Ciencia que estudia lo referente a los tejidos

orgnicos:
Estructura microscpica.
Desarrollo.
Funciones.
A menudo la podemos identificar con la
anatoma microscpica:
No se detiene en el estudio aislado de los tejidos.
Para su estudio es necesario analizar los procesos
fisiolgicos de los componentes tisulares en relacin,
esto la ata con la Biologa Celular y la Bioqumica.
Teor
Teor

a celular
a celular
Schleiden
Schleiden
y
y
Schwann
Schwann
, 1839.
, 1839.
La clula es la estructura ms simple que posee
las propiedades de los seres vivos:
Poseen un metabolismo propio, (son capaces de
extraer, transformar y utilizar
la materia y la energa almacenada en las molculas
que se encuentran en su entorno).
Pueden reproducirse y autoensamblarse generando
copias de si mismas.
Todos los seres vivos estn formados por una o
ms clulas.
Tejido
Tejido
Organizacin de clulas y MEC (matriz extra-
celular), con un comportamiento fisiolgico
coordinado y un origen embrionario comn.

rgano
rgano
Es un conjunto asociado de tejidos que
concurren en estructura y funcin.
SUB-ATMICO
ATMICO
MOLECULAR
MACROMOLECULAR
MACROMOLECULAR
COMPLEJO
CELULAR
TISULAR
RGANOS
SISTEMAS DE
RGANOS
C
O
M
P
L
E
J
I
D
A
D
...
Niveles de organizaci
Niveles de organizaci

n de la materia
n de la materia
Las propiedades de los seres vivos
resultan de una serie de niveles de
organizacin integrados
En cada nivel aparecen nuevas
propiedades (propiedades
emergentes), que constituyen un salto
cualitativo respecto del nivel anterior
Estas propiedades emergentes son
caractersticas de cada nivel. Surgen
de la asociacin de estructuras
individuales del mismo, que a su vez
caracterizan el salto de nivel.
En ese sentido, entendemos a la
vida biolgica como un conjunto de
propiedades emergentes a partir
del nivel de organizacin celular.
SUB-ATMICO
ATMICO
MOLECULAR
MACROMOLECULAR
MACROMOLECULAR
COMPLEJO
CELULAR
TISULAR
RGANOS
SISTEMAS DE
RGANOS
C
O
M
P
L
E
J
I
D
A
D
...
Las estructuras de los niveles ms bajos tienen
dimensiones muy pequeas, por eso se utilizan las
siguientes unidades mtricas:
1 mm 10
-3
m
1 m 10
-6
m
1 nm 10
-9
m
10
-10
m 1
Microscop
Microscop

a
a

ptica y
ptica y
Electr
Electr

nica.
nica.
Un microscopio es un instrumento que
amplifica una imagen y permite la
observacin de mayores detalles que los
posibles a simple vista.
El poder de resolucin es la capacidad de un
sistema ptico de percibir detalles (calidad de la
imagen, claridad y riqueza de detalles).
El lmite de resolucin es la distancia mnima
que debe existir entre dos puntos para que se
visualicen separados.
Cuanto menor sea el lmite de resolucin mayor/
mejor ser el poder de resolucin.
L
L

mite y Poder de Resoluci

mite y Poder de Resoluci

n
n
L.R.= longitud de onda ( ) x 0.61
A.N.
0.61: es una constante, no vara.
Longitud de onda: distancia entre dos picos de onda.
A.N.: apertura numrica (capacidad de un objeto de utilizar mayor o
menor cantidad de rayos para formar una imagen)
A.N= n x sen
n: ndice de refraccin que se interpone entre el objeto que se observa
y el objetivo.
n del aire= 1
n del agua= 1.33
n del aceite= 1.51
sen : seno del semingulo de apertura, limitado por los rayos mas
perifricos que penetran en el sistema.
Para disminuir L.R. podemos:
- Disminuir la longitud de onda, cambiando de luz.
- Aumentar A.N. aumentando el ndice de refraccin o el seno del
semingulo de apertura.
Microscopio
Microscopio

ptico
ptico
Est compuesto por dos sistemas de lentes convergentes,
ubicadas en un mismo eje.
Da una imagen aumentada, invertida y virtual.
Consta de dos partes:
La parte mecnica, que soporta al sistema ptico: Pie del
microscopio, el tubo, la platina, la subplatina, tornillos macro y
micromtrico, etc.
La parte ptica, formada por:
El aparato de iluminacin: el condensador (enfoca los rayos), el espejo
(cara plana para trabajar con luz artificial, cara cncava para luz
natural) y el diafragma (regula la cantidad de luz que recibe el objeto).
El objetivo: formado por varias lentes, tiene como finalidad aumentar la
imagen del objeto y proyectarla sobre el ocular. Ej. Panormico, Seco
dbil, Seco fuerte y de inmersin.
El ocular: Lleva un sistema de lentes, aumenta el tamao de la imagen
producida por el objetivo.
Tornillo
macromtrico
Tornillo
micromtrico
Columna
Tornillo para regular
la altura del
condensador
Pie
Ocular
Tubo
Revolver
Objetivos
Fijador de la platina
Platina
Condensador
Diafragma
Filtro
Espejo
Sobre la base del M.O. se han
desarrollado varios microscopios
especiales.
Estos intensifican el contraste sin coloracin.
Microscopio de Campo o Fondo
Oscuro.
El objetivo no recibe luz directa de la
fuente luminosa.
El objetivo recibe luz dispersa o refractada
por estructuras del espcimen.
Se observan partculas luminosas sobre
un fondo oscuro.
Se lo utiliza para el anlisis de preparados
radioautograficos.
Microscopio de Contraste de Fase
Permite observar clulas y tejidos sin colorear.
til para observar clulas y tejidos vivos.
Aprovecha las diferencias entre los ndices de refraccin
en las distintas partes de una clula y de la muestra de
tejido.
Produce un retardo en las longitudes de onda,
transformando las diferencias de longitud en diferencias
de fase de la luz, que el ojo capta como diferencias de
intensidad.
Las partes oscuras corresponden a las porciones
densas.
Las partes claras corresponden a las porciones menos
densas.
Microscopio de interferencia.
Sobre la base de los principios del de contraste
de fase, se utilizan las diferencias de fase
producidas por la luz que atraviesa el objeto.
Divide la luz de una nica fuente en dos haces
luminosos, uno se enva a travez del objeto y el
otro no se altera. Por lo que queda como haz de
referencia. Luego se reunen ambos haces.
Se observan estructuras vivas como si
estuvieran coloreadas, se obtiene una imagen
en relieve y con distintos tipos de sombras.
Microscopio de Luz Polarizada
Emplea la propiedad de las molculas de rotar
el ngulo de la luz polarizada.
Se coloca un filtro polarizador entre la fuente de
luz y la muestra; y un segundo (analizador)
entre el objetivo y el observador.
Estructuras anistropas: dividen la luz
polarizada en dos componentes.
Estructuras istropas: no dividen la luz
polarizada, el indice de rafraccin es igual en
todas las direcciones.
Microscopio de Fluorescencia
Utiliza la propiedad de fluorescer que
tienen ciertas molculas bajo luz
ultravioleta.
Se utiliza para revelar molculas
fluorescentes naturales
(autofluorescentes) o marcadas con
fluorescentes (fluorocromos).
Microscopio de Luz Ultravioleta
Utiliza lentes de cuarzo y una fuente de
luz ultravioleta.
Se utiliza luz ultravioleta con longitud de
onda de 250nm, la mitad que la luz visible
Se busca disminuir la longitud de onda
para aumentar el lmite de resolucin.
Se toma la imagen en una pelcula
fotogrfica.
Microscop
Microscop

a
a
Electr
Electr

nica
nica
Se reemplaza la luz visible, de longitud de onda de
alrededor de 500nm, por un haz de electrones de
longitud de onda de 0.005nm, lo que aumenta el lmite
de resolucin.
Como los electrones no atraviesan el vidrio, es
necesario reemplazar las lentes con bobinas
electromagnticas.
La imagen se forma por proyeccin sobre una pantalla
fluorescente o una pelcula fotogrfica.
Por la escasa movilidad de los electrones en el aire todo
el sistema debe estar al vaco.
Se observa la ultraestructura.
Microscopio Electrnico de Barrido
(MEB)
Forma una imagen de la superficie.
No es necesario el uso de cortes ultrafinos,
dado que el haz no atraviesa el preparado.
El lmite de resolucin es de alrededor de 10nm.
La nitidez de la imagen en profundidad es hasta
10 veces la que se obtiene con el MO.
Se puede originar una imagen tridimensional
definida.
Microscopio Electrnico de
Transmisin (MET)
Emplea un haz de electrones con una
muestra para producir una imagen
proyectada sobre una pantalla
fluorescente.
El lmite de resolucin aproximada es
2nm.
Ultraestructural Estructural Nivel de estudio
Pantalla fluorescente En la retina ocular Formacin de la imagen
No (escala de grises, se
pueden utilizar contrastes)
No/Si Coloracin
Ultramicrotomo (espesor
60 a 80nm)
Microtomo (espesor de 1
a 10um)
Corte
Resina epoxi, acrlicos Parafina Inclusin
Glutaraldehdo o tetrxido
de Osmio
Formolaldehdo o lquido
de Bouin
Fijacin
Canastilla de cobre Portaobjetos Muestra
Al vaco Simple con aire Tubo
Haz de electrones Luz Fuente luminosa
0.001um=2 a 10nm=1
0.25um= 250nm (el del
ojo es de 0.2mm)
Lmite de resolucin
20000x a 60000x 40x a 100x
Capacidad de
amplificacin
Clulas muertas Clulas vivas o muertas Estudian
ME MO
T
T

cnicas Histol
cnicas Histol

gicas
gicas
T
T

cnica histol
cnica histol

gica
gica
Se denomina Tcnica Histolgica al
conjunto de operaciones que han de darse
para obtener un preparado observable al
microscopio ptico.
Existen diversos mtodos histolgicos:
Mtodos inmediatos o al estado fresco.
Mtodos mediatos o post-mortem.
Mtodos histoqumicos.
Mtodos citoqumicos.
M
M

todos Inmediatos
todos Inmediatos
Al estado fresco:
No requiere preparacin previa ni coloracin.
Se observan distintos tonos de grises.
Se coloca el material en el portaobjetos, con una gota de lquido
para tratar de que se mantenga en un medio parecido a cuando
se hallaba en vida. Luego se coloca el cubreobjetos.
Se obervan: clulas aisladas- clulas formando un tejido- lquidos
biolgicos- microorganismos.
Coloreado:
Tambin se observan muestras sin conservar.
Se utilizan colorantes que aplican contraste.
Al utilizar colorantes que respeten la vida y no impongan
modificaciones se realiza una Coloracin Vital.
Coloracin supravital: el colorante se aplica sobre la muestra.
Coloracin intravital: se aplica por va endovenosa o digestiva en el
animal vivo, se obtiene una muestra coloreada.
Permite profundizar en el estudio de
detalles celulares ms finos pero requiere
la muerte previa del objeto a observar.
Pasos:
Toma del material.
Fijacin.
Inclusin.
Corte.
Coloracin.
Montaje final.
Examen mediato o de
Examen mediato o de
post
post

mortem:
mortem:
Toma del material:
Puede ser por:
Biopsia: toma del material de un ser vivo.
Autopsia: toma del material de un cadver.
Fijacin:
Para obtener preparados duraderos es necesario someter
a los tejidos a sustancias que detengan los procesos de
autlisis y que conserven en lo posible el estado en
que se encontraban en vida, lo que la define.
Un fijador debe:
Actuar con rapidez, matando y fijando las clulas antes que
aparezcan fenomenos post-mortem (autlisis, desintegracin);
Poseer alto poder de penetracin;
Conservar en lo posible detalles estructurales;
Permitir o favorecer el empleo de procedimientos posteriores;
Impedir la desaparicin de elementos solubles, durante o
despus;
No provocar artificios de tcnica;
No retraer la muestra, ni volverla friable o quebradiza.
Inclusin:
Tiene como objetivo dar volumen y consistencia
a la muestra para facilitar su manipulacin y
obtener cortes mas finos.
La sustancia ms utilizada hoy en da es la
parafina (en la tcnica de rutina),insolubles en
agua y alcohol y solubles en xilol, toluol,
cloroformo, etc.
Como la parafina es incompatible con el agua y
el alcohol, es necesario que el agua sea
reemplazada por una sustancia miscible con la
parafina; por lo que primero se la deshidrata,
luego se impregnan en el disolvente (llamado
aclarante), para finalmente realizar la
penetracin en parafina.
Deshidratacin:
Despus de retirar las piezas del fijador y lavarlas estn embebidas en agua,
impidiendo la penetracin de la parafina.
En primer lugar se deben deshidratar los tejidos sumergindolas en lquidos
anhidros pero vidos de agua.
Para evitar daar la muestra con una deshidratacin brusca se realizan baos
sucesivos de alcohol cada vez menos hidratados, 50, 70, 80, 90, 96, hasta
alcohol 100.
Aclaracin:
Las piezas deshidratadas se sumergen en un disolvente de alcohol (dado que
la parafina no es afn a este), xilol o toluol.
Se realizan dos o tres baos.
Se reemplaza el alcohol y las piezas se vuelven transparentes, de ah el
nombre Aclarantes y el paso Aclaracin.
Los aclarantes permiten la inclusin en parafina pero eliminan los lpidos de la
muestra. Razn por la que no deben ser utilizados si se planea ver lpidos en
la muestra.
Penetracin de la parafina:
Se efecta en caliente ya que la parafina es slida a T ambiente.
Se realizan dos o tres baos de parafina.
Inclusin Definitiva o Formacin del Bloque:
Se solidifica la parafina por enfriamiento.
Se utilizan moldes de papel o metal ad-hoc donde se coloca la parafina
fundida.
Se coloca la pieza, orientndola segn la necesidad de estudio.
Obtencin de cortes
El objetivo es la obtencin de cortes lo
suficientemente delgados como para que
pueda atravesar la luz.
Se utilizan distintos mtodos y variados
aparatos de gran precisin, a los que se
denominan Micrtomos.
Los espesores ms utilizados van desde 4
a 6um.
Coloracin:
Antes de proceder con la tincin, los cortes se pegan a un portaobjetos
con albmina. Luego se debe eliminar la parafina, rehidratar nuevamente
al tejido (siguiendo los pasos inversos a la inclusin), ya que el colorante
es soluble en agua.
Colorantes: son las sustancias qumicas, solubles en agua, que pueden
interactuar con sustancias qumicas de la muestra confirindoles su color.
Presentan dos grupos funcionales:
Grupo cromforo: encargado de proporcionar el color.
Grupo auxcromo: encargado de interactuar con sustancias qumicas de la
muestra.
Coloracin: es el proceso mediante el cual un cuerpo es teido por una
sustancia colorante, el objetivo es dar contraste para permitir la
identificacin de las estructuras. Pueden ser:
Ortocromticas: los tejidos adquieren un color igual al de la solucin
colorante empleada.
Metacromticas: una sustancia o un grupo celular se tie con un color
diferente al del colorante empleado. Depende de dos factores: 1) Del
colorante, los que hacen metacromsia son colorantes bsicos; 2) Del tejido,
deben abundar sustancias polianinicas como los proteoglicanos o los GAGs
(poseen mucha carga negativa debido a los grupos sulfato).
Sustancias basfilas: Son los componentes de las
estructuras que se tien con colorantes bsicos.
Sustancias acidfilas: Son los componentes de las
estructuras que se tien con colorantes cidos.
Tecnica de coloracin HyE:
Hematoxilina: Es un colorante nuclear, est cargado
positivamente y es por lo tanto un colorante bsico. Se
deposita en los grupos fosfatos del ADN y ARN que
tienen carga negativa. Es el colorante nuclear ms
utilizado.
Eosina: Es un colorante artificial, dbilmente cido que
pertenece al grupo de las fluorescenas. Es fcilmente
soluble en agua. Colorea al citoplasma, tejido conjuntivo,
fibras colgenas de rosado intenso.
Desparafinizacin: se utiliza un disolvente de
la parafina como el xilol, colocando gotas sobre
el portaobjetos, volvindose los cortes
transparentes.
Hidratacin: el xilol debe ser eliminado antes
de hidratar. Se elimina mediante alcohol etlico.
Se hacen sucesivos baos de alcohol de
concentraciones decrecientes, hasta llegar a
hidratar completamente el tejido.
Coloracin propiamente dicha: comienza con
la hematoxilina, virado con agua corriente. Se
pasa luego a la eosina, para finalmente
sumergir la muestra en alcohol al 70%.
Coloracin en la tcnica de
rutina (H y E)
Montaje final de la muestra
Se coloca un vidrio mas pequeo que el
portaobjetos, cubreobjetos, para proteger la
muestra. Para adherirlo se utiliza Blsamo de
Canad. Dicha sustancia se la emplea disuelta
en xilol, por lo que es necesario deshidratar el
preparado utilizando concentraciones crecientes
de alcohol, luego aclararlo impregnndolo en
xilol y finalmente s, colocar sobre la muestra
gotas de Blsamo de Canad, y sobre este el
cubreobjetos. Se pueden cubrir los bordes con
Betn de Judea para concervar aun ms la
muestra.
Mtodos Histoqumicos.
Tcnicas de coloracin para Hidratos de Carbono:
Reaccin de PAS (Peryodic acid Schiff):
Se basa en la liberacin de grupos aldehdos por la accin oxidante del
cido peridico y su evidencia ulterior por medio del reactivo de Schiff.
Tie de rojo o rojo prpura a las estructuras que han liberado los
aldehdos.
Tcnicas de coloracin para cidos nuclicos ADN:
Reaccin de FEULGEN:
Es especfica para ADN, pues depende del azcar Desoxirribosa. Tras
una hidrlisis ligera por la accin de cido clorhdrico, se logra la
liberacin de grupos aldehdos, sobre los cuales acta el reactivo de
Schiff. Se obtiene un color prpura o violeta oscuro en las estructuras
que contienen ADN.
Mtodos para detectar lpidos:
Como las grasas son solubles en alcohol, xilol, toluol, etc. El estudio de la
misma requiere que no se utilicen disolventes. Se aconsejan los cortes por
congelacin, ya que es un mtodo fijador y a la vez da volmen y
consistencia
Sudan III polvo rojizo, soluble en alcohol y grasas, se utiliza para la tincin.
Mtodos Citoqumicos
Usa anticuerpos para molculas
especficas para detectar su presencia en
los tejidos
Los anticuerpos se obtienen inoculando
protenas a animales y extrayndolos
luego del suero.
La reaccin Antgeno - Anticuerpo se
evidencia mediante la previa marcacin
con sustancias fluorescentes
(fluorocromos).
Los siguientes conceptos van a ser
tiles para los TP
Desarrollo
Implica incremento en el nivel de organizacin.
Se refiere a todos los procesos que llevan a la
formacin de un individuo adulto pluricelular y
complejo a partir de una clular huevo.
Comprende el aumento de complejidad del
organismo.
Implica el aumento de nmero de elementos
participantes de la estructura (crecimiento), requiere
un aumento de interrelaciones entre los
elementos participantes.
Embriologa:
Rama de la biologa que estudia el desarrollo inicial
de los organismos.
Para mamferos el desarrollo embrionario va desde la
fecundacin hasta el nacimiento.
Por eso no puede ser comprendido sin entender la
Gametognesis.
Reproduccin:
Es una caracterstica esencial de los seres vivos.
Toda reproduccin implica la formacin de nuevos
individuos que conservan ciertas especialidades y
admiten ciertas variaciones con respecto a sus
progenitores.
Dos tipos: Sexual y asexual.
Evolucin:
Es una caracterstica esencial de las especies.
Comprende la produccin al azar de modificaciones por
mutacin del genoma. Estas mutaciones seran cambios
en la estructura de genes preexistentes y formacin de
nuevas molculas de un gen.
Ante una mayor probabilidad de adaptacin de una
especie a cambios ambientales hay una mayor
probabilidad de variabilidad en la especie (Probabilidad
evolutiva).
Al incluir la reproduccin sexual varias etapas de
haploida y fusin en cada ciclo se rompen las
combinaciones. Esto permite la formacin de nuevas,
permitiendo una gran ventaja evolutiva.
En la reproduccin asexual una mutacin beneficiosa
quedar restringida a un clon, mientras que en la
reproduccin sexual podra ser extendida a toda la
especie.
Ontogenia:
Desarrollo individual del organismo desde el comienzo
hasta el fin de la vida del individuo.
Durante la reproduccin, la ontogenia comienza a partir
del perodo embrionario, cuando en el cuerpo de
ejemplares progenitores se forman las clulas de las
cuales nace el cigoto.
Despus de la fecundacin comienzan los perodos
embrionarios y post-embrionarios. La ontogenia termina
con la vejez y muerte del individuo.
Filogenia:
Es la historia del origen y desarrollo de un grupo
sistemtico dado.
Cuando se habla de filogenia se tiene en cuenta todo el
proceso histrico del desarrollo de la vida desde su
surgimiento en la tierra hasta la aparicin de la especie.