La cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) se utiliza para separar, cuantificar y analizar los componentes de una mezcla química. Este documento describe el equipo de HPLC, cómo funciona para separar los componentes de una muestra inyectada en una columna, y los tipos de muestras y tratamientos que requieren. Finalmente, explica cómo el equipo presenta los resultados cualitativos y cuantitativos y sus aplicaciones importantes en química farmacéutica como el control de calidad de medicamentos.
La cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) se utiliza para separar, cuantificar y analizar los componentes de una mezcla química. Este documento describe el equipo de HPLC, cómo funciona para separar los componentes de una muestra inyectada en una columna, y los tipos de muestras y tratamientos que requieren. Finalmente, explica cómo el equipo presenta los resultados cualitativos y cuantitativos y sus aplicaciones importantes en química farmacéutica como el control de calidad de medicamentos.
La cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) se utiliza para separar, cuantificar y analizar los componentes de una mezcla química. Este documento describe el equipo de HPLC, cómo funciona para separar los componentes de una muestra inyectada en una columna, y los tipos de muestras y tratamientos que requieren. Finalmente, explica cómo el equipo presenta los resultados cualitativos y cuantitativos y sus aplicaciones importantes en química farmacéutica como el control de calidad de medicamentos.
Escuela de Qumica Departamento de Fisicoqumica Anlisis Instrumental II Dulce Flor de Mara Gudiel Hernndez 201113461 Mara Rene Arrivillaga Herrera 201113559 Fernando Andrs Hernndez Cordero 201119629 Helena Alejandra Reyna Corado 201119561 Jose Len Castillo Arroyave 201123956
Reporte No. #10: Cromatografa Lquida de Alta Resolucin (HPLC) Determinacin Cuantitativa de Cafena en Formulaciones de Analgesicos.
1. Instrumentacin:
La cromatografa de lquidos de alta resolucin (HPLC) es un proceso analtico que utiliza un instrumento especialmente diseado para separar, cuantificar y analizar los componentes de una mezcla qumica. Un equipo de HPLC consiste esecialmente de un sistema de inyeccin, un reservorio para el disolvente, una bomba peristalica, una columna, un detector y un aparato de registro. (Anaya, et al; 2001). El papel esencial de las bombas es impulsar a la fase mvil con presin y flujo constante, el proceso de inyeccin de la muestra en la actualidad es automtica, las columnas que se utilizan normalmente son de acero inoxidable y los detectores su papel fundamentalmente es de indicar el momento de aparicin de los diferentes componentes que constituyen la muestra, calificarlo cuantitativamente como cualitativamente. (HPLC, s.f.).
Los detectores ms comunes de los que se dispone son 2: El detector ultravioleta-visible de longitud de onda variable y el detector LSD (evaporative light-scattering detector) pero pueden ser muchos ms detectores como detectores de refraccin, detectores de espectrmetro de masas y RMN. Un aparato de HPLC moderno se equipa con uno o ms recipientes de vidrio o acero inoxidable, cada uno de los cuales contiene unos 500ml de un disolvente. Los recipientes a menudo se equipan con un sistema para eliminar los gases disueltos en general oxigeno y nitrgeno que interfieren formando burbujas en los sistemas de deteccin. Con frecuencias estos sistemas tambin contienen un dispositivo para la filtracin del polvo y de las partculas solidas en suspensin de disolventes.
2. Como funcionan:
Para purificar una mezcla de compuestos, un pequeo volumen de muestra es inyectado en el aparato donde es acarreado por el disolvente o fase mvil hacia la columna y eludo hasta salir de la columna por la fase mvil seleccionada ms adecuada basado en las caractersticas de la muestra. La elusin de la muestra puede ser obtenida con disolventes de composicin constante o con disolventes de composicin variable lo que se determina una cromatografa co gradiente de solvente. (Anaya, et al; 2001). Las tcnicas cromatografas en columna son muy variadas, pero en todas ellas hay una fase mvil como se menciono con anterioridad la cual consiste en un fluido (gas, lquido, o fluido supercrtico) que en el caso de cromatografa de HPLC es un fluido que es arrastrado a la muestra con un flujo constante de presin proporcionado por una bomba que suele ser una bomba reciproca constituida por un piston que mueve el fluido a presiones mayores de 6000 psi esta bomba necesita de un amortiguador de pulsaciones para evitar que los picos se vean afectados en sensibilidad, esta fluido se hacer pasar por todo el aparato hasta llegar al bucle de inyeccin donde arrastra la muestra hasta llegar al punto donde es introducida la muestra a la columna. Siguiendo el flujo de presin la lleva a una columna donde se encuentra la fase estacionaria que se trata de un slido o un lquido fijado en un slido, donde lo usual utilizado en cromatografa por HPLC es como soporte silica gel sustituida con grupos octadecilo que dan un excelente rendimiento para la mayora de muestras utilizadas. (HPLC, s.f.).
3. Qu tipo de muestras analiza, condiciones y/o tratamientos especiales que deben de realizarse a las muestras?
En este tipo de estudios, los proveedores recomiendan que se filtre y se desgasifique todo componente antes de ser introducido a un sistema de HPLC, esto con el propsito de evitar daos futuros (HPLC, s.f.). El tamao de la muestra deseable tiende a ser de 10mg, en este caso como ejemplo se realiza un triturado de aspirina forte la cual posee un contenido de cido acetilsaliclico y cafena la cual se desea detectar por medio de este instrumento esta se debe de diluir en un disolvente para poder ser analizada en este caso se debe de utilizar agua para disolverla debido a su fcil solubilizacion y ahorrar costos en la cromatografa, de ah esta muestra para evitar precipitados y formacin de cristales que puedan daar el equipo se realiza una dilucin con metanol siempre en las proporciones correctas para obtener una disolucin de concentracin conocida terica para su posterior cromatografa como se indic anteriormente antes de introducir cualquier muestra para evitar interferencias esta tiene que ser desgasificada lo que se hace por medio de un sistema de ultrasonido para eliminar el oxgeno y nitrgeno principalmente disueltos.
4. Cmo presenta los resultados el equipo?
La cromatografa liquida de alta eficacia es la tcnica analtica de separacin mas ampliamente utilizada en la actualidad debido a su sensibilidad, a su adecaucion para realizar determinaciones cuantitativas exactas y a su gran aplicabilidad a diferentes tipos de sustancias, En principio se utiliz una alta presin para incrementar la velocidad lineal y reducir la difusin de los compuestos en el interior de las columnas empaquetadas mejorando asi la resolucin de la cromatografa. Hay 3 caracterisiticas principales que se pueden usar para conseguir una separacin de HPLC, por polaridad, la carga elctrica y el tamao molecular, despus de realizar la separacin por cualquiera de los tres mtodos el equipo enva los datos mediante los anlisis posteriores por un detector el cual manda los datos dependiendo de cul sea el detector dando caractersticas cualitativas y cuantitativas de cada eluato que se logra separar (Mndez, M., 2009).
5. Aplicaciones En qumica Farmacutica. La cromatografa por HPLC ha llegado a ser una de las tcnicas ms importantes para el anlisis qumico y purificacin de compuestos en muchos laboratorio modernos. (Anaya, et al; 2001) Por ser una cromatografa de gran versatilidad y capacidad de acoplar a gran variedad de detectores se ha hecho muy importante en la industria farmacutica para control de calidad cuando se necesitan saber cantidades de compuestos puros contenidos en mezclas, tambin se utiliza para identificacin y caracterizacin de muestras farmacuticas para determinar impurezas dentro de los medicamentos, para determinar homogeneidad entre lotes as como otras aplicaciones para identificacin de sustancias peligrosas en aguas para uso farmacutico.
Conclusiones:
Un equipo de HPLC es un equipo sofisticado que nos brinda una gran resolucin y versatilidad de deteccin y acoplamientos.
El tratamiento previo de solventes y muestras para utilizar en el equipo es de gran importancia para obtener mejores resultados y mantener el equipo en ptimas condiciones.
El equipo de HPLC es de gran importancia en el uso farmacutico debido a que se puede hacer una gran cantidad de muestras diferentes convirtindose en un equipo fundamental en un laboratorio de anlisis farmaceutico.
Bibliografa:
Anaya, A; et al. (2001). Relaciones Qumicas entre Organismos: Aspectos Bsicos y Perspectivas de su Aplicacin. Mxico: Plaza y Valds, S.A. Pp.186. Mndez, M. (2009) Desarrollo de mtodos para el aislamiento y la deteccin de toxinas marinas en productos de la pesca y la agricultura, (1 edicin) Editorial de la universidade de Santiago de Compostela, Galicia, Espaa, Pag. 55 PHLC. (s.f.). Extrado el 17 diciembre 2013 desde: http://tesis.uson.mx/digital/tesis/docs/19630/Capitulo2.pdf