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CARACTERIZACIN DE LA FLORA MICROBIANA ANAEROBIA DEL CIEGO EN LA POBLACIN

AVICOLA ADULTA Y SANA DEL MUNICIPIO DE LOS PATIOS CON MIRAS A LA PRODUCCIN DE
PROBIOTICOS CON CEPAS AUTOCTONAS DE LA REGIN
ADIEL ALBERTO VASQUEZ QUIJANO
RESUMEN
Los probiticos son aqueos !icroor"anis!os #i#os que$ a ser a"re"a%os co!o supe!ento en a %ieta$
a&ectan en &or!a bene&iciosa e %esarroo %e a &ora !icrobiana no pat"ena en e intestino ' esti!uan as
&unciones protectoras %e siste!a %i"esti#o(
En este traba)o se presentan resuta%os con respecto a a caracteri*acin %e a &ora intestina anaerobia
pre%o!inante en a#es a%utas sanas %e !unicipio %e Los +atios( Se i%enti&icaron$ con ",nero ' especie$ -.
bacterias$ / %e as cuaes no se 0an reporta%o en a iteratura internaciona( Se prepar un probitico con estos
!icroor"anis!os ' se e#au &rente a %escar"as %e Salmonella resutan%o un 1actor %e +roteccin 21+3 456(6(
Se prepararon probiticos con as -. bacterias i%enti&ica%as ' a &ora aerobia obteni%a %e ca%a una %e as
"ran)as en estu%io$ se e#au e 1+ ' se obtu#ieron resuta%os que !ostraron un au!ento pro!e%io %e 1+ %e
6.(78( Los resuta%os in%ican que a e&iciencia %e un probitico est9 %a%a por e tipo %e &ora aerobia '
anaerobia que pue%a contener(
PALABRAS CLAVES
+robitico$ anaerobios$ aerobios$ 1actor %e +roteccin$ a#es a%utas sanas(
INTRODUCCION
E conoci!iento %e os e&ectos ben,&icos %e a"unas %e as bacterias %e a &ora intestina se inicia a principios
%e si"o con os traba)os %e :etc0ni;o&&( Des%e entonces$ ' a o ar"o %e estos casi 5<< a=os %e estu%io$
autores !u' %i#ersos se 0an es&or*a%o en conocer as %istintas &unciones %e os !icroor"anis!os que pueban
e tracto %i"esti#o( A pesar %e eo$ a"unas %e sus acciones no est9n bien precisa%as( +or otra parte$ una #e*
co!proba%o que a"unas bacterias intestinaes$ a%iciona%as a pienso o a a"ua %e bebi%a$ %eter!inaban una
respuesta &a#orabe en pro%uccin ani!a$ se intent en!arcaras en un "rupo espec>&ico( Sin e!bar"o$ a
propia 0etero"enei%a% %e os !icroor"anis!os e?peri!enta%os no &aciit este propsito( De i"ua &or!a$ no se
0a resueto una %eno!inacin t,cnica espec>&ica que per!itiera su %i&erenciacin %e otros a%iti#os o sustancias
no bio"icas$ consi%era%os con e&ectos esti!uantes %e a pro%uccin ani!a(
La paabra probitico &ue utii*a%a por 5@ #e* por Lie' ' StiAe en 5/76 para re&erirse a Buna sustancia
secreta%a por un !icroor"anis!o que esti!uaba e creci!iento %e otroC( En 5/D5$ Sperti %e&ini probitico
co!o Be?tractos %e te)i%o que esti!uaban e creci!iento !icrobianoC$ +ar;er$ en 5/D.$ co!o Bor"anis!os '
substancias que contribu'en para e baance !icrobiano intestinaC( :as tar%e$ en 5/E/$ 1uer !o%i&ic e
concepto co!o Bsupe!ento ai!enticio !icrobiano #i#o que a&ecta ben,&ica!ente e 0ospe%ero ani!a por que
!e)ora su baance !icrobiano intestinaC(
En pro%uccin ani!a intensi#a$ para obtener un buen ren%i!iento$ es in%ispensabe e uso %e antibiticos$ o
cua proporciona a ani!a una proteccin &rente a ciertas en&er!e%a%es$ a !is!o tie!po$ actFan co!o
precursores %e creci!iento a ei!inar !icroor"anis!os no %esea%os que se encuentran en e tubo %i"esti#o(
Sin e!bar"o$ e probe!a centra %e usar antibiticos en %ietas para ani!aes$ ra%ica en que que%a un resi%uo
en os pro%uctos ani!aes que a ser consu!i%o por e 0o!bre$ pro%uce una resistencia %e !icroor"anis!os
pat"enos a a accin %e antibiticos ' por consi"uiente e 0o!bre se encuentra en con%iciones !9s precarias
%e %e&ensa ante cuaquier en&er!e%a%$ especia!ente bacteriana(
Si con a a%!inistracin %e probiticos conse"ui!os !antener una &ora intestina en equiibrio e#itare!os
probe!as tan &recuentes en as a#es %e )aua co!o son as %iarreas ' otros probe!as pro%uci%os por
bacterias co!o a Salmonella(
+ero Gcua es e probitico i%eaH Las caracter>sticas que %ebe reunir son as si"uientesI
Que no resute %a=ino ni pro%uctor %e sustancias t?icas(
Los !icroor"anis!os que os co!ponen %eben a%0erirse &9ci!ente a a pare% intestina ' crecer
r9pi%a!ente(
Jontener bacterias que co!o os actobacios pue%an trans&or!ar a actosa en 9ci%o 9ctico$
consi"ui,n%ose as> ta aci%e* en e tubo %i"esti#o e#itan%o que ciertas bacterias %a=inas pue%an
sobre#i#ir(
Incuir !icroor"anis!os que eaboren #ita!inas$ bene&iciosas ' necesarias para e a#e ' en*i!as que
a'u%en a a %i"estin(
Que por su si!pe presencia &>sica e#ite que !icroor"anis!os pat"enos coonicen e intestino(
En este traba)o se presentan resuta%os con respecto a a &ora intestina anaerobia pre%o!inante en a#es
a%utas sanas %e !unicipio %e Los +atios$ %on%e se cacua una pobacin apro?i!a%a %e 7<<(<<< ani!aes( A
tra#,s %e in&or!acin obteni%a %e IJA se ocai*aron as "ran)as %e%ica%as a a a#icutura en e 9rea %e estu%io(
Se ei"ieron 57 "ran)as con una pobacin a#>coa %e apro?i!a%a!ente 6K7(7<< a#es$ %e as cuaes .-6(-<<
2D/(-.83 son pone%oras ' 555(.<< 2-<(D783 poos %e en"or%e(
Se re#isaron to%os os %atos obteni%os en ca%a una %e as "ran)as$ con e &in %e seeccionar as que reun>an as
con%iciones para e estu%io$ tenien%o en cuentaI
Lran)as sin 0istoria %e patoo">as recientes(
Lran)as cu'as a#es cu!p>an con as caracter>sticas pti!as %e creci!iento espera%as para a
e%a%(
De as "ran)as esco"i%as para e estu%io soa!ente se traba) con / %e eas 2E/(..8 %e a pobacin a#>coa %e
Los +atios3 'a que as otras siete presentaban$ a !o!ento %e estu%io$ probe!as epi%e!io"icos con NeA
Jaste ' Lu!boro$ que%an%o una pobacin %e .6-(-<< ani!aes que representan un D6(KD8 %e tota %e a
pobacin(
Una #e* reai*a%o e censo %e a pobacin a#>coa$ se ei"ieron os ani!aes que cu!p>an as con%iciones para
e estu%io tenien%o en cuenta e criterio %e ser aves adulas ! sa"asM en tota cuatro a#es en a a#>coa con
!a'or pobacin ' %os a#es en ca%a una %e as otras "ran)as para un tota %e 5< a#es$ con as que se proce%i
a reai*ar e estu%io(
Se sacri&icaron ca%a #e* %os a#es por "ran)a ' se to! e conteni%o %e os cie"os en un ca%o %e tio"icoato
para e an9isis %e a &ora !icrobiana anaerobia(
D#a$"%s#&' ()esu"#v' de a"ae)'*#'s+ Sie!pre se 0ace in%ispensabe un %ia"nstico r9pi%o( E aisa!iento
' a i%enti&icacin %e os anaerobios to!an a"unos %>as ' aFn se!anas$ por o que es necesario 0acer un
an9isis presunti#o en a !uestra$ basa%o en %os par9!etros esenciaesI
5( E?a!en !acroscpico %e a !uestra(
a3 Joor con ten%encia a par%o o ne"ro !9s que %e coor cre!a$ que "enera!ente es %e ori"en
anaerobio(
b3 Oor caracter>stico(
c3 A"unos !icroor"anis!os anaerobios presentan &uorescencia$ co!o e Bacillus melaningognicus
2&uorescencia ro)o briante3(
-( E?a!en !icroscpico %e a !uestra(
a3 1rente a a cooracin %e Lra! se obser#an !e*cas %e cocos Lra! +ositi#os ' Lra! ne"ati#os '
bacios(
b3 A"unas #eces os bacios Lra! ne"ati#os presentan caracter>sticas &usi&or!es o una !or&oo">a
!u' peo!or&ica(
c3 En ocasiones os bacios Lra! ne"ati#os pue%en ser en!ascara%os por os cocos Lra! positi#os '
esto presenta %i&icuta%es en a interpretacin %e os cuti#os(
%3 La !or&oo">a %e Actinomyces caracter>stica$ se!e)an%o !9s ca%enas %e cocos que ee!entos
baciares(
e3 Clostridium perfringens es "enera!ente !9s ob#io en su !or&oo">a$ bacios Lra! positi#os !u'
"ruesos bruscos con bor%es recorta%os que recuer%an a%rios(
MATERIALES Y METODOS+
En e proceso se utii*aron as t,cnicas tra%icionaes %e aboratorio para e cuti#o %e anaerobios$ incu'en%oI
S#se,a a"ae)%*#&' GasPa-+ Jarra anaerobia eabora%a en po'carbonato %e K(6 itros %e capaci%a%$ con un
porta pacas 2ca)as %e +etri3 !et9ico(
S'*)es $e"e)ad')es de a"ae)'*#'s#s (a)a el s#se,a GasPa-I Sobre %e !eta a!ina%o que contiene pape
%e &itro$ una tabeta %e boro0i%ruro %e so%io$ una %e bicarbonato %e so%io ' 9ci%o c>trico( Jon a a%icin %e 5<
! %e a"ua %estia%a o %esioni*a%a$ e siste!a pro%uce %espren%i!iento %e N- O JO-( La reaccin resutante
9ci%a e#ita a reabsorcin %e an0>%ri%o carbnico(
S'*)es #"d#&ad')es de a"ae)'*#'s#s+ Tira %e a"o%n i!pre"na%a en re*ar*urina en sobre %e !eta a!ina%o(
MEDIOS DE CULTIVO PARA ANAEROBIOS+
Cald' T#'$l#&'la' .e")#/ue&#d'0I +ara e creci!iento ' cuti#o %e !icroor"anis!os anaerobios( Este !e%io
pue%e utii*arse as> !is!o para %i#ersos &ines en e aisa!iento e i%enti&icacin %e estos ",r!enes(
F'),a de a&ua&#%"+ Las sustancias re%uctoras$ tio"icoato$ cisterna ' su&ito s%ico pro%ucen una
anaerobiosis su&iciente para os Anaerobios e?i"entes( A i"ua que otros !e%ios tio"icoato$ es a%ecua%o$ tanto
para a in#esti"acin %e !uestras c>nicas co!o para !ateriaes o conser#antes que conten"an !ateriaes
pesa%os(
Med#' 1lu#d' T#'$l#&'la' se$2" B)e3e)
A$a) sa"$)e (a)a a"ae)'*#'s se$2" CECI +ara cuti#o %e !icroor"anis!os anaerobios$ incuso !u'
e?i"entes ' %e creci!iento ento$ a partir %e !ateria c>nico %e in#esti"acin(
F'),a de a&ua&#%"+ Este !e%io %e cuti#o no seecti#o$ rico en nutrientes$ "aranti*a tanto e cuti#o %e
!icroor"anis!os anaerobios e?i"entes co!o %e aerobios ' !icroaero&>icos( 1a#orece as> !is!o a &or!acin
%e pi"!ento t>pico en e caso %e Bacteroides melaningognicus ' a &or!acin %e %obe 0e!isis en
Clostridium perfringens.
S#se,a de #de"#1#&a&#%" CRYSTAL+ Un !icro !,to%o cuaitati#o que utii*a sustratos cro!"enos '
con#encionaes !o%i&ica%os( E principio %e siste!a JRPSTAL se basa en que os panees %e !is!o
contienen K< sustratos bioqu>!icos ' en*i!9ticos %es0i%rata%os que se 0i%ratan con a suspensin %e bacterias
en &ui%o %e incuo( Las pruebas se basan en a utii*acin ' %e"ra%acin !icrobiana %e sustratos espec>&icos
%etecta%os por #arios siste!as in%ica%ores(

S#se,a de #de"#1#&a&#%" IDS Ra(#d ANA II S!se,+ Es ta!bi,n un !icro !,to%o cuaitati#o %e i%enti&icacin
que e!pea sustratos con#encionaes ' cro!o",nicos para a i%enti&icacin %e bacterias anaerobias$ que
aunque en !e%icina #eterinaria no 0a si%o tota!ente estabeci%o presta "ran utii%a% con reacin a a
i%enti&icacin %e !uc0os !icroor"anis!os anaerobios reaciona%os en e 9rea(
A#sla,#e"'+ +ara e#itar conta!inacin con otro tipo %e !icroor"anis!os se to!aron a !9?i!o as
precauciones pertinentes a traba)o en !icrobioo">a( Las !uestras se se!braron %irecta!ente en ca%o
tio"icoato ' %e a> se to!aron a>cuotas %e &on%o %e tubo para se!brar ' aisar en a"ar san"re para
anaerobios$ pre#ia incubacin %urante -. 0oras a KDQJ en con%iciones %e anaerobiosis$ utii*an%o e siste!a
anaerbico Laspa;(

A !is!o tie!po se to!aron a>cuotas %e ca%o tio"icoato ' se se!braron en ca%o nutriti#o para cuti#ar a
&ora aerobia &acutati#a ' e#auar e &actor %e proteccin ' e &actor %e in&eccin %e a !is!a(
A as %i&erentes coonias %e anaerobios aisa%as se es 0i*o cooracin %e Lra! ' se i%enti&icaron con os
siste!as JRPSTAL e IDS Rapi% ANA II S'ste!(
RESULTADOS DE LOS CULTIVOS ANAEROBIOS
En tota se i%enti&icaron -. %i&erentes bacterias anaerobias %e as cuaes 56 se 0an reporta%o en a iteratura
sobre probiticos ' / %e eas son nue#as 2Ver taba 53(
G45G46G47G48G49T'al 1ActinomycetaceaeXX 2Bacillus cereusX 3Bacillus subtilisX
4Bacteroides capillosusX 5Bacteroides ulgatusX !Bifidobacterium bifidumXX
"#actobacillus acidop$ilus %acid&XX '#actobacillus bifiduXXXX (#actobacillus
caseiXXXXX1)#actobacillus delbrue*ii11#actobacillus fermentumXXXX12#actobacillus
lactisX13Sacc$aromyces cereisiaeXX14Streptococcus
intermediusXXX15Streptococcus mutansXXX16*Mobiluncus
curtiusXX17*Actinomyces bovisXXX18*Bacteroides
thetriomiconX19*Propionibacterium propionicusXX2*Actinomyces
viscosusXX21*!issierella praeacutaXXX22*Bilophila
ivads"orthiaXX2#*$apnocytopha%a sp&XXX2'*Propionibacterium
%uenilosumXXX12119111(#
Tabla 1: Microorganismos anaerobios identificados por granja, * Microorganismos
no reportados en bibliografa
Vae a pena acarar que tanto as !uestras co!o as sie!bras no se re&ri"eraron puesto que en caso %e
in#esti"acin %e anaerobios se 0a %esec0a%o este proceso por %os ra*ones &un%a!entaesI
a3 Es caro que a"unas cepas no o toeran(
b3 Los or"anis!os aerobios tien%en a incre!entarse 0acien%o ine&ecti#o e proce%i!iento %e anaerobiosis(
Cul#v's+ La con&ir!acin %e a presencia %e anaerobios en una !uestra est9 %a%a por su aisa!iento en
!e%ios %e cuti#o( E !a'or probe!a en e aisa!iento %e anaerobios est9 %a%o por a pro&usin %e especies$
&9ci!ente se pue%en encontrar %ocenas %e ",r!enes anaerobios ' %e or"anis!os &acutati#os( +ara e#itar
estos incon#enientes se 0i*o necesario esco"er en &or!a ana>tica ' siste!9tica os !e%ios %e cuti#o
a%ecua%os para a obtencin %e pti!os resuta%os(
Jon estos -. !icroor"anis!os anaerobios i%enti&ica%os ' con os cuti#os aerobios se pro%u)eron %os
probiticos 2probitico %e anaerobios ' probitico %e aerobios3$ que se a%!inistraron a "rupos %e 5< poitos %e
. %>as %e naci%os que se so!etieron a una %escar"a %e %osis estan%ari*a%a %e Sa!onea(
EVALUACION DE LA EFECTIVIDAD DEL PROBIOTICO PRODUCIDO
La e#auacin %e a e&iciencia %e trata!iento con e +ROBIOTIJO$ se cacua con base en >n%ices %e in&eccin
' %e proteccin( 2Ver tabas -$ K P .3
D's#s Sal,'"ella
.Ba&e)#as : $0
G)u(' C'")'l
.N; de ('ll#'s ('s##v's0
G)u(' T)aad'
.N; de ('ll#'s ('s##v's0
5<
D
. <
5<
7
6 5
5<
6
K <
5<
.
K <
5<
K
- <
5<
-
5 <
5<
5
< <
No se a>sa 2<3R < 5<
Datos obtenidos para grupos de 10 pollitos tratados con probitico anaerobio y grupos de 10 pollitos control.
J9cuosI
1I 2Jontroes3 S
1I 2Trata%os3 S
( ) . 0 10 1 < =
1+ S ! . 1!
. 0
" . #
$Tratados% &'
% $(ontroles &'
> = =
Vaores ba)os %e Fa&') de I"1e&&#%" 21I3 in%ican ba)a proporcin %e a#es in&ecta%as con Salmonella+ ' ba)o
ni#e %e ani!aes porta%oresM o contrario ocurre con #aores atos %e 1I(
En cuanto a Fa&') de P)'e&&#%" .FP0< !ientras !a'or sea e #aor$ !9s e&ica* es a proteccin(
Terica!ente$ e !9?i!o #aor que se obtiene es 4 E<$ en e supuesto %e que to%as as a#es contro tu#iesen
5<
E
Salmonella , g en os cie"os$ ' que to%as as a#es trata%as &uesen ne"ati#as( Es i!probabe acan*ar este
resuta%o en a pr9cticaI Los #aores que se obtienen son !uc0o !enores( +i#nic; ' co( Jitaron #aores %es%e
.(E 0asta 5D(6( Aunque es i!posibe reacionar estos %atos %irecta!ente con a apicacin co!ercia %e
trata!iento$ se 0a su"eri%o que un &actor %e proteccin T. ten%r>a poca o nin"una posibii%a% %e re%ucir as
in&ecciones con Salmonella en as a#es %o!,sticas(
Taba -I Janti%a% %e poitos positi#os para Sa!onea a cabo %e cuatro %>as tras a inocuacin( R
Las !uestras en que no se %etectaron Sa!oneas$ recibieron un #aor %e cero 2<3(
Datos obtenidos para grupos de 10 pollitos tratados con me)cla de probitico anaerobio y aerobio.
*rupos de 10 pollitos control.
( ) ( ) ( ) ( ) ( ) ( )
" . #
10
#"
10
+ 1 , + - , ! , ! # -
= =
+ + + + +
J9cuosI
1I 2Jontroes3 S
( ) ( ) ( ) ( ) ( )
" . #
10
#"
10
, 1 - + ! , , # !
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1I 2Trata%os3 S 1 . 0
10
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( )
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1 . 0
" . #
= =
Tratados FI
controles FI
D's#s Sal,'"ella
.Ba&e)#as : $0
G)u(' C'")'l
.N; de ('ll#'s ('s##v's0
G)u(' T)aad'
.N; de ('ll#'s ('s##v's0
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D
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5<
7
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5<
6
K <
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.
- <
5<
K
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5<
-
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5<
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No se aisa 2<3R < 5<
Taba KI Janti%a% %e poitos positi#os para Sa!onea a cabo %e cuatro %>as tras a inocuacin( R
Las !uestras en que no se %etectaron Sa!oneas$ recibieron un #aor %e cero 2<3(
*.1*.+*.,*.-*.!/robitico
0erobio&/!--!-!!0-1/robitico mi2to
$aerobio3anaerobio%&/#1#-##"#"
CONCLUSIONES
Un buen probitico se %ebe preparar con &ora aerobia ' anaerobia(
La capaci%a% protectora %e !ateria ceca o &eca #ar>a %e a#e en a#e ' %e "ran)a en "ran)a(
+ara !e)ores resuta%os %e proteccin un probitico se %ebe preparar con &ora bacteriana autctona %e
a re"in(
Es i!portante i%enti&icar a &ora bacteriana para e#itar a propa"acin %e a"entes pat"enos(
Los nue#e !icroor"anis!os nue#os encontra%os %e!uestra que no se 0an i%enti&ica%o en su totai%a%
aqueas bacterias con capaci%a% prebitica(
Taba .I Datos del &/ para cada grupo de pollos tratados con los dos
probiticos obtenidos.
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S_NJNEZ LARJ\A$ A%a Iris( E!peo %e sustancias con acti#i%a% probitica en "ain9ceas( Uni#ersi%a% %e
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