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MEMORIA
Fundacin La Salle de Ciencias Naturales
Tomo LIX, nmero 151, enero/junio 1999
EL BANCO DE CEPAS DE MICROALGAS DE LA ESTACIN DE
INVESTIGACIONES MARINAS DE MARGARITA, FUNDACIN LA
SALLE DE CIENCIAS NATURALES
Esperanza Buitrago, Martn Llano
y Khenia Frontado
Estacin de Investigaciones Marinas de Margarita EDIMAR
Fundacin La Salle de Ciencias Naturales
Apartado 144, Porlamar, Venezuela
Correo electrnico: edimar_oceano@intercon.net.ve
Palabras clave: Banco de cepas. Microalgas. Fitoplancton. Coleccin cultivos.
Base de datos.
RESUMEN
Se presenta el diseo de una base de datos automatizada que almacena la
informacin correspondiente al banco de cepas de microalgas del laboratorio de
cultivos de la Estacin de Investigaciones Marinas de Margarita de La Fundacin
La Salle de Ciencias Naturales. Se administra informacin de microalgas marinas
y de agua dulce, mantenidas en cultivos unialgales desde 1980; el proceso de
mantenimiento y enriquecimiento del banco es continuo y acumulativo a travs
del tiempo. Las cepas aisladas que ingresan al banco son caracterizadas y toda la
informacin generada en cuanto a identificacin taxonmica, parmetros de
crecimiento, composicin bioqumica, medios de cultivo y aplicacin en
acuicultura, biotecnologa o ensayos de ecotoxicidad, es ingresada en tablas
relacionadas entre s dentro de la base de datos.
THE COLLECTION OF MICROALGAL STRAINS OF FUNDACION
LA SALLES MARGARITA MARINE RESEARCH STATION.
Key words: Strains Bank. Microalgae. Phytoplancton. Culture collection. Data
base.
ABSTRACT
The design of a computerised data base that stores the information of a
Culture collection of microalgae is showed. The culture collection is maintained
at the Aquaculture Department of Margaritas Research Station from La Salle
Natural Science Foundation.
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The data base has information of fresh water and marine microalgae, kept at
unialgal cultures since 1980. The maintenance and new entries to the culture
collection, is a continuos and increasing process through the time. Each isolated
microalgae is characterised and all the data about their taxonomic identity,
growing parameters, biochemical composition, culture media, aquaculture uses,
biothecnology and toxicity bioassays is stored in related tables in the data base.
INTRODUCCIN
El banco de cepas de microalgas de la Estacin de Investigaciones Marinas de
Margarita (EDIMAR, Fundacin La Salle de Ciencias Naturales), se inici en 1980
(Varela, 1985). El objetivo del banco es mantener y enriquecer una coleccin de
cultivos unialgales, como un proceso continuo y acumulativo a travs del tiempo,
para lo cual se realiza el aislamiento de muestras de especies autctonas y la
adquisicin de cepas nuevas por medio de intercambio con otros laboratorios.
Las microalgas incluidas dentro del banco presentan caractersticas deseables
para su utilizacin en acuicultura, biotecnologa y ensayos de ecotoxicidad. Una
de las principales funciones del banco de cepas es la de suministrar, a la comunidad
cientfica y a la industria, cultivos vivos de microalgas y toda su informacin
asociada.
Con el propsito de hacer ms efectivo el trabajo relativo al mantenimiento
del banco de cepas, as como el de prestar un ms eficiente servicio a los usuarios
del mismo y dado que el nmero de cepas fue creciendo de forma acelerada, se
tom la decisin de crear una base de datos automatizada que almacenara toda la
informacin correspondiente a cada especie, as como sus caractersticas biolgicas,
bioqumicas, sus aplicaciones y cualquier otro dato de inters.
La base de datos del Banco de Cepas de Microalgas se encuentra formando
parte del Sistema de Informacin Oceanogrfico de EDIMAR (SIOCDE; Llano,
1995), a partir del cual se seleccion la plataforma ms adecuada para su realizacin,
y se diseo la base de datos correspondiente.
MATERIALES Y MTODOS
Aislamiento y Mantenimiento de las microalgas
El enriquecimiento del banco de cepas se logra mediante el aislamiento de
microalgas del medio natural. Los mtodos para aislamiento de las cepas tienen
como objetivo obtener una poblacin de microalgas partiendo de un slo individuo.
Este tipo de cultivo se denomina clonal. Dentro del procedimiento de aislamiento
de una cepa de microalgas a partir de una muestra natural, uno de los primeros
paso es el enriquecimiento de la muestra, el cual puede ser completo y/o selectivo
(Coll, 1991).
Existen diferentes mtodos para el aislamiento de cepas puras o en cultivo
unialgal. Entre los ms utilizados estn: el aislamiento con micropipetas, de
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diluciones seriadas, aislamiento en medio slido (tanto por extensin en cpsulas
de petri como por aspersin) y por fototropismo (Droop, 1954; Hoshaw y Rosowski,
1973). Los mtodos a utilizar dependen principalmente de las dimensiones de las
microalgas, de su motilidad o no, as como de su carcter filamentoso o unicelular.
Generalmente se logran los mejores resultados mediante una combinacin de
varios de estos mtodos.
Las cepas una vez aisladas pueden ser purificadas con el fin de eliminar otros
tipos de microorganismos presentes, tales como protozoarios. En caso de
eliminacin completa de todo tipo de organismo acompaante se lo denomina
cultivo axnico (Wiedeman et al., 1964; Droop, 1967).
El mantenimiento de las cepas se realiza mediante subcultivos seriados en
condiciones aspticas, transfiriendo una alcuota de cultivo algal en medio de
cultivo fresco a intervalos regulares, de forma que las cepas puedan continuar
dividindose y permanecer en buen estado.
Las cepas se manti enen en tubos de ensayo en medi o l qui do
(aproximadamente el 90%) y en medio slido en agar inclinado (el 10% restante).
La coleccin de microalgas se mantiene en una cmara con condiciones controladas,
bajo un fotoperodo de 12 horas de luz y 12 horas de oscuridad, con una intensidad
lumnica de 45 mol quanta.m
-2
.s
-1
, y a una temperatura promedio ambiental de
20 2 C. La iluminacin se realiza mediante lmparas de 20 y 40 watts de tipo luz-
da.
Las tcnicas de cultivo de microalgas son descritas en detalle por diferentes
autores (Kufferath, 1929; Burlew, 1953; Stein, 1973; Guillard, 1975; Richmond,
1986; Borowitzka y Borowitzka 1988, y Abalde et al., 1995). La importancia de las
tcnicas aspticas y el concepto de mantenimiento perpetuo fueron adaptados de
investigaciones bacteriolgicas realizadas ya en el siglo pasado por Beijerinck y
Miquel en 1890 (Varela, 1988). Los medios de cultivo ms usados son: ES Provasoli
(Provasoli et al., 1957); Guillard f/2 (Guillard, 1975); Walne, (Walne, 1966) y
Algal (Fabregas et al., 1985).
Base de Datos
Para el diseo de la base de datos se seleccion la plataforma Microsoft
Access , por ser un administrador de bases de datos amistoso, el cual acepta de
forma directa la transferencia de datos desde sistemas de almacenaje tales como,
lotus, dbase, etc., as como de otras bases de datos de uso en la actualidad, entre
las que destacan: Excel, Paradox, Oracle, FoxPro, ArcInfo, entre otros.
RESULTADOS
La coleccin de microalgas en cultivos unialgales de la Estacin de
Investigaciones Marinas de Margarita est formada por diatomeas, fitoflagelados,
clorofitas y cianobacterias tanto marinas como de agua dulce. La Figura 1 muestra
la tasa de ingreso de las cepas a la coleccin desde el ao 1981 hasta la actualidad.
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Figura 1
Tasa de ingreso de muestras al Banco de Cepas.
El banco de cepas de microalgas est constituido por cinco tablas relacionales:
Identificacin de las cepas (25 campos); Bioqumica (20 campos); Parmetros de
Crecimiento (11 campos); Medios de Cultivos (4 campos); Aplicaciones (5 cam-
pos). Las cinco tablas se encuentran interrelacionadas por medio de determinados
campos idnticos, los cuales forman los enlaces o vnculos entre ellas, de manera
que la informacin almacenada en cualquier parte de una tabla puede ser
recuperada desde cualquier punto de la base de datos. El diagrama presentado en
la Figura 2 muestra los campos que vinculan las cinco tablas.
La base de datos se encuentra actualmente automatizada de forma que
cualquier usuario sin experticia en el manejo de este tipo de sistemas puede llevar
a cabo culquier consulta. A partir de una pantalla de bienvenida el usuario puede
ingresar al men principal, donde se le ofrecen las opciones para acceder a una
serie de pantallas explicativas de las propiedades y modo de funcionamiento de
la base de datos, introduccin de nueva data (si es personal asignado a esta tarea),
realizacin de diversas consultas sobre la informacin contenida o en ltimo caso
para salir del sistema.
La introduccin de datos se realiza por medio de formularios prediseados
que conducen al transcriptor por los campos que debe ir llenando, mientras que
el usuario interesado en una consulta puede, en primera instancia, emplear una
consulta prefabricada o si conoce el mtodo de realizacin de consultas puede
formularlas personalmente.
Toda la informacin disponible concerniente a cada cepa se encuentra
clasificada de la siguiente manera: IdEsp (cdigo de identificacin); Cdigo de la
cepa; Gnero / especie; Nombre del autor / ao; Clase; Identificada por; Colectada por;
Fecha de coleccin; Lugar de Coleccin; Origen (tipo de ambiente en el cual fue
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0
0
Ao de ingreso
N

d
e

c
e
p
a
s
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Figura 2
Diagrama de la base de datos del Banco de Cepas de microalgas de la Estacin de
Investigaciones Marinas de Margarita, indicando los campos vinculables entre tablas.
colectada); Otra informacin; Aislada por; Fecha de aislamiento; Ingresada por; Fecha de
ingreso; Purificada por; Fecha de purificacin; Axnica (S/No); Medio de cultivo;
Temperatura; Longitud de la clula; Ancho de la clula; Sinnimo de la cepa; Nombre del
sinnimo; Txica (Solamente S). La Tabla 1 muestra, a modo de ejemplo, una
consulta de identificacin de una cepa.
La tabla de medios contiene la composicin de todos los medios usados para
el mantenimiento y tambin aquellos que han sido utilizados para el cultivo de
alguna de las cepas, las cuales se encuentran en orden alfabtico y se les asigna un
cdigo que permite relacionarlos con el cdigo de cepa, parmetros de crecimiento
y composicin bioqumica.
La base de datos de microalgas se encuentra a su vez relacionada con la base
de datos de referencias bibliogrficas del Departamento de Cultivos, de manera
que cada tabla termina con un campo denominado Codigo Ref, que almacena los
cdigos relativos a las referencias bibliogrficas que contienen la informacin
correspondiente.
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Tabla 1
Ejemplo de identificacin de una cepa en el Banco de Cepas de microalgas de la Estacin de
Investigaciones Marinas de Margarita.
Cdigo de la cepa: TTE
Gnero / especie: Tetraselmis tetrathele
Nombre del autor / ao: (G.S. West) Butcher, 1959
Clase: Prasinophyceae, Familia
Chlorodendraceae
Identificada por: Instituto Espaol de Oceanografia.
Laboratorio de la Corua, Espaa
Colectada por:
Fecha de coleccin:
Lugar de Coleccin:
Origen: Tipo de ambiente del cual fue colectada
Otra informacin:
Aislada por: Instituto Espaol de Oceanografia.
Laboratorio de la Corua, Espaa
Fecha de aislamiento:
Ingresada por: Ramon Varela
Fecha de ingreso: 1 de agosto de 1981
Purificada por: Esperanza Buitrago
Fecha de purificacin: 1990
Axnica (S/No): No
Medio de cultivo: Walne 30
Temperatura: 20+/-2
Longitud de la clula: 13 - 18 micras
Ancho de la clula: 7 - 9 micras
Sinnimo de la cepa:
Nombre del sinnimo:
Txica (Solamente S):
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