Aspectos moleculares de la formacin de bilis y colestasis

Recientes conocimientos sobre los mecanismos celulares y moleculares que controlan la

funcin y la regulacin del transporte Hepatobiliar han conducido a una mayor comprensin
de la importancia fisiolgica de la secrecin de bilis. Los portadores individuales para los cidos
biliares y otros aniones orgnicos en hgado y el intestino ya han sido clonados de varias
especies. Adems, estn siendo desentraando complejas redes de seales que regulan las
enzimas claves y transportadores de membrana situados en las clulas que participan en el
metabolismo o el transporte de electores biliares. Este conocimiento tiene importantes
implicaciones para la patogenia de enfermedades hepticas colestsicas. Aqu repasamos
informacin reciente sobre aspectos moleculares de la funcin secretora Hepatobiliar y su
regulacin en la colestasis. Tambin se discuten posibles consecuencias de este conocimiento
para el diseo de nuevas terapias de los trastornos colestsicas.
Secrecin biliar juega un papel fundamental en la fisiologa del hgado porque sirve como una
importante ruta excretor para muchos endo - y xeno-bioticos y participa en la absorcin de los
lpidos desde el lumen intestinal. Recientemente, se han logrado avances importantes en la
identificacin molecular de protenas de transporte de membrana en el hgado y el intestino
que controlan la formacin de la bilis. Informacin sobre la regulacin de estos sistemas de
transporte bajo condiciones fisiolgicas y fisiopatolgicas han entrelazado una compleja red de
seales de control de sntesis de sales biliares (BS) y transporte, as como el colesterol,
metabolismo de lipoprotenas y drogas. Por lo tanto, han surgido nuevos conceptos para la
regulacin normal de transportadores solutos orgnicos y las respuestas adaptativas de los
hepatocitos a la acumulacin intracelular de compuestos potencialmente txicos. Esta
informacin ha conducido a una mejor comprensin del control de flujo biliar normal y, por lo
tanto, los procesos implicados en la patogenia de varias formas de enfermedades hepticas
colestsicas. Adems, las protenas de transporte y sus reguladores representan nuevas dianas
farmacolgicas potenciales para la intervencin teraputica en enfermedades colestsicas y
dao heptico inducido por drogas. Esta revisin resume los datos recientes sobre los
determinantes moleculares de la formacin de bilis y su regulacin en la colestasis.
Conceptos bsicos de la formacin de bilis
Formacin de bilis resulta de la secrecin de compuestos activos osmticamente activa por los
hepatocitos en el espacio con canalculos, seguido por el movimiento pasivo del agua a travs
de las ensambladuras apretadas. Las sales biliares son los principales solutos en la bilis y se
consideran la mayor fuerza impulsora osmtica en la generacin de flujo de la bilis, aunque
independiente BS procesos tambin contribuyen a la produccin de bilis. Transporte de los
constituyentes biliares de sangre a la bilis es un proceso vectorial que incluye la captacin de
sangre sinusoidal, transporte intracelular a travs del hepatocito (con o sin modificaciones
metablicas) y secrecin con canalculos contra gradientes de concentracin que requieren
transporte activo dependiente de energa. Aunque el principal determinante del flujo biliar
total es el volumen de agua generada en el nivel con canalculos, otras modificaciones de la
composicin de la bilis ocurren a lo largo del rbol biliar. Adems, BS los principales solutos
biliares se someten a enteroheptica ciclismo debido a la presencia de un mecanismo de
transporte activo ubicado en el Polo apical de los enterocitos en leon terminal. Esto permite la
recuperacin de BS desde el lumen intestinal y transporte a la circulacin portal y, en ltima
instancia, al hgado para la absorcin y la secrecin.
Bases moleculares del transporte Hepatobiliar
Los transportadores de membrana principal que determinan principalmente la produccin de
bilis heptica ahora se caracterizan en gran medida a nivel molecular. La mayora de ellos ha
sido clonada de tejidos humanos y roedores. Informacin sobre la localizacin, nomenclatura y
funcin de los transportadores hepatobiliares aparecen en la tabla 1. Algunos de estos
transportadores se expresan tambin en tejidos que no sean el hgado, donde desempean
funciones fisiolgicas especficas. Debido a limitaciones de espacio, se revisan aqu slo los
conceptos bsicos de los transportadores hepticos implicados en la formacin de bilis (Figura
1). Comentarios ms completos estn disponibles en otros lugares. Las siguientes secciones
describen los procesos de transporte individuales segn su localizacin en la membrana
plasmtica de las clulas del hgado.

Sinusoidal absorcin de solutos biliares
La membrana sinusoidal de hepatocitos contiene varias protenas portadoras que facilitan la
entrada en el hgado de BS y otras sustancias orgnicas solubles en lpidos, incluyendo
sustratos fisiolgicos (es decir, bilirrubina), as como medicamentos y xenobiticos. Absorcin
de sales biliares est mediada por la Na + - dependientes - independientes y mecanismos. El
polipptido de cotransporte de taurocolato Na+(NTCP) y una creciente familia de
transportadores de anin orgnico mltiples especficos son las principales protenas
implicadas en esta etapa de formacin de la bilis. Los NTCP se expresa exclusivamente en el
hgado, estrictamente localizado en la membrana basolateral de los hepatocitos y es el
predominante Na +-dependiente transportador BS de los hepatocitos. Los NTCP transporta
principalmente conjugados BS, tomando ventaja de la membrana internamente dirigido
gradiente Na+, que es mantenido por la Na + / K +-ATPasa de la clula del hgado.
Transporte sinusoidal Na+ independiente de BS y aniones orgnicos es mediada por el
transporte de aniones orgnicos polipptidos (OATPs). Los OATPs son una familia de
transportadores poli especficos con afinidad de sustratos superpuestos que median la
absorcin Na+-independiente de especies no conjugadas de BS. Adems, OATPs median la
captacin de un gran nmero de otros compuestos con diferentes cargos y conjugados de
estructura, incluyendo algunos bilirrubina, hormonas tiroideas, esteroides neutros y
numerosos medicamentos y xenobiticos. Un nmero creciente de OATPs ha sido identificado
tanto en ratas y seres humanos. En contraste con NTCP, OATPs se expresan en tejidos
extrahepticos, particularmente el intestino, rin y cerebro, subrayando su papel en la
disposicin general de compuestos anfipticas. Aunque algunos OATPs humanas no son
ortlogos verdadero del producto del gen del ratn o la rata, aquellos que expresan
predominante o exclusivamente en el hgado tienen funciones similares a los del ratn o la
rata Oatps *. Funcin de absorcin de algunos miembros de la familia OATP parece implicar
intercambio aninico con glutatin reducido y bicarbonato. Por otra parte, algunos OATPs
podran funcionar como transportadores bi-direccionales en intracelular altas concentraciones
de sustrato, funcionamiento, cuando sea necesario, como un sistema de extrusin de
compuestos potencialmente peligrosos.
* Por Convencin, los nombres de los genes del transportador humano hepatobiliares se
capitalizan, mientras que los roedores genes y sus productos estn escritos en minsculas con
maysculas de la primera letra. Adems, los genes del transportador se fijan en cursiva,
mientras que productos gnicos se fijan en romanos.
Protenas de transporte adicionales, tales como los hgado homlogos de los transportadores
de anin orgnico del rin (avena) y los transportadores de cationes orgnicos (PTU),
recientemente se han identificado en el dominio sinusoidal de hepatocitos. Estos
transportadores podran desempear un papel en la absorcin de drogas por el hgado.
Con canalculos transporte de solutos biliares
Despus del transporte intracelular, que podra implicar vinculante, secuestro,
biotransformacin o verbal, colephilic sustancias son secretadas a travs de la membrana de
los hepatocitos con canalculos. Este proceso proporciona la motivacin primordial para la
generacin de flujo de bilis y es crucial para la funcin excretora del hgado (por ejemplo
eliminacin de cuerpo de endo - y xeno-bioticos, incluyendo las drogas). Los llamados
transportadores de membrana dependientes de ATP (ABC) que funcionan como bombas de
exportacin dependiente de ATP unidireccionales son clave protenas en esta etapa de
formacin de bilis. Los transportadores ABC presentes en la membrana canalicular incluyen: (i)
la BS exportar bomba (mediando), que interviene en la secrecin de BS en los canalculos; (ii) la
protena asociada a resistencia de mltiples drogas 2 (MRP2), que transporta aninicos
conjugados de muchas sustancias lipoflicas y glutatin reducido; (iii) el multirresistente 1
(MDR1) producto del gene, que acta como un transportador de compuestos catinicos
voluminosos y esteroides; y (iv) el MDR3 producto gnico, que acta como un translocador del
fosfolpido. Tres adicionales 'mitad transportadores ABC', que contienen slo seis de los doce
dominios transmembrana tpicos de los transportadores ABC, han sido identificados
recientemente en la membrana canalicular. Estos incluyen los esteroles maclados media-
transportadores ABCG5 y ABCG8, que parecen jugar un papel importante en la regulacin de la
secrecin biliar de colesterol y ABCG2 (tambin conocido como cncer de mama protena
relacionada; BCRP), que transporta preferentemente conjugados de sulfato. Adems de estos
transportadores ABC, la membrana con canalculos contiene a un intercambiador aninico que
excreta bicarbonato en la bilis y un p-tipo ATpasa (colestasis intraheptica familiar 1; FIC1) que
participan en el transporte de aminofosfolpidos desde el exterior al interior prospecto del
hgado o las membranas celulares biliares (tabla 1). FIC1 puede ser relevante para la regulacin
del transporte de cidos biliares o el mantenimiento de la composicin lipdica de la
membrana canalicular, pero esta hiptesis sigue siendo especulativa.

Efluxin de constituyentes biliares
Sinusoidal emanacin BS podra estar mediada por ciertas OATPs o transportadores ABC de la
membrana basolateral. MRP-3 y -4 transporte varios sustratos fisiolgicos, incluyendo BS no
sulfatada y sulfatadas. Aunque Mrp3 mnimamente se expresa en hgados normales, es
inducible. MRP4 se expresa en el hgado a un mayor grado y funciona como un co-
transportador dependiente de ATP de glutatin reducido, junto con BS monoaninico. Dada la
naturaleza vectorial de transporte Hepatobiliar, la exportacin a la sangre portal de
compuestos que normalmente se excreta en la bilis puede servir como una va alternativa para
la eliminacin de los constituyentes biliares, limitar la acumulacin de los constituyentes
biliares txicos cuando se interrumpe la va secretora con canalculos (vase ms adelante).
Sistemas de transporte en colangiocitos
La bilis puede modificarse significativamente por un conjunto de mecanismos de absorcin en
la membrana apical de cholangiocytes. Est acumulando una gran cantidad de informacin
sobre la biologa del cholangiocytes del hgado humano y roedor. Protenas de transporte
especficas se encuentran en el epitelio biliar. Estos transportadores se enumeran en la tabla 1.
Mecanismos moleculares de la colestasis
Colestasis se define como la debilitacin de bilis normal flujo resultante de un defecto
funcional a nivel de los hepatocitos o de obstruccin del conducto biliar a nivel. Colestasis
puede resultar de infecciones, el uso de ciertas drogas y trastornos autoinmunes, metablicos
o genticos. Identificacin de las protenas de transporte implicadas en la formacin de bilis
conducida al concepto de que altera la funcin de los transportadores de membrana o
expresiones podra subyacen algunas formas de colestasis. Adems, el reconocimiento de las
mutaciones en la colestasis intraheptica familiar progresiva, adems de los defectos genticos
responsables de fibrosis qustica y el sndrome de Alagille, estableci la base molecular de un
grupo de desordenes peditricos colestsicas clnicamente importante y proporcion evidencia
convincente de la importancia de los transportadores hepticos en la formacin de bilis. Los
detalles completos sobre trastornos hereditarios colestsicas se repasan en otros lugares.
Aqu, nos centramos en cambios en la expresin del transportador de hepatocelular observada
en condiciones experimentales y en humanas colestsicas. En este escenario, las alteraciones
en la expresin del transportador son principalmente secundarias (en lugar de primaria o
causal); Sin embargo, estas alteraciones podran explicar y mantener el continuo deterioro
funcional de la secrecin de bilis en la colestasis.
Expresin de transportadores del hepatocito ha sido investigado en varios modelos de la
colestasis, as como en ciertas enfermedades colestsicas humanas. Informacin actual sobre
los cambios en la expresin de transportadores hepticos en colestasis se resume ms
adelante. Debido a limitaciones de espacio, no discutimos las modificaciones de la expresin
del transportador en los tejidos extrahepticos (es decir, intestino y rin) que podra facilitar
la excrecin de la retenidas constituyentes biliares extraheptica.
cambios Hepatocelulares
Lesin colestsica en roedores resulta en una reduccin marcada de los niveles de mRNA y
protena de Ntcp y otras protenas de transporte de anin orgnicas (es decir, Oatp1 y Mrp2) y
en menor medida de mediando. Expresin disminuida del transportador puede explicar la
alteracin hepatocelular captacin y excrecin canalicular de BS y otros aniones orgnicos (e.g.
diglucoronido de bilirrubina) visto en colestasis. Expresin de los canalculos Bsep inicialmente
disminuye y se recupera parcialmente con colestasis prolongada. As, mediando es ms estable
expresaron que los otros transportadores (Ntcp, Oatp1 y Mrp2) y pueden continuar a excretar
BS en la bilis incluso bajo condiciones colestsicas. En contraste con la desregulacin de
algunos de los transportadores de anin orgnico, expresin de Mdr1 en la membrana
canalicular e isoformas de Mrp (Mrp1, Mrp3 y Mrp4) en la membrana basolateral aumentan
tras lesin colestsica. Adems, otras dos isoformas Oatp del hgado, Oatp2 y Oatp4, estn
relativamente bien conservadas bajo condiciones colestsicas.
Desde un punto de vista teleolgico, alteraciones en la expresin del transportador se cree
que representa una respuesta compensatoria (anti-colestsica) que pretende limitar la
acumulacin hepatocelular de los constituyentes biliares potencialmente txicos y ofrecer
rutas alternativas excretores para acumular cholephils en colestasis. Como transporte con
canalculos representa el paso de limitacin de velocidad en la secrecin de bilis, alteraciones
de la expresin del transportador con canalculos pueden considerarse los eventos principales
en formas hepatocelular de colestasis. Por el contrario, las alteraciones de los sistemas de
transporte basolateral podran ser secundarias, con el objetivo de limitar an ms la absorcin
y la proteccin de los hepatocitos de sobrecarga con compuestos potencialmente txicos. Por
ejemplo, mantiene expresin de Oatp2 y Oatp4 en condiciones colestsicas podra facilitar la
emanacin de BS en la direccin opuesta (es decir, desde el hepatocito hacia la sangre
sinusoidal) en virtud de su funcin como intercambiadores de aniones. La misma
interpretacin se ha dado a la regulacin al alza observada de basolateral Mrps en colestasis.
En particular, transporte Mrp3 y Mrp4 sulfatada BS, que se incrementan en la colestasis.
Sobrerregulacin de basolateral Mrp3 tambin podra explicar la aparicin de bilirrubina
conjugada en plasma y orina durante la colestasis. Finalmente, en condiciones colestsicas,
cambios adaptativos de los transportadores de anin orgnico tambin se producen en el
rin, favoreciendo el cambio hacia la excrecin renal de BS y otros constituyentes biliares.
Cambios en la expresin del transportador en enfermedades hepticas colestsicas humanas
son consistentes con conceptos derivados de modelos animales experimentales. Expresin de
NTCP y OATP2, as como mediando y MRP2, est reducida en pacientes con colestasis inducida
por la inflamacin aguda. En cirrosis biliar primaria (PBC), cambios en la expresin del
transportador evolucionan de una forma dependiente de etapa. En etapas tempranas de la
PBC, cambios en BS o transportadores de anin orgnico no se consideran. Con la progresin
de la enfermedad, OATP2 y en menor grado NTCP son reguladas, mientras que la expresin
MRP3 y MDR1 es sobrerregulada. Los cambios inversos de NTCP (regulacion baja) y la
expresin MRP3 (aumento) son predominantes en el rea periportal, donde los hepatocitos
estn expuestos a los niveles ms altos de BS bajo condiciones normales y colestsicas. Esto
espacialmente coordinado regulacin decreciente de sistemas de captacin basolateral, y la
sobreexpresin de bombas de eflujo potencialmente compensatoria (MRP3) podra proteger el
hepatocito de mayor acumulacin de BS txicos y otros componentes biliares en colestasis
crnica. MEDIANDO con canalculos y MRP2 aumenta en etapa III PBC antes de regresar a los
niveles normales en etapa IV. Esta induccin transitoria de MRP2 y mediando podra
interpretarse como un intento de superar la lesin colestsica compensatorio. Observaciones
similares se han hecho en la colangitis esclerosante primaria.
Cambios colangiocelulares
Similar a los hepatocitos, sistemas de transporte colangiocelular podran tambin
experimentan cambios compensatorios o convertido en el blanco de la lesin inicial
colestsica. Sin embargo, la informacin sobre este tema es limitada. Incremento en la
captacin de BS de bilis debido a la presencia del apical Na +-transportador dependiente BS y
Mrp3 (promocin de eflujo de BS en circulacin peribiliar) podra facilitar el regreso de BS de
los conductos biliares obstruidos a la circulacin sistmica. Reabsorcin de sales biliares de la
bilis puede prevenir o limitar la lesin heptica inducida por BS en colestasis obstructiva.
Mecanismos moleculares de la regulacin de los transportadores hepticos en colestasis
Los mecanismos que intervienen en la modulacin de la expresin del transportador durante
la colestasis se conocen slo parcialmente. Mltiples factores tales como BS, citocinas
proinflamatorias, estrs oxidativo, los retinoides, las drogas y las hormonas estn en juego.
Regulacin de la iniciacin de transcripcin de ARNm es reconocido como el mecanismo
predominante que regulan la expresin gnica del transportador. Ha surgido una expansin
del papel de los factores de transcripcin activados por ligando y miembros de la superfamilia
de receptores (NHR) nuclear hormonal en la regulacin de la expresin del transportador. En
particular, el receptor farnesoid X (FXR) que acta como un sensor de BS intracelular regula la
expresin basal de mediando y participa en su regulacin al alza tras una carga de BS. Adems,
a travs de la activacin de NHR otro denominado a corto heterodmero socio (SHP), FXR
participa en Ntcp downregulation de colestasis. SHP puede suprimir la transcripcin NTCP rata
compitiendo con activadores co por Unin activados por ligandos retinoid X receptor, socio
principal de NHR. FXR tambin est implicado en la regulacin transcripcional de MRP2 y
control de la sntesis de BS a travs de la 7-a-hidroxilasa (CYP7A1). Estudios en ratones FXR
nulo sugieren que los niveles elevados de BS en el hepatocito provocan una respuesta mediada
por FXR que reduce importacin BS (reduciendo la expresin Ntcp) y sntesis de BS (mediante
la supresin de la expresin de CYP7A1) y aumenta la exportacin BS con canalculos activando
Bsep expresin. Estos cambios regulatorios tambin parecen estar en juego en la colestasis.
Adems FXR, otros dos miembros de la superfamilia de NHR regulan los transportadores
Hepatobiliar: el receptor de pregnano X (PXR) y el receptor del androstano constitutiva (CAR).
El receptor de pregnano X estimula la expresin de Oatp2, que est implicada en BS y aniones
orgnicos o transporte de cationes y Cyp3a, que participa en la hidroxilacin BS y
desintoxicacin, considerando que el coche est implicada en la regulacin de Mrp2 heptica y
expresin Mrp3. Finalmente, otro factor de transcripcin, hepatocito nuclear factor 1a
(HNF1a), parece jugar un papel clave en la mediacin de la supresin de OATP2 BS. As,
cambios en la expresin del transportador durante la colestasis parecen estar mediado por los
mandantes biliares (principalmente BS) y pueden ser explicados por los cambios en un
conjunto de loteras FXR, PXR y coches, as como HNF1a. Adems, citoquinas proinflamatorias
que median disminuyeron la transcripcin gentica de transportadores hepatobiliares en
colestasis (tales como un factor de necrosis tumoral e interleukin-1b) afectan los niveles de
mRNA de varias loteras y HNF1a, que podra explicar las tarifas reducidas transcripcin de
genes dependientes o correspondientes.
Finalmente, adems de eventos transcripcionales, cambios postranscripcional o poste-de
translacin pueden tambin desempear un papel cambios del transportador en la colestasis,
aunque la informacin al respecto es limitada.
Perspectivas teraputicas
Opciones de tratamiento para enfermedades colestsicas son limitadas. Estimulacin de la
expresin del transportador defectuoso y funcin puede ser de beneficio teraputico en la
colestasis. Estrategias de tratamiento podran estar dirigidas a apoyar y estimular las vas de
rescate como rutas de eliminacin y desintoxicacin alternativa.
El cido ursodesoxiclico droga anti-colestsica (UDCA) acta, al menos en parte, por el
estmulo de la expresin del transportador o funcin. UDCA estimula vesicular exocitosis e
insercin de los transportadores con canalculos y aumenta los niveles de protena Bsep, Mrp2,
Mrp3 y Mrp4 en animales de experimentacin. Ms recientemente, UDCA tambin ha
demostrado ser capaz de estimular Cyp3A4 expresin, una va de desintoxicacin pertinentes
para BS.
Un ejemplo adicional de la estimulacin de la expresin del transportador o funcin es los
efectos beneficiosos de los corticosteroides en el tratamiento de la ictericia colestsica ('Cal
esteroide'). Los corticoesteroides han demostrado estimular la expresin mediando y Mrp2 en
los hepatocitos y la expresin del transportador colangiocelular.
Con la excepcin de UDCA, otras opciones de tratamiento para la colestasis no han
demostrado para ser beneficiosos. Por lo tanto, contina la bsqueda de terapias ms
especficas y efectivas de trastornos colestsicas. Factores de transcripcin activados por
ligandos conocidos para regular el transporte y el metabolismo de los constituyentes biliares
representan blancos atractivos para el diseo de frmacos. Dado sus efectos sobre el
metabolismo y transporte de BS en tejidos hepticos y extrahepticos, FXR es un candidato
susceptible de manipulacin farmacolgica. Un potente agonista FXR gene-especfico debe ser
capaz de reducir los niveles intracelulares de BS y promover la eliminacin renal de BS
retenidos, disminuyendo la lesin heptica. Tambin podra ser posible utilizar PXR como una
diana farmacolgica. Pruebas clnicas sobre el efecto de la rifampicina en colestasis sugieren
que los agonistas PXR ms potentes y eficaces podran ser tiles. Agonistas PXR se esperan
reducir la acumulacin de BS txicos en el hgado, promoviendo su metabolismo y excrecin.
Finalmente, el uso combinado de agonistas FXR y PXR es una excitante posibilidad que podra
para ser til en el tratamiento de los trastornos colestsicas.
Observaciones finales
Recientes conocimientos sobre los mecanismos de formacin de bilis han establecido que esta
funcin del hgado depende de una accin concertada de los transportadores de membrana.
Regulacin molecular de estos sistemas de transporte Hepatobiliar en colestasis parece ser
parte de una respuesta adaptativa con el objetivo de minimizar el grado de lesin colestsica.
Una mejor comprensin de los mecanismos moleculares implicados en la colestasis,
particularmente el papel de loteras en la regulacin transcripcional de la expresin heptica
de transportador, abrir nuevos horizontes para la intervencin teraputica.