mg) e sdio (Na), por EAA, adicionar 10 mL de trixido
de lantnio 50 g/L nas solues finais dos padres e amostras.
10.8. Colocar o EAA (combinao de gases, queimador, lmpada, comprimento de onda, fenda, chama
adequada) ou ICP, nas condies operacionais para determinao do elemento, conforme orientao do
fabricante.
10.9. Calibrar o aparelho com o branco e os padres. Conferir a calibrao, mediante a leitura da amostra
de verificao.
10.10. Fazer a leitura da concentrao da amostra.
11. Clculos
144
Onde:
C Concentrao do elemento na soluo da amostra, em mg/L
V Volume inicial da soluo da amostra, em mL
P Massa da amostra, em grama
FD Fator de diluio (volume balo / volume pipeta), em mL
12. Bibliografia
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Mtodos fsico-qumicos para anlise de alimentos. 4. ed., 2005. p. 740.
Association of Analytical Chemists. 14. ed., 1984. p. 164.
VOGEL, Arthur Israel. Anlise qumica quantitativa. 5. ed, 1992. p. 646-654.
preparao, purificao. 2. ed., 1972. p. 399, 414.
145
Mtodos Analticos
Micotoxinas (Aflatoxinas
B1, B2, G1 e G2,
Ocratoxina, Zearalenona e
Esterigmatocistina)
MTODO N 39
Reviso: 2009
8 pginas
1. Introduo
Micotoxinas so metablitos txicos produzidos por alguns fungos denominados de fungos toxignicos,
sendo os principais representantes os dos gneros Aspergillus, Penicillium e Fusarium, que infectam
produtos e subprodutos agrcolas.
Estas toxinas so carcinognicas, mutagnicas e teratognicas e, dependendo da dosagem, causam
doenas ou mesmo a morte quando ingeridas pelo homem ou pelos animais domsticos.
As Micotoxinas no so completamente removidas por processos de descontaminao industrial, por
isso a importncia do controle de qualidade. Entre as principais micotoxinas de interesse na rea de
alimentos citamos: aflatoxinas, patulina, ocratoxina, zearalenona, tricotecenos, fumonisinas entre outras.
As Micotoxinas determinadas por este mtodo so:
Aflatoxinas: produzidas por fungos do gnero Aspergillus flavus e Aspergillus parasiticus. Estes fungos
produzem vrios tipos de Aflatoxinas como B1, B2, G1, G2 e M1, entretanto, a Aflatoxina B1 a mais
freqente de todas e a mais potente em toxicidade. A aflatoxina M1 derivada da ingesto de aflatoxina (
B1, B2, G1, G2 ) ela encontrada no leite e seus derivados.
Porcentagem de Toxicidade das Aflatoxinas:
Aflatoxina B1 tem 100%;
Aflatoxina B2 tem 50%;
Aflatoxina G1 tem 25%;
Aflatoxina G2 tem 12,5%;
Esterigmatocistina: produzida por fungo do gnero Aspergillus versicolor e Aspergillus nidulans.
Ocratoxina: produzida por fungo do gnero Aspergillus ochraceus e vrias espcies do fungo Penicillium,
somente a Ocratoxina A de importncia toxicolgica.
Zearalenona: uma micotoxina estrognica produzida pelo fungo do gnero Fusarium graminearum e
Fusarium moniliforme.
2. Recomendaes
produtos qumicos e padres de toxinas.
146
3. Escopo
Aplicvel em milho, amendoim, trigo, triticale, cevada, centeio, farelos, canjicas, quireras, farinhas, raes
e outros tipos de alimentos destinados para consumo humano ou animal.
No aplicvel.
5. Definies
No aplicvel
6. Reaes
7.1. Acetato de Etila p.a.
7.2. Acetona p.a.
7.3. cido Frmico p.a.
7.5. cido Trifluoractico p.a.
7.6. Celite p.a.
7.7. Cloreto de Alumnio p.a.
7.8. Cloreto de Potssio p.a.
7.10. Dicromato de Potssio p.a.
7.11. Etanol p.a.
7.12. Metanol p.a.
7.13. Padres para Aflatoxinas, Ocratoxina, Esterigmatocistina e Zearalenona (Diludos)
7.14. Sulfato de Amnio p.a.
7.15. Sulfato de Cobre Penta Hidratado p.a.
7.16. Sulfato de Sdio Anidro p.a.
7.17. Toluol p.a.
7.18. Soluo de cido sulfrico 0,009M
7.18.1. Preparo: Pipete 1 mL de cido sulfrico e transfira para balo volumtrico de 2000 mL e complete
o volume com gua.
7.19. Soluo A (dicromato de potssio 0,25mM)
7.19.1. Preparo: Pese aproximadamente 78 mg (0,078 g) de dicromato de potssio previamente dessecado
e dissolva em 1000 mL de cido sulfrico 0,009M.
7.20. Soluo B (dicromato de potssio 0,125mM)
7.20.1. Preparo: Pipete 25 mL da soluo A e transfira para um balo de 50 mL e complete o volume com
soluo de cido sulfrico 0,009M.
7.21. Soluo C (dicromato de potssio 0,0625 mM)
147
7.21.1. Preparo: Pipete 25 mL da soluo B e transfira para balo de 50 mL e complete o volume com
soluo de cido sulfrico 0,009M.
7.22. Soluo de Cloreto de Potssio 4%
7.22.1. Preparo: Pesar 40g de Cloreto de Potssio e diluir em balo volumtrico de 1000 mL com gua
destilada
7.23. Soluo de Sulfato de Amnia 30%
7.23.1. Preparo: Pesar 300g de Cloreto de Amnia e diluir em balo volumtrico de 1000mL com gua
destilada.
7.24. Soluo de Sulfato de Cobre Penta Hidratado 10%
7.24.1. Preparo: Pesar 100g de Sulfato de Cobre e diluir em balo volumtrico de 1000 mL com gua
destilada.
7.25. Soluo de cido Sulfrico 20%
7.25.1. Preparo: Adicionar cuidadosamente 20 mL de cido Sulfrico concentrado em um bquer contendo
50 mL de gua. Aps esfriar completar o volume em balo volumtrico 100 mL com gua destilada.
7.26. Soluo de Cloreto de Alumnio 20%
7.26.1. Preparo: Pesar 20 g de Cloreto de Alumnio e dissolver em balo volumtrico de 100 mL com
lcool etlico a 74%.
7.28. Bquer de 600, 400, 50 mL
7.29. Cromatofolhas ou cromatoplacas de slica gel 20x20 cm e 0,25 mm de espessura
7.30. Cuba com tampa para Cromatografia em Camada Delgada
7.31. Esptula de alumnio
7.32. Frasco mbar ( 20ml)
7.33. Funil de separao tipo pra de 500 mL
7.34. Funil de vidro 11 e 5 cm
7.35. L de vidro
7.36. Micropipeta
7.37. Microseringa
7.38. Nebulizador de vidro de 150 mL (Sistema com ar comprimido ou semelhante)
7.41. Pipetador automtico
7.42. Proveta de 500, 250, 25 e 10 mL
8. Equipamentos
8.2. Banho Maria
8.3. Cmara Escura - Luz Ultra Violeta 366 nm
8.5. Liquidificador
8.6. Ultra-Som
9. Amostragem
148
10. Procedimento
10.1. Procedimento de verificao:
10.1.1. Avaliao de desempenho espectrofotmetro
10.1.1.1. Ler as absorbncias das solues 0,25 / 0,125 e 0,065 mM de dicromato de potssio, a 350nm,
usando como branco a soluo de cido sulfrico 0,009 M. Em seguida calcular separadamente, a
absortividade molar de cada uma das solues e o fator de correo do espectrofotmetro.
Clculo:
Onde:
A Absorbncia das solues de dicromato de potssio, calculadas separadamente.
C Concentrao das solues de dicromato de potssio em mM
Tirar a mdia dos 3 valores de absortividade molar:
Onde:
a Absortividade molar da soluo de dicromato de potssio 0,25 mM
b Absortividade molar da soluo de dicromato de potssio 0,125 mM
c Absortividade molar da soluo de dicromato de potssio 0,065 mM
Determinar o fator de correo (CF) para o espectrofotmetro substituindo na equao:
Onde:
3160 Valor de absortividade molar para solues de dicromato de potssio.
absortividade molar mdia
O intervalo de aceitabilidade do fator de correo (CF) o obtido entre 0,95 e 1,05. Se o valor do fator de
correo estiver fora do intervalo aceitvel, teste novamente o aparelho. Se o valor persistir, o aparelho
est descalibrado e necessita de reparo tcnico.
149
10.1.2. Checagem concentrao micotoxinas
10.1.2.1. Dissoluo dos padres de micotoxina em solventes:
Solvente 1 = metanol
Solvente 2 = tolueno-acetonitrila (9+1)
Solvente 3 = benzeno-cido actico (99+1)
Solvente 4 = benzeno
Solvente 5 = clorofrmio
Solvente 6 = tolueno
Solvente 7 = heptano
10.1.2.2. Aps a dissoluo dos padres de micotoxinas em seus respectivos solventes, ler as
absorbncias nos comprimentos de onda de mxima absoro e determinar a concentrao, usando os
dados fornecidos na tabela acima, atravs do seguinte clculo:
Onde:
A absorbncia
CF fator de correo do aparelho
PM peso molecular da micotoxina
absortividade molar da micotoxina
10.1.3. Procedimento analtico
10.1.3.1. Pesar 50 g de amostra moda e bater no liqidificador por 5 minutos com 270 mL de Metanol pa.
e 30 mL de Soluo Cloreto de Potssio 4%.
150
10.1.3.2. Filtrar qualitativamente toda a amostra e retirar, utilizando proveta, 150 mL do filtrado. Transferir
para um bquer de 600 mL. Adicionar 150 mL de Sulfato de Amnia 30% ( ou Soluo de Sulfato de Cobre
10%) e 10g de Celite, misturar com uma basto de vidro e filtrar qualitativamente.
Nota: para feijo, arroz e amendoim, use como clarificante a soluo de cobre 10% e para milho e mandioca,
a soluo de sulfato de amnia 30%.
10.1.3.3. Retirar 150 mL do filtrado e transferir quantitativamente para um funil de separao de 500 mL com
150 mL de gua destilada e 10 mL de Clorofrmio.
10.1.3.4. Agitar cuidadosamente por 3 minutos (abrindo a torneira do funil para aliviar o gs formado) e
deixar separar as fases. Se no houver separao, acrescentar mais 10 mL de Clorofrmio.
10.1.3.5. Recolher a fase do clorofrmio em um bquer 50 mL com funil contendo l de vidro e sulfato de
sdio. Repetir a extrao com 10 mL de clorofrmio . Em seguida, medir o volume em proveta e colocar
em frasco mbar para evaporar o clorofrmio em banho maria.
10.1.3.6. Diluir o produto da evaporao em clorofrmio de acordo com a convenincia (normalmente 300
l), utilizando micropipeta. Dissolver em ultra-som.
10.1.4. Triagem das micotoxinas
10.1.4.1. Aplicar 4 vezes na cromatoplaca 3, 5 ou 7l do extrato da amostra, utilizando microseringa.
Sobre uma das alquotas, aplicar uma quantidade adequada dos padres, geralmente 1l .
10.1.4.2. Colocar a cromatofolha em cuba de vidro, contendo a fase mvel tolueno-acetato de etila-cido
frmico (60+40+10).
10.1.4.3. Deixar eluir at restar aproximadamente 1 cm para atingir a borda superior da placa.
10.1.4.4. Retirar da cuba e deixar evaporar em capela.
10.1.4.5. Observar a placa em cmara escura e lmpada UV a nvel qualitativo, para verificar presena de
aflatoxina e ocratoxina.
10.1.4.6. Em seguida, nebulizar a placa com Cloreto de Alumnio 20% e levar estufa 105C por 3
minutos.
10.1.4.7. Decorrido o tempo de 3 minutos, observar novamente sob lmpada UV a possvel presena das
toxinas zearalenona e esterigmatocistina.
10.1.5. Quantificao
10.1.5.1. Aplicar, separadamente para cada micotoxina, volumes correspondentes a 3, 5, 7 e 10 l do
extrato da amostra e do padro.
10.1.5.2. Para quantificao de aflatoxinas, desenvolver as placas em acetona-clorofrmio (10:90).
10.1.5.3. Para quantificao de ocratoxina A desenvolver as placas em tolueno-acetato de etila-cido
frmico (50:40:10).
10.1.5.4. Para quantificao de zearalenona e esterigmatocistina, desenvolver as placas em tolueno-
acetato de etila-cido frmico (60:40:10), seguida de pulverizao com soluo de cloreto de alumnio
20%.
10.1.5.5. Compare a intensidade de fluorescncia da mancha da micotoxina da amostra com as do padro
e determine qual das manchas da amostra corresponde a uma das do padro. Se a intensidade da
fluorescncia da mancha de menor volume da amostra for maior que a do padro, a amostra dever ser
diluda e recromatografada.
10.1.6. Testes confirmatrios para aflatoxinas
10.1.6.1. A confirmao da micotoxina analisada poder ser realizada da seguinte maneira:
10.1.6.1.1. Reao com cido sulfrico: Pulverize a placa com H
2
SO
4
20%. Deixe secar e observe sob
lmpada UV. A fluorescncia da aflatoxina muda de azul ou verde para amarelo. Este teste somente
confirma a ausncia de aflatoxinas.
10.1.6.1.2. Reao com TFA (cido trifluoroactico): Marque uma placa, verticalmente, dividindo-a em
duas regies e em cada uma delas cromatografe dois pontos da amostra e dois do padro. Em uma das
151
regies sobreponha 1 l da soluo de TFA em um dos pontos da amostra e em um dos pontos dos
padres(em cima do spot de B
1
). Aquea a placa por 10 minutos a (35-40)C e desenvolva o cromatograma
com clorofrmio-acetona (85:15 ou 9+1). Examine a placa sob lmpada UV. A aflatoxina com TFA aparecer
em 1/3 do R
f
da aflatoxina original.
10.1.6.1.3. Testes confirmatrios para ocratoxina A:
a) mudana da fase mvel para hexano-acetato de etila-cido actico (10:30:10);
b) reao qumica: Exponha a placa com a mancha suspeita de conter ocratoxina A ao vapor de
amnia. A fluorescncia da ocratoxina A na luz UV passa de verde para azul brilhante com aumento da sua
intensidade.
c) derivatizao com trifluoreto de boro a 14% em metanol: Adicione 50 l deste composto ao
frasco com o resduo seco da amostra. Leve a uma placa aquecedora a 65C por 15 minutos. O resduo
do solvente deve ser removido usando nitrognio. Redissolva em volume adequado de acetonitrila para
a cromatografia. Aplique em uma placa, 10 l do extrato original da amostra e 10l do extrato que reagiu
com BF
3.
Desenvolva o cromatograma em benzeno-metanol-cido actico (18:1:1) e examine a placa sob
luz UV. O ster formado tem R
f
mais elevado do que o da ocratoxina A, mas com a mesma fluorescncia.
11. Clculo
Onde:
Conc Pd Concentrao do Padro, em g/mL
Vol apl Pd Volume aplicado do Padro, em L, comparado com aquele que
assemelha ao da amostra
Dil final do extrato Diluio final do extrato feita com clorofrmio, em L, depois da
evaporao
Vol apl am Volume aplicado da amostra, em L, comparado com aquele que
assemelha ao da amostra
Peso am Peso da amostra na partio, em grama
12. Bibliografia
AMAYA, Dlia B. Rodrigues; SOARES, Lcia Valente. Screening and quantification of ochratoxin A in corn,
peanuts, beans, rice and cassava. J. Assoc. Off. Anal. Chem., 1985. v. 68 p. 1128-1130.
AMAYA, Dlia B. Rodrigues; SOARES, Lcia Valente. Survey of Aflatoxins, Ochratoxin A, Zearalenone and
Sterigmatocystin in Some Brazilian Foods by using Multi-toxins thin-layer chromatografic Method. J. Assoc.
Off. Anal. Chem., 1989. v. 72. p. 22-26.
AOAC. Official Methods of Analysis.15.ed. 1990 c.49. p.1184-1213.
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Mtodos fsico-qumicos para anlise de alimentos. 4. ed. 2005. mtodo 407/IV.
152
Mtodos Analticos
Espectrofotometria de
Reflectncia no Infra
Vermelho Prximo (NIR)
MTODO N 40
Reviso: 2009
2 pginas
1. Introduo
A radiao no infravermelho prximo (NIR) utilizada principalmente para a determinao quantitativa
rotineira de espcies como gua, protenas, hidrocarbonetos de baixo peso molecular e gorduras em
produtos das indstrias agrcolas, alimentcias, petrolferas e qumicas. Tanto medidas de reflexo como
de transmisso so utilizadas, embora a reflectncia seja mais empregada. Suas absortividades molares
so pequenas e os limites de deteco esto na ordem de 0,1%.
A parte do espectro eletromagntico visvel ao olho humano se estende de 400 a 730 nm, enquanto que
o espectro eletromagntico do infravermelho (IV) vai de 2500 a 600000 nm. A regio intermediria entre o
IV e o espectro visvel denominada de infravermelho prximo.
2. Recomendaes
A estabilidade do equipamento pode ser interferida por variaes na corrente eltrica (picos de energia),
vibrao na bancada (local onde se encontra o aparelho instalado), corrente de ar.
A heterogeneidade das amostras tambm provoca interferncia nos resultados. De forma geral, as amostras
devem ser homogneas e consistentes com a amostra da calibrao.
3. Escopo
Aplicvel em amostras de origem orgnica.
Verificar manual especfico de cada equipamento.
5. Definies
Calibrao: Sugere-se que uma calibrao deve conter no mnimo 100 amostras, de acordo com a
recomendao do fabricante, com anlises via mida inserindo os resultados no espectro da amostra.
Considera-se que uma calibrao ideal deve apresentar um coeficiente de correlao
>
95%.
Amostra de referncia: aquela utilizada para verificar a calibrao do equipamento.
NIR: Near Infrared.
153
6. Reaes
No aplicvel.
7.1. Moinho
7.2. Clula de Leitura
7.3. Esptula
7.4. Pincel
8. Equipamentos
8.1. Espectrofotmetro de Infravermelho Prximo.
9. Amostragem
As amostras devem ser preparadas conforme a necessidade de cada equipamento (modo ou no modo),
considerando a homogeneidade como um fator importante para a representatividade da curva de calibrao.
10. Procedimento
10.1. Preparar a amostra.
10.2. Transferir a amostra previamente homogeneizada para a clula com auxlio da esptula.
10.3. Inserir a clula no equipamento e selecionar a curva de acordo com a amostra a ser analisada. O
incio da leitura ser selecionado de acordo com o manual do equipamento.
10.4. Ao trmino da leitura o programa apresentar o resultado.
11. Clculos
Cada programa realizar o clculo de acordo com a curva de calibrao.
12. Bibliografia
FOSS QUICK START GUIDE ISIscan
TM
. Infrasoft International 2001. ISIscan Website. ht t p: / / 216. 23. 177. 12/
ht ml / i si scan/ i si scan/ i si scanhome. ht m
PERKIN ELMER. Manual do equipamento FT NIR System.
SILVERSTEIN, Robert M. Identificao Espectromtrica de Compostos Orgnicos. 6. ed. Rio de janeiro:
LCT, 2000.
154
Mtodos Analticos
Nitrognio no
Proteico
MTODO N 41
Reviso: 2009
3 pginas
1. Introduo
A anlise de nitrognio no protico quantifica os compostos nitrogenados, como nitratos, nitritos, sais de
amnia, uria e outros compostos que no fazem parte da protena verdadeira dos alimentos. Precipita-se
todo o nitrognio orgnico da amostra com cido tricloroactico.
2. Recomendaes
O cido clordrico nocivo e prejudicial sade se inalado ou se entrar em contato com a pele e olhos,
portanto a soluo de HCl deve ser preparada em capela com o uso de luvas adequadas e culos de
segurana. A mesma regra se aplica ao uso do cido sulfrico, sendo que a soluo de catalisador lquido
deve ser tambm preparada em capela, observando os devidos cuidados de segurana.
O cido tricloroactico cancergeno e causa leses de pele. Deve ser manuseado com luva e necessrio
extremo cuidado no momento da pesagem.
3. Escopo
Amostras nitrogenadas de origem orgnica e inorgnica.
No Aplicvel
5. Definies
No Aplicvel
6. Reaes
7.1. cido tricloroactico p.a.
7.2. Soluo de cido Tricloroactico 20%
7.2.1. Preparo: Dissolver 200 g de cido tricloroactico p.a. em 1 L de gua destilada.
155
7.3. Solues usadas na anlise de Protena Bruta
7.4. Erlenmeyer de 250 mL com tampa
7.7. Funil de vidro
7.8. Papel filtro quantitativo (Whatman 541 ou faixa preta)
7.9. Tubo macro
7.10. Conjunto para digesto, destilao e titulao usados na anlise de Protena Bruta
8. Equipamentos
8.2. Refrigerador
9. Amostragem
10. Procedimento
Para forragens e alimentos concentrados energticos, recomenda-se tomar uma alquota de 20 mL.
10.1. Pesar 5,0 g de amostra com tamanho de partcula de 1 mm, em Erlenmeyer de 250 mL com tampa.
10.2. Adicionar volumetricamente 50 mL de gua destilada e agitar vigorosamente por 10 minutos.
10.3. Deixar a soluo em repouso por 30 minutos.
10.4. Adicionar volumetricamente 50 mL de soluo de cido tricloroactico 20% e deixar em refrigerador
por 3 horas.
10.5. Filtrar em papel de filtro quantitativo desprezando os primeiros 10 mL filtrados, coletar o filtrado
restante. Tomar cuidado para no misturar o sobrenadante com a amostra.
10.6. Homogeneizar o filtrado, pipetar volumetricamente 10 mL para tubo macro.
10.7. Determinar N-total na alquota seguindo procedimento analtico 1 ou 2, do mtodo n. 48 Protena
Bruta Mtodo Kjeldahl, para determinao de protena bruta.
11. Clculos
11.1. Clculo do procedimento 1 de Protena para NNP
Onde
Va Volume da soluo de HCl 0,1M gasto na titulao da amostra, em mL
Vb Volume da soluo de HCl 0,1 M gasto na titulao da prova em branco, em mL
M Molaridade da soluo de HCl
156
Fc Fator de correo do HCl 0,1M
Pa Peso da amostra na alquota, em mg
11.2. Clculo do Procedimento 2 de Protena para NNP
Onde
V
Volume da soluo de H
2
SO
4
0,1M gasto na titulao da amostra, em mL
V
Volume da soluo de NaOH 0,2M gasto na titulao da amostra, em mL

Fc
Fator de correo da soluo de H

2
SO
4
0,1M
Fc
Fator de correo da soluo de NaOH 0,2M

M
2
SO
4
M

P Peso da amostra na alquota, em mg
12. Bibliografia
A.O.A.C. Association of Official Agricultural Chemists. Official methods of analysis. 12. ed. Washington,
D.C., 1975.
KRISHNAMOORTHY, U.; MUSCATO, T.V.; SNIFFEN, C.J.; VAN SOEST, P.J. Nitrogen fractions in select
feedstuffs. J. Dairy Sci., v. 65, p.217-225, 1982.
157
1. Introduo
celulose.
O nitrognio insolvel em detergente cido (NIDA) aquele que permanece no resduo de fibra em
detergente cido. Eles podem estar presentes naturalmente nas plantas e, entretanto, ser considerados
uma estimativa dos danos causados pelo calor durante o armazenamento ou processamento. O nitrognio
em amostras excessivamente aquecidas normalmente indisponvel para os animais
2. Recomendaes
produtos qumicos.
3. Escopo
No aplicvel.
5. Definies
No aplicvel
6. Reaes
Digesto
Mtodos Analticos
Nitrognio Insolvel em
Detergente cido
(NIDA)
MTODO N 42
Reviso: 2009
3 pginas
158
No recipiente contendo a amostra digerida:
No recipiente com cido brico (onde ser recolhido o destilado):
Titulao

7.3. Papel de filtro previamente seco em estufa a 105C
7.4. Frascos de macro Kjeldahl
8. Equipamentos
8.1. Balana analtica (resoluo de 0,0001g )
8.2. Bomba de vcuo
9. Amostragem
10. Procedimento
10.1. Para a determinao do NIDA, utilizar o resduo obtido na anlise de FDA (fibra detergente cida),
mtodo n 20 deste compndio, substituindo no momento da filtrao o cadinho filtrante por papel de filtro
previamente seco em estufa a 105C por no mnimo 1 hora ou at peso constante.
10.2. No final do tempo de refluxo da amostra de FDA, filtrar em papel de filtro previamente seco e
pesado, sob vcuo mnimo.
10.3. Em paralelo fazer uma prova em branco, filtrando a soluo de FDA sobre um papel de filtro, para
calcular o nitrognio do papel e dos reagentes.
10.4. Dobrar o papel de filtro contendo a amostra, secar por trs horas ou at peso constante em estufa
a 105 C e repesar.
10.5. Registrar o peso (este peso necessrio para o clculo de FDA, mas no entra no clculo de
NIDA).
10.6. Inserir o papel de filtro mais a amostra em frascos de macro Kjeldahl e determinar o nitrognio,
conforme mtodo n 48 Protena Bruta Mtodo Kjeldahl. Faa o mesmo procedimento para o branco.
159
11. Clculo
Onde:
VA Volume de HCl 0,1M gasto na amostra, em mL
VB Volume de HCl 0,1M gasto na prova em branco, em mL
MR Molaridade real do HCl 0,1M
0,014 Unidade molar do nitrognio, em g/mol
P Peso da amostra original (usado na extrao do FDA), em grama
12. Bibliografia
SILVA, Dirceu Jorge. Anlise de Alimentos Mtodos qumicos e biolgicos, 3. ed. 2006. p. 120-122
160
Mtodos Analticos
Nitrognio Insolvel em
Detergente Neutro
(NIDIN)
MTODO N 43
Reviso: 2009
3 pginas
1. Introduo
celulose.
O nitrognio insolvel em detergente neutro (NIDN) aquele que permanece no resduo de fibra em
detergente neutro. Eles podem estar presentes naturalmente nas plantas e, entretanto, ser considerados
uma estimativa dos danos causados pelo calor durante o armazenamento ou processamento. O nitrognio
em amostras excessivamente aquecidas normalmente indisponvel para os animais
2. Recomendaes
produtos qumicos.
3. Escopo
No aplicvel.
5. Definies
No aplicvel
6. Reaes
Digesto
161
Titulao
7.3. Papel de filtro previamente seco em estufa a 105C
7.4. Frascos de macro Kjeldahl
8. Equipamentos
8.1. Balana analtica (resoluo de 0,0001g )
8.2. Bomba de vcuo
9. Amostragem
10. Procedimento
10.1. Para a determinao do NIDN, utilizar o resduo obtido na anlise de FDN (fibra detergente neutro),
mtodo n 21 deste compndio, substituindo no momento da filtrao o cadinho filtrante por papel de filtro
previamente seco em estufa a 105C por no mnimo 1 hora ou at peso constante.
10.2. No final do tempo de refluxo da amostra de FDN, filtrar em papel de filtro previamente seco e
pesado, sob vcuo mnimo.
10.3. Em paralelo fazer uma prova em branco, filtrando a soluo de FDN sobre um papel de filtro, para
calcular o nitrognio do papel e dos reagentes.
10.4. Dobrar o papel de filtro contendo a amostra, secar por trs horas ou at peso constante em estufa a
105C e repesar.
10.5. Registrar o peso (este peso necessrio para o clculo de FDN, mas no entra no clculo de NIDN).
10.6. Inserir o papel de filtro mais a amostra em frascos de macro Kjeldahl e determinar o nitrognio,
conforme mtodo n 48 Protena Bruta Mtodo Kjeldahl. Faa o mesmo procedimento para o branco.
162
11. Clculo
Onde:
VA Volume de HCl 0,1M gasto na amostra, em mL
VB Volume de HCl 0,1M gasto na prova em branco, em mL
MR Molaridade real do HCl 0,1M
0,014 Unidade molar do nitrognio, em g/mol
P Peso da amostra original (usado na extrao do FDN), em grama
12. Bibliografia
SILVA, Dirceu Jorge. Anlise de Alimentos Mtodos qumicos e biolgicos, 3. ed. 2006. p. 120-122
163
Mtodos Analticos
ndice de Perxido -
Mtodo a Frio
MTODO N 44
Reviso: 2009
4 pginas
1. Introduo
O perxido oxida o iodeto a iodo elementar que, por sua vez, forma com o amido um complexo de
incluso de cor caracterstica escura.
Os perxidos so substncias que apresentam uma ligao oxignio-oxignio e que contenham o oxignio
em estado de oxidao -1. Geralmente se comportam como substncias oxidantes.
A peroxidao lipdica iniciada por formas qumicas de oxignio, de grande reatividade, chamadas
radicais livres, e a sua formao acelerada pela presena de metais, principalmente ferro (Fe), cobre
(Cu), zinco (Zn) e nquel (Ni), por altas temperaturas, efeito da luz solar, pela concentrao de oxignio e
por outros tipos de irradiaes, como microondas, raio X, etc. Os microrganismos possuem enzimas
que podem exercer efeito oxidante.
Os perxidos formados podem se ligar a um grande nmero de produtos instveis, que destroem a
molcula de cido graxo, originando os produtos de oxidao, que so txicos. Muitos deles so pequenos
e volteis, liberando odor caracterstico de rano, percebidos em processos de avanado estado de
oxidao. Esta etapa, geralmente, lenta, podendo durar horas, semanas ou meses, dependendo do
tipo de gordura e das condies ambientais, porm uma vez iniciado o processo, muito difcil de
controlar.
2. Recomendaes
produtos qumicos.
3. Escopo
Aplicvel a produtos alimentcios secos (farinhas de origem animal e vegetal, raes, etc.) ou midos
(carnes, salsichas, peixes, etc.) e leos e gorduras susceptveis a oxidao.
No aplicvel.
5. Definies
No aplicvel
6. Reaes
164
7.7. Metanol p.a.
7.8. Sulfato de sdio anidro (Na
2
SO
4
) p.a.
2
S
2
O
3
.5H
2
O) p.a.
7.10. Sulfato de sdio 1,5%(m/v)
7.10.1. Preparo: Pesar 1,5g de sulfato de sdio anidro e dissolver em 100 mL de gua destilada.
7.11. Soluo de iodeto de potssio saturado (m/v)
7.11.1. Preparo: Adicionar iodeto de potssio gua destilada, recentemente fervida, at saturao. Para
ter certeza de que a soluo est saturada, verifique se h cristais sem dissolver. Preparar a soluo no
dia do teste. Estocar em frasco mbar.
OBS: 2 mL de gua a 20
o
C dissolvem aproximadamente 2,88g de KI
7.12. Soluo indicadora de amido 1%(m/v)
7.12.1. Preparo: Pesar 1g de amido p.a. em bquer de 250 mL. Adicionar 50 mL de gua destilada e
aquecer at ebulio. Esfriar e completar o volume para 100 mL. Preparar esta soluo momentos antes
do uso.
7.13. cido clordrico 1M (v/v)
7.13.1. Preparo: Diluir 8,5 mL de cido clordrico para 100 mL de gua destilada em balo volumtrico.
7.14. Soluo padronizada de tiossulfato de sdio 0,01 M
2
S
2
O
3
.5H
2
O p.a., previamente seco em estufa a 105
o
C por duas horas.
Dissolver em bquer contendo aproximadamente 100 mL de gua destilada, fervida e fria. Transferir
fria. Homogeneizar e estocar em frasco mbar
2
Cr
2
O
7
em estufa a 105
o
C por duas horas. Dissolver em bquer com aproximadamente 50 mL de gua destilada,
fervida e fria, transferir quantitativamente para balo volumtrico de 200 mL, completar o volume com gua
destilada, fervida e fria e homogeneizar. Pipetar 10 mL da soluo de dicromato de potssio e transferir
para erlenmeyer de 250 mL com tampa. Acrescentar aproximadamente 70 mL de gua destilada, fervida e
fria. Adicionar 2 g de KI e solubilizar. Adicionar 20 mL de cido clordrico 1 M. Tampar o erlenmeyer e
estocar imediatamente ao abrigo da luz por 10 minutos. Titular gotejando a soluo de Na
2
S
2
O
3
.5H
2
O at
aproximadamente 20 mL. Acrescentar 1 mL da soluo indicadora de amido 1% e continuar a titulao at
Clculo do fator:
165
Onde:
P Peso do K
2
Cr
2
O
7
na alquota, em mg
V Volume gasto na titulao, em mL
FC Fator de correo
49 Unidade molar do dicromato de potssio (g/mol)
7.16. Bureta de 25 mL
7.18. Erlenmeyer de 250 mL com tampa esmerilhada
7.21. Pipetas volumtricas de 10 mL, 25 mL e 50 mL
7.22. Provetas de 25 mL e 50 mL
8. Equipamentos
8.1. Centrfuga de baixa rotao (ou funil de decantao)
8.2. Agitador / barra magntica de agitao ou mesa agitadora
9. Amostragem
10. Procedimento
Os volumes de solventes que sero adicionados inicialmente (25, 50 e 20 mL), correspondem a uma
relao em volume de 1:2:0,8 clorofrmio: metanol: gua. Nessa proporo os trs solventes coexistem
em uma soluo homognea.
No entanto em um segundo momento quando da adio de mais clorofrmio e mais gua muda-se a
proporo para 2:2:1,8, causando a separao total de clorofrmio que carrega os lipdios (camada inferior),
portanto, teoricamente todos os lipdios da amostra ficam dissolvidos em 50 mL de clorofrmio.
10.1. Pesar em um erlenmeyer de 250 mL , uma quantidade de amostra suficiente para que contenha no
mnimo 2 g de leo, ou seja , (massa da amostra(g) x teor de leo (%) / 100 = 2 g. Anotar o peso.
Geralmente para amostras em que o teor de gordura elevado (acima 18%), pesar 10 g e para amostras
com baixo teor de gordura, pesar 20 g.
10.2. Adicionar 50 mL de metanol, 25 mL de clorofrmio e suficiente quantidade de gua que , somada
gua da amostra (proveniente da umidade) resulte em 20 mL . (ex.: a umidade de 10 g de amostra 5%,
ento 20 mL 0.5 mL = 19.5 mL de gua necessria a ser adicionada ). Colocar a barra magntica e tampar
hermeticamente o erlenmeyer, ou usar agitador tipo kline, durante 30 minutos.
10.3. Adicionar, em seguida, 25 mL de clorofrmio e 25 mL de soluo de sulfato de sdio 1,5%. Tampar
e agitar por mais 2 minutos.
166
10.4. Transferir a soluo com a amostra para um funil de separao e deixar separar as camadas de forma
natural (ou centrifugar a 1000 rpm por dois minutos para acelerar a separao).
10.5. Deixar verter a camada inferior (clorofrmio + lipdio) para um funil pequeno contendo papel de filtro
e um pouco de sulfato de sdio anidro (para remover os traos de gua que, invariavelmente, so arrastados)
recolhendo o filtrado em erlenmeyer de 125 mL. A soluo deve ficar lmpida.
10.6. Pipetar exatamente 10 mL do filtrado e transferir para um bquer de 50 mL previamente tarado (
recomendvel que este passo seja levado adiante, aps a confirmao de perxido positivo, este dado
somente ser necessrio para o clculo). Colocar na estufa a 105
o
C por 60 minutos, resfriar em dessecador
e pesar.
10.7. Com outra pipeta volumtrica tomando os mesmos cuidados, pipetar exatamente 20mL do filtrado
para um erlenmeyer de 250 mL, adicionar 20 mL de cido actico concentrado e 0,5 mL de soluo fresca
de iodeto de potssio saturado. Agitar e deixar o erlenmeyer tampado por 1 minuto em local escuro.
10.8. Aps 1 minuto adicionar 30 mL de gua destilada e 1 mL de amido 1%. Se ao acrescentar o amido,
imediatamente aparecer alguma alterao (mesmo que pequena) de cor, continuar a titulao. Caso no
se verifique mudana alguma de colorao, dar como encerrada a anlise, ou seja, 0,00 de perxido.
10.9. Titular o iodo liberado com tiossulfato de sdio 0,01M, com agitao constante. O ponto final
quando a cor azul desaparece totalmente.
10.10. Fazer uma prova em branco com reagentes, sendo que a titulao desta prova no deve gastar
mais que 0,5 mL de tiossulfato de sdio 0.01 M.
11. Clculo
Onde:
A Volume de tiossulfato de sdio 0,01M gasto na titulao da amostra, em mL
B Volume de tiossulfato de sdio 0,01M gasto na titulao da prova branco, em mL
F Fator de correo do tiossulfato de sdio
P Peso da gordura extrada na alquota x 2 (peso do bquer mais gordura-peso do bquer
vazio), em grama
1000 Converso para miliequivalente
12. Bibliografia
BLIGH, E.G. & DYER, W.J. A rapid method of total lipid extration and purification. Can. J. Biochem. Physiol.
37:911, 1959.
anlise de alimentos. 3. ed. So Paulo, 1985. v. 1. Mtodo 17.9, p. 256
167
Mtodos Analticos
ndice de Perxido -
Mtodo a Quente
MTODO N 45
Reviso: 2009
4 pginas
1. Introduo
O perxido oxida o iodeto a iodo elementar que, por sua vez, forma com o amido um complexo de
incluso de cor caracterstica escura.
Os perxidos so substncias que apresentam uma ligao oxignio-oxignio e que contenham o oxignio
em estado de oxidao -1. Geralmente se comportam como substncias oxidantes.
A peroxidao lipdica iniciada por formas qumicas de oxignio, de grande reatividade, chamadas
radicais livres, e a sua formao acelerada pela presena de metais, principalmente ferro (Fe), cobre
(Cu), zinco (Zn) e nquel (Ni), por altas temperaturas, efeito da luz solar, pela concentrao de oxignio e
por outros tipos de irradiaes, como microondas, raio X, etc. Os microrganismos possuem enzimas
que podem exercer efeito oxidante.
Os perxidos formados podem se ligar a um grande nmero de produtos instveis, que destroem a
molcula de cido graxo, originando os produtos de oxidao, que so txicos. Muitos deles so pequenos
e volteis, liberando odor caracterstico de rano, percebidos em processos de avanado estado de
oxidao. Esta etapa, geralmente, lenta, podendo durar horas, semanas ou meses, dependendo do
tipo de gordura e das condies ambientais, porm uma vez iniciado o processo, muito difcil de
controlar.
2. Recomendaes
produtos qumicos.
3. Escopo
Aplicvel a produtos alimentcios secos (farinhas de origem animal e vegetal, raes, etc.) ou midos
(carnes, salsichas, peixes, etc.) e leos e gorduras susceptveis a oxidao.
No aplicvel.
5. Definies
No aplicvel
6. Reaes
168
7.4. Butilhidroxitolueno (BHT)
2
S
2
O
3
.5H
2
O) p.a.
7.9. Soluo de cido actico + clorofrmio (3 + 2)
7.9.1. Preparo: Misturar 3 partes de cido actico em duas partes de clorofrmio.
7.10. Soluo reagente de cido clordrico 1 M
7.10.1. Preparo: Medir 8,5 mL de HCl p.a. e transferir para balo volumtrico de 100 mL contendo
7.11. Soluo indicadora de amido 1%
7.11.1. Preparo: Pesar 1 g de amido p.a. e transferir para bquer de 250 mL. Adicionar aproximadamente
completar o volume com gua destilada e homogeneizar.
7.12. Soluo reagente de iodeto de potssio saturada
7.12.1. Preparo: Adicionar 20 mL de gua destilada fervida e fria em um bquer de 50mL e ir adicionando
KI p.a. at saturao.
7.13. Soluo de ter de petrleo + BHT
7.13.1. Preparo: Dissolver 1 g de BHT em 1000 mL de ter de petrleo p.a.
7.14. Soluo padronizada de tiossulfato de sdio 0,01 M
2
S
2
O
3
.5H
2
O p.a., previamente seco em estufa a 105C por duas
horas. Dissolver em bquer contendo aproximadamente 100 mL de gua destilada, fervida e fria. Transferir
fria. Homogeneizar e estocar em frasco mbar
2
Cr
2
O
7
em estufa a 105C por duas horas. Dissolver em bquer com aproximadamente 50 mL de gua destilada,
fervida e fria, transferir quantitativamente para balo volumtrico de 200 mL, completar o volume com gua
destilada, fervida e fria e homogeneizar. Pipetar 10 mL da soluo de dicromato de potssio e transferir
para erlenmeyer de 250 mL com tampa. Acrescentar aproximadamente 70 mL de gua destilada, fervida e
fria. Adicionar 2 g de KI e solubilizar. Adicionar 20 mL de cido clordrico 1 M. Tampar o erlenmeyer e
estocar imediatamente ao abrigo da luz por 10 minutos. Titular gotejando a soluo de Na
2
S
2
O
3
.5H
2
O at
aproximadamente 20 mL. Acrescentar 1 mL da soluo indicadora de amido 1% e continuar a titulao at
Clculo do fator:

169
Onde:
P Peso do K
2
Cr
2
O
7
na alquota, em mg
V Volume gasto na titulao, em mL
FC Fator de correo
49 Unidade molar do dicromato de potssio (g/mol)
7.16. Bquer de 25 mL, 50 mL, 150 mL, 400 mL e 1000 mL
7.18. Bureta de 25 mL (div 0,05mL)
7.20. Erlenmeyer de 250 mL com tampa esmerilhada
8. Equipamentos
8.2. Banho termosttico (70C 80C)
9. Amostragem
10. Procedimento
10.1. leos e gorduras: pesar 5 g da amostra em erlenmeyer de 250mL e pular para passo 10.4.
10.2. Outros produtos: pesar 50g de amostra e adicionar 100 mL da soluo de ter de petrleo e agitar
ocasionalmente, em seguida filtrar em funil de vidro contendo papel de filtro qualitativo ou algodo
(opcionalmente poder se centrifugar 2500 rpm durante 10 minutos, desde que a centrfuga seja prova
de exploso).
10.3. Em um erlenmeyer de 250 mL, previamente tarado, receber o filtrado e evaporar o resduo de ter
em banho-maria 80C. Colocar em estufa a 105C, durante 10 minutos. Esfriar em dessecador e repesar.
10.4. Aps a pesagem do frasco contendo a gordura, adicionar 30 mL da mistura cido actico + clorofrmio
e 0,5 mL da soluo de iodeto de potssio saturada, agitar at completa dissoluo.
10.5. Tampar o frasco e deixar em repouso por aproximadamente 1 minuto no escuro (ao abrigo da luz),
com agitaes ocasionais.
10.6. Acrescentar 30 mL de gua destilada e agitar vagarosamente.
10.7. Adicionar 1 mL da soluo de amido. Se ocorrer mudana de cor escuro (azul / violeta), mesmo que
a mudana de tonalidade seja sutil, proceder a titulao com a soluo de tiossulfato de sdio 0,01 M at
o completo desaparecimento da colorao azul.
10.8. Fazer um branco da mistura clorofrmio + cido actico e soluo de amido.
170
11. Clculo
Onde:
A Volume de tiossulfato de sdio 0,01M gasto na titulao da amostra, em mL
B Volume de tiossulfato de sdio 0,01M gasto na titulao da prova branco, em mL
F Fator de correo do tiossulfato de sdio
P Peso da gordura, em grama
1000 Converso para miliequivalente
12. Bibliografia
ASSOCIATION OF OFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS. Oficial methods of analysis of the Association of
anlise de alimentos. 4. ed. So Paulo: Prol, 2005. p. 593-594
171
Mtodos Analticos
Digestibilidade Protica
em Pepsina no
Sobrenadante
MTODO N 46
Reviso: 2009
5 pginas
1. Introduo
Na formulao de raes muito importante o conhecimento da digestibilidade protica, pois essa
informao nos leva a alcanar melhores resultados para o crescimento dos animais e para o ambiente,
reduzindo o excesso de nutrientes excretados. Um dos mtodos para predizer o valor protico atravs
da solubilidade das protenas de origem animal em Pepsina. Esse procedimento mantm uma boa
correlao com os mtodos in vivo, tendo a vantagem de ser de fcil e rpida execuo e de ter um
custo reduzido, alm de ser muito bem aceito entre os laboratrios das fbricas de raes animais.
2. Recomendaes
O cido clordrico nocivo e prejudicial sade se inalado ou se entrar em contato com a pele e olhos,
portanto a soluo de HCl deve ser preparada em capela com o uso de luvas adequadas e culos de
segurana. A mesma regra se aplica ao uso do cido sulfrico, sendo que a soluo de catalisador lquido
deve ser tambm preparada em capela, observando os devidos cuidados de segurana.
3. Escopo
Esse procedimento aplicvel a fontes proticas de origem animal e tem por objetivo quantificar in vitro
a solubilidade em pepsina da frao protica de amostras de produtos e subprodutos de origem animal
(farinha de carne, farinha de penas, farinha de sangue, etc...)
No aplicvel
5. Definies
No aplicvel
6. Reaes
6.1. Reaes enzimticas:
O princpio da reao a formao do complexo chave-fechadura, que se forma no momento em que a
enzima (pepsina) entra em contato com seu substrato (amostra em questo).
172
6.2. Demais reaes
As demais reaes envolvidas no processo dependero do procedimento para determinao de protena
escolhido.
Usar somente reagentes de grau analtico, a no ser que especificado em contrrio.
7.2. Sulfato de Sdio Anidro p.a
7.3. Sulfato de Cobre pentahidratado p.a
7.4. Selenito de Sdio p.a
7.5. Biftalato de Potssio - Padro Primrio p.a.
7.6. lcool Etilco p.a.
7.8. cido Clordrico p.a.
7.9. Pepsina 1:10000 (Sigma P 7000, Merck ou Difco)
7.10. Soluo de cido clordrico 0,0744 M
7.10.1. Preparo: em um balo volumtrico de 2000 mL contendo aproximadamente 1500 mL de gua
destilada ou similar, adicionar 12,50 mL de cido clordrico concentrado (d=1,180 e pureza 36,50%).
Completar o volume com gua destilada ou similar e homogeneizar.
7.11. Soluo pepsina 0,02%
7.11.1. Preparo: pesar 20 mg de pepsina (atividade digestiva de 1:10000) em um bquer de 100 mL.
Dissolver com aproximadamente 50 mL da soluo de cido clordrico 0,0744 M Depois de dissolvida a
pepsina, transferir para um balo volumtrico de 100 mL, lavando o bquer com pequenas pores da
soluo de cido clordrico 0,0744 M. Completar o volume com a soluo de cido e homogeneizar.
Preparar a soluo imediatamente antes de sua utilizao.
7.12. Soluo pepsina 0,002 %
7.12.1. Preparo: em um balo volumtrico de 1000 mL, transferir os 100 mL da soluo pepsina 0,02 % e
completar o volume com cido clordrico 0,0744 M. Preparar a soluo imediatamente antes da sua utilizao.
7.13. Soluo pepsina 0,0002 %
7.13.1. Preparo: em um balo volumtrico de 1000 mL, transferir 100 mL da soluo pepsina 0,002 % e
completar o volume com cido clordrico 0,0744 M. Preparar a soluo imediatamente antes da sua utilizao.
7.14. Vermelho de Metila p.a.
7.15. Tubo para macro com borda reforada
7.16. Frasco com tampa ou Erlenmeyer de 250 mL
173
8. Equipamentos
8.1. Estufa de Secagem com circulao de ar a 105C
8.2. Destilador de protena Kjeldahl
8.4. Microbureta ou bureta semi-automtica
8.5. Repipetador com dosagem regulvel (dispenser)
8.6. Bloco Digestor para tubos de macro Kjeldahl
8.7. Estufa agitadora para pepsina a 45C ou equivalente
9. Amostragem
No necessrio desengordurar a amostra.
10. Procedimento
Em caso de necessidade, pode ser feita a digestibilidade sem o uso de estufa giratria. O preparo ser
o mesmo e a incubao ser por 63 horas a 45C, sem agitao rotativa. O coeficiente de variao do
resultado desta anlise parada em relao ao mtodo padro (16 horas sob agitao) aproximadamente
10% para substratos disponveis (carne, peixe, sangue, etc) e at 20% para substratos indisponveis
(penas e vsceras).
10.1. Pesar 1,00 g da amostra em Erlenmeyer de 250 mL ou frasco com tampa especfico para estufa
de pepsina. Adicionar 75 mL da soluo pepsina na concentrao adequada (0,02%, 0,002% ou 0,0002%)
para a amostra (substrato em questo), conforme solicitao.
10.2. Homogeneizar para que toda a amostra entre em contato com a soluo. Tampar o frasco e incubar
por 16 horas a 45C, com agitao rotativa leve, em estufa agitadora tipo Wagner.
10.3. Transferir o contedo do frasco de incubao para tubo de centrfuga e centrifugar por 10 minutos ou
at que no haja partculas em suspenso no sobrenadante.
10.4. Filtrar o sobrenadante com papel de filtro qualitativo em bquer de 100mL de plstico.
10.5. Transferir alquota de 15 mL do extrato filtrado para tubo de macro Kjeldahl.
10.6. Seguir o procedimento de determinao de protena do mtodo n. 48 Protena Bruta Mtodo
Kjeldahl ou do mtodo n. 47 Protena Mtodo Dumas. Se o mtodo Kjeldahl for utilizado para
determinao de protena bruta, deve-se adicionar 32 mL de mistura cataltica.
Sugestes para concentrao de Pepsina e preparo do Erlenmeyer com vermelho de metila: (mtodo
Kjeldahl.)
Amostra Conc. Pepsina (%) Volume de cido (mL)
Farinha de sangue 0,002 10
Farinha de carne 0,002 8
Farinha de peixe 0,002 8
Farinha de penas 0,02 8
Farinha penas e vsceras 0,02 8
Farinha de vsceras 0,02 8
174
11. Clculos
necessrio o valor de protena bruta para calcular o teor de digestibilidade em pepsina.
11.1. Para mtodo Dumas
Onde
Va Volume de HCl 0,1M gasto na titulao, em mL
Vb Volume de HCl 0,1M gasto no branco, em mL
F Fator de correo do HCl 0,1M
M Molaridade do HCl
11.2. Para mtodo Kjeldahl
Onde
PBA % protena bruta no sobrenadante da amostra
V

Fc

V
Volume de H
2
SO
4
Fc
2
SO
4
0,1M
M

M
2
SO
4
P Peso da amostra na alquota, em mg (1,00g/75mLx15mL)
175
11.3. Digestibilidade em pepsina
Onde
PBA % protena bruta no sobrenadante da amostra
PB % protena bruta da amostra
12. Bibliografia
BELLAVER, C. Zanotto D. L. Determinao da digestibilidade da protena em pepsina. EMBRAPA. 2003.
ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS. Official Methods of Analysis. 14. ed. Washington,
DC, 1984
176
Mtodos Analticos
Protena -
Mtodo Dumas
MTODO N 47
Reviso: 2009
3 pginas
1. Introduo
No mtodo Dumas, a amostra sofre uma digesto oxidativa com oxignio a aproximadamente 900-1200C;
ento o gs arrastado com auxlio de hlio, purificado (incluindo a remoo de gua) e os xidos de
nitrognio formados so reduzidos a nitrognio elementar pelo contato com metal quente (tungstnio ou
cobre), o qual determinado quantitativamente por detector de condutividade trmica. O contedo de
nitrognio multiplicado pelos fatores de converso especficos para protena.
2. Recomendaes
produtos qumicos.
3. Escopo
Amostras orgnicas e inorgnicas.
No aplicvel
5. Definies
No aplicvel
6. Reaes
Matria orgnica + O
2
CO
2
+ SO
2
+ NO
X
+ H
2
O + partculas de xidos
O equipamento dotado de filtros que retm as partculas de xidos, os gases interferentes e a gua. O
NO
X
depois de isolado reduzido a N
2
e detectado por condutividade trmica.
Alguns reagentes podem variar em funo do equipamento. Consultar o manual de instrues do
equipamento.
177
7.1. Folhas de estanho ou navculas de cermica
7.2. Esptula
8. Equipamentos
8.2. Instrumento de protena por combusto
8.3. Estufa de secagem (105 5C)
9. Amostragem
10. Procedimento
Ajustar os parmetros de operao do equipamento de combusto (temperatura do forno, fluxo de oxignio,
valores de calibrao e demais controles) de acordo com as instrues do fabricante.
Estabilizar a temperatura do forno.
Estabilizar o sistema passando uma srie de brancos (no mnimo 5 brancos so recomendados) ou at
que os resultados sejam repetitivos.
Realizar a curva de calibrao utilizando o padro de EDTA, determinando no mnimo 3 pontos, pesar de
50 400 mg de EDTA em duplicata.
Ajustar o equipamento diariamente utilizando o ponto intermedirio da curva de calibrao como ponto de
verificao do padro.
10.1. Pesar de 150 - 300 mg de amostra em folha de estanho.
10.2. Levar as amostras pesadas para pr-secagem em estufa 105C por 30 min, para retirar o excesso de
umidade, se necessrio.
10.3. Fechar a folha de estanho adequadamente, retirando o ar da embalagem.
10.4. Introduzir as amostras no equipamento.
10.5. Colocar os dados de identificao e massa no sistema.
10.6. Iniciar as anlises.
10.7. Realizar as leituras do teor de Nitrognio diretamente no equipamento.
11. Clculos
11.1.Para produtos lcteos:
11.2. Para ovo:
178
11.3. Para trigo e derivados:
11.4. Para outros gros de cereais e oleaginosas:
Onde:
N Teor de nitrognio
12. Bibliografia
ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS. Official Methods of Analysis. 18. ed. rev. 2.
Gaithersburg, MD, USA, 2007. Crude protein in meat and meat products including pet foods, c. 39. Method
992,15. p. 6-7
179
Mtodos Analticos
Protena Bruta -
Mtodo KJELDAHL
MTODO N 48
Reviso: 2009
8 pginas
1. Introduo
O ensaio baseado na digesto de amostras nitrogenadas com cido sulfrico concentrado, em presena
do catalisador.
Este mtodo se baseia em trs etapas: digesto, destilao e titulao. O nitrognio da amostra
transformado em sulfato de amnio por digesto cida, e em nitrognio amoniacal por destilao em
meio alcalino. O nitrognio ento quantificado por titulao em cido padronizado.
2. Recomendaes
produtos qumicos.
3. Escopo
Amostras nitrogenadas de origem orgnica e inorgnica, com exceo de nitratos e nitritos.
No aplicvel.
5. Definies
Sendo o contedo de nitrognio das diferentes protenas aproximadamente 16%, introduze-se o fator
emprico 6,25 para transformar o nmero de gramas de protdeos. Em alguns casos, emprega-se um valor
diferente de 6,25.
6. Reaes
Digesto
180
Titulao
7.1. cido brico p.a.
7.5. Etanol p.a.
7.6. Carbonato de sdio p.a.
7.8. Hidrxido de sdio p.a.
7.9. L-Cistina p.a.
7.10. Lisina p.a.
7.11. Selenito de Sdio p.a.
7.12. Sulfato de cobre pentahidratado p.a.
7.13. Sulfato de sdio anidro ou sultafo de potssio anidro p.a.
7.14. Tiossulfato de sdio p.a.
7.15. Soluo volumtrica padronizada de cido clordrico 0,1M
7.15.1. Preparo: Medir 8,5 mL de HCl p.a. e transferir para balo volumtrico de 1000mL, contendo
aproximadamente 500mL de gua destilada. Esfriar, completar o volume e homogeneizar.
7.15.2. Padronizao: Pesar exatamente 5,299g de carbonato de sdio (Na
2
CO
3
) p.a., previamente seco
a 270C por uma hora. Dissolver em gua destilada, transferir para um balo volumtrico de 1000mL e
completar o volume. Pipetar 20mL da soluo de Na
2
CO
3
e transferir para um erlenmeyer de 250mL.
Adicionar 3 gotas de soluo de vermelho de metila 0,1%. Titular at viragem para colorao rsea.
Aquecer a ebulio, para eliminar o gs carbnico. Esfriar e prosseguir a titulao. Repetir esta operao
at colorao rsea permanente.
181
Onde:
MR Molaridade real da soluo de HCl 0,1M
P Peso do Na
2
CO
3
, em mg
Mol Unidade molar do Na
2
CO
3
(105,988/2)
V Volume de HCl 0,1M gasto na titulao, em mL
7.16. Soluo de cido brico 4%
7.16.1. Preparo: Pesar 40 g de H
3
BO
3
p.a. e transferir para bquer de 1000 mL. Dissolver em
aproximadamente 500 mL de gua destilada, utilizando agitao. Transferir quantitativamente, por papel
filtro qualitativo, para balo volumtrico de 1000 mL, completar o volume e homogeneizar.
7.17. Mistura cataltica
7.17.1. Preparo: Peneirar separadamente o sulfato de sdio ou potssio anidros e o sulfato de cobre
pentahidratado em peneira com malha de 1 mm. Juntar 10 partes de Na
2
SO
4
ou K
2
SO
4
e uma parte de
CuSO
4
.5H
2
O. Homogeneizar e guardar em frasco com tampa.
7.18. Soluo alcolica indicadora de vermelho de metila 0,1%
7.18.1. Preparo: Dissolver 0,1 g de vermelho de metila p.a. em aproximadamente 40 mL de gua destilada.
Transferir para balo volumtrico de 100 mL, completar o volume com etanol e homogeneizar.
7.19. Soluo reagente de hidrxido de sdio 50% (P/V)
7.19.1. Preparo: Dissolver 500 g de NaOH p.a. ou grau tcnico de boa qualidade em gua destilada.
Adicionar 30 g de tiossulfato de sdio evitar a carbonatao quando o perodo de armazenamento for
longo e completar para 1000 mL em bquer.
7.20. Soluo mista
7.20.1. Preparo: Dissolver 0,132 g de vermelho de metila p.a. em 40 mL de gua destilada. Transferir
quantitativamente para balo volumtrico de 200 mL. Dissolver 0,066g de verde de bromocresol p.a. em
40 mL de gua destilada. Juntar ao balo contendo vermelho de metila, completar o volume com etanol
p.a. e homogeneizar. O indicador misto poder ser incorporado soluo de cido brico 4% (8 mL por
litro).
7.21. Verde de bromocresol p.a.
7.23. Bureta
7.24. Conjunto Kjeldahl para digesto e destilao macro e micro
7.25. Erlenmeyer de 125 mL, 250 mL ou 500 mL
7.26. Frasco Kjeldahl de 500 mL ou 800 mL ou tubo de digesto (macro ou micro).
7.27. Prolas de vidro ou zinco metlico granulado 20 mesh
Solues para uso no procedimento 2:
7.29. Soluo indicadora de fenolftalena 1%
7.29.1. Preparo: Pesar 1 grama de fenolftalena P.A. em balo volumtrico de 100 mL. Dissolver com
lcool etilco 99,5GL. Completar o volume do balo com lcool etilco 99,5GL e homogeneizar.
7.30. Soluo Indicadora de vermelho de metila 0,1%
7.30.1. Preparo: Pesar 1 g de vermelho de metila e dissolver em 800 mL de lcool etilco 99,5. Adicionar
200 mL de gua destilada ou similar. Filtrar em funil de Buckner com algodo, se necessrio.
7.31. Catalisador lquido
7.31.1. Preparo: Para preparar 1 litro, adicionar, na ordem descrita: 05,00 g de selenito de sdio p.a.;
10,00 g de sulfato de cobre p.a.; 53,5 g de sulfato de sdio p.a.; 500 mL de cido sulfrico p.a.; 437,5 mL
182
de gua destilada ou similar. Respeitar a ordem de adio dos reagentes. Esperar esfriar para poder
utilizar a soluo.
7.32. Soluo de NaOH 0,2M
7.32.1. Preparo: Pesar 8,00 g de NaOH 99,99% em bquer de 250 mL e diluir com gua destilada ou
similar. Aps esfriar, transferir para balo volumtrico de 1.000 mL. Completar o volume com gua destilada
ou similar. Considerar a pureza do reagente e corrigir massa.
7.32.2. Padronizao: Pesar em erlenmeyer de 125 ou 250 mL, 0,5000 g de Biftalato de Potssio, previamente
seco 105C, por 2 horas. Adicionar 40-50 mL de gua destilada ou similar e titular com NaOH 0,2M,
usando gotas de soluo de fenolftalena como indicador at viragem levemente rosa.
Onde:
MR
Molaridade real da soluo de NaOH 0,2M

P Peso do Biftalato de potssio, em g
Mol Unidade molar do biftalato de potssio (204,22865)
V Volume de NaOH 0,2M gasto na titulao, em L
FC

MT
Molaridade terica da soluo de NaOH 0,2M

7.33. Soluo de H
2
SO
4
0,1M
7.33.1. Preparo: Adicionar 5,6 mL de H
2
SO
4
p.a. (97% de pureza) em bquer contendo 700 mL de gua
destilada ou similar. Aps esfriar, transferir para balo volumtrico de 1000 mL, completar o volume com
gua destilada ou similar e homogeneizar. Considerar a pureza do reagente e corrigir volume.
7.33.2. Padronizao: Tomar uma alquota de 10 mL de H
2
SO
4
0,1M e transferir para um erlenmeyer de 125
ou 250mL. Adicionar 3 gotas de indicador vermelho de metila 0,1% e titular com soluo de NaOH 0,2M
padronizada, at viragem de rosa para amarelo
Onde:
FC

2
SO
4
0,1M
FC

V
Volume de H
2
SO
4
0,1M gasto na titulao, em L
183
8. Equipamentos
8.2. Funil Buckner
8.3. Bomba a vcuo
8.4. Microbureta ou bureta semi-automtica calibrada
9. Amostragem
10. Procedimento
Destilar de modo que o condensado seja obtido temperatura ambiente.
O terminal do condensador deve ficar mergulhado na soluo durante a fase de destilao.
Quando houver viragem da cor vermelha para amarela durante a fase de destilao, desconsiderar a
anlise em processo.
Orientao para volumes de H
2
SO
4
0,1 M a ser utilizado, de acordo como percentual de protena bruta
esperado:
% PB mL H
2
SO
4
at 10% 10
`` 20% 15
`` 30% 25
`` 40% 30
`` 60% 50
`` 80% 60
Proceder sempre uma prova de recuperao utilizando lisina, sulfato de amnio anidro p.a. (sem digesto)
ou cloreto de amnio p.a..
Amostra com alto teor de gordura ou que apresente formao de espuma durante a fase de digesto ou
destilao, utilizar algumas gotas de soluo antiespumante.
10.1. Procedimento 1:
10.1.1. Pesar de 0,2 a 2,0g (conforme teor de protena esperado) da amostra e transferir para frasco
kjeldahl de tubo de digesto.
10.1.2. Adicionar de 1,5g a 15g de mistura cataltica e 5 a 7 perolas de vidro (balo) e de 5mL a 20mL de
H
2
SO
4
p.a. O cido deve ser adicionado cuidadosamente, escorrendo pela parede do frasco.
10.1.3. Iniciar a digesto com temperatura baixa. Prosseguir, elevando at o mximo de 420C, evitando
deixar pontos pretos aderidos parede do frasco. Continuar por mais 30 minutos aps clareamento
completo da mistura.
10.1.4. Esfriar, adicionar de 15 a 250mL de gua destilada (dependendo da capacidade do frasco), Agitar
at dissoluo e esfriar.
10.1.5. Colocar no erlenmeyer aproximadamente 50mL de cido brico 4% com indicador misto para
receber o destilado.
184
10.1.6. Levar o erlenmeyer ao destilador mergulhando o terminal do condensador na soluo receptora,
completando com gua destilada, se necessrio.
10.1.7. Recolher aproximadamente 200mL do destilado ou quantidade suficiente para o carregamento de
todo o nitrognio da amostra.
10.1.8. Retirar o erlenmeyer, lavar o terminal do condensador e titular com soluo de HCl 0,1M at
viragem do indicador misto (verde para rosa).
10.1.9. Proceder paralelamente prova em branco dos reagentes utilizados.
10.1.10. Para verificao do mtodo pode-se utilizar um aminocido nitrogenado de alto grau de pureza.
Faz-se a anlise de protena bruta e compara-se o valor encontrado com o percentual terico de protena
bruta presente no aminocido. Sugere-se a utilizao de L-Cistina ou Lisina.
10.2. Procedimento 2:
10.2.1. Pesar de 0,2 a 2,0g (conforme teor de protena esperado) da amostra e transferir para frasco
kjeldahl de tubo de digesto.
10.2.2. Adicionar 4 mL de catalisador lquido para amostras de micro e 40 mL de catalisador lquido para
amostras de macro.
10.2.3. Levar ao digestor de micro pr-aquecido a 100C e aumentar gradativamente a temperatura at
completa digesto (cor esverdeada). Esta queima leva, geralmente, 2 horas para se completar. O perodo
crtico na faixa de 150 a 250C, quando as amostras podem subir nas paredes do tubo e precisam ser
monitoradas para evitar perdas.
O tempo e a temperatura do bloco digestor seguem a seguinte seqncia:
100C: 15 min.
150C: 15 min.
200C: 15 min.
250C: 45 min.
400C (temperatura mxima): 45 min.
10.2.4. Retirar do digestor, esfriar e adicionar aproximadamente 250 a 350 mL de a gua destilada
(dependendo da capacidade do frasco). Agitar at a dissoluo e esfriar. Imediatamente antes da destilao,
adicionar uma pitada de zinco granulado.
10.2.5. Colocar em erlenmeyer aproximadamente 50 mL gua destilada, volume de H
2
SO
4
0,1M de acordo
com a porcentagem de protena estimada e 3 a 5 gotas de soluo indicadora de vermelho de metila
0,1%.
10.2.6. Levar o erlenmeyer ao destilador mergulhando o terminal do condensador na soluo receptora.
10.2.7. Adicionar cuidadosamente ao frasco Kjeldahl 50 a 80ml de NaOH 50%, conectar imediatamente ao
destilador e proceder a destilao.
10.2.8. No caso dos destiladores automticos, conectar o tubo de suporte e bocal apropriados e proceder
a destilao.
10.2.9. Recolher aproximadamente 200 mL do destilado, mantendo o terminal do condensador mergulhado
na soluo receptora at que toda a amnia seja liberada.
10.2.10. Retirar o erlenmeyer, lavar o terminal do condensador e titular o excesso de cido com soluo
de NaOH 0,2M at viagem do indicador vermelho para amarelo
10.2.11. Proceder paralelamente prova em branco dos reagentes utilizados.
185
11. Clculos
11.1. Clculo procedimento 1
Onde:
Va Volume de HCl 0,1M gasto na titulao, em mL
Vb Volume de HCl 0,1M gasto na prova em branco, em mL
MR Molaridade real da soluo de HCl 0,1M
0,014 Massa milimolar do nitrognio
6,25 Fator de transformao do nitrognio em protena considerando 16% de
nitrognio (100/16 = 6,25). Este fator pode variar conforme tabela abaixo:
Alimento Fator Emprico
Trigo e derivados 5,83
Leite e derivados 6,38
Outros alimentos 6,25
11.2. Clculo procedimento 2
Onde
PB % protena bruta na amostra
Va Volume de H
2
SO
4
0,1M utilizado, em mL
Vb Volume de H
2
SO
4
0,1M consumido na prova em branco, em mL
Fc
2
SO
4
0,1M
V

Fc

M
2
SO
4
M

186
12. Bibliografia
ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS. Official Methods of Analysis. 18. ed. Gaithersburg,
MD, USA, 2005. Method 2001.11
ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS. Official Methods of Analysis. 18. ed. Gaithersburg,
MD, USA, 2005. Method 936.15
AMERICAN ASSOCIATION OF CEREAL CHEMISTS. Aproved Methods of Analysis of AACC. 9. ed. 1999.
Official Method 46-16
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz: Mtodos fsico-qumicos para anlise
de alimentos. 4. ed. Braslia: Editora MS, 2005. p. 122-125.
SILVA, Dirceu Jorge; QUEIROZ, Augusto Csar de. Anlises de Alimentos. Mtodos Qumicos e Biolgicos.
3. ed. Minas Gerais: Editora UFV, 2005.
187
Mtodos Analticos
Resduo Insolvel
em HCI
MTODO N 49
Reviso: 2009
3 pginas
1. Introduo
o resduo inorgnico, insolvel em soluo de cido clordrico, do material resultante da queima da
amostra a uma temperatura em torno de 600C, contidos nos produtos de origem mineral, vegetal, animal
ou de misturas.
2. Recomendaes
produtos qumicos.
3. Escopo
Aplicvel a produtos ou subprodutos de origem animal, vegetal ou mineral, raes e concentrados.
No aplicvel
5. Definies
No aplicvel
6. Reaes
No aplicvel.
7.1. HNO
3
p.a. ou gua oxigenada 30 volumes
7.2. Cadinho ou cpsula de porcelana
7.4. Cadinho de porcelana
7.5. Pina metlica
7.6. Papel de filtro quantitativo, filtrao mdia
7.8. cido Clordrico 1:1
7.8.1. Preparo: Diluir cuidadosamente uma parte de cido clordrico p.a. em uma parte igual de gua
destilada.
188
8. Equipamentos
8.2. Forno mufla
9. Amostragem
10. Procedimento
Para materiais de origem mineral no necessrio queima da amostra.
O resduo obtido na queima da amostra, pode no representar toda a substncia inorgnica, pois alguns
sais sofrem reduo ou volatilizao nesta faixa de temperatura.
10.1. Pesar o cadinho ou cpsula de porcelana, limpo e previamente calcinado em mufla a 550C - 600C
por 30 minutos e resfriado em dessecador at equilbrio com a temperatura ambiente.
10.2. Pesar de 2 a 3 g da amostra no cadinho ou cpsula.
10.3. Levar mufla e gradualmente aumentar a temperatura (550C - 600C) at obteno de cinzas claras
(3 horas no mnimo). Opcionalmente pode-se efetuar pr-queima em placa aquecedora ou bico de Bunsen,
transferindo em seguida para o forno mufla (550C - 600C).
10.4. No se obtendo cinzas claras aps o perodo mnimo de calcinao, recomenda-se a adio de 2 a
3 gotas de HNO
3
p.a. ou gua oxigenada 30 volumes e retorno ao forno mufla por mais uma hora.
10.5. Retirar a 250C - 300C, esfriar em dessecador at equilbrio com a temperatura ambiente.
10.6. Transferir quantitativamente as cinzas contidas no cadinho para bquer de 250 mL, lavando com
trs pores de aproximadamente 20 mL de soluo de cido clordrico 1:1. Ferver por 5 minutos.
10.7. Filtrar quantitativamente sobre papel de filtro, lavando o resduo com gua destilada quente at
eliminao de todo o cido.
10.8. Transferir o papel de filtro com resduo para cpsula ou cadinho de porcelana, previamente tarado.
Levar mufla e gradualmente aumentar a temperatura. Manter por duas horas (no mnimo) temperatura
de 550 / 600C.
10.9. Retirar a 250 / 300C. Resfriar em dessecador at a temperatura ambiente e pesar.
11. Clculos
Onde:
A Peso do recipiente + resduo, em grama
B Peso do recipiente, em grama
189
12. Bibliografia
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. : Mtodos qumicos e fsicos para
anlise de alimentos. 3. ed. So Paulo: PROL, 1985. p. 31
Analytical Chemists. 18. ed. A.O.A.C., 2005. c.4. p.8. method 942.05.
190
Mtodos Analticos
Determinao de Selnio
por Via mida -
Volumetria Iodomtrica
MTODO N 50
Reviso: 2009
4 pginas
1. Introduo
A determinao de Selnio por volumetria utilizada como alternativa metodologia por Espectrofotometria
de Absoro Atmica.
O on selenito em soluo cida tratado com um excesso de tiossulfato de sdio padronizado. O
excesso no deve ser superior a 6 mL. O tiossulfato de sdio em excesso quantificado por titulao
com soluo padro de iodo, utilizando amido como indicador.
2. Recomendaes
Vide precaues de segurana dos reagentes cido clordrico, tiossulfato de sdio, Dicromato de potssio
e Iodeto de potssio.
O Selenito de sdio um produto custico e venenoso. Evitar contato com a pele e olhos, usando luvas
de borracha e culos de proteo.
3. Escopo
Mtodo aplicvel em Selenito de sdio.
No aplicvel.
5. Definies
No aplicvel.
6. Reaes
2
S
2
O
3
) p.a.
7.3. Carbonato de sdio (Na
2
CO
3
) p.a.
191
7.4. Dicromato de potssio( K
2
Cr
2
O
7
) p.a.
7.5. Iodeto de potssio (KI ) p.a.
7.6. Amido ( C
6
H
10
O
5
) p.a.
7.7. Soluo de cido clordrico 500 mililitros por litro (mL/L)
7.7.1. Preparo: Adicionar lentamente 500 mL de HCl p.a. para cada 500 mL de gua destilada, medidos em
proveta. Esfriar, homogeneizar e armazenar.
2
S
2
O
3
.5H
2
O p.a. e 0,2g de carbonato de sdio anidro (Na
2
CO
3
). Dissolver
em bquer contendo aproximadamente 100 mL de gua destilada, fervida e resfriada. Transferir
resfriada. Homogeneizar e deixar em repouso durante 24 horas. Padronizar e estocar em frasco mbar.
7.8.2. Padronizao: Pesar 0,2 g de dicromato de potssio p.a. previamente seco em estufa por 2 horas
a 105C. Transferir para erlenmeyer de 250 ml com tampa esmerilhada. Acrescentar 70 ml de gua destilada,
fervida e fria. Adicionar 2 g de Potssio Iodeto p.a. e solubilizar. Adicionar 20 ml de cido Clordrico 1M.
Tampar o erlenmeyer e estocar imediatamente ao abrigo da luz por 10 minutos. Titular gotejando a soluo
de tiossulfato de sdio 0,1M at quase desaparecimento da colorao amarela. Acrescentar 1 ml da
soluo indicadora de amido 10g/l e continuar a titulao at o desaparecimento da colorao azul.
Clculo:
Onde
MR Molaridade real
m Massa do Dicromato de Potssio p.a., em mg
v Volume de Tiossulfato de sdio gasto na titulao, em mL
1 mL de tiossulfato de sdio 0,1 M, equivale a 0,04904 g do dicromato de potssio p.a.
7.9. Soluo indicadora de amido 10 g/L
7.9.1. Preparo: Pesar 1g de amido p.a. e transferir para bquer de 250 mL. Adicionar aproximadamente 50
mL de gua destilada e aquecer at ebulio. Esfriar. Transferir para balo volumtrico de 100 mL, completar
o volume com gua destilada e homogeneizar. Preparar momentos antes do uso.
7.10. Soluo volumtrica padronizada de Iodo 0,1M
7.10.1. Preparo: Pesar 36g de iodeto de potssio e dissolver em 100 mL de gua destilada. Acrescentar
12,75g de iodo puro, dissolver, transferir para balo de 1000 mL, completar o volume com gua destilada
e homogeneizar. Estocar em frasco mbar em local escuro. Repousar por 24 horas.
7.10.2. Padronizao: Pipetar 25 mL da soluo de Iodo para erlenmeyer de 250 mL e adicionar 10 mL de
cido clordrico 500 mL/L. Titular com soluo de tiossulfato de sdio 0,1M at desaparecimento da colorao
castanha caracterstica de iodo (a soluo passa de castanho a amarelo palha), ento acrescentar 2 mL de
soluo de amido 5 g/L. Prosseguir a titulao gota a gota at incolor.
192
Clculo
Onde
MR
Molaridade Real da soluo de Iodo 0,1M

25 Alquota da soluo de Iodo 0,1M
MR Molaridade Real da soluo de tiossulfato de sdio 0,1M
7.11. Erlenmeyer com tampa
7.13. Bquer de diversos volumes
7.14. Bureta volumtrica
7.16. Pipeta graduada
7.17. Proveta graduada.
8. Equipamentos
8.1. Agitador magntico e barras magnticas
8.3. Chapa de aquecimento
8.4. Estufa para 150C
9. Amostragem
10. Procedimento
10.1. Pesar de 1,0 a 3,0g da amostra e transferir para um balo volumtrico de 100 mL. Se a amostra
apresentar resduo insolvel, dissolver com 3 mL de cido clordrico p.a. Completar o volume com gua
destilada e homogeneizar.
10.2. Pipetar 20 mL para erlenmeyer de 250 mL, adicionar 5 mL de cido clordrico 500 mL/L, gua
destilada at 100mL e 2 mL de amido 5 g/L.
10.3. Acrescentar 50 mL de soluo de tiossulfato de Sdio 0,1M e titular imediatamente com a soluo
de iodo 0,1M at colorao castanha claro.
193
11. Clculos
Onde
50 Alquota de soluo de tiossulfato de sdio 0,1M, em mL
MR Molaridade real da soluo de tiossulfato de sdio 0,1M
V Volume de soluo de iodo 0,1M gasto na titulao, em ml
MR
Molaridade real da soluo de iodo 0,1M

PA Peso da amostra, em grama
dil Diluio (100/20) = 5.
0,01974 1 mL tiossulfato de sdio 0,1 M equivale a 0,01974 g de selnio(78,96/4/1000).
12. Bibliografia
MARINI, Jos Luiz. Manual de Anlises de Sais Minerais e Matrias Primas. 1992. p. 65.
194
Mtodos Analticos
Solubilidade Protica
em KOH
MTODO N 51
Reviso: 2009
3 pginas
1. Introduo
O ndice de solubilidade em KOH determina o quanto protena presente na soja solvel em soluo de
KOH 0,036 M e em sua posterior quantificao pelos mtodos de Kjeldahl ou Dumas.
2. Recomendaes
O cido Sulfrico e o Hidrxido de Potssio so prejudiciais sade se inalados ou se entrarem em
contato com a pele e olhos, portanto a soluo de catalisador lquido, bem como a soluo de KOH
0,036M deve ser preparada em capela com o uso de luvas adequadas e culos de segurana.
3. Escopo
Gros de oleaginosas e derivados.
No Aplicvel
5. Definies
No Aplicvel
6. Reaes
As reaes envolvidas dependero do procedimento para determinao de protena adotado.
Usar somente reagentes de grau analtico, a no ser que especificado em contrrio
7.2. Soluo volumtrica padronizada de hidrxido de potssio (0,036 M)
Ajustar a soluo de KOH exatamente 0,036 M.
7.2.1. Preparo: Pesar 2,376 g de KOH p.a., solubilizar em gua destilada. Transferir quantitativamente para
balo volumtrico de 1000 mL, completar o volume e homogeneizar
7.2.2. Padronizao: Pesar com exatido 0,2 g de biftalato de potssio p.a., previamente seco em estufa
a 120C por 2 horas. Dissolver em erlenmeyer com aproximadamente 75 mL de gua destilada, adicionar
4 gotas de soluo alcolica de fenolftalena 1% e titular gotejando a soluo de KOH at colorao
levemente rsea.
195

Onde
MR Molaridade real
Mol Unidade molar do Biftalato de Potssio
V Volume de KOH gasto na titulao, em mL
8. Equipamentos
8.1. Agitador tipo Wagner ou tipo Kline ou agitador magntico (todos) com controle de rotao
8.3. Centrfuga (1500 rpm)
8.4. Equipamentos usados na determinao de protena bruta
9. Amostragem
Moer a amostra de maneira que passe em peneira de 0,5 mm
10. Procedimento
Devido alta sensibilidade do mtodo, trabalhar com soluo de KOH exatamente 0,036M.
10.1. Pesar 2 g da amostra, transferir para erlenmeyer de 250 ou 300 mL e adicionar volumetricamente
100 mL de soluo de KOH 0,2% (0,036 M).
10.2. Agitar por 20 minutos, o mnimo suficiente para revolver toda a amostra, usando agitador tipo Wagner
ou tipo Kline ou agitador magntico (todos) com velocidade correspondente.
10.3. Centrifugar o sobrenadante por 10 minutos a 1.500 r.p.m.
10.4. Transferir cuidadosamente o sobrenadante para um bquer de 50 mL evitando-se a passagem de
partculas da amostra.
10.5. Pipetar volumetricamente 25 mL do centrifugado e transferir para frasco Kjeldahl ou 10 mL para tubo
de digesto.
10.6. Proceder conforme descrito no mtodo 48 Protena Bruta mtodo Kjeldahl, para determinao
de protena bruta.
10.7. Proceder paralelamente prova em branco dos reagentes utilizados.
196
11. Clculos
Para o clculo da porcentagem de protena do sobrenadante, utilizar o peso da amostra na alquota
empregada.
12. Bibliografia
setembro de 1991
197
Mtodos Analticos Tanino
MTODO N 52
Reviso: 2009
3 pginas
1. Introduo
Taninos (do francs tanin) so polifenis de origem vegetal. As plantas os usam como defesa qumica
contra o ataque de herbvoros vertebrados ou invertebrados e contra os microorganismos.
Os taninos esto concentrados na testa da semente e formam complexos com carboidratos e principalmente
protenas, reduzindo assim sua digestibilidade e piorando a palatabilidade, pois confere ao sorgo sabor
adstringente. O tanino pode estar presente no gro de sorgo em menor ou maior concentrao, identificando-
os como de baixo ou alto tanino. A presena de altos nveis de tanino, que caracteriza as variedades
resistentes ao ataque de pssaros, tem influncia negativa no desempenho dos animais.
2. Recomendaes
produtos qumicos.
3. Escopo
Aplicvel Sorgo.
No aplicvel.
5. Definies
No aplicvel
6. Reaes
7.1. cido tnico p.a.
3
PO
4
) p.a.
7.3. cido fosfomolbdico hidratado (H
3
[P(Mo
3
O
10
)
4
].H
2
O) p.a.
7.4. Carbonato de sdio anidro (Na
2
CO
3
) p.a
7.5. Tungstato (wolframato) de sdio (Na
2
Wo
4
.2H
2
O) p.a.
198
7.6. Soluo de Folin-Dennis
7.6.1. Preparo: Pesar 2 g de cido fosfomolbdico e 10g de tungstato de sdio, adicionar 5mL de cido
fosfrico em 75 ml de gua destilada, transferir para o balo de fundo chato e refluxar por 2 horas em
condensador. Esperar esfriar, transferir para balo volumtrico de 100 mL e completar o volume com
gua destilada.
7.7. Soluo saturada de carbonato de sdio
7.7.1. Preparo: Dissolver 35 g de carbonato de sdio em 100 mL de gua destilada a (70 80C), aquecer
at dissolver completamente.
7.8. Soluo padro de cido tnico
7.8.1. Preparo: Dissolver 50 mg de cido tnico em 500 mL de gua destilada. Transferir 20 mL desta
soluo para balo volumtrico de 100 mL e completar o volume com gua destilada.
7.9. Balo fundo chato 250 mL junta esmerilhada 24/40
7.10. Bales volumtricos de 500 mL e 100 mL
7.11. Condensador
7.12. Pipeta volumtrica de 5 mL e 20 mL
7.13. Pipetas graduadas de 5 mL e 10 mL
8. Equipamentos
8.2. Centrfuga
9. Amostragem
10. Procedimento
Caso o laboratrio no possua centrfuga, possvel substituir deixando a amostra em repouso por 15
minutos.
10.1. Confeco da Curva Padro
10.1.1. Pipetar para bales volumtricos de 100 mL, contendo 60 mL de gua destilada e 2 mL da soluo
de Folin-Denis, alquotas de 0,5 mL; 1,0 mL; 1,5 mL; 2,0 mL; 2,5 mL e 3,0 mL da soluo padro de cido
tnico. Seguir os passos 10.2.5, 10.2.6, 10.2.7 e 10.2.8 do Procedimento Analtico.
10.1.2. Existe a possibilidade de preparar apenas um ponto da curva de concentrao (0,1mg) para leitura
juntamente com a amostra todas as vezes que realizar anlise. Para isso transferir 20mL da soluo de
cido tnico para balo volumtrico de 100 mL e completar o volume com gua destilada.
10.2.1. Pesar 0.5g de amostra e transferir para balo de fundo chato adaptado a um refluxo, adicionar 90
mL de gua destilada e refluxar por 5 horas.
10.2.2. Deixar esfriar, transferir para balo volumtrico de 100 mL e completar o volume com gua destilada.
10.2.3. Centrifugar por 5 minutos. Pipetar uma alquota de 5 mL do sobrenadante e transferir para balo
volumtrico de 100 mL , adicionar 5 mL do reagente de Folin-Dennis, 10 mL da soluo de carbonato de
sdio e completar o volume com gua destilada.
199
10.2.4. Agitar bem e aguardar por 30 minutos.
10.2.5. Fazer o padro, adicionando 5 mL da soluo diluda padro de cido tnico (0,1 mg), 5 mL do
reagente de Folin-Dennis, 10 mL de carbonato de sdio e completar o volume com gua destilada em
balo volumtrico de 100 mL.
10.2.6. Fazer um branco com 5 mL do reagente de Folin-Dennis, 10 mL de carbonato de sdio e completar
o volume com gua destilada em balo volumtrico de 100 mL.
10.2.7. Fazer a leitura em absorbncia, aps zerar com o branco, usando 760 nm de comprimento de
onda ou o estabelecido por meio de varredura.
11. Clculo
Onde:
ASBA Absorbncia da amostra
CP Concentrao do padro na alquota de leitura
ASBP Absorbncia do padro
CA Concentrao da amostra na alquota de leitura
12. Bibliografia
ASSOCIATION OF OFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS. Official methods of analysis. 15. ed. 1990. method
952.03
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Mtodos Fsico-Qumicos para Anlise de Alimentos. 4. ed. Braslia: Instituto
Adolfo Lutz, 2005. mtodo 255/IV.
200
Mtodos Analticos
Teste de Rancidez -
Reao de Kreiss
MTODO N 53
Reviso: 2009
3 pginas
1. Introduo
Rancidez o nome que se d s alteraes no odor e no sabor do alimento, provocada pela ao do ar
(rancidez oxidativa) ou de microrganismos (rancidez cetnica). A floroglucina reage em meio cido com
os triglicerdeos, dando uma colorao rsea ou vermelha, cuja intensidade aumenta com a deteriorao
devida, provavelmente, presena de aldedo malnico ou de aldedo epidrnico. Geralmente, quando a
colorao de Kreiss intensa, pode-se deduzir que o valor do ndice de perxido ser elevado.
2. Recomendaes
produtos qumicos.
3. Escopo
Aplicvel a produtos crneos e a leos e gorduras.
No aplicvel.
5. Definies
No aplicvel
6. Reaes
7.3. Floroglucina p.a.
7.4. Permanganato de potssio p.a.
7.5. Soluo de Floroglucina 0,1%
7.5.1. Preparo: Pesar 0,1g de floroglucina p.a. e dissolver em ter etlico p.a. para balo volumtrico de
100 mL . Esta soluo deve ser preparada no mesmo dia.
201
7.6. Soluo de Permanganato de Potssio 0,002 M
7.6.1. Preparo: Pese 0,32 g de KMnO
4
e transfira para um bquer de 2L. Adicione 1000 mL de gua, cubra
com um vidro de relgio e leve a ebulio. Deixe a soluo em fervura suave durante cerca de 20
minutos. Esfrie temperatura ambiente, deixe em repouso em frasco fechado por alguns dias, no escuro,
e filtre atravs de cadinho de Gooch com placa porosa. Transfira o filtrado para frasco escuro, com rolha
esmerilhada.
7.7. Bquer de 50 mL
7.8. Cadinho de Gooch com placa porosa
7.9. Erlenmeyer 250 mL
7.10. Papel de filtro qualitativo ou algodo hidrfilo
7.11. Pipeta graduada de 5mL
7.12. Proveta de 25 ou 50 mL com tampa ou tubo de ensaio de no mnimo 20 mL com tampa
8. Equipamentos
8.1. Agitador Kline ou magntico
8.3. Banho-maria
9. Amostragem
10. Procedimento
possvel utilizar a gordura extrada pelo extrator Soxhlet, aps a determinao de extrato etreo.
10.1. Pesar 50g de amostra previamente moda, adicionar 100 mL da soluo de ter de petrleo e agitar
em agitador Kline ou magntico durante 30 minutos. (Opcionalmente pode-se deixar a amostra em contato
com o ter, ao abrigo da luz e calor, por uma noite).
10.2. Filtrar em funil de vidro contendo papel de filtro qualitativo ou algodo.
10.3. Receber o filtrado em um erlenmeyer de 250 mL e evaporar o resduo de ter em banho-maria a
80C.
10.4. Colocar em estufa a 105C, durante 10 minutos. Esfriar em dessecador. Este processo de evaporao
tambm pode ser realizado, opcionalmente, no rotaevaporador.
10.5. Transfira, com auxlio de uma pipeta, 5mL da gordura fundida para uma proveta ou tubo de ensaio
com tampa. Adicione 5mL de cido clordrico, tampe e agite por 30 segundos.
10.6. Adicione 5 mL de soluo de floroglucina 0,1%, tampe e agite novamente por 30 segundos. Deixe
em repouso por 10 minutos.
Na presena de substncias ranosas, a camada inferior apresentar colorao rsea ou vermelha.
Se a intensidade da colorao for fraca, compare a camada inferior com uma soluo de permanganato
de potssio (KMnO
4
) 0,0012% (3,8 mL de uma soluo 0,002M diludo para 100mL). Se a intensidade for a
mesma, ou inferior, pode-se deixar de levar em considerao o resultado, contanto que as caractersticas
sensoriais do produto sejam satisfatrias.
202
11. Clculo
No aplicvel
12. Bibliografia
INSTITUTO ADOLFO LUTZ . Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz.: Mtodos qumicos e fsicos para
anlise de alimentos. 4. ed. So Paulo: PROL, 2005. p. 507 508
203
Mtodos Analticos
Umidade -
Mtodo Direto
MTODO N 54
Reviso: 2009
2 pginas
1. Introduo
A amostra de alimento se destila adicionando tolueno. O azetropo formado, tolueno/gua, se separa
devido reduzida densidade do tolueno aps a condensao. A gua arrastada medida aps o trmino
da destilao.
2. Recomendaes
produtos qumicos.
3. Escopo
Amostras lquidas, forragens, silagens e outras passveis de alteraes quando analisadas pelo mtodo
indireto.
No aplicvel
5. Definies
No aplicvel
6. Reaes
No aplicvel
7.1. Tolueno p.a.
7.2. Balo de fundo redondo ou chato, capacidade 500 mL com junta esmerilhada
7.3. Condensador Liebig com junta esmerilhada.
8. Equipamentos
204
8.2. Manta ou placa aquecedora com controle de temperatura
8.3. Sistema receptor graduado de Dean and Stark ou Bidwell Stirling com capacidade para 10 mL ou
20 mL, diviso 0,1 mL com juntas (superior e inferior) esmerilhadas.
9. Amostragem
10. Procedimento
10.1. Pesar 20 a 30 g da amostra in natura (ou conforme a quantidade de gua estimada), diretamente no
balo.
10.2. Adicionar aproximadamente 200 mL de Tolueno p.a., conectar ao sistema e este ao condensador.
10.3. Aquecer a mistura lentamente, controlando a temperatura para manter o lquido em constante ebulio.
10.4. Destilar at volume constante da fase aquosa no tubo graduado.
10.5. Desligar e proceder leitura do volume final temperatura ambiente.
11. Clculo
Onde:
V Volume da fase aquosa no tubo graduado, em mL
12. Bibliografia
3. ed. Minas Gerais: Editora UFV, 2005. p. 33-35.
MATISSEK, R; SCHNEPEL, F.M; STEINER, G. Analisis de los alimentos: Fundamentos, mtodos,
aplicaciones. 2.ed. Espanha: Ed. Acribia, 1992. p.8-9
205
Mtodos Analticos
Umidade e Volteis
em Gros
MTODO N 55
Reviso: 2009
3 pginas
1. Introduo
Umidade e volteis corresponde perda em peso sofrida pela amostra quando aquecida em condies
nas quais a gua e outras substncias volteis so removidas.
Existem muitas variaes quanto ao tamanho, temperaturas e tempo de mtodo padro sendo esta
metodologia uma sugesto que no invalida a utilizao de mtodos diferentes, mais que possam reproduzir
resultados semelhantes ao mtodo sugerido.
2. Recomendaes
Ao utilizar estufa sem circulao de ar, recomenda-se no processar grande nmero de amostras
simultaneamente.
3. Escopo
Gros de cereais e oleaginosas.
No aplicvel
5. Definies
A expresso at peso constante significa que os valores obtidos em duas pesagens sucessivas diferem
no mximo, em 0,0005 g por grama de substncia.
Subentende-se temperatura ambiente como sendo a temperatura de 25C ( 10C).
6. Reaes
No aplicvel
7.1. Cadinho pesa filtro ou cpsula de alumnio
7.2. Dessecador com cloreto slica-gel anidro
206
7.3. Esptula
7.4. Moinho
8. Equipamentos
8.2. Estufa de secagem (preferencialmente com circulao de ar)
9. Amostragem
A amostra no deve sofrer aquecimento durante o processo de moagem, pois isto acarreta em perda de
umidade, aconselha-se o uso de moinho do tipo ultra-centrfugo
10. Procedimento
No deixar pesa filtro ou cadinho de alumnio em dessecador por um perodo superior a 3 horas.
10.1. Pr-secagem utilizando estufa a 45C por 24 horas
10.1.1. Pesar uma cpsula de alumnio ou cadinho pesa filtro, previamente seco em estufa a 135C 5C
e resfriado em dessecador at temperatura ambiente, registrar a identificao e o peso.
10.1.2. Pesar aproximadamente 15 gramas da amostras do gro na cpsula de alumnio ou cadinho pesa
filtro.
10.1.3. Colocar em estufa a 45C 2C por 24 horas
10.1.4. No final deste tempo, retirar e colocar em dessecador at equilbrio com a temperatura ambiente.
10.1.5. Pesar, anotar e determinar a umidade da etapa de pr-secagem.
10.1.6. Moer e reservar esta amostra para secagem definitiva.
10.2. Secagem definitiva utilizando estufa com circulao forada de ar a 135C por duas horas
10.2.1. Pesar uma cpsula de alumnio ou cadinho pesa filtro, previamente seco em estufa a 135C 5C
e resfriado em dessecador at temperatura ambiente, registrar a identificao e o peso.
10.2.2. Pesar aproximadamente 3 gramas da amostras do gro que sofreu pr-secagem e moagem, na
cpsula de alumnio ou cadinho pesa filtro.
10.2.3. Colocar em estufa a 135C 5C por 2 horas ou at peso constante.
10.2.4. No final deste tempo, retirar e colocar em dessecador at equilbrio com a temperatura ambiente.
10.2.5. Pesar, anotar e determinar a umidade da etapa de secagem definitiva.
11. Clculo
11.1. Clculo da umidade da pr-secagem
207
Onde:
U
Umidade pr-secagem (%)

A Peso do pesa filtro ou cadinho de alumnio, em grama
B Peso do pesa filtro ou cadinho de alumnio + amostra mida, em grama
C Peso do pesa filtro ou cadinho de alumnio + amostra aps secagem, em grama
11.2. Clculo da umidade da secagem definitiva
Onde:
U
Umidade secagem definitiva (%)

D Peso do pesa filtro ou cadinho de alumnio, em grama
E Peso do pesa filtro ou cadinho de alumnio + amostra mida, em grama
F Peso do pesa filtro ou cadinho de alumnio + amostra aps secagem, em grama
11.3. Clculo da umidade corrigida
11.3.1. Fator de correo:

11.3.2. Umidade corrigida:
11.4. Clculo da umidade total

12. Bibliografia
ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS Official Methods of Analysis. 18. ed. AOAC
INTERNATIONAL, Gaithersburg, MD, USA, 2005. method 934.01
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz: Mtodos fsico-qumicos para anlise
de alimentos. 4. ed. Braslia: Editora MS, 2005. p. 98-99.
3. ed. Minas Gerais: Editora UFV, 2005. p. 23-29.
LAZZARI, A. Flvio. Umidade, Fungos e Micotoxinas na Qualidade de Sementes, Gros e Raes. 1. ed.
Curitiba: Ed. do Autor, 1993.
208
Mtodos Analticos
Umidade e Volteis
MTODO N 56
Reviso: 2009
3 pginas
1. Introduo
Umidade e volteis corresponde perda em peso sofrida pela amostra quando aquecida em condies
nas quais a gua e outras substncias volteis so removidas.
2. Recomendaes
Ao utilizar estufa sem circulao de ar, recomenda-se no processar grande nmero de amostras
simultaneamente.
3. Escopo
Produtos e subprodutos de origem vegetal, animal e mineral, raes e concentrados.
No aplicvel
5. Definies
No aplicvel
6. Reaes
No aplicvel
7.1. Pesa filtro ou cpsula de alumnio
7.2. Dessecador com cloreto de clcio ou slica-gel anidros.
7.3. Esptula
8. Equipamentos
8.2. Estufa de secagem 105C 5C
209
9. Amostragem
10. Procedimento
10.1. Pesar a cpsula ou pesa filtro, limpo e previamente seco em estufa a 105C por uma hora, resfriar
em dessecador at temperatura ambiente.
10.2. Pesar de 3 a 5 g da amostra.
10.3. Colocar em estufa pr-aquecida a 105C at peso constante (4 a 6 horas).
10.4. Retirar o recipiente da estufa, esfriar em dessecador at equilbrio com a temperatura ambiente.
10.5. Pesar.
11. Clculo
Onde:
A Peso do recipiente + amostra, em grama
B Peso do recipiente + amostra aps secagem, em grama
12. Bibliografia
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz.: Mtodos qumicos e fsicos para
anlise de alimentos. 3 ed. So Paulo: IMESP, 1985. p. 21-22.
210
Mtodos Analticos Uria
MTODO N 57
Reviso: 2009
4 pginas
1. Introduo
Consiste na determinao do nitrognio da uria, liberado pela ao enzimtica da urease.
2. Recomendaes
produtos qumicos.
3. Escopo
Esse procedimento aplicvel uria ou produtos que a contenham.
No aplicvel
5. Definies
No aplicvel
6. Reaes
7.1. Cloreto de clcio (CaCl
2
) p.a.
7.2. xido de magnsio (MgO) p.a.
7.3. Urease p.a. ou Jack bean meal(feijo branco)
7.4. Uria (CH
4
N
2
O) p.a.
7.5. Acido brico 4%
7.6. Soluo reagente neutra de urease 1%
7.6.1. Determinao da acalinidade: Pesar exatamente 0,1 g de urease p.a., dissolver em 50 mL de gua
destilada e titular com soluo volumtrica padronizada de HCl 0,1M, utilizando vermelho de metila 0,1%
como indicador at viragem para colorao rsea. Anotar a quantidade de HCl 0,1M necessria para
neutralizar 0,1 g de urease.
7.6.2. Preparo: Pesar exatamente 1 g de urease p.a. em bquer de 100 mL e dissolver com
aproximadamente 50 mL de gua destilada. Neutralizar esta soluo utilizando a relao gramas de urease
211
p.a. / mL de HCl 0,1 M obtida na determinao da alcalinidade. Transferir para balo volumtrico de 100
mL, completar o volume com gua destilada e homogeneizar.
7.6.3. Determinao da atividade enzimtica: Adicionar quantidades crescentes de soluo neutra de
urease 1% a vrias amostras de 0,1 g de uria p.a. e prosseguir a partir do item 10.2 do procedimento.
Conforme os resultados obtidos, determina-se a quantidade mnima de soluo necessria para hidrolizar
0,1 g de uria.
7.7. Soluo volumtrica padronizada de cido clordrico 0,1 M
7.7.1. Preparo: Medir 8,5 mL de HCI p.a. e transferir para balo volumtrico de 1.000 mL, contendo
7.8. Soluo volumtrica padronizada de cido sulfrico 0,1 M
7.8.1. Preparo: Medir 5,5 mL de H
2
SO
4
p.a. e transferir para balo volumtrico de 1000 mL contendo
7.9. Soluo volumtrica padronizada de hidrxido de sdio 0,2 M
7.9.1. Preparo: Pesar cerca de 8,2 g de NaOH p.a. e dissolver em gua destilada. Transferir quantitativamente
para balo volumtrico de 1.000 mL, completar o volume e homogeneizar.
7.10. Soluo indicadora mista
7.10.1. Preparo: Dissolver 0,132 g de vermelho de metila p.a. em 70 mL de etanol p.a. Transferir
quantitativamente para balo volumtrico de 200 mL. Dissolver 0,066g de verde de bromocresol p.a.
em 70 mL de etanol p.a.. Juntar ao balo contendo vermelho de metila, completar o volume com
etanol p.a. e homogeneizar. Observao: O indicador misto poder ser incorporado soluo de cido
brico 4% (8 mL por litro).
7.11. Soluo reagente de cloreto de clcio 25%
7.11.1. Preparo: Pesar 25 g de CaCl
2
p.a. em bquer e dissolver com gua destilada. Transferir
7.12. Soluo antiespumante
7.13. Vermelho de metila
7.14. Bureta (div. 0,05mL)
7.15. Conjunto Kjeldahl para destilao macro
7.17. Frasco Kjeldahl de 500 ou 800 mL
7.18. Prolas de vidro 4 a 6 mm
7.19. Provetas de 10 e 100 mL
8. Equipamentos
9. Amostragem
10. Procedimento
Quando houver viragem da cor vermelha para amarela durante a fase de destilao, desconsiderar a
anlise em processo.
212
10.1. Pesar de 0,2 a 2 g da amostra, conforme o teor esperado de uria e transferir para frasco Kjeldahl de
500 ou 800 mL.
10.2. Adicionar aproximadamente 300 mL de gua destilada e 10 mL de soluo neutra de urease 1% ou
Jack bean meal em excesso (500 - 600 mg). Tampar hermeticamente e deixar temperatura ambiente
por 1 hora ou 20 minutos a 40C.
10.3. Abrir o frasco Kjeldahl e, sem agitar, adicionar 2 g de xido de magnsio p.a., 5 mL de soluo de
cloreto de clcio 25%, 3 mL de soluo antiespumante e 7 - 8 prolas de vidro.
10.4. Levar ao destilador, arrolhando rapidamente o frasco. Agitar e proceder destilao. Destilar de
modo que o condensado seja obtido temperatura ambiente.
Nota: O terminal do condensador deve ficar mergulhado na soluo durante a fase de destilao.
10.5. Recolher cerca de 150 a 200 mL do destilado em erlenmeyer de 300 mL ou 500 mL, contendo 50 mL
de soluo de cido brico 4% ou volume de soluo de H
2
SO
4
0,1 M, conforme o percentual de uria
esperado. (Neste caso, utilizar como indicador vermelho de metila 0,1%).
Nota: Orientao para volumes de H
2
SO
4
0,1 M a serem utilizados, de acordo com o percentual de uria
esperado:
Concentrao Esperada de Uria mL H
2
SO
4
0,1 M
at 1% 5
2% 10
5% 25
Proceder sempre a uma prova de recuperao utilizando uria p.a. (100 a 200 mg). Para valores esperados
acima de 5%, pesar massa correspondente e usar alquota apropriada.
10.6. Retirar o erlenmeyer, lavar o terminal do condensador e titular com HCl 0,1 M quando a soluo
receptora for H
3
BO
3
4%, ou com NaOH 0,2 M, quando a soluo receptora for H
2
SO
4
0,1 M. Proceder
titulao conforme descrito na metodologia para determinao de protena bruta.
10.7. Recolher aproximadamente 200 mL do destilado, mantendo o terminal do condensador mergulhado
na soluo receptora at que toda a amnia seja liberada.
10.8. Retirar o erlenmeyer, lavar o terminal do condensador e titular o excesso de cido com soluo de
NaOH 0,2 M at viragem do indicador (vermelho para amarelo). Observao: Ao utilizar cido brico 4%
empregar como titulante HCl 0,1 M at viragem do indicador misto (verde para rosa).
11. Clculos
11.1. Procedimento com uso de H
2
SO
4
0,1 M (titulao com NaOH):
Onde:
Va Volume da soluo de H
2
SO
4
0,1 M utilizado, em mL
Vb Volume da soluo de H
2
SO
4
0,1 M utilizado na prova em branco, em mL
F

2
SO
4
0,1 M
M
2
SO
4
Vs Volume da soluo de NaOH 0,2 M gasto na titulao, em mL
213
F
Fator de correo da soluo de NaOH 0,2 M

M

2,143 Fator de transformao do nitrognio em uria
M
2
SO
4
11.2. Procedimento com uso de cido brico (titulao com HCl):
Onde:
Va Volume da soluo de HCl 0,1 M gasto na titulao, em mL
Vb Volume da soluo de HCl 0,1 M gasto na prova em branco, em mL
F
Fator de correo da soluo de HCl 0,1 M

M
Molaridade da soluo de HCl

2,143 Fator de transformao do nitrognio em uria
M
2
SO
4
12. Bibliografia
setembro de 1991
214
Mtodos Analticos
Determinao de Zinco -
Via mida
MTODO N 58
Reviso: 2009
4 pginas
1. Introduo
A determinao de zinco por volumetria utilizada como alternativa metodologia por Espectrofotometria
de Absoro Atmica
Baseia-se na reao da amostra com o cloreto de amnio, para eliminao de contaminao por outros
metais. Posteriormente adicionado excesso de cido sulfrico formando sulfato de zinco e o excesso
do cido presente titulado com soluo alcalina de titulo conhecido.
2. Recomendaes
produtos qumicos.
3. Escopo
Mtodo aplicvel em xido de Zinco.
No aplicvel.
5. Definies
No aplicvel.
6. Reaes
2
SO
4
) p.a. (d = 1,84 g/mL)
7.2. Carbonato de sdio (Na
2
CO
3
) p.a.
7.3. Cloreto de amnio (NH
4
Cl) p.a.
215
7.5. Soluo de cido Sulfrico 0,5M
7.5.1. Preparo: Medir 27,5 mL de cido sulfrico p.a. e transferir para balo volumtrico de 1000 mL,
contendo aproximadamente 500 ml de gua destilada. Esfriar, completar o volume com gua destilada e
homogeneizar.
7.5.2. Padronizao: Pesar exatamente 1,00 g de carbonato de sdio (Na
2
CO
3
) p.a. previamente seco em
mufla a 270C por uma hora. Dissolver em erlenmeyer, adicionando aproximadamente 30 mL da soluo
de H
2
SO
4
0,5M e 4 gotas de soluo de vermelho de metila. Prosseguir a titulao gotejando a soluo de
H
2
SO
4
0,5M at leve colorao rsea. Aquecer at ebulio e esfriar. Havendo permanncia da colorao
rsea, considerar terminada a titulao. Caso contrrio, prosseguir repetindo a operao at colorao
permanente.
Onde
MR Molaridade real da soluo de H
2
SO
4
P Peso do Na
2
CO
3
, em mg
V Volume de H
2
SO
4
mol Unidade molar do Na
2
CO
3
7.6. Soluo volumtrica padronizada de hidrxido de sdio 1M
7.6.1. Preparo: Pesar aproximadamente 45 g de NaOH p.a. e dissolver em gua destilada. Transferir
7.6.2. Padronizao: Pesar exatamente 3,0 g de biftalato de potssio p.a. previamente seco em estufa a
120C por duas horas. Dissolver em erlenmeyer com aproximadamente 75 mL de gua destilada. Adicionar
4 gotas de soluo indicadora de fenolftalena 10g/L e titular gotejando a soluo de NaOH 1M at
colorao levemente rsea.
Onde
P Peso do biftalato de potssio, em mg
V Volume de NaOH 1M gasto na titulao, em mL
mol Unidade molar do biftalato de potssio
216
7.7. Soluo alcolica indicadora de vermelho de metila 1 g/L
7.7.1. Preparo: Dissolver 0,1 g de vermelho de metila p.a. em aproximadamente 40 mL de gua destilada.
Transferir para balo volumtrico de 100 mL, completar o volume com lcool etlico e homogeneizar.
7.8. Soluo alcolica indicadora de fenolftalena 10 g/L
7.8.1. Preparo: Dissolver 1,0 g de fenolftalena p.a. em aproximadamente 40 mL de gua destilada. Transferir
para balo volumtrico de 100 mL, completar o volume com lcool etlico e homogeneizar.
7.11. Bureta
7.12. Cpsula ou cadinho de porcelana
7.13. Erlenmeyer
8. Equipamentos
8.2. Forno mufla
9. Amostragem
10. Procedimento
10.1. Pesar 1,5 g da amostra, previamente moda e homogeneizada, em cadinho ou cpsula de porcelana.
10.2. Levar ao forno mufla e aumentar gradualmente a temperatura at 550/600C. Manter durante 2 horas.
10.3. Retirar a 250C e resfriar em dessecador at equilbrio com a temperatura ambiente.
10.4. Transferir quantitativamente com o auxlio de basto de vidro e gua destilada para erlenmeyer de
500 mL contendo 2,5 g de cloreto de amnio.
10.5. Adicionar 50 mL de soluo de H
2
SO
4
1M. Aquecer at dissoluo e esfriar a temperatura ambiente.
10.6. Adicionar 5 a 10 gotas de soluo de vermelho de metila 1 g/L e titular com soluo de hidrxido de
sdio 1M at viragem de vermelho para amarelo.
11. Clculos
Onde:
V
Volume da soluo de H
2
SO
4
1M empregada, em mL
M
Molaridade real da soluo de H

2
SO
4
1M
V
Volume da soluo de NaOH 1M gasto na titulao, em mL

M
Molaridade real da soluo de NaOH 1M

1 mL de H
2
SO
4
1M equivale 0,032685 g do zinco
217
12. Bibliografia
preparao, purificao. 2. ed. 1972
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Mtodos fsico-qumicos para anlise de alimentos. 4. ed. 2005

Metodos Analiticos I

Uploaded by

Document Information

Copyright

Available Formats

Share this document

Share or Embed Document

Sharing Options

Did you find this document useful?

Is this content inappropriate?

Copyright:

Available Formats

Metodos Analiticos I

Uploaded by

Copyright:

Available Formats

1

Guia de Mtodos Analticos

Fator de correo da soluo de EDTA 0,01 M

Molaridade da soluo de EDTA 0,01 M

Volume gasto de EDTA 0,01 M na titulao da soluo de CaCO

Fator de correo da soluo de CaCO

Molaridade da soluo de CaCO

Volume gasto de CaCO

Volume do primeiro balo de diluio, em mL

Volume do segundo balo de diluio, em mL

Volume da pipeta utilizada na primeira alquota, em mL

Volume da pipeta utilizada na segunda alquota, em mL

C - 80C e titular nessa temperatura gotejando a

Fator de correo da soluo de permanganato de potssio 0,1M

Volume de HCl 0,1M gasto na titulao da amostra, em mL

Volume de HCl 0,1M gasto na titulao do branco, em mL

Volume de NaOH 0,2M gasto na titulao, em mL

Fator de correo do NaOH 0,2M

Molaridade da soluo de NaOH

Volume da soluo tiossulfato de sdio 0,1M gasto na titulao do branco, em mL

Volume da soluo tiossulfato de sdio 0,1M gasto na titulao, em mL

Volume da soluo de NaOH 0,2M gasto na titulao da amostra, em mL

Fator de correo da soluo de H

Fator de correo da soluo de NaOH 0,2M

Molaridade da soluo de NaOH

Volume de NaOH 0,2M gasto na titulao, em mL

Fator de correo do NaOH 0,2M

Molaridade da soluo de NaOH

Molaridade real da soluo de NaOH 0,2M

Fator de correo da soluo de NaOH 0,2M

Molaridade terica da soluo de NaOH 0,2M

Fator de correo da soluo de H

Fator de correo da soluo de NaOH 0,2M

Volume de NaOH 0,2M gasto na titulao, em mL

Fator de correo do NaOH 0,2M

Molaridade da soluo de NaOH

Molaridade Real da soluo de Iodo 0,1M

Molaridade real da soluo de iodo 0,1M

Umidade pr-secagem (%)

Umidade secagem definitiva (%)

Fator de correo da soluo de H

Fator de correo da soluo de NaOH 0,2 M

Molaridade da soluo de NaOH

Fator de correo da soluo de HCl 0,1 M

Molaridade da soluo de HCl

Molaridade real da soluo de H

Volume da soluo de NaOH 1M gasto na titulao, em mL

Molaridade real da soluo de NaOH 1M

You might also like