Exerccio 1) Faa um resumo dos tipos de operaes dos biorreatores.

Cite em
quais processos eles podem ser empregados.
Biorreatores so equipamentos capazes de multiplicar mudas de plantas com muito mais
higiene, segurana e economia. So utilizados para o cultivo de clulas, tecidos ou
rgos em meio de cultura liquido e visam produzir plantas de forma automtica, com
monitoramento e controle das condies de cultivo, alm de menor manipulao de
culturas. Biorreatores podem ser operados de forma Semi!ont"nua, !ont"nua,
#escont"nua e #escont"nua com $limentao.
% $ caracter"stica principal do processo Semi!ont"nuo a interrupo do flu&o de
entrada no reator e do material fermentado por algum tempo. #epois de adicionado ao
reator o meio de fermentao e o inoculo, aguardase o trmino da fermentao. $ps
fermentado, parte do meio retirado do reator e transferido para outro. $m'os os
reatores so completados e o processo reiniciado. (sse procedimento repetido
continuamente enquanto no houver queda de produtividade. $s vantagens do processo
so a possi'ilidade de operar o fermentador por longos per"odos, sem a necessidade de
preparo de novo inoculo e a possi'ilidade de aumentar a produtividade alterando apenas
o cronograma de tra'alho. )esse aspecto, otimizadas as condies de tra'alho, o
aumento tornase considervel, quando comparado ao processo #escont"nuo. *uanto +
aplicao, o processo Semicont"nuo restrito, sendo indicado apenas para poucos
volumes de material fermentado.
% , processo !ont"nuo esta'elece um flu&o cont"nuo de l"quido num reator ou em vrios
reatores em srie. )os reatores em srie, a alimentao de um reator da srie feito com
o efluente do reator anterior e assim sucessivamente. - um 'om processo para aplicao,
visto sua 'oa produtividade .s interrompido de tempos em tempos ou em caso de
contaminao/, a o'teno de um caldo fermentado mais uniforme e o alto grau de
automao. 0esmo apresentando essas vantagens, o processo requer um alto
investimento inicial, dificuldades na manuteno da homogeneidade do reator, se estiver
tra'alhando em 'ai&as vazes, por e&emplo, alm de sua alta vulnera'ilidade a
contaminaes, 1 que a limpeza dos reatores feita com menor periodicidade.
,peraes cont"nuas podem ser aplicadas em processos que requerem 'ai&o grau de
assepsia, em tratamento de efluentes industriais e em fermentaes alcolicas.
% , processo Batelada caracterizado por apresentar um tempo morto entre uma
fermentao e outra. )essa operao, o material a ser fermentado adicionado ao reator
1untamente com o inculo. )o decorrer do processo, nada adicionado + mistura, e&ceto
,&ig2nio em processos aer'ios. $o fim da operao, o material fermentado removido
do reator e passa por etapas adicionais .centrifugao, por e&emplo/. , reator limpo e
esterilizado para que uma nova carga de material e inculo se1am adicionadas. (sse
tempo de preparo o chamado tempo morto, necessrio para garantir segurana contra
contaminaes e pre1u"zos com rendimentos. !omo vantagens, essa operao
apresenta uma maior facilidade de operao e controle, menor risco de contaminaes e
ser uma operao em curto prazo. !omo desvantagens, o processo apresenta maiores
custos e reduo do tempo 3til, com o tempo de preparo do reator, podem ocorrer desvios
no meta'olismo celular e ini'ies, pela adio do su'strato em uma 3nica vez. ,
processo em Batelada apresenta alta aplica'ilidade, sendo utilizada na o'teno de
grande parte dos produtos fermentados, como vinhos, cerve1as, iogurtes, entre outros.
% , processo #escont"nuo com $limentao conduzido como o processo #escont"nuo,
porm os nutrientes so adicionados gradualmente ao reator. $ vazo dessa alimentao
pode ser constante ou variada e o volume no reator pode variar dependendo da
concentrao de su'strato e da ta&a de evaporao do sistema. $ps o enchimento do
reator, no h entrada ou sa"da de material at o trmino da fermentao, o que
caracteriza o processo como #escont"nuo. (sse tipo de operao apresenta 'oa
aplica'ilidade, sendo utilizada na produo de 4eveduras, 5licerol, $cetona, entre outros.
$lguns e&emplos de 'iorreatores6
Biorreatores tipo aerador agitador6 (sse tipo de 'iorreator o mais parecido com os
fermentadores convencionais. $ agitao 'asicamente feita por meio de hlices
conectadas a um ei&o giratrio. - 'asicamente utilizado para clulas e em'ries
somticos. $ grande desvantagem desse modelo de
'iorreator que, para haver uma 'oa homogeneizao do meio, necessrio que a
hlice gire em velocidades suficientemente elevadas, o que, regra, causa dano mec7nico
acentuado ao material em cultivo, principalmente em hastes e gemas.
Biorreator tipo tam'or rotatrio6 )esse tipo de 'iorreator, o frasco de cultivo gira
suavemente em movimentos rotacionais so're dois ei&os, que servem no apenas de
apoio, mas que tam'm so responsveis por imprimir ao frasco de cultivo o movimento
rotatrio. )esse tipo de 'iorreator, o dano mec7nico m"nimo e adequado ao cultivo de
em'ries e plantas. (ntretanto, o n"vel de o&igenao s adequado quando se utilizam
meios de cultura com alta viscosidade.
Biorreator tipo filtro rotatrio6 Biorreator de filtro rotatrio apresenta um filtro conectado a
um ei&o central, por onde o meio de cultura descarregado. (sse elemento
responsvel igualmente pela homogeneizao, 'em como pela aerao do material em
cultivo. (sse tipo de 'iorreator funciona satisfatoriamente 'em para propagao via
em'riog2nese somtica.
Biorreator tipo 'or'ulhamento6 , 'iorreator tipo 'or'ulhamento apresenta uma
constituio muito simples. $ homogeneizao do meio, 'em como a aerao so feitos
via 'or'ulhamento de ar no fundo do frasco. 8ode ser de dois tipos6 aerao simples ou
coluna de 'olha.
Biorreator de aerao simples e coluna de 'olha6 $ relao altura9di7metro de : a ;
define o 'iorreator de aerao simples e se a relao < ou acima, o 'iorreator do tipo
coluna de 'olha. (sses modelos de 'iorreatores apresentam 'ons resultados no cultivo
de hastes caulinares, 'ul'os, cormos e tu'rculos. (sse modelo de 'iorreator foi
desenvolvido e utilizado primeiramente na micropropagaco.
Biorreator do tipo levantamento de ar6 , meio de cultura nesse tipo de 'iorreator
movido de 'ai&o para cima dentro de um tu'o situado verticalmente no interior do frasco
pelas 'olhas de ar produzidas no fundo do frasco de cultivo. (sse modelo apresenta 'ons
resultados, uma vez que h uma 'oa aerao e homogeneizao do meio de cultura e
pouco dano mec7nico ao material em cultivo. $ 3nica diferena desse 'iorreator para o
modelo anterior que o 'or'ulhamento de ar feito dentro de um tu'o centralizado no
frasco de cultivo.
Biorreator do tipo fase gasosa6 (sse modelo equipado com um suporte perfurado so're
o qual o material em cultivo posicionado. , meio de cultura, pulverizado so're o
material em cultivo , em seguida, drenado pela 'ase de suporte e novamente 'om'eado
e pulverizado a intervalos preesta'elecidos. (sse tipo de 'iorreator apresenta e&celentes
resultados no cultivo de clulas, tecidos e rgos porque no h dano mec7nico nem
agitao via 'or'ulhamento. , inconveniente desse modelo a no renovao do ar
interno do frasco de cultivo, o que pode ser contornado com
a incluso de um sistema de aerao via in1eo de ar estril.
Biorreator de aerao por mem'rana porosa ao o&ig2nio6 , frasco de cultura desse tipo
de 'iorreator contm uma canalizao fina em forma de espiral feita de material poroso
ao o&ig2nio, que pode ser de teflon, silicone, policar'onato ou polipropileno, atravs do
qual o o&ig2nio passa para o meio de cultura. (sse modelo de 'iorreator no apresenta
pro'lemas relacionados com o dano mec7nico, uma vez que no h nenhum tipo de
agitao, entretanto, a homogeneizao do meio de cultura fica pre1udicada.
Biorreator do tipo so'reaerao6 )esse modelo, a aerao feita por sopramento do ar
estril so're o meio de cultura. (ventualmente, esse tipo de aerao pode ser com'inado
com agitao suave do meio. (sse modelo apresenta defici2ncia na aerao, o que pode
comprometer o crescimento, so'retudo, de clulas e tecidos.
Exerccio 2) Qual a importncia da parede celular das leeduras!
$ parede celular das leveduras desempenha papel importante no meta'olismo,
transportando molculas para dentro e fora da clula, alm de proteger o protoplasma.
Sa'ese que a parede celular das leveduras apresenta uma grande diversidade de
componentes qu"micos, dentre estes, enzimas responsveis pela hidrlise e&tracelular de
nutrientes ou de macromolculas durante a morfog2nese celular. $lgumas
macromolculas da parede so parte integrante em reaes de agregao celular que
ocorrem durante a reproduo e floculao.
$s leveduras, vivas ou no, possuem na sua composio uma frao de car'oidratos
.;=> a ?=>/, que na grande maioria fazem parte da parede celular, que composta
principalmente por @glucanos e mananos.0,S/.,s quais tem impacto no sistema
imunolgico e a capacidade de revenir a colonizao de 'actrias patog2nicas no trato
gastrointestinal.
Exerccio ") Quais s#o as antagens do processo de imobili$a#o de c%lulas
&microrganismos)! Explique.
, estado morfolgico do microrganismo durante o processo fermentativo influencia
diretamente a o'teno dos produtos micro'ianos de interesse, por diminuir o tempo de
cultivo e aumentar o rendimento do processo. ,s fungos, por e&emplo, apresentam uma
morfologia 'astante comple&a com estruturas celulares diferentes em cada etapa do seu
ciclo de vida.
Ama das alternativas encontradas para BengenheirarC a estrutura morfolgica destes
microrganismos a imo'ilizao celular .D!/, de maneira que se1a preservada a atividade
catal"tica dese1ada, para aplicao tanto em escala de la'oratrio quanto industrial. $
tecnologia da D! se restringe + produo de meta'litos e&tracelulares ou a utilizao de
microrganismos como 'iocatalizadores.
$ D! consiste no confinamento f"sico das clulas em uma regio definida de espao, na
qual so mantidas suas atividades catal"ticas em processos de operao cont"nua ou
descont"nua possi'ilitando a reutilizao das mesmas. $ maioria dos processos
fermentativos industriais convencionais utiliza clulas livres em suspenso, porm o uso
de microrganismos imo'ilizados .0D/ permite um aumento da produtividade devido +
elevada concentrao de clulas.
$ maior concentrao de clulas micro'ianas no suporte garante a s"ntese dos
meta'litos e aumenta a efici2ncia da fermentao. $lm disso, facilita a recuperao dos
produtos do meta'olismo de interesse na fase de BdoEnstreamC e a1uda na manuteno
dos fermentadores, uma vez que no apresenta pro'lemas de adeso e o'struo aos
eletrodos e tu'os.
$ reutilizao das clulas imo'ilizadas considerada uma das grandes vantagens da D!,
principalmente quando os suportes escolhidos para imo'ilizao so inertes e
apresentam alta resist2ncia mec7nica. $ D! surgiu como alternativa + imo'ilizao de
enzimas, pois no requer etapas de e&trao, isolamento e purificao. #esde ento, o
processo de imo'ilizao tem conseguido vrios avanos, principalmente na rea da
'iotecnologia, permitindo a o'teno de meta'litos micro'ianos de maneira mais
eficiente.$ D! tam'm representa uma alternativa ao uso
dos sistemas slidos de fermentao. ,s processos que empregam 0D podem ser
realizados em espao f"sico menor, como em 'iorreatores, ocorrem em am'ientes com
maior atividade de gua e permitem melhor controle de contaminaes.
(m'ora apresente algumas desvantagens, o uso de clulas micro'ianas imo'ilizadas
compensado
pelas vantagens que o mtodo proporciona. , processo de imo'ilizao pode no ser
econFmico e
as limitaes de transfer2ncia de massa podem afetar a fisiologia e cintica do
crescimento celular. $lm disso, a matriz utilizada pode romperse devido ao crescimento
celular e evoluo de gases, devido +s limitaes na transfer2ncia de o&ig2nio. $ssim,
para que a D! apresente sucesso, necessrio escolher adequadamente a metodologia a
ser utilizada.
$ D! tam'm representa uma alternativa ao uso dos sistemas slidos de fermentao. ,s
processos que empregam 0D podem ser realizados em espao f"sico menor, como em
'iorreatores, ocorrem em am'ientes com maior atividade de gua e permitem melhor
controle de contaminaes.
Exerccio ') Qual a di(erena entre respira#o e (ermenta#o!
Gespirao celular referese a um processo atravs do qual as clulas convertem
alimento em energia. Hermentao uma reao qu"mica espec"fica no ciclo respiratrio.
$contece quando as clulas no t2m acesso ao o&ig2nio, uma condio
tam'm conhecida como respirao anaer'ica. , processo de fermentao produz 'em
menos energia do que a respirao aer'ica ou + 'ase de o&ig2nio.
)a respirao ocorre a o&idao 'iolgica de su'stratos org7nicos so' sistemas
multienzimticos que catalizam a o&idao. I transporte de eltrons na cadeia
respiratria onde h ativao do o&ig2nio .aceptores/ e formao de gua. - o processo
de produo de energia, na clula, atravs da com'usto da glicose.
)a fermentao ocorres reaes em que compostos org7nicos atuam como su'stratos e
como agentes de o&idao, em uma sequ2ncia ordenada de reaes enzimticas. I
converso de uma molcula em outra, com produo de energia.
(&6 Jipos de Hermentao e GespiraoK
% Hermentao $lcolica6
5licose % lcool et"lico L !,; L ; $J8
% Hermentao $ctica6
5licose % cido actico L !,; L ; $J8
% Gespirao $er'ia6
5licose L ,; % !,; L I;, L <M ou <N $J8
Exerccio )) Qual a (inalidade do estudo cin%tico de uma (ermenta#o! *ostre
esquematicamente como s#o os per(is normais esperados da concentra#o de
substrato+ c%lula e produto.
, estudo cintico de um processo fermentativo consiste na anlise da evoluo dos
valores de concentrao de um ou mais componentes do sistema de cultivo, em funo
do tempo de fermentao.
Sem o conhecimento da cintica tornase invivel a transposio de escala do la'oratrio
para a ind3stria, uma vez que os valores cinticos fazem parte de um con1unto de dados
necessrios ao dimensionamento de uma instalao produtiva.
$travs do estudo cintico temse a possi'ilidade de uma comparao quantitativa entre
condies de cultivo.
(ntendese por componentes6
% 0icrorganismo .'iomassa/K representado pela letra OK
% 8rodutos do meta'olismo .meta'litos/K representados pela letra 8K
% )utrientes .su'strato/ que compem o meio de culturaK representados pela letra S.
Jais valores e&perimentais de concentrao .O, 8 e S/, quando representados em funo
do tempo, permitiro os traados das curvas de a1uste.
!urvas de a1uste dos resultados de uma e&peri2ncia idealizada de fermentao6
S"m'olos6
O P concentrao de microrganismo 8 P concentrao de produto
S P concentrao de su'strato J P tempo
Om e 8m P valores m&imo de O e 8K O= e S= P valores iniciais de O e 8
Sf P valor final de su'stratoK Jf P tempo final de fermentao
#entre os produtos formados, escolhese para o estudo cintico o produto de interesse
econFmico.
#entre os poss"veis su'stratos e&istentes no meio de cultura, utilizase o que for limitante.
Exerccio ,) Com os dados experimentais de 2 cultios descontnuos empregando
di(erentes microrganismos+ como mostram as tabelas abaixo+ calcular os seguintes
parmetros de trans(orma#o do processo-
. /rodutiidade m0xima de biomassa1
. /rodutiidade m0xima de produto1
. Fatores de coners#o (inal do processo1
2 que pode ser obserado pelos resultados apresentados+ uma e$+ que estes
microrganismos utili$aram as mesmas condies extrnsecas e intrnsecas+ al%m da
mesma quantidade inicial de substrato! 3iscuta.
4empo &5) 6 &g78) 9 &g78) / &g78)
0 0,91 106,9 0
4 0,91 106,9 0
8 1,61 96,8 6,2
12 2,42 83,6 15
16 3,59 59,9 23,5
20 4,71 31,6 34,3
24 5,51 10,6 42,2
28 5,56 7 42,8
Tabela 1- Fermentao empregando S. cerevisiae
4empo &5) 6 &g78) 9 &g78) / &g78)
0 0,89 106,9 0
4 0,97 105,6 0,68
8 1,52 98,6 5,8
12 2,46 82,9 14,2
16 3,6 52,5 27,0
20 4,71 32,2 34,4
24 5,49 10,5 41,7
28 5,57 7,0 42,8
Tabela 2 Fermentao com !ngo "lamento#o
Q !alculo para produtividade 0&ima em Biomassa6
P
x
=
(
X
m
X
0
)
t
f
8
&
P 8rodutividade em BiomassaK
O
=
P !oncentrao inicial de clulasK
O
m
P !oncentrao atual de clulasK
t
f
P Jempo final de fermentao.
% Hermentao !om S. cerevisiae6
8
&
P .O
m
R O
o
/9t
f
P .S,SM R =,T:/9;N P =,:MM g.4
:
.h
:
% Hermentao com Hungo Hilamentoso6
8
&
P .O
m
R O
o
/9t
f
P .S,SU R =,NT/9;N P =,:MU g.4
:
.h
:
Q !alculo para produtividade 0&ima do 8roduto6
P
p
=
(
P
m
P
0
)
t
fp
8
p
P 8rodutividade do 8roduto
8
=
P 8rodutividade inicialK
8
m
P 8rodutividade atual
t
fp
P Jempo final de produo.
% Hermentao com S. cerevisiae6
8
p
P .8
m
R 8
o
/9t
f
P .?;,N R =/9;N P :,S;T g.4
:
.h
:
% Hermentao com Hungo Hilamentoso6
8
&
P .8
m
R 8
o
/9t
f
P .?;,N R =/9;N P :,S;T g.4
:
.h
:
Q Hatores de !onverso Hinal do 8rocesso6
Q Hator de !onverso do Su'strato em Biomassa6
Y
X /S
=
X
m
X
0
S
0
S
m

V
O9S
P Hator de !onversoK
O
m
P !oncentrao celular no instante tK
O
=
P !oncentrao celular inicialK
S
m
P !oncentrao de su'strato no instante tK
S
=
P !oncentrao de su'strato inicial.
% Hermentao com S. cerevisiae6
V
O9S
P .O
m
R O
o
/9.S
o
S
m
/ P .S,SM R =,T:/9.:=M,T R U/ P =,=?MS
% Hermentao com Hungo Hilamentoso6
V
O9S
P .O
m
R O
o
/9.S
o
S
m
/ P .S,SU R =,NT/9.:=M,T R U/ P =,=?MN
Q Hator de !onverso do Su'strato em 8roduto6
Y
P/ S
=
P
m
P
0
S
0
S
m
V
89S
P Hator de !onversoK
8
m
P !oncentrao de produto no instante tK
8
=
P !oncentrao de produto inicialK
S
m
P !oncentrao de su'strato no instante tK
S
=
P !oncentrao de su'strato inicial.
% Hermentao com S. cerevisiae6
V
89S
P .8
m
R 8
o
/9.S
o
S
m
/ P .?;,N R =/9.:=M,T R U/ P =,?;N
% Hermentao com Hungo Hilamentoso6
V
89S
P .8
m
R 8
o
/9.S
o
S
m
/ P .?;,N R =/9.:=M,T R U/ P =,?;N
Q Hator de !onverso de Biomassa em 8roduto6
Y
P/ X
=
P
m
P
0
X
m
X
0
V
89O
P Hator de !onversoK
8
m
P !oncentrao de produto no instante tK
8
=
P !oncentrao de produto inicialK
O
m
P !oncentrao celular no instante tK
O
=
P !oncentrao celular inicial.
% Hermentao com S. cerevisiae6
V
89O
P .8
m
R 8
o
/9.O
m
O
o
/ P .?;,N R =/9.S,SM R =,T:/ P T,;=?
% Hermentao com Hungo Hilamentoso6
V
89O
P .8
m
R 8
o
/9.O
m
O
o
/ P .?;,N R =/9.S,SU R =,NT/ P T,:?S
$s curvas do comportamento da S. cerevisiae e do Hungo filamentoso .relao +
!oncentrao de !lulas .O/, de Su'strato .S/ e de 8roduto .8//, foram6
!oncentrao de !lulas vs Jempo de Hermentao
!oncentrao de Su'strato vs Jempo de Hermentao
!oncentrao de 8roduto vs Jempo de Hermentao
$nalisando as curvas e os dados podemos o'servar que a S. cerevisiae possui uma fase
de adaptao maior que o Hungo Hilamentoso. !oncluise isto atravs do consumo de
su'strato e gerao de produto aps ? horas de fermentao, no caso da 4evedura,
enquanto que para o Hilamentoso 1 h formao de produto antes desse tempo.
8elas curvas perce'emos que o consumo de su'strato e a produo de 'iomassa no
so proporcionais. 8ois um pouco da energia, proveniente daquele consumo, destinada
+ manuteno do meta'olismo micro'iano. 8odemos o'servar que uma diferena entre o
consumo de su'strato e gerao de produto visto entre :S e :M horas. $lm disso, a
produtividade m&ima da levedura nas 3ltimas ? horas do processo varia menos que do
Hungo Hilamentoso, o que pode estar relacionado com o fato de a S. cerevisiae ser mais
seletiva em relao ao su'strato.
Exerccio :) Calcule o alor de ;s e <max atra%s dos dados (ornecidos+ bem como
os alores de elocidade especi(ica de crescimento para cada concentra#o se
substrato empregado.
$l"co#e %g&'( )ma* %+,-1(
0,01 0,160
0,15 0,486
0,50 0,644
1-10 0,673
20 0,701
90 0,701
1

x
=
1

max
+
K
s

max

1
S
Walores o'tidos pela regresso linear6
1/S :==,= M,MMU ;,= =,T=T =,=S= =,=::
1/
max
M,;S ;,=SN :,SS< :,?NM :,?;U :,?;U
$ equao na regresso linear foi 6V P :,?TS;M L =,=?UU O 9 r P =,TTN
% !lculo do X
ma&
6
1

max
=a
PY

max
=
1
1, 49527
PY X
ma&
P =,MMT h
:
% !lculo do Z
S
6
K
S

max
=b PY
K
S
=0,0477 0,669
PY Z
S
P =,=<:T g 4
: