Cromatografa

INTRODUCCIN
La cromatografa es uno de los principales mtodos para la separacin de especies
qumicas estrecamente relacionadas en comple!as" La cromatografa es un mtodo
fsico de separacin #asado en la distri#ucin de los componentes de una me$cla entre
dos fases inmisci#les% una fi!a o estacionaria & otra m'il"
(n todas las separaciones cromatogr)ficas la muestra se disuel'e en una fase m'il%
que puede ser un gas un lquido o un fluido supercrtico" (sta fase m'il se ace pasar
a tra's de una fase estacionaria inmisci#le% la cual se mantienen fi!a en una columna o
so#re una superficie slida" Las fases se eligen de tal forma que los componentes de la
muestra se distri#u&en de modo distinto entre la fase m'il & la fase estacionaria"
*quellos componentes que son retenidos con m)s fuer$a por la fase estacionaria se
mue'en lentamente con el flu!o+ por el contrario los componentes que unen d#ilmente
a la fase estacionaria% se mue'en con rapide$" Como consecuencia de la distinta
mo'ilidad% los componentes de la muestra se separan en #andas discriminadas que
pueden anali$arse cualitati'a &,o cuantitati'amente"
Cromatografa
CROMATOGRAFIA
Qu es la cromatografia?
La cromatografa es una tcnica desarrollada en los -ltimos a.os% empleada
en la qumica analtica% que permite la separacin de los componentes de una
me$cla de#ido a la influencia de dos efectos contrapuestos.
Su empleo presenta notables ventajas:
/" (s sencilla% r)pida & no requiere aparatos complicados"
0" *#arca escalas microanalticas asta escalas industriales"
1" (s una tcnica poca o nada destructi'a que puede aplicarse a sustancias l)#iles"
Constitu&e una metodologa imprescindi#le en estudios #ioqumicos% to2icolgicos%
estructurales% etc" No solo utili$ando como tcnica de separacin e identificacin% sino
como mtodo preparatorio% incluso a escalas industriales"
La pala#ra cromatografia pro'iene de 3romatos% color & grapos% escrito"
Una de las definiciones de la tcnica m)s correcta seria% la dada por 4eulemans:
"Mtodo fsico de separaci! e! el "ue los compo!e!tes a separar se distri#u$e!
e! dos fases% u!a de las cuales co!stitu$e u! &ec&o estacio!ario de gra!
desarrollo superficial $ la otra u! fluido "ue pasa a tra'es o a lo largo del lec&o
estacio!ario (fase m'il)*"
(n todo proceso cromatografico la fase m'il es la que pro'oca un mo'imiento de las
distintas especias para que a#andonen el medio soporte% & la fase estacionaria la que
suministra el efecto retardador% selecti'o para cada componente% que condiciona que
cada uno de ellos se desplace con distinta 'elocidad"
Cromatografa
C+A,IFICACIO- ./ +O, M/TO.O, CROMATOGRAFICO,0
5on clasificados seg-n el estado fsico de la fase% el mecanismo de separacin & el tipo
de soporte"
La fase m'il puede ser un gas o un lquido% & la estacionaria u lquido o un slido" 5e
pueden esta#lecer cuatro tipos de cromatografia6
Cromatografa slido1l"uido" La fase estacionaria es un slido &
la m'il un lquido"
Cromatografa l"uido1l"uido. La fase estacionaria es un
lquido anclado a un soporte slido"
Cromatografa l"uido1gas. La fase estacionaria es un lquido
no 'ol)til impregnado en un slido & la fase m'il es un gas"
Cromatografa slido1gas" La fase estacionaria es un slido & la
m'il un gas"
Los mecanismos por los que los diferentes componentes son separados en los
procesos cromatograficos son 'ariados" (n algunos casos participan m)s de un
mecanismo en un mismo proceso de separacin por lo que dificulta la clasificacin" Los
principales mecanismos que inter'ienen en la separacin cromatografica son6
Adsorci!: 7ases o lquidos contenidos en la fase m'il son retenidos por una
adsorcin selecti'a en la superficie del slido que constitu&e la fase estacionaria" (n la
interfase slido8fase m'il a& un aumento de concentracin respecto a la inicial" (ste
mecanismo controla la cromatografia gas8slido & lquido8slido"
Reparto0 Los componentes de la fase m'il son retenidos por la fase estacionaria
liquida en funcin de su solu#ilidad en ella" 5i las dos son liquidas se tiene un proceso
de e2traccin en continuo"
Intercambio Ionico: La fase estacionaria constituida por un slido intercam#iando
iones con iones contenidos en la fase m'il% liquida" (l intercam#io de iones slido8
solucin esta regulado por la afinidad quimica de los iones con am#as fases & por sus
respecti'as concentraciones"
Cromatografa
Tama2o Molecular0 (species neutras de alto peso molecular pueden ser separadas
en 'irtud de su tama.o donde la fase estacionaria es un gel idrofilico altamente poroso
que retiene las molculas de menor tama.o al de los poros" Las molculas de ma&or
tama.o son retardadas en su paso por peque.as fuer$as de adsorcin de la superfie
e2terna del gel que luego son e2cluidas de la fase estacionaria"
Migraci! /lctrica0 Los componentes inicos de una muestra son separados por
su diferente 'elocidad & sentido con que se despla$an en un campo elctrico" La fase
estacionaria puede ser un papel saturado por un electrolito" La aplicacin de un campo
pro'oca un mo'imiento diferencial de los iones dependiendo de su carga & de su
mo'ilidad ionica"
TIPOS DE CROMATOGRAIA
5eg-n el tipo de interaccin que se esta#lece entre los componentes de la me$cla
& la fase m'il & estacionaria podemos distinguir entre"
Cromatografa de adsorci!" La fase estacionaria es un slido polar
capa$ de adsor#er a los componentes de la me$cla mediante
interacciones de tipo polar
Cromatografa de partici!" La separacin se #asa en las
diferencias de solu#ilidad de los componentes de la me$cla en las fases
estacionaria & m'il% que son am#as lquidas"
Cromatografa de i!tercam#io i!ico" La fase estacionaria es un slido
que lle'a anclados grupos funcionales ioni$a#les cu&a carga se puede
intercam#iar por aquellos iones presentes en la fase m'il"
CR O MA TOG RA ! A D E AD SO RC I "#
La adsorcin es la propiedad que tienen ciertos slidos de aumentar la concentracin
en su superficie de otras sustancias" La separacin se de#e a las diferencias de
adsorcin de los componentes de una me$cla so#re la fase estacionaria" La fase
estacionaria a de ser un slido polar de gran superficie 9adsor#ente:" La fase m'il
puede ser un gas o un lquido dando lugar a la cromatografa gas8slido 9C75: o
lquido8slido 9CL5:"
Cromatografa
(l grado de adsorcin 'ara seg-n la naturale$a & superficie especfica de los
adsor#entes & naturale$a de los solutos" Los enlaces entre molculas adsor#idas & el
adsor#ente an de ser d#iles para que su fi!acin sea re'ersi#le% las uniones son
de#idas a fuer$as intermoleculares 9interacciones dipolo8dipolo o puentes de
idrgeno:" Como regla general% las polaridades del adsor#ente & de los solutos an
de ser opuestas"
CR O MA TOG RA ! A D E P A RT I C I " # .
La cromatografa lquido8lquido% tam#in llamada de particin se caracteri$a por
emplear una fase estacionaria lquida% anclada a un soporte slido% & una fase
m'il tam#in lquida" (l soporte slido por lo general es gel de slice% so#re cu&a
superficie se a anclado una fase lquida con la incorporacin de una cadena
idrocar#onada larga% mediante la transformacin de los grupos silanol 95i8O;: de la
gel de slice en grupos silo2ano 95i8O85i8R:% lo que proporciona una fase lquida
estacionaria trmicamente esta#le & difcil de idroli$ar en condiciones normales
C R O M A T O G R A !A DE I # TERC A M $ IO I" # IC O .
La cromatografa de intercam#io inico 9cromatografa inica: es un proceso que
permite la separacin de iones & molculas polares #asado en las propiedades de
carga de las molculas" <uede ser usada en casi cualquier tipo de molcula cargada%
inclu&endo grandes protenas% peque.os nucletidos & amino)cidos" La solucin que
se in&ecta es usualmente llamada muestra & los componentes separados
indi'idualmente son llamados analitos" (s usada a menudo en purificacin de
protenas% an)lisis de agua o control de calidad"
La fase estacionaria 9resina de intercam#io: muestra en la superficie grupos
funcionales inicos que interact-an con iones de carga opuesta" (ste tipo de
cromatografa se su#di'ide a su 'e$ en la cromatografa de intercam#io catinico &
cromatografa de intercam#io aninico6
La cromatografa de intercam#io catinico retiene cationes cargados positi'amente
de#ido a que la fase estacionaria muestra un grupo funcional cargado negati'amente
95O
1
8
% CO
0
8
:" Las resinas cu&o grupo funcional acti'o es
un sulfonato 95O
1
8
: se
consideran resinas intercam#iadoras )cidas fuertes%
mientras que aqullas cu&o
Cromatografa
grupo funcional acti'o es un in car#o2ilato 9CO
0
8
: se consideran resinas )cidas
d#iles"
La cromatografa de intercam#io de aniones retiene aniones usando
grupos funcionales cargados positi'amente% como un catin de amonio cuaternario
9R
=
N
>
:"
R
=
8N
>
L
8
> ?
>
> @
8
A88B R
=
8N
>
@
8
> L
8
> ?
>
(ste tipo de cromatografa se #asa en el equili#rio de intercam#io inico entre una
fase slida que contiene grupos sulfnicos o car#o2licos 9para la separacin de
cationes: o grupos amino cuaternarios% ternarios o secundarios 9para la separacin de
aniones: & los iones presentes en la fase m'il" <or e!emplo% para la separacin de
cationes se puede utili$ar una resina de )cido d#il donde se producir) el siguiente
equili#rio6
R8CO0; > ?
>
R8CO0? > ;
>
R8*
8
;
>
> ?
>
> @
8
A88B R8*
8
?
>
> ;
>
> @
8
Cromatografa
(n este caso% el catin ?
>
puede ser eluido de la columna por un )cido fuerte en
una concentracin capa$ de despla$ar el equili#rio representado en la ecuacin
anterior acia la i$quierda" (l desarrollo de esta tcnica al estado de
Cromatografa
cromatografa de alta resolucin% llamada cromatografa inica% fue posi#le a partir
de la dcada del CD cuando se desarrollaron recu#rimientos que contienen los
materiales tpicos para el intercam#io 9grupos sulfnicos para cromatografa
catinica & grupos aminos cuaternario para cromatografa aninica:" (stos
recu#rimientos se depositan so#re peque.as esferas de slice% 'idrio o de alg-n
polmero que son capaces de soportar las altas presiones com-nmente utili$adas
en cromatografa lquida de alta resolucin"
CROMATOGRAIA E# PAPE%
Qu es la cromatografia e! papel?
La cromatografia en papel es la tcnica de separacin e identificacin de
sustancias qumicas mediante un disol'ente que se mue'e so#re o!as o tiras de
papel de filtro"
5e toma una pie$a de papel de filtro & cerca de uno de sus e2tremos se deposita
una gota de la solucin que contiene la me$cla de las sustancias que se quieren
separas" 5e de!a secar la gota & quedara la manca de las sustancias me$cladas"
(l e2tremo del papel mas pro2imo a la manca se introduce en un disol'ente
apropiado% pero sin que la manca llegue a introducirse en l"
(2isten mucos tipos de cromatografia so#re papel% una primera di'isin de las
'ariadas clases podra ser6
/8 Cromatografia asce!de!te0 el disol'ente se encuentra en el fondo del
recipiente que sostiene al papel & 'a su#iendo a tra'es de el por capilaridad.
08 Cromatografia desce!de!te0 el disol'ente esta en un recipiente esta en un
recipiente del que cuelga el papel% flu&e por l acia a#a!o por una com#inacion
de capilaridad & gra'edad"
(n am#os casos el disol'ente a'an$a a lo largo del papel pasando por encima de
la manca% al a'an$ar disuel'e & arrastra las sustancias de la manca% cada una
de ellas se mue'e% por lo general a distinta 'elocidad que las otras"
[Escriba texto] Pgina 8
Cromatografa
5e de!a actuar el disol'ente un tiempo determinado% se seca el papel & se
o#ser'an las sustancias separadas si tienen color% o en caso de no tener color se
procede al re'elado por una reaccin quimica apropiada"
(sta tcnica se conoce como cromatografEa monodimencional & el papel resultante
reci#e el nom#re de cromatograma monodimencional"
+a resulta!te de las fuer3as0
Cuando el disol'ente a'an$a so#re las mancas de las sustancias% comien$an a
actuar dos tipos de fuer$as opuestas6 unas que arrastran & otras que retardan"
Las fuer$as propulsoras act-an apartando las sustancias de su punto de origen &
desplasandolas en direccin del flu!o de origen"
Las fuer$as retardantes tratan de impedir el mo'imiento de las sustancias%
lle')ndolas fuera del disol'ente que flu&e & acia atr)s en el papel"
La distancia recorrida por cada sustancia a partir del origen% en un tiempo dado% es
la resultante de estas dos clases de fuer$as"
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Cromatografa
Fuer3as propulsoras0
Cuando se reali$a un cromatograma en papel% las fuer$as propulsoras m)s
importantes son6 el flujo de disolvente & la solubilidad de cada sustancia en le
disol'ente"
Flu4o del disol'e!te:
5i la sustancia cromatografiada fuera completa e instant)neamente solu#le
en el disol'ente que a'an$a% por e!emplo agua & a$-car% & no actuaran fuer$as de
retardo la sustancia ascender) desde el origen asta donde llega el dilu&ente" (n
cam#io si la sustancia fuera completamente insolu#le en el disol'ente en
mo'imiento no se mo'era del origen"
La corriente del disol'ente es la misma para todas las sustancias de la manca%
as pues% si el disol'ente fuese capa$ de disol'er instant)nea & completamente
todas las sustancias% estas a'an$aran !untas asta el final de la tra&ectoria del
disol'ente & terminaramos donde empe$amos con todas las sustancias !untas"
,olu#ilidad0
Una fuer$a diferencial es% en efecto% la solu#ilidad" <ocas son las sustancias
que ofrecen la misma solu#ilidad en cualquier disol'ente" La particular solu#ilidad
de una sustancia en la corriente del disol'ente es una fuer$a propulsora que
tiende a despla$arla% manteniendola en mo'imiento a lo largo del papel"
Fuer3as retarda!tes0
;a& tam#in dos fuer$as retardantes principales6 la adsorcin & el reparto"
Adsorci!0
La celulosa de la que esta eco el papel de filtro% posee propiedades
adsor#entes" Las sustancias depositadas en el papel% en cromatografa% pueden
ser m)s o menos adsor#idas en el papel"
La adsorcin es otra de las fuer$as diferenciales% esto significa que unas
sustancias son adsor#idas m)s que otras &% por consiguiente% la li#eracin de las
sustancias de las mancas 'ariar) de una sustancia a otra" (sto contri#u&e de
nue'o a la separacin" ?ientras que se 'a reali$ando el cromatograma% las
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Cromatografa
sustancias mas fuertemente adsor'idas se 'an quedando atr)s% mientras que las
adsor'idas con menos fuer$a a'an$an acia el frente"
Reparto0
La cormatografia se #asa% en una medida considera#le% en la presencia de dos
fases liquidas indi'iduali$adas" Una de ellas es la corriente del disol'ente
circulando por el papel de filtro" La otra es la fase acuosa contenida en el mismo
papel de filtro" Una o!a de papel de filtro aparentemente seca contiene entre un F
& /0G de agua firmemente aderida a la celulosa" *qu es donde entra en funcin
el reparto"
Cuando una sustancia que es solu#le en dos disol'entes no me$clados es
e2puesta al mismo tiempo a am#os% se repartir) entre ellos" La cantidad que se
encuentre en cada disol'ente depender) de la relati'a solu#ilidad del soluto en
cada uno" (l grado de reparto% una 'e$ conseguido el equili#rio% se llama
coeficiente de reparto o razon de distribucin.
Co!sta!te Rf0
(l -ltimo punto alcan$ado por el disol'ente en su a'ance se denomina frente del
disol'ente" <uede usarse como punto de referencia para e2presar las distancias
relati'as recorridas por las diferentes sustancias en un cromatograma" (l sm#olo
utili$ado para designar esta distancia relati'a es Rf & se define mediante6
distancia recorrida por el compuesto desde el origen
Rf H
Distancia del origen al frente del disol'ente
Como el denominador es siempre ma&or que el numerador en Rf de#era ser un
decimal" <or ra$ones de con'eniencia se suele e2presar como un porcenta!e"
*si un Rf de ID indicara que el compuesto a'an$o la mitad de la distancia del
frente del disol'ente"
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Cromatografa
Cromatografa de adsorci! e! colum!a
La fase estacionaria est) constituida por un slido que se empaqueta en una
columna% normalmente de 'idrio"Los componentes a separar se a.aden en forma
solu#le por la parte superior de la columna% quedando retenidos en la misma"
<osteriormente los componentes se despla$an arrastrados por una fase m'il
lquida" Dependiendo de la a#sorcin selecti'a de cada uno de ellos por la fase
estacionaria se despla$an a distinta 'elocidad% efectu)ndose la separacin"<ara
que a&a una separacin efecti'a de los componentes% su 'elocidad a tra's de la
columna de#e ser suficientemente diferente & la longitud de la columna% adecuada"
<or e!emplo% si por una columna con al-mina como a#sor#ente se introduce una
disolucin conteniendo nitratos de Je 9III:% Cu 9II: & Co 9II: & posteriormente se
pasa agua ligeramente acidulada con )cido ntrico se o#ser'a la separacin de
tres $onas diferenciadas 9de arri#a a#a!o: pardo8 ro!i$a de Je 9III:% a$ul de Cu 9II: &
rosa de Co 9II:" 5i se desean apreciar me!or las distintas #andas se puede
introducir una solucin de ferrocianuro pot)sico como re'elador" 5e o#ser'an
entonces coloraciones m)s intensas+ a$ul oscuro de Je= KJe 9CN:FL1% pardo8 ro!i$a
de Cu0 KJe 9CN: FL & 'erdosa de Co0 KJe 9CN: FL"
a) A!5lisis fro!tal.& 5upongamos una disolucin conteniendo tres componentes
*% @ & C% que se introduce continuamente en una columna en la que la adsorcin
sigue el orden C% @% *" La especie menos adsor#ida% *% emerge la primera por la
parte inferior de la columna% & sigue saliendo indefinidamente" Despus de un
perodo en que slo sale *% comien$a a salir tam#in @% o#teniendo una me$cla *
> @" Jinalmente sale el componente m)s retenido C% !unto con * & @"
#) A!5lisis por despla3amie!to.& La me$cla a ser separada se a#sor#e en una
peque.a $ona en la parte superior de la columna" <osteriormente se introduce un
disol'ente 9o una disolucin: que sea m)s fuertemente a#sor#ido que cualquiera
de los componentes" (l efecto resultante es que los componentes son
despla$ados de la columna por el disol'ente8 despla$ante &% adem)s% cada uno de
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Cromatografa
ellos despla$a al inmediatamente menos a#sor#ido" * la salida de la columna 'an
saliendo consecuti'amente todos los componentes & el despla$ador% separados
pero uno !unto al siguiente"
c) A!5lisis por eluci!.& Despus de fi!ar los componentes en la parte superior se
pasa un disol'ente puro que no se adsor#e" Los componentes 'an a'an$ando por
la columna dependiendo de la fuer$a con que son adsor#idos+ cada uno de los
cuales es distri#uido en una peque.a $ona" 5i la columna es suficientemente larga
& los 'alores de Rf difieren #astante% se puede lograr la separacin de me$clas
#astante comple!as" (n la Jig" MIII8/0 se muestra un cromatograma desarrollado
por este mtodo" Cada componente puede ser recogido & anali$ado a la salida de
la columna"
Adsor#e!te $ elu$e!tes
5on mucos los slidos que se an utili$ado como fase estacionaria en
cromatografa de adsorcin" Los m)s importantes son al-mina% silicato de
aluminio% silicagel% 2ido% silicato & car#onato de magnesio% 2ido% car#onato &
fosfato de calcio% como inorg)nicos+ & car#n% almidn & a$-cares como org)nicos"
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Cromatografa
Normalmente de#en ser sometidos a un proceso trmico de acti'acin superficial
antes de su utili$acin"Como elu&entes se utili$an agua% alcooles% cetonas%
steres% cloroformo% tetracloruro de car#ono% etc" 5u capacidad de elucin
depende de su polaridad% del a#sor#ente & de las especies a eluir"
Cromatografa de reparto e! colum!a
(sta tcnica es seme!ante a la mencionada anteriormente en cuanto a materiales
utili$ados% mtodos operati'os% etc" La diferencia reside en la fase estacionaria
utili$ada &% en consecuencia% en el mecanismo de separacin"
(n cromatografa de reparto la fase estacionaria es un lquido% poco misci#le con
la fase m'il" Los solutos se distri#u&en
entre las dos fases dependiendo de su
solu#ilidad en cada una de ellas% es decir%
seg-n su coeficiente de reparto" *unque el
mecanismo fundamental de la separacin es
la e2traccin o reparto% es pr)cticamente
imposi#le e'itar adsorciones por parte del
slido soporte% por lo que mucas de las
separaciones son empricas% no pudiendo
reali$arse un e2acto tratamiento terico" Los
slidos soportes m)s utili$ados son el silicagel% el pol'o de celulosa & la tierra de
diatomeas+ menos aplicacin tienen el almidn & el relleno de #olas de 'idrio"
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Cromatografa
Cromatografa so#re geles porosos
(s un tipo de cromatografa que se aplica% fundamentalmente% a la separacin de
productos macromoleculares so#re geles inca#les por agua o por cualquier otro
lquido pre'iamente escogido"
(l fundamento de este tipo de cromatografa consiste en que al incarse el gel
queda una cadena mu& a#ierta con grupos terminales generalmente polares que
son capaces de adsor#er agua u otros disol'entes polares" 5eg-n el n-mero de
ligaduras entre las grandes cadenas e2iste un tama.o crtico 9lmite de e2clusin:
de molcula que puede entrar en el interior del gel% mientras que las molculas de
ma&or tama.o pasar)n a tra's del mismo% con lo que% en principio% se origina una
separacin de molculas de acuerdo con su diferente tama.o"
(l fenmeno puede considerarse como una filtracin a tra's de un tami$
molecular & por eso a esta tcnica se la llama tam#in cromatografa con tamiz
molecular 9ctm:+ as mismo se la a denominado% 6e!etraci! so#re gel%
e7clusi! molecular ' tami3ado molecular.
Cromatografa de capa fi!a
La llamada Ncapa finaO consiste en una placa de 'idrio% rectangular o cuadrada%
denominadas cromatoplacas% o simplemente placas so#re cu&a superficie se
deposita una capa uniforme mu& delgada 9en ocasiones de algunas micras de
espesor: de una su#stancia a#sor'ente% casi siempre silicagel o al-mina% en
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Cromatografa
condiciones tales que resulte uniformemente e2tendida & suficientemente
aderida" (n general% de ace
una papilla acuosa con el
adsor#ente% que se deposita
so#re la placa mediante un
aplicador adecuado" Las placas
se secan en estufa para acti'ar
la superficie del adsor#ente &
se encuentran aptas para
efectuar la cromatografa"
* las 'enta!as de resistencia a la temperatura & a los reacti'os agresi'os de la
cromatografa en capa fina% a& que a.adir una ma&or nitide$ & sensi#ilidad de los
cromatogramas% as como una ma&or rapide$ en su desarrollo" *dem)s% los
cromatogramas o#tenidos pueden conser'arse indefinidamente & arci'arse si se
pul'eri$a la placa re'elada con una dispersin de un pl)stico transparente &
especial donde quede gra#ado el cromatograma so#re la pelcula endurecida del
pl)stico% que se separa f)cilmente del soporte"
Las aplicaciones son seme!antes a las de la cromatografa de papel"
/lectroforesis
(l fundamento de la tcnica consiste en depositar so#re un medio poroso una
me$cla de especies cargadas 9algunas pueden ser neutras:" <or aplicacin de un
campo elctrico entre los e2tremos del soporte poroso las especies se separan en
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Cromatografa
funcin de su carga & su mo'ilidad inica en ese medio" <ara fa'orecer el paso de
la corriente se utili$an disoluciones fondo conductoras 9electrolitos:% que son
generalmente disoluciones reguladoras en las que se empapa pre'iamente el
soporte poroso% de#idamente escogidas para que no formen precipitados con las
especies del pro#lema"
Como soportes se an utili$ado al-mina% lana de 'idrio% almidn% agar8 agar% gel de
silice% etc" tanto en columna como en capa fina% pero qui$)s el mtodo m)s
utili$ado es el que emplea como soporte papel" 5e suelen utili$ar tiras de acetato
de celulosa% casi transparentes% que por poseer una estructura m)s uniforme & un
poro menor que el del papel filtro% tienen un ma&or poder de resolucin" * estas
'enta!as del acetato de celulosa se a.ade su f)cil solu#ilidad en )cidos% lo que
facilita la posterior determinacin de las especies separadas"
La emigracin de las distintas especies en el papel depende de la magnitud &
signo de su carga% del tama.o de la partcula% de las propiedades adsor#entes del
soporte 9que de#en atenuarse en lo posi#le:% del 'olta!e aplicado & de la intensidad
de corriente"
CROMATOGRAFIA ./ GA,/,
(sta tcnica es similar a la cromatografia de columna% con la diferencia de que el
sistema es cerrado & la fase m'il es un gas" La separacin de los componentes
gaseosos se produce por adsorcin selecti'a so#re un slido 9C"7"5": o por
reparto entre un gas inerte & un lquido no 'ol)til que constitu&e la fase
estacionaria 9C"7"L":" (n la actualidad esta tecnica 9C"7"L": es la m)s empleada%
aplicandose el analisis de gases o de lquidos & slidos que puedan 'olatili$arse a
temperatura no superior a =DDPC" L C"7"5" es an)loga a la C"L"5"
Los componentes del gas pro#lema son sostenidos selecti'amente por un slido
a#sor#ente dispuestos en columna met)lica% recta o en espiral" (l gas pro#lema
es in&ectado en la corriente de un gas inerte que le conduce asta la columna &
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Cromatografa
que ace la fase m'il" (n la distri#ucin de los componentes del pro#lema entre
el gas portador & el slido a#sor'er'ente se 'erifica una separacin por lo que
emergen de la columna a distintos tiempos pasando finalmente por un detector
que los identifica & cuantifica"
(n la C"7"L" la fase estacionaria es un lquido no 'ol)til a#sor#ido en un soporte
slido que rellena la columna" Los componentes del gas pro#lema son
despla$ados selecti'amente% como en la cromatografia de reparto% por el gas
portador que flu&e de manera continua"
Los componentes de la muestra se separan de acuerdo con sus coeficientes de
reparto entre las dos fases"
I-,TR8M/-TACIO-
(sta cromatografia es tan sencilla como las dem)s% necesita un monta!e
instrumental m)s comple!o de#ido al tra#a!o con gases% lo que o#liga a tra#a!ar en
sistema cerrado & a controlar caudales% presin & temperatura"

FA,/, MO9I+/,0 como gases inertes portadores se utili$an ;% ;e% N & aire" La
eleccin del gas portador depende del sistema en estudio & so#re todo del
detector que se utilice"
FA,/ /,TACIO-ARIA: en C"7"5" los a#sor#entes mas utili$ado son car#n%
alumina% silicagel & tamises moleculares" (n el C"7"L" es necesario un slido
soporte adsor'ente & un lquido no 'ol)til% el slido soporte mas utili$ado es la
tierra diatomeas" Los lquidos que constitu&en la fase m'il son mucos% depende
de la me$cla a separar & de la temperatura de operacin 9esteres% polioles% aceite
de silicona% etc":"
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Cromatografa
./T/CTOR/,0 son mucos tipos de detectores% estos act-an siempre por
comparacin de alguna propiedad fsica o quimica 9densidad% calor de com#ustin%
etc": del gas portador solo 9antes de la introduccin de la muestra: & de la me$cla
de gas portados & componentes de pro#lemas" Los detectores se diferencian
principalmente por su selecti'idad & sensi#ilidad% por destruir o no la muestra & por
ser integrales o diferenciales% los primeros miden continuamente la muestra
acumulada desde el principio del analisis & los segundos miden concentraciones
instant)neas" 5e utili$an m)s los detectores diferenciales"
/9A+8ACIO- ./ +O, CROMATOGRAMA,
Los distintos componentes de la muestra emergen de la columna a tiempos
diferentes dependiendo de su retencin en la misma% definido como volumen de
retencin el 'olumen de me$cla gaseosa que emerge de la columna entre la
introduccin de la muestra & la aparicin de un componente" 5e calcula a partir
del tiempo transcurrido & de flu!o gaseoso"
M r H tr J
(l 'olumen de retencin% asi como el tiempo de retencin 9para un flu!o constante:
son 'aria#les cualitati'as que permiten la identificacin de especies" Normalmente
se utili$an los 'alores respecto al m)2imo del aire 9MQr: o 'alores relati'os frente a
una especie patron" (stas 'aria#les cualitati'as solo son constantes cuando se
producen e2actamente las condiciones% por lo que no son mu& utili$adas para
identificaciones directas" Utili$ando muestra patrones% la cromatografia de gases
constitu&e el mtodo r)pido & e2celente para confirmar la presencia concreta en
una muestra" *dicionando un patrn al pro#lema% no de#en aparecer nue'os picos
en el cromatograma & de#er) o#ser'ar el )rea que constitu&e la muestra patrn"
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Cromatografa
La e'aluacin cuantitati'a se #asa en que% en determinadas condiciones% el )rea
del pico 9detector diferencial: & la altura del escaln 9detector integral: son
proporciones a la concentraciones de especies"
A6+ICACIO-/,
La cromatografia de gases constitu&e el me!or mtodo analtico ideado para la
separacin de gases% lquido o slidos que pueden pasar f)cilmente al estado de
'apor o transform)ndolos pre'iamente en otros estados 'ol)tiles (!" metilacin de
)cidos grasos en el analisis de aceite & a resuelto pro#lemas de mu& difcil
solucin para la quimica analtica empleada ace una dcada" <or eso su
utili$acin es indispensa#le en analisis industriales% forenses #romatologicos%
to2icologicos% clnicos & de contaminacin am#iental"
CROMATOGRAFIA +IQ8I.A ./ A+TA R/,O+8CI:-
(n las cromatografas cl)sicas% en las que la fase m'il es un lquido que flu&e a
tra'es de un slido por el efecto de la gra'edad para alcan$ar alta resolucin seria
necesario emplear columnas e2cesi'amente largas% lo que se traducira en un
desarrollo mu& lento de los cromatogramas"
(stos incon'enientes se an resuelto con la cromatografia de alta resolucin% en la
que se tra#a!a con peque.as columnas% mu& empaquetadas & for$ando el paso de
la fase m'il mediante ele'adas presiones% con lo que se consiguen separaciones
mu& efecti'as en un pla$o mu& corto de tiempo"
Dependiendo de la fase estacionaria% el mecanismo de separacin puede ser
reparto% adsorcin% tama.o molecular 9geles: e incluso cam#io ionico% aunque los
mtodos mas utili$ados est)n #asados en reparto & adsorcin"
(l esquema fundamental de un cromatografo de alta resolucin esta constituido
por un deposito & un dispositi'o de #om#eo de la fase m'il que opera a ele'ada
presin 9asta IDD atm":% un sistema de in&eccin de la muestra% columnas
resistentes% generalmente e acero ino2ida#le% rellenas de fase estacionaria% un
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Cromatografa
detector & un sistema de registro gr)fico" La columna & los detectores 'an
introducidos en termostatos"
Los detectores m)s utili$ados en esta tcnica est)n #asados en a#sorciometria
UM & en medida de ndices de refraccin% siendo los cromatogramas o#tenidos
seme!antes a los de cromatografia gaseosa con detector diferencial"
A6+ICACIO-/,
/" Concentracin de tra$as
0" 5eparacin de iones interferentes en analisis cl)sico
1" 5eparaciones de iones de caractersticas similares
=" Desminerali$acin del agua
I" <reparacin de disoluciones patrn
F" Disolucin de sustancias insolu#les"
C+A,IFICACIO- ./ +A, CROMATOGRAFIA,
CRO?*TO7R*JI* (N COLU?N* *@I(RT*
#ombre (e la
T)cnica
ase
estacionaria
ase m*vil Despla+amiento
,ase m*vil
Mecanismo (e
separaci*n
C. s*li(o&
l-.ui(o
Sol. absorbente %-.ui(o Grave(a( A(sorci*n
C. l-.ui(o&
s*li(o
%i.. Absorbi(o
en soporte sol.
%-.ui(o Grave(a( Reparto/
A(sorci*n
C. sobre 0eles Sol. Gel poroso %-.ui(o Grave(a( Tama1o
Electro,eresis Sol. pol-mero %i.. Ionico Emi0raci*n
i*nica
Emi0raci*n
i*nica
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Cromatografa
C. intercambio
ionico
Sol. Cambia(or
ionico
%-.ui(o Grave(a( A,ini(a(
.uimica
CRO?*TO7R*JI* (N COLU?N* C(RR*D*
C" de gases 5ol" *#sor#ente
Liq" *#sor#ido
en soporte sol"
7as <resin *dsorcin
C" liquida de alta
resolucin
5ol" Di'ersos &
liq" *#sor#idos
en soporte sol"
Liq" <resin *dsorcin%
reparto% afinidad
quimica% tama.o
CRO?*TO7R*JI* (N <*<(L
C" adsorcin en
papel
5lido 9papel: Lquido polar Capilaridad
9gra'edad:
*dsorcin
C" de reparto en
papel
Liq" <olar
a#sor#ido en
papel slido
Lquido no polar Capilaridad
9gra'edad:
Reparto
9adsorcin% af"
Ruimica:
C" cam#io inica
en papel
5lido Lquido Capilaridad
9gra'edad:
*finidad quimica
(lectroferesis en
papel
5lido 9papel: Lquido inico (migracin
inica
(migracin
inica

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