Biologia celular

Teoria celular

1665 Robert Hooke 1 observao de clulas (clulas mortas de cortia com um microscpio
composto)
1831 1833 Roberto Brown ncleo (comum a todas as clulas e est rodeado por citoplasma)
1838 Mattias Schleiden todos os tecidos vegetais so constitudos por clulas
1839 Theodor Schwann Teoria celular



A clula a unidade fundamental de todos os organismos; todas as clulas derivam de outras
clulas

1858 Rudolf Virchow todas as clulas tm origem em clulas pr existentes, por diviso.


A clula a unidade fundamental da vida todos os organismos vivos so compostos por uma ou
mais clulas.
Todas as clulas tm origem em clulas pr-existentes.
As clulas contm toda a informao hereditria dos organismos dos quais so uma parte e esta
informao passada da clula me para a clula filha.

Caractersticas comuns a todas as clulas
- Limitadas por uma membrana constituda por lpidos e protenas: membrana plasmtica
- Citoplasma: contedo celular, delimitado pela membrana citoplasmtica, excluindo o
ncleo
- Informao hereditria armazenada em molculas de DNA que codificam a sntese de RNA
e protenas
- Possuem capacidade de se reproduzirem diviso celular
- Citosol soluo aquosa onde esto todos os organelos, enzimas, ies, protenas, etc. a
substncia fundamental do citoplasma

Clulas procariticas

- Maioria das clulas sem compartimentos membranares internos
- Caractersticas dos grupos Eubacteria e Archaebacteria
- DNA localizado no citoplasma; uma molcula circular geralmente no associada a protenas
(podem existir algumas protenas semelhantes a histonas)
- A nica membrana que existe a membrana plasmtica

A parede celular exterior membrana plasmtica; confere forma clula e proteo fsica e
osmtica; rgida devido presena de peptidoglicano.

As cianobactrias so evolutivamente semelhantes s clulas eucariticas. Tm membranas
fotossintticas no citoplasma e fazem fotossntese com libertao de oxignio. Tm pigmentos
fotossintticos fazem fotossntese como plantas superiores no entanto os pigmentos esto nas
membranas citoplasmticas. As hidrogenases so as enzimas responsveis pela produo de
hidrognio.

Microscopia

- Microscopia tica de campo claro

3 Conjuntos de lentes:
- Oculares (10x)
- Objetivas (4x,10x,40x,100x)
- Condensador (concentra a luz emitida pela lmpada)

Ampliao total = amp. Objetiva x amp. Ocular
Imagem final: virtual, ampliada, invertida

Resoluo: capacidade de distinguir pontos muito prximos
Limite de resoluo: distncia mnima entre dois objetos para que sejam distinguveis

Um bom microscpio deve ter um bom poder resolvente e, assim, ter um pequeno limite
de resoluo (quanto menor for o limite de resoluo, maior o poder resolvente).
Para que o limite de resoluo seja o menor possvel, tenta-se que a abertura mnima da
objetiva seja o maior possvel (conseguir ndices de refrao maiores do que o do ar ou recorrendo
a luz com menor comprimento de onda).

Preparao:
- Fixao
- Desidratao
- Impregnao
- Incluso

Quando se observam clulas sem cor, mais difcil ver o contedo da clula uma vez que
assim a luz passa toda (no h diferenas de contraste que nos permitem ver os pormenores).
Nestes casos, coram-se as estruturas para tornar a tarefa mais fcil.
Os atrasos que a luz sofre devem-se espessura e ao ndice de refrao do meio.

- Microscopia tica de contraste de fase

As diferenas de fase a luz traduzem-se em diferenas de intensidade da luz provocando
contrastes na imagem.
Tem um diafragma anular associado ao condensador (a luz passa apenas por um anel). Cada
objetiva tem uma placa de face que faz com que as ondas sofram novo atraso.

- Microscopia de interferncia diferencial de Nomarski

As imagens parecem ter relevo.
D-se por sobreposio de ondas luminosas.

- Microscopia de fluorescncia

As substncias fluorescentes tm a capacidade de absorver luz com comprimento de onda
especfico (de excitao) e libertam luz com comprimento de onda superior (de emisso).

- Fluorescncia primria: fluorescncia natural das substncias presentes nos tecidos (colagnio,
celulose, clorofila)
- Fluorescncia secundria (induzida): fluorescncia resultante da utilizao de corantes
fluorescentes especficos para determinadas estruturas celulares fluorocromos (ligam-se estrutura da
clula que queremos identificar)

Imunofluorescncia: anticorpos especficos para determinadas protenas celulares associados a
corantes fluorescentes

Brometo de etdeo: liga-se ao DNA e emite fluorescncia avermelhada.
DiOC6: incorporado especificamente pelas mitocndrias e emite fluorescncia verde zonas ricas
em DNA mitocondrial fluorescem em amarelo

- Microscopia confocal

Princpio desenvolvido por Marvin Minski nos anos 50
Utilizao de sistema tico (semelhante ao microscpio de fluorescncia) sendo a luz reduzida a
uma imagem pontual que faz o varrimento de cada ponto do plano de foco; usa-se normalmente uma
fonte de raios laser.
Para criar uma imagem, o ponto de luz faz o varrimento de cada ponto do plano de foco e a
imagem construda num computador (por meio de um espelho oscilatrio defletor colocado entre o
espelho dicroico e objetiva)
O sistema permite o seccionamento tico do objeto; mtodo no invasivo: espcimes fixados ou
vivos.
A sobreposio da imagem de vrios planos de foco consecutivos permite a reconstruo de
imagens tridimensionais.

- Microscopia eletrnica de transmisso

3 Tipos de lentes:
- Condensadoras
- Objetivas
- Projetoras (projetam a imagem final num ecr)

As lentes projetoras projetam a imagem final num ecr ( recoberto com uma substncia
fluorescente emite um comprimento de onda maior do que o de emisso, o que torna as imagens
visveis aos nossos olhos) que est colocado na base da coluna do microscpio.

Lentes:
- Eletrostticas
Tem um polo positivo e um polo negativo
Filamento de tungstnio aquecido incandescncia liberta eletres efeito
de Edison
Feixe acelerado por diferena de potencial estabelecida

- Eletromagnticas
Cilindros ocos de ferro com enrolamento eltrico. A corrente que aqui passa
cria um campo magntico fazendo com que os eletres se movimentem

H sempre alterao das clulas devido ao impacto dos eletres. Torna impossvel guardar
as amostras biolgicas. Isto contrariado pelo facto de o microscpio permitir tirar fotografias para
registar as imagens.
A corrente sobreaquece as lentes por isso existe uma corrente de gua que tenta evitar isso
para que no haja danos nas lentes.

Desvantagem: no se podem ver clulas vivas porque necessrio que a coluna esteja em
vcuo (a gua existente nas clulas destruiria o vcuo). Se existisse ar, os eletres embatiam nas
molculas e apenas se moveriam uns milmetros.

Preparao de material biolgico para microscopia eletrnica de transmisso

- Fixao
- Preservar estruturas das clulas
- Impedir atividade enzimtica
- Preparar os tecidos para tratamentos subsequentes
- Conferir caractersticas que permitam suportar efeito do feixe de eletres

Fixador pode atuar diretamente sobre os tecidos ou ser aplicado por perfuso
Soluo fixadora = fixador + soluo tampo
As clulas vegetais levam mais tempo a fixar do que as clulas animais.

Principais fixadores:
-Tetrxido de smio (reao com lpidos, protenas, compostos heterocclicos e
aromticos; baixa reatividade com DNA, RNA e hidratos de carbono)
- Aldedos (penetram rapidamente nos tecidos
Glutaraldedo (fixador preferencial de protenas)
Formaldedo (mais utilizado para reaes de citoqumica enzimtica e
imunocitoqumica)
- Permanganato de potssio (bom fixador de biomembranas)

Fixao de rotina (glutaraldedo 1h + smio 2h) utiliza-se para que se fixe bem tanto as protenas
como os lpidos; permite ver melhor as membranas existentes nas clulas

- Desidratao

Retirar a gua livre existente nas clulas
Solues de concentrao crescente de desidratante (soluto orgnico)
A sada brusca de gua da clula pode alterar a estrutura da clula

- Impregnao

Substituio de desidratante pelo meio de incluso; passagem do material biolgico em misturas
progressivamente mais concentradas do meio de incluso e do desidratante

- Incluso

Faz-se no meio incluso puro; polimerizao para obter bloco rgido, facilmente manusevel para
execuo de cortes ultrafinos.

Meios de incluso: misturas de parafina e aloidina plsticos
Resinas epxi: lquidos viscosos que ocupam o lugar do desidratante para o tecido ficar includo.

Contraste positivo
Solues de metais pesados diferentemente absorvidos pelas estruturas celulares.
O contrastante liga-se diretamente s molculas que contrasta nos cortes ultrafinos.
Ex: acetato de uranilo e citrato de chumbo

Contraste negativo
Contrastante depositado volta da estrutura, originando um fundo negro que rodeia a estrutura
clara.
Aplica-se ao estudo de partculas ou objetos isolados e complexos macromoleculares.
Ex: cido fosfotngstico, acetato de uranilo


Crio-gravao

O espcime rapidamente congelado e o bloco de gelo fraturado com uma faca. O gelo
sublimado no vcuo, expondo as estruturas da clula que estavam mais prximas do corte.

- Microscopia eletrnica de varrimento

O material no precisa de ser includo nem cortado.
Toda a superfcie revestida com um metal (ouro) depois da desidratao.

- Microscopia eletrnica anlise elemental

Sonda que deteta os raios X libertados aps o impacto dos eletres do feixe com os tomos
do material biolgico.
Comprimento de onda ou energia dos raios X caractersticos dos elementos que os libertam.

Citoqumica

As tcnicas de citoqumica permitem localizar e identificar compostos qumicos especficos,
nas clulas.
1 O composto a ser estudado deve ser imobilizado
2 O produto da reao deve ser insolvel
3 O mtodo deve ser especfico para uma substncia ou grupo qumico

Reao de Feulgen
Identificao de DNA, em microscopia tica.
A reao com HCl provoca a libertao das bases purinas (o DNA fica s com bases
pirimdicas). O reagente de Schiff liga-se aos grupos livres resultantes da libertao da purina.
Aps a reao de Feulgen, locais de DNA com cor magenta.

Reao de PAS
Identificao de polissacardeos em microscopia tica.
O tecido tratado primeiro com cido peridico que rompe as ligaes dos carbonos
(oxidao dos grupos glicosdicos 1,2). Colora-se com Schiff que se liga ao local de onde saram os
aldedos.

Reao com negro de Sudo
Identificao de lpidos, em microscopia tica.
O corante difunde-se para o interior das gotas lipdicas, mas no estabelecem
ligaes qumicas.

Citoqumica enzimtica

Permite saber os locais da clula onde certas enzimas esto ativas.
Fornecimento de molculas de substrato.
Produto da reao transformado em produto insolvel, por reao com outra substncia
presente no meio.
Local da atividade identificado pelo depsito do produto insolvel.
O meio tem de ter grande quantidade de substrato para que a enzima possa atuar. A reao
faz-se depois da fixao e antes da desidratao.

Fosfatase cida

Catalisa a hidrlise de mono-steres do cido fosfrico com libertao de fosfato inorgnico.

O glicerofosfato de sdio origina dois produtos de reao. O Pi reage com o Pb
++
originando
fosfato de chumbo (insolvel) que fcil de identificar.
No microscpio tico, adiciona-se sulfureto de amnio para dar origem ao sulfureto de chumbo
(amarelo) para ser mais fcil de observar.
Onde se veem depsitos densos onde a enzima est ativa.

Citocromo oxidase

Caracterstica das mitocndrias (nas cristas e na matriz)

Imunocitoqumica

Tcnicas que permitem a localizao intracelular de molculas atravs da utilizao de anticorpos
que se ligam especificamente a essas molculas.

Tcnica direta: utilizao de um anticorpo primrio que reconhece e se liga ao antignio que
se pretende localizar

Tcnica indireta: utilizao de um anticorpo primrio que reconhece e se liga ao antignio
que se pretende localizar e de um anticorpo secundrio que reconhece e se liga ao anticorpo primrio.

Marcadores dos anticorpos: fluorocromos com enzimas ou com compostos radioativos ou com
ouro coloidal

Fracionamento celular

Permite isolar protenas e organelos mantendo-os vivos e depois estudar as suas reaes
metablicas.

1. Homogeneizao dos tecidos
Rompe-se a membrana das clulas e obtm-se fraes onde se recuperam os vrios organelos.
necessrio fazer, primeiro, a homogeneizao dos tecidos (triturao dos tecidos num meio especifico para
que a membrana seja destruda) com homogeneizadores que tm uma lmina cortante que provoca a
rutura dos tecidos num meio vivel (frio, para evitar alteraes de corrente; com sacarose para equilibrar a
concentrao do meio e com soluo tampo). Depois, separam-se os organelos em centrfugas.

2. Separao dos componentes celulares

Coeficiente de sedimentao: parmetro que traduz a velocidade com que se movem partculas
sujeitas a um campo gravitacional.
No rotor que tem orifcios, coloca-se o homogeneizado que sofre processos de centrifugao. Por
fim, os elementos movimentam-se em direo ao fundo do tubo de centrfuga.


Centrifugao diferencial
Os diferentes componentes do homogeneizado so separados de acordo com o tamanho e
densidade. Para a velocidade inicial, sedimentam-se os elementos mais densos e mais volumosos
(ncleos)
O sobrenadante pode ser transferido e ser centrifugado a uma velocidade superior. Para
velocidades diferentes, sedimentam componentes prprios da clula. No final, sedimenta a frao
solvel do citoplasma.

Centrifugao por gradiente de densidade
H componentes que tm densidades muito prximas e sedimentam em conjunto. Assim,
tem de se estabelecer um gradiente de densidade. Usa-se uma soluo de sacarose (com
concentrao varivel: maior no fundo e menor superfcie).
Sobre o gradiente, introduz-se a frao a centrifugar. Os elementos ficam retidos onde a
concentrao idntica sua. Os componentes esto separados de acordo com a sua densidade.

Plantas

As plantas tm uma importncia vital para a espcie humana.
- Fonte de oxignio que respiramos
- Fonte de toda a alimentao, direta ou indiretamente
- Fonte de fibras para as roupas que vestimos
- Fonte de medicamentos
- Fonte de madeira
- Fonte de papel
- Fonte de energia
- Fonte de beleza e tranquilidade

As plantas so componentes essenciais da biosfera, regulando os ciclos da gua e dos
nutrientes e proporcionando habitats para a biodiversidade.
A preservao dos ecossistemas planetrios e a otimizao dos recursos naturais necessita
de um conhecimento profundo do funcionamento das plantas.
As plantas desenvolveram plasticidade fenotpica: a mesma espcie adapta-se a diferentes
meios e altera-se. Tm capacidade de percecionar alteraes no meio, responder e adaptar-se a
elas.

Todas as clulas de uma planta so totipotentes


Capazes de regenerar um organismo completo

Todas as clulas de uma planta so multifuncionais


Capazes de percecionar e responder a todo o tipo de stresses ambientais

Clula animal vs Clula vegetal

-Centrossoma - Parede celular
- Lisossomas - Vacolos
- Plastdeos

Clula vegetal = parede celular + protoplasto

Tratamento com enzimas que degradam a parede celular

- Parede celular

rgida e determina a forma e o tamanho da clula, a textura do tecido e a forma final dos rgos
vegetais.
constituda por celulose e linhina; gera uma fora essencial no crescimento das folhas.
Impede a clula vegetal de rebentar em meio hipotnico e permite o desenvolvimento de uma
presso hidrosttica interna designada presso de turgescncia.
A presso de turgescncia pode atingir valores elevados devido acumulao de solutos no
vacolo. Mantm-se o volume da clula mas aumenta a presso.
A presso de turgescncia responsvel pelo suporte e rigidez mecnica nas plantas herbceas
(no lenhosas).

A parede primria constituda por celulose embebida em matriz de polissacardeos e protenas
estruturas que mantm a posio relativa da celulose.
A parede celular um compsito constitudo por fibras que conferem resistncia trao e por
matriz que confere resistncia compresso.

A celulose constitui o principal esqueleto da parede celular e um polissacardeo constitudo por
microfibrilas resultantes da associao de cadeias lineares de molculas de glicose por ligaes glicosdicas
1,4.
As microfibrilas de celulose possuem em mdia 36 cadeias com arranjo paralelo e com domnios
cristalinos em que as diferentes cadeias formam um arranjo ordenado devido ao estabelecimento de
pontes de hidrognio.

Associao de cadeias = grande resistncia trao

As celulose sintases esto localizadas na face citoplasmtica da membrana plasmtica e associam-
se em grupos de 6 que por sua vez se associam em grupos de 6 (6x6) formando uma roseta.
As microfibrilas de celulosa so sintetizadas pela celulose sintase, um complexo enzimtico em
forma de roseta que se move na membrana medida que sintetiza a microfibrila, com orientao
determinada pelos microtbulos.
A orientao das fibrilas de celulose determina a orientao da clula, atravs de microtbulos que
faz com que a celulose sintase se mova.

A matriz constituda por hemiceluloses, pectinas e protenas estruturais.
Os glicanos com ligaes cruzadas da parede celular (hemiceluloses) so polissacardeos que
estabelecem pontes de hidrognio com as microfibrilas de celulose forram as microfibrilas e
ligam-nas umas s outras formando uma rede.
As pectinas so uma mistura de polissacardeos heterogneos ramificados, altamente
hidratados e ricos em cido galacturnico. Ligam-se entre si atravs de ies clcio para formar um
gel poroso (determinam a porosidade da parede) e so responsveis pela adeso clula-clula na
lamela mediana.

A parede celular possui vrias classes de glicoprotenas estruturais que podero tambm ter
funes de reconhecimento e sinalizao das quais so exemplo a extensina e as protenas
arabinogalactnicas.
As macromolculas da matriz da parede celular so secretadas na parede por vesculas
provenientes do complexo de Golgi.


Na clula animal, a citocinese ocorre por formao de um anel contrtil (actina+miosina)
que vai estrangular e dividir a clula em duas.
Na clula vegetal, forma-se um organelo responsvel pela construo de uma nova parede
entre as duas clulas o fragmoplasto (actina+miosina+microtbulos).

O fragmoplasto forma-se no centro e cresce para a periferia formando um anel. Alberga
vesculas com polissacardeos e protenas de parede que se fundem para formar a placa celular que
vai crescendo at formar uma nova parede celular revestida por membrana plasmtica.
A nova separao entre duas clulas no contnua vai deixar canais de ligao
atravessados por canalculos de RE plasmodsmios.
A continuidade entre o lmen das vrias clulas vigiada por protenas que controlam
rigorosamente o que passa entre duas clulas adjacentes.

?Se a parede celular rgida, como podem crescer as clulas vegetais?
A parede celular primria (que est mias longe da clula) tem que tornar a parede
mais elstica e a presso de turgescncia obriga a clula a esticar (permite o crescimento da
clulas). A parede secundria muito mais rgida e s se forma depois da primria. Cada secundria
pode ter orientaes diferentes, o que torna o material mais rgido.


A presso de turgescncia a principal fora impulsionadora da expanso celular durante o
crescimento das clulas vegetais.
A orientao das microfibrilas de celulose determina a direo da expanso da clula.
A presso de turgescncia vai induzir o afastamento e deslizamento das fibras da parede
quando as ligaes entre estas so atenuadas por enzimas especficas, conduzindo ao crescimento
da clula.

A libertao do stress da parede celular permite a expanso e crescimento da clula vegetal.
As enzimas que afrouxam a parede so ativadas quando a clula quer crescer.

O protoplasto forma a sua parede celular do interior para o exterior, sendo a parede mais recente a
poro mais interior.
A regio de unio das paredes primrias de clulas adjacentes constitui a lamela mediana (rica em
pectinas) forma-se durante a diviso celular.
As primeiras camadas de parede, depositadas durante o crescimento da clula, constituem a
parede primria.
Muitas clulas depositam camadas adicionais de parede celular quando o crescimento termina, que
constituem, assim, a parede secundria.
As paredes secundrias no possuem pectinas e os espaos entre as microfibrilas de celulose esto
preenchidas por lenhina, cutina ou suberina muito rgidas.

A linhina uma molcula grande constituda por um percursor fenlico, que forma uma rede
atravs das suas ligaes que so formadas por peroxidase 3. Permite o desenvolvimento de estruturas
com alturas enormes e grandes longevidades.

- Plastideos

Tm origem endossimbitica
Possuem invlucro com duas membranas com composio diferente; genoma prprio do tipo
procarionte (molculas de DNA circular no associado a protenas); ribossomas do tipo procarionte.

Os plastdeos formam-se por diviso de plastdeos pr-existentes. Possuem semi-autonomia
gentica.

Leucoplasto: presente na raiz; produz estruturas bioqumicas necessrias clula
Proplastdeo: est presente nas clulas indiferenciadas e depois pode-se diferenciar
Cromoplasto: armazena pigmentos que conferem cor
Amiloplato: armazena amido

H plantas que crescem mais na obscuridade. H mais gua, o vacolo aumenta e empurra a
parede celular. Apesar de no existirem mais clulas, as que existem so mais volumosas.

- Vacolo

Ocupa 80-90% do volume da clula
Para alm de gua tem ies inorgnicos, cidos orgnicos, aucares, enzimas hidrolticas, protenas
de armazenamento, compostos secundrios.
A acumulao de solutos no vacolo determina a entrada osmtica de gua para o interior do
vacolo produzindo a presso de turgescncia necessria para suporte do corpo da planta e para o
crescimento da clula. A fora motriz o gradiente de concentrao. As enzimas no podem atuar logo
que so sintetizadas: s atuam a um certo pH (cido).

O vacolo permite o crescimento barato das clulas vegetais que pode continuar mesmo em
condies adversas praticamente s custa de gua, solutos e pouco mais; permite produzir coletores
solares amplos a custo reduzido.
Uma clula pode ter mais que um tipo de vacolos.

Funes:
- Produo da presso de turgescncia (suporte e expanso celular)
- Armazenamento: solutos de baixo peso molecular e protenas
- Compartimento ltico: protases, nucleases, glicosidases, lpases
- Homeostase inica e do pH: reservatrio de H
+
e Ca
2+

- Sequestro de xenobiticos: metais pesados, poluentes, etc.
- Defesa contra microorganismos patognicos e herbvoros: acumulao de
metabolitos secundrios, produtos naturais e enzimas que degradam as paredes celulares dos
insetos
- Comunicao

Como no tm sistema excretor, acumulam os xenobiticos no vacolo ou na parede
celular, onde ficam numa forma inerte. uma forma de se despoluir o solo: absorvem os metais
pesados e estes ficam acumulados nas folhas.

As plantas so comidas por todo o tipo de animais no entanto esto programadas para
responder ao estmulo de serem comidas, crescendo muito mais.

Metabolitos primrios: molculas presentes em todas as clulas e diretamente envolvidas
no crescimento, desenvolvimento e reproduo (essencial vida)
Ex: aucares, protenas, cidos nucleicos

Metabolitos secundrios: molculas com distribuio restrita a certas espcies; sem funo
direta no crescimento, desenvolvimento e reproduo das clulas
So importantes para a sobrevivncia e propagao das espcies em que ocorrem: emitem
sinais qumicos de resposta; funo de defesa e de proteo contra a radiao UV

Terpenos

So polmeros de um precursor com cinco carbonos (isopreno). So classificados pelo
nmero de unidades de isopreno. Usados como perfumes ou usados na defesa contra insetos
Ex: mentol, taxol, cido abtico, borracha

Alcaloides

Compostos heterocclicos que possuem azoto, so quimicamente um grupo muito
heterogneo. Usualmente sintetizados a partir de um ou alguns aminocidos comuns.
Compostos muito importantes do ponto de vista farmacolgico e mdico; so importantes
dissuasores de herbvoros

Compostos fenlicos

Apresentam um grupo OH ligado a um anel aromtico (benzeno); so sintetizados a partir de
vrias vias, entre as quais a do cido chiquimico e do aminocido fenilalanina.
Esto presentes na nossa alimentao: do sabor e cor a tudo.
Foram essenciais para a evoluo das plantas porque so os percursores da lenhina, que
permitiram construir vasos.

- Ncleo

A lmina nuclear (densa) constituda por filamentos proteicos em que a protena a lamina. a
camada que confere forma e estabilidade ao ncleo. a ponte de ligao entre a cromatina e o invlucro
nuclear.

Os corpos de Cajal so locais de modificao final de snRNPs e snoRNPs.
Os grnulos intercromatnicos so locais de armazenamento de snRNPs funcionais.

O involucro nuclear constitudo por duas membranas: a externa, virada para o citoplasma e a
interna, virada para o ncleo.
As nucleopurinas so as protenas associadas ao poro. Dispem-se na parte interna e externa do
poro em estrutura octogonal (8 protenas que constituem as margens do poro). Limitam o dimetro do
canal de passagem.
O nmero de poros nucleares varivel: depende do tipo de clula e do estado metablico da
mesma. Com muito material em trnsito pode haver mais poros para que se movimente mais rpido para
o citoplasma.


?Como so as protenas direcionadas para o poro?
Existe na protena uma sequncia de aminocidos que constitui um sinal que as destina a
serem encaminhadas para o ncleo. O sinal vai ser reconhecido por outras protenas solveis do
citoplasma que constituem os recetores nucleares. D-se a ligao da protena recetora protena a
transportar (pode haver uma protena adaptadora intermediria) e ligam-se a nucleopurinas para poderem
passar o poro.

O transporte de molculas de maiores dimenses atravs dos poros nucleares implica gasto de
energia proveniente da hidrlise de GTP (GTPase Ran).

O nuclolo uma fbrica de ribossomas. O seu centro fibrilar o DNA; o componente fibrilar denso
so molculas de RNA que esto a ser transcritas o componente granular so partculas percursoras dos
ribossomas.
A cromatina constituda por DNA e por protenas associadas (histonas). H outras protenas que
no esto associadas cromatina mas so essenciais condensao ou transcrio do DNA protenas no
histonicas.
O nucleossoma a unidade bsica da cromatina (DNA enrolado volta de um ncleo de 8 histonas).
No uma estrutura estvel, dinmica: com facilidade o DNA volta das histonas se enrola e permite a
ligao de protenas especficas ao DNA, que regulam a atividade dos genes.
As histonas tm carga positiva (lisina e arginina): facilita o enrolamento das histonas pois o DNA
tem carga negativa. So responsveis pelo maior ou menor grau de condensao da cromatina. As
extremidades das histonas podem interagir com histonas de um nucleossoma adjacente. Os
nucleossomas aproximam-se e a cromatina torna-se mais densa. A aproximao dos nucleossomas
deve-se aos braos das H1.

A transcrio est relacionada com alteraes qumicas das extremidades das histonas. As
acetilaes, por exemplo, estabilizam a carga positiva das lisinas fazendo com que o DNA no esteja
associado e, consequentemente, h uma menor condensao da cromatina.

Eucromatina: cromatina dispersa
Heterocromatina: cromatina condensada

O centrmero o local onde se ligam os microtbulos do fuso mittico e tem uma
localizao varivel.
Os telmeros so zonas terminai do cromossoma. So relgios moleculares porque
determinam o nmero de ciclos de diviso.

O DNA dos telmeros perde genes ao longo dos vrios ciclos devido exigncia funcional da
protena. Assim, a certa altura a clula fica invivel e acaba por morrer. No entanto, a clula
contraria este facto. A clula tem a telomerase que vai adicionar um pequeno fragmento de DNA na
cadeia que vai ser duplicada. Este ltimo fragmento no vai ser duplicado mas o anterior sim: os
genes da clula mantm-se porque o ltimo gene no fazia parte, tinha sido adicionado. A
telomerase vai diminuindo a sua atividade medida que os ciclos vo ocorrendo assim que se
envelhece (no acontece nas clulas germinativas e tumorais).

Poliploidia: duplicao dos cromossomas sem subsequente diviso celular (deficincia na
anafase ou endomitose no h citocinese)
Autopoliploidia: todas as guarnies cromossmicas so iguais
Alopoliploidia: nenhum cromossoma tem homlogo
Euploidia: caritipo com n cromossomas (ou mltiplos)
Aneuploidia: caritipo com cromossomas a mais ou a menos


Sem efeitos
Mutaes Prejudiciais
Consequncias sobrevivncia
Benficas
Evoluo

Mitose

Processo de diviso que permite que as clulas se dividam: o material filho igual ao do
progenitor.

Profase
Prometafase
Metafase
Diviso nuclear Anafase
Telofase
Fase M

Diviso citoplasmtica Citocinese

1 Profase
Caracteriza-se pela mxima condensao da cromatina. O invlucro nuclear ainda se mantm
intacto mas comea-se a ver a desorganizao do nuclolo. No citoplasma comea-se a formar o fuso
mittico, constitudo por estruturas (centrossomas) a partir das quais so polimerizados os microtbulos
(polmeros de tubulina).

2 Prometafase

D-se a desorganizao do invlucro nuclear e h a ligao dos cromossomas a microtbulos
(cinetocoro).

3 - Metafase

H o alinhamento dos cromossomas no plano mdio, os centrossomas esto no polo do fuso.
Os cromatdeos mantm-se unidos atravs das coesinas (que se desorganizam na passagem
metfase-anafase).

4 Anafase

Os cromatdeos ascendem para os polos do fuso.

5 Telofase

Reorganiza-se o invlucro nuclear e os cromossomas tornam a condensar.

6 Citocinese

Nas clulas animais d-se por estrangulamento: forma-se um anel de actina e miosina que
contraem a regio mdia at que os dois citoplasmas se separam; nas clulas vegetais h a formao de
uma nova parede celular atravs de percursores que vm de vesiculas do complexo de Golgi que se
depositam no plano mdio.


Nas clulas animais, o centrossoma o principal centro organizador dos microtbulos: tem tubulina
(inicia-se a polimerizao dos microtbulos e centrolos. Cada fuso mittico tem 2 centrossomas a sua
duplicao ocorre na interfase).
Os cinetocros so um complexo multiproteico ao qual se ligam os microtbulos. Esta ligao
auxiliada por uma srie de protenas (cinesinas e dinena): so at 40 microtbulos por cinetocoro.

A separao dos cromatdeos, no incio da mitose, implica a fosforilao das coesinas. A
nvel do centrmero a fosforilao das coesinas s ocorre na transio da metfase para a anafase.
Durante a metfase criam-se foras que equilibram o cromossoma no plano equatorial. Os
microtbulos so dinmicos com uma extremidade positiva qual se ligam subunidades de tubulina
e so retiradas pela extremidade negativa. Quando a quantidade que se adiciona igual que se
retira, h um balano e o microtbulo mantm um tamanho constante que permite que o
cromossoma se mantenha quieto. Quando se adicionam menos subunidades do que as que se
retiram, o microtbulo diminui de tamanho e os cromossomas comeam a aproximar-se do polo.

Meiose

Ocorrem duas divises sucessivas: I reduo do nmero de cromossomas; II reduo da
quantidade de DNA
Formam-se 4 clulas filhas com metade do material gentico; permite a formao de
gmetas

Profase I

Leptteno: os cromossomas comeam a reconhecer-se
Zigteno: os cromossomas homlogos vo reconhecer-se e associar-se (emparelhamento)
Paquteno: a unio vai progredindo at que os cromossomas ficam completamente
emparelhados e ocorre a troca de material gentico (crossing over)
Diplteno: ocorre a dessinapse em que os cromossomas comeam a separar-se mas no
completamente (mantm-se temporariamente os pontos de quiasmata)
Diacinese: comea a desorganizar-se o invlucro e o nmero de pontos de quiasmata
muito inferior

Emparelhamento de cromossomas homlogos sinapse, atravs da formao do complexo
sinaptonmico. Forma-se uma rede na zona central um nico tipo de protena que se associa aos
pares formando um dmero e se cruz no centro formando a tal rede.

A meiose extremamente longa: a sua fase mais longa a prfase I e dentro desta, o
paquteno o processo que leva mais tempo.

Controlo do ciclo celular

H controladores que determinam que o ciclo celular se inicie.

G0: fase em que ficam as clulas que temporariamente no se dividem para quando
entrarem no processo de diviso, entrarem diretamente para G1

Os pontos de controlo so pontos com capacidade para parar o ciclo celular se tiver ocorrido
algum erro e s o deixam avanar quando estiver reparado. Asseguram que a clula se reproduz
direito e que a clula me igual clula filha.

As ciclinas e cnases controlam o processo de regulao do ciclo celular.

Ciclinas: so sintetizadas e degradadas em cada ciclo celular.
A concentrao de ciclinas varia ao longo do ciclo celular aumenta na fase de sntese e
diminui na fase de degradao.

As cnases fosforilam substratos e s esto ativas quando ligadas respetiva ciclina, a sua
concentrao constante.

Cnase Wee 1: adiciona grupos fosfato ao local ativo da enzima e o complexo cinase ciclina fica
inativo. O grupo fosfato removido pelas fosfatases (CDC 25)

Todas as clulas eucariticas exigem 3 ciclinas:
- Ciclina G1-S: determina o incio do ciclo celular, decresce na fase S
- Ciclina S: relacionada com duplicao do DNA
- Ciclina M: estimula o incio da mitose

A atividade das CDK pode ser inibida por fosforilao ou por protenas inibidoras (CK1)

Fator promotor da fase S (S-CDK)
A DNA polimerase tem de saber onde se vai ligar para duplicar. A origem da duplicao marcada
por enzimas e forma-se o complexo pr-replicativo e s assim se pode ligar DNA polimerase.
Estando ativa, a cinase fosforila a CDC 6 do complexo e a sua degradao provoca a abertura das
helicases que permite que entre a DNA polimerase para que ocorra duplicao.

Fator promotor da fase M
A ciclina M liga-se cinase respetiva (h a ligao da cnase a um fosfato ativador; remove-se o
fosfato inibidor para que o complexo fique ativo regula positivamente a fosfatase e inibe a Wee 1)

A cinase fosforila vrios substratos:
- Condensinas (levam condensao da cromatina)
- Laminas (que levam desorganizao do invlucro)
- Protenas que levam fragmentao do complexo de Golgi e RE
- Protenas que tornam instveis os microtbulos do exoesqueleto (as tubulinas livres
formam o fuso mittico)

O complexo promotor da anafase est intacto at transio metfase anafase, mas a CDC20
liga-se e ativa-o. Provoca a degradao da securina; facilita a separao da separasse que degrada as
coesinas e permite a libertao dos cromatdeos na anafase. H a degradao da ciclina mittica (ciclina M)


Complexo G1 Cdk: a protena Rb quando est ativa mantm ligada a E2F. A CDK fosforila a
protena Rb, alterando a conformao e libertando E2F que ativadora de genes da fase S.

A p53 suspende o ciclo at o dano ser reparado.
Em situao no tem qualquer funo porque est ligada a outra protena. Mas com danos o
ciclo para at se reparar. O erro ativa outras cnases que fosforilam a p53, que se liberta do que a
estava a inibir e funciona como fator promotor da transcrio de um gene de p21 (inibidora da
ciclina cinase)

Membranas
impossvel conceber uma clula sem uma membrana. Uma membrana um
compartimento especializado onde ocorrem reaes qumicas especiais.

cidos gordos

Grupo carboxilo polar + cauda aliftica
Os cidos gordos saturados (mais estveis porque as molculas podem alinhar-se
paralelamente) no tm ligaes duplas entre os tomos de carbono. Os cidos gordos insaturados
(agregados menos densos) tm pelo menos uma ligao dupla. Cada ligao dupla produz um
cotovelo na cadeia.

cidos gordos saturados dispem-se lado a lado duma forma quase cristalina. A presena de
ligaes duplas resulta em agregados menos estveis.
A presena de ligaes duplas confere curvatura cadeia, dando pelo menos estabilidade
molcula (foras fracas ao longo da cadeia).
Os cidos gordos saturados aumentando o tamanho da cadeia, aumentando o ponto de
fuso. Nos cidos insaturados, para o mesmo nmero de carbonos com diferentes ligaes duplas,
o ponto de fuso tanto menor quanto mais ligaes duplas tiver.

Algumas clulas regulam a composio lipdica das suas membranas de modo a manter o
grau de fluidez constante sob condies ambientais diversas.
Agregados de lpidos anfipticos que se formam em gua: micelas, bicamadas e lipossomas.
Os lipossomas podem ser usados como vesculas de descarga intracelular para frmacos, partculas
virais, DNA ou outros.


Triglicerdeos

Trs cidos gordos unidos por ligaes ster a uma molcula de glicerol. So molculas
apolares e so o principal componente das reservas energticas lipdicas.
Tm como funo o armazenamento intracelular de energia qumica e isolamento trmico.

As membranas biolgicas podem conter diferentes tipos de lpidos:

1 Glicerolpidos, glicerofosfolipidos e galactolipidos
Os glicerofosfolipidos so constitudos por uma molcula de glicerol, dois cidos gordos e
um grupo fosfato ligado a um lcool.
Os galactolipidos so os principais constituintes dos tilacoides e so constitudos por uma
molcula de glicerol, dois cidos gordos, um acar e um grupo SO
4


2 Esfingolpidos
Tm uma arquitetura geral anloga dos glicerolpidos: tm uma s cadeia de cido gordo, mas o
componente esfingosina contribui com a segunda cauda

3 Esteris
Tm ncleo esteroide (plano), um grupo polar (OH), uma cadeia lateral aliftica. Os esteris
reduzem a fluidez das membranas diminuindo a liberdade de movimento dos fosfolpidos e impedem a
solidificao das membranas a baixas temperaturas.
No ncleo esteroide, as hormonas esteroidais so mais hidroflicas que o colesterol porque no
possuem cadeia aliftica.
O colesterol (no existe nas clulas vegetais) essencial na estrutura das membranas, reduz a
fluidez e impede a congelao das membranas.


As membranas das Archaea contm lpidos invulgares: GDGTs. Contm glicerol em ambas as
extremidades da molcula, ligaes ter em vez de ster, e cadeias hidrofbicas compostas por unidades
de isopreno em vez de cidos gordos, com cerca do dobro do comprimento dos fosfolpidos habituais. No
constituem uma bicamada.

O isopreno a unidade modular de muitos lpidos incluindo o ncleo esteroide, mas tambm dos
terpenos (resinas, leos essenciais), carotenoides, vitaminas lipossolveis, quinonas. A borracha um
polmero de isopreno.

As membranas so todas diferentes porque tm composies qumicas diferentes o folheto
interno tem carga negativa e o folheto externo tem carga positiva.
A translocao de fosfolpidos de um folheto para o outro no acontece espontaneamente, existem
transportes especiais para o fazer.
As membranas formam-se sempre a partir da fase citoslica (face de fora): se no houvesse
movimento (no RE) para o folheto interno, havia um desequilbrio porque crescia o folheto externo e o
interno no.

O movimento flip flop sem mediador muito mais lento (dias) do que se o mediador (flipase)
estiver presente (acontece em segundos)

Funes da membrana:
- Transporte: movem solutos especficos, orgnicos e inorgnicos
- Receo: captam sinais extracelulares e promovem alteraes moleculares no interior da
clula
- Adeso: mantm clulas vizinhas fortemente unidas
- No interior da clula, as membranas organizam processos celulares como sntese de lpidos
e algumas protenas, bem como os processos de transduo de energia nas mitocndrias e cloroplastos.

As protenas podem associar-se a diferentes formas. H protenas que s se conseguem isolar se se
destrusse a membrana intrnsecas mas h as que so isolveis facilmente, que se associam
apenas membrana extrnsecas.
Uma das formas de extrair protenas para o exterior da membranas mas mant-las
ancoradas atravs de ncoras GPI.
Algumas protenas ligam-se s membranas atravs de ligaes covalentes com grupos
lipdicos diversos que funcionam como ncoras hidrofbicas.

?Como que uma protena se vai inserir na membrana?
Elas no vo para l, nascem l!
As protenas comeam a sua sntese no citosol, a sntese proteica para, a membrana
faz uma ancoragem ao retculo e reinicia-se a sntese e a protena cresce para dentro da membrana.

-Barril: comum em purinas; composta essencialmente por folhas antiparalelas

Esfingolpidos e colesterol agrupam-se na membrana para formar jangadas de lpidos
(membranas rafts). So resistentes a detergentes no inicos, tais como Triton X-100, a 4C, e
concentram seletivamente protenas que tenham sido aciladas com cadeias saturadas durante a
sua modificao ps-traduo.
A maior espessura das jangadas de lpidos pode ser observada por microscopia de fora
atmica (os picos correspondem a protenas com ncoras GPI). Estas jangadas tm sido isoladas
com base numa combinao de baixa densidade e insolubilidade a detergentes, e parecem ter uma
estrutura mais ordenada devido interao do colesterol com esfingolpidos, para alm da
presena de fosfolpidos saturados.

Transporte
Quando uma bicamada lipdica separa dois compartimentos aquosos, a permeabilidade da
membrana pode ser facilmente determinada adicionando uma pequena quantidade de material
radioativo num dos compartimentos e medindo a respetiva taxa de aparecimento no segundo
compartimento.



Difuso simples

Movimento de soluto da regio de maior concentrao para a regio de menor
concentrao. Quanto maior a quantidade de soluto, maior a taxa de difuso. A energia potencial
proveniente do gradiente de concentrao pode ser usada para realizar trabalho.
v




c
Para solutos eletricamente carregados, a taxa de movimento transmembranar ditada por
uma combinao de potencial eltrico e do gradiente de concentrao. O equilbrio atinge-se
quando este potencial eletroqumico 0.

Cada hlice transmembranar no constituda apenas por aminocidos hidrofbicos. Um lado
da hlice mais hidrofbico e um mais hidroflico. As regies hidroflicas vo ficar lado a lado
espontaneamente, formando uma passagem hidroflica.

GLUT 1: a associao lado a lado de vrias hlices anfipticas pode produzir um canal
transmembranar hidroflico, enquanto as regies hidrofbicas constituem as regies de contacto com a
bicamada lipdica.

Difuso facilitada

Ocorre atravs de transportadores; ocorre a favor do gradiente de concentrao e no precisa de
energia; por mais que se aumente o soluto a taxa de difuso mantm-se: tem um ponto de saturao
porque todas as enzimas j esto ocupadas.
v



c
Os transportadores so saturveis e obedecem a uma cintica: h um ponto a partir do qual
incrementos sucessivos na concentrao inicial de soluto no causam consequentes aumentos na taxa de
transporte.
Transporte ativo
contra o gradiente de concentrao, requer uma fonte de energia por no ser espontneo.
A energia pode advir da hidrlise do ATP, do gradiente de ies, da transferncia de eletres ou da
energia luminosa.

Bomba de sdio potssio
Por cada molcula de ATP hidrolisada, 3 Na
+
so bombeados para fora e 2 K
+
so bombeados para
dentro da clula.
O sdio no exterior est em grandes quantidades assim como o potssio no interior. Esta diferena
de concentraes importante para gerar diferena de potencial, importante para a homeostasia.
eletrognica: nas clulas animais, este sistema de transporte responsvel pela manuteno das
concentraes intracelulares de Na
+
e K
+
e contribui para a gerao do potencial eltrico transmembranar.

As ATPases do tipo P so reversivelmente fosforiladas pelo ATP como parte do ciclo de transporte,
apresentam semelhana de sequncia e so inibidas pelo vanadato.
F-ATPases e V-ATPases tm dois complexos e realizam trabalho mecnico.

custa da hidrlise do ATP, h movimento da subunidade e a energia mecnica que transmitida
para F0 usada para bombear ies.
Funciona no reverso: os ies que so transportados resultam na produo de ATP.
O ativador no se fosforila, usado apenas para o transporte de ies.

Transportadores do tipo ABC

Usam a hidrlise do ATP para translocar uma grande variedade de molculas. Constituem
uma super famlia de protenas muito diversificada, mas possuem tipicamente dois domnios
muito conservados de ligao ao ATP.
Os transportadores MDR fazem com que as clulas se tornem resistentes ao de
compostos citotxicos quimicamente no relacionados.

MDR1 um transportador de grande espetro que bombeia compostos xenobiticos para
fora da clula. responsvel por uma diminuio na acumulao intracelular de muitos compostos,
e frequentemente medeia o estabelecimento de resistncia s drogas anticancergenas.

Uniporte: transporte de apenas uma substncia
Simporte: transporte simultneo de um io e de uma outra substncia, no mesmo sentido
(s acontece se forem transportadas as duas substncias)
Antiporte: transporte simultneo, em sentidos opostos

Canais de ies

A taxa de transporte extremamente rpida; no so saturveis; por mais que se aumente a
quantidade de soluto, a taxa de transporte aumenta; s transportam ies; so seletivos; a maioria
no est sempre aberto (se estiverem so canais de escape).
Os canais podem, ainda, ter o estado refratado: quando h um estmulo que altera a
polaridade da membrana e aumenta a concentrao de sdio e h tambm uma despolarizao ao
lado (conduo do estmulo nervoso). Como o estmulo s pode ter um sentido, o perodo refratado
serve para evitar que os canais de sdio que j abriram e fecharam sejam novamente ativados.
Canal de sdio
Um poro estreito permite a passagem de sdio ligado a uma nica molcula de gua, mas
impede a passagem de potssio e outros ies

Canal de potssio
Possui um estreito filtro de seletividade formado por tomos de O. O poro permite a
passagem de potssio desidratado.
No filtro de seletividade, os tomos de O dos grupos carbonilo progridem para o interior do
canal. A repulso mtua entre ies potssio, faz com que s 2 dos 4 locais de ligao possveis
estejam ocupados simultaneamente.

A maioria dos venenos de serpentes, escorpies e aranhas alteram o funcionamento destes
canais.

Aquaporina: transporta gua de forma especfica; o movimento ditado pelos potenciais
osmticos, mas essencial que as aquaporinas impeam o movimento de H
3
O
+
, o que resultaria no
colapso dos potenciais eletroqumicos da membrana. Consegue-o atravs de um filtro de
especificidade.
Ionforos: pequenas molculas, de origem bacteriana, que conferem um revestimento
hidrofbico a ies, aumentando assim a permeabilidade das membranas para esses ies. Podem ser
mveis ou formadores de canais.

Vias metablicas
(documento)

Maior parte do trabalho das clulas realizado pelas protenas.

Protenas: conferem a cada compartimento as suas propriedades estruturais e funcionais
caractersticas. So sintetizadas no citosol e so transportadas para o RE. Esta informao est na
sequncia de aminocidos.

Sistema endomembranar

Tem como origem comum a membrana plasmtica.
Conjunto de membranas que formam uma unidade funcional com biognese comum.
Inclui o RE, o Golgi, a membrana plasmtica, vrios compartimentos endossomais e os lisossomas/
vacolos
Ocorre troca de material entre todos os componentes do sistema secretor por trnsito de vesculas
membranares.

Via secretora: transporte de material no sentido RE, Golgi, membrana plasmtica,
lisossoma/vacolo protenas secretoras
Via endoctica: transporte de material extracelular para vesculas intracelulares/endossoma/
lisossoma/vacolo

Reticulo endoplasmtico

Rede de membranas interligadas formando tubos e sacos achatados formam um compartimento
altamente ramificado separado do citoplasma.

Funes:
- Sntese e glicosilao de protenas
- Sntese de lpidos
- Desintoxicao celular
- Acumulao de clcio

RE Rugoso
Sacos achatados com ribossomas associados face externa com localizao frequentemente
perinuclear.
Responsvel pela sntese, modificao e transporte de protenas que se destinam ao restante
sistema endomembranar e ao espao extracelular.

RE Liso
Forma mais tubular e sem ribossomas associados.
Responsvel pela sntese da maior parte dos lpidos da clula.
Contm enzimas envolvidas na degradao de drogas e outros componentes txicos para o
organismo.

Pptido sinal: sequncia de aminocido N-terminal que reconhecida como o sinal de
endereamento de protenas solveis para o RE

Formam-se polirribossomas a ler o mesmo mRNA e ligados membrana do RE por mltiplas
cadeias polipeptdicas em crescimento.
O transporte de protenas para o RE envolve a atuao sequencial de 3 protenas:
1 SRP (partcula de reconhecimento de sinal)
2 Recetor de SRP
3 Protena translocadora (encontra-se fechada at ficar bloqueada pelo ribossoma,
garantindo a impermeabilidade da membrana do RE)
O pptido sinal removido durante a translocao de protenas nascentes para o RE

Translocador do RE
Funciona em duas direes: pode formar um poro atravs da membrana e pode abrir
lateralmente para deixar pores hidrofbicas da protenas localizar-se na membrana.

Integrao na membrana do RE de uma protena membranar de passo nico com um
pptido sinal clivado:
Quando a sequncia stop-transfer entra na translocao e interage com um local de
ligao, o translocador modifica a sua conformao e descarrega a protena lateralmente na
membrana.

Glicosilao

A maioria das protenas sintetizadas no RER so glicosiladas pela adio de um
oligossacardeo comum N-ligado a uma asparagina.
Muito poucas protenas do citosol so glicosiladas e possuem apenas um resduo de N-
acetilglucosamina O-ligado a uma treonina ou serina.

1 - So retiradas algumas manoses e adicionam-se oligossacardeos
2 Acrescentam-se manoses oligossacardeos ricos em manoses

No ocorre em bactrias porque estas no tm sistema endomembranar. Ento produzem-
se protenas em clulas vegetais. No entanto, os padres de glicosilao so diferentes nas clulas
vegetais pelo que se procede alterao gentica.

O estabelecimento da conformao tridimensional mediado por chaperones: BIP,
calnexina, calreticulina.
Uma glucosil transferase adiciona glucose nas cadeias em que a conformao ainda no est
completa ocorre nova ligao ao chaperone calnexina que promove a adoo da conformao
correta (ocorrem ciclos de glucosilao e ligao calnexina at a protena assumir a sua
conformao correta).
A presena de glucose nas cadeias oligossacardicas funciona como um marcador do estado da
conformao da protena.

E quando uma protena assume uma conformao defeituosa?
As protenas com conformao defeituosa so translocadas de volta para o citosol
(retrotranslocao), so desglicosiladas, ubiquitiniladas e degradadas no proteossoma a translocao
bidirecional.

Golgi

Coleo de cisternas membranares achatadas que formam pilhas (dictiossomas) geralmente de 4-6
cisternas.
Nas clulas animais, as pilhas de Golgi esto tipicamente ligadas por conexes tubulares formando
um complexo nico com localizao perinuclear.

As pilhas de cisternas tm 2 faces:
- Face cis (entrada): em comunicao com a rede cis Golgi, recebe vesculas do RE
- Face trans (sada): em comunicao com a rede trans Golgi, exporta macromolculas para
diferentes destinos: espao extracelular, lisossomas, vacolos, membrana citoplasmtica

Funes:
- Modificao/processamento e direcionamento de macromolculas provenientes do RE
para outros organelos ou para secreo
- Sntese de hidratos de carbono

Cada compartimento encerra um espao chamado lmen que topologicamente equivalente ao
exterior da clula todos comunicam entre si por transporte de vescula que carregam molculas solveis
e membranares a carga.

Transporte de vesculas

Vesiculas carregam material (carga) do lmen e membrana de um compartimento para outro.

Formao de uma vescula: fuso membranar tem incio na face interna da membrana
Fuso de uma vescula: fuso membranar tem incio na face citoplasmtica de ambas as
membranas

Existem marcadores moleculares dispostos na face citoslica das membranas dos diferentes
compartimentos que servem de guias para o trfego de entrada, assegurando que as vesculas de
transporte se fundam com o compartimento correto.
A maioria das vesculas forma-se a partir de pores de membrana revestidas e destacam-se como
vesculas revestidas que perdem o seu revestimento antes de se fundirem com a membrana alvo.

Revestimento das vesiculas

Importante para a seleo da carga (concentra protenas membranares especficas
no local que vai dar origem vescula)
Importante para a formao das vesculas (a juno das protenas do revestimento
numa grelha curva em forma de cesto deforma a membrana moldando a vescula)

Vesculas revestidas a clatrina

Cada subunidade de clatrina constituda por 3 subunidades pequenas e 3 grandes
que formam uma estrutura com trs pernas designadas triskelion.
A extruso de uma vescula induzida pela polimerizao das subunidades de
clatrina ao unir-se a adaptinas que se ligaram a recetores da molcula presentes na membrana de
origem das vesculas.
A vescula destaca-se por ao de uma protena que liga GTP, a dinamina.
A dinamina polimeriza volta de uma evaginao em formao originando um anel
que recruta outras protenas e vai desestabilizar a membrana os folhetos no citoslicos vo
fundir-se

Reconhecimento da membrana alvo

Vesculas possuem marcadores superficiais que identificam a origem e a carga e so
reconhecidos por recetores complementares nas membranas alvo
Controlado por duas classes de protenas:
- SNAREs: fornecem a especificidade e catalisam a fuso; existem como pares
complementares: U-SNARE na membrana da vescula e t-SNARE da membrana alvo
- Rabs: GTPases que facilitam e regulam a taxa de acoplagem das vesculas e o
reconhecimento dos pares SNARE

Transporte entre o RE e o Golgi

Transferncia de um compartimento para outro envolve um balano entre o
transporte antero-grado e retro-grado.
Protenas que entraram no RE e so destinadas ao Golgi so transportadas em
vesculas COPII que se formam em regies especializadas do RE locais de sada do RE
Muitas protenas do RE esto em trnsito para outras localizaes, mas outras so
residentes no RE onde esto presentes em grande concentrao

Vesculas COPII provenientes do RE fundem-se para formar um compartimento
intermdio que conduzido ao Golgi por protenas motoras que se movem ao longo de
microtbulos.
Revestimentos COPI medeiam a formao de vesculas que retomam ao RE

Modelo de recuperao das protenas residentes:
O recetor KDEL captura as protenas e transporta-as de volta ao RE nas vesculas COPI
A variao da conformao do recetor KDEL, pensa-se que devido a diferentes pHs e
concentraes inicas, faz com que ele liga as protenas com sinal KDEL no Golgi e as liberte no RE

Transporte no aparelho de Golgi

1- Modelo do transporte vesicular
As cisternas so organelos estticos com um complemento residente de protenas
caracterstico.
O movimento de material entre cisternas mediado por vesculas

2- Modelo de maturao das cisternas
Toda a cisterna se move de cis para trans so adicionadas novas cisternas na face cis que
passam atravs de todo o sistema e se degradam no lado trans
O complemento residente de protenas mantido pelo transporte retrogrado.

As vesculas movem-se por ao de protenas motor que se movem ao longo de filamentos do
citoesqueleto.
As protenas motor sofrem alteraes reversveis da sua forma utilizando a energia do ATP.

Lisossomas

Possuem enzimas hidrolticas que funcionam a pH cido hidrlases
As hidrlases so capazes de destruir todo o tipo de biomolculas presentes nas clulas. So ativas
a pH cido. Este pH mantido custa de bombas de protes que existem nas membranas dos lisossomas
(transportam ativamente protes do citosol para os lisossomas e esta energia resulta da hidrlise do ATP).
A fosfatase cida usada para marcao para identificao de lisossomas.
As protenas desta membrana so altamente glicosiladas. A frao glicosdicas protege-a da ao
das proteases existentes internamente que caso elas no existissem iriam atacar as protenas da
membrana porque no as iam reconhecer como prprias.

Protenas: ligam-se grupos fosfatos ao carbono 6 da manose que est ligada ao oligossacardeo no
Golgi cis faz com que as protenas se desloquem ao longe do Golgi e cheguem ao trans sem alteraes.
Aqui so endereadas para os lisossomas onde o grupo fosfato removido.
Se no tiver manose, no chegam aos lisossomas e so endereadas para outro lado.
Se acontecerem mutaes que impeam a aduo dos grupos fosfato, ento no se d o transporte
das hidrlases para os lisossomas e deixa-se de eliminar o material que devia ser degradado, formando-se
incluses.

Pneumoconioses: a inalao de partculas faz com que estas se alojem nos lisossomas para serem
degradadas no entanto, como so muito grandes, rompem a membrana do lisossoma e h consequente
libertao das hidrlases

Doenas de sobrecarga: o material acumulado mas no degradado porque h falta de hidrlases
para o degradar

Peroxissomas

Possuem enzimas oxidativas (usam o oxignio para remover o hidrognio de substratos
especficos).
A catalase usada para marcao para se identificar se o peroxissoma ou no.

A degradao dos cidos gordos d origem a acetil CoA, que exportado para o citoplasma
para ser usada.

Sindrome de Zellweger: os peroxissomas vazios (sem enzimas). Os cidos gordos esto l
mas no so degradados porque no h atividade enzimtica
Adrenoleucodistrofia (XALD): os cidos gordos esto l, no entanto, como no h
transportadores, eles acumulam-se e no so degradados

Ciclo do glioxilato
catalisado por enzimas especficas (isocitrato liase, malato sintetase).
O sucinato tem de sair para as mitocndrias e incluir-se no ciclo de Krebs.
O malato vai sair para o citoplasma e participa em reaes inversas da gliclise (sintetiza
hidratos de carbono)

Esferossomas

Oleosinas: no se encontram noutros locais da clula presentes nas sementes e gros de
plen e no nos frutos
Tem origem numa regio do RE onde existem oleosinas, vesculas e, no interior, acumulam-
se lpidos que se depositam entre as camadas ficando o esferossoma rodeado apenas por metade
da membrana.

Citoesqueleto

No tem membranas associadas, o que permite que a clula cresa, se multiplique e se
adapte.
Os filamentos proteicos do citoesqueleto so formados por pequenas sub-unidades que se
agregam e se desagregam; ligaes no covalentes (fracas)
Constituido por microtbulos, microfilamentos e filamentos intermdios.

Microtbulos
So polmeros de tubulina (dmero); so essenciais na diviso celular; importantes na
movimentao de estruturas no citoplasma; fazem parte da constituio de clios e flagelos.
Subunidade liga sempre GTP; subunidade liga GTP (depois passa a GDP)
As subunidades associam-se longitudinalmente formando um protofilamento
(sempre na mesma posio que o dmero se associa)
Associam-se 3 protofilamentos lateralmente para formar a parede do microtbulo.
Adicionam-se unidades em ambas as extremidades, s varia a velocidade.
Podem alternar entre perodos de crescimento lento e de rpida despolimerizao,
hidrlise de GTP favorece a despolimerizao

- end: retiram-se mais subunidades do que as que se adicionam
+ end: adicionam-se mais subunidades do que as que se retiram

Em protofilamentos adjacentes, as contactam com as e as com as
Os microtbulos mantm um comprimento constante (fluxo microtubular): adicionam-se unidades
na extremidade positiva e retiram-se na negativa.
A polimerizao dos microtbulos inicia-se a partir da tubulina

Taxol : utilizado no tratamento de certos tipos de cancro, causa preferencialmente a morte de
clulas em diviso

As pontes de ligao formadas pelas MAPs entre o microtbulo e o outro microtbulo, estabilizam
os microtbulos.
A movimentao exige energia que se vai buscar hidrlise do ATP. A movimentao de vesiculas
faz-se em associao a protenas motoras e microtbulos.

Clios e flagelos

Axonema: estrutura constituda por microtbulos; responsvel pelo movimento dos clios e dos
flagelos; tem origem no corpo basal
Ligam-se as dinenas motoras que contactam com o tbulo B adjacente, provocando o movimento.
O tbulo A completo no entanto o tbulo B no porque partilha parte da parede com o tbulo A.
Se houver deficincias nos braos das dinenas, os clios e os flagelos perdem a sua capacidade de
se movimentar (origina doenas)

Microfilamentos

O processo de sntese origina-se a partir de um ncleo de protenas formam o complexo ARP.
Quando a clula recebe um estmulo para polimerizar adicionam-se protenas ao ARP, ativando-a.
Agora adiciona-se actina, havendo a polimerizao.
Se o ARP se associar a um filamento j polimerizado, a polimerizao mais rpida.

Filamentos intermdios

Podem no existir em todas as clulas
Existem na lmina densa
A estabilidade no muito acentuada porque as protenas so muito longas, que se associam
lateralmente formando dmeros. Estes juntam-se e formam-se tetrmeros so as estruturas constituintes
destes filamentos.

Estruturas de ligao intercelular
Junes de adeso

Possibilita a adeso entre clulas mas tambm entre clulas e a matriz celular.
Existem protenas transmembranares, nas duas membranas, que tm domnios
extracelulares que se ligam entre si; o domnio interno permite que se liguem a filamentos do
citoesqueleto (de actina ou intermdios) atravs da protena de ligao.

Clula clula

Intervm protenas da categoria das caderinas.
A quantidade de clcio condiciona a forma das caderinas que se ligam a filamentos de
actina. Se a quantidade de clcio for elevada, h muito clcio para se ligar s caderinas e a protena
estende-se e pode contactar com caderinas de clulas adjacente. Se a concentrao de clcio for
baixa, no se liga caderina e a protena fica com uma forma flexvel impedindo o contacto com a
caderina adjacente.

As junes de adeso no esto isoladas formam conjuntos de estruturas de adeso
contnuas cintos de adeso.

Clula matriz

Existem hemidesmossomas que so heterodmeros. Liga-se a protenas da matriz e,
internamente liga-se a filamentos de actina por meio de outras protenas.
As integrinas esto ligadas a protenas da matriz e, no interior da clula, a filamentos
intermdios do citoesqueleto.
Se houver alterao da distrofina, no h adeso das clulas com a matriz e provoca a
distrofia muscular de Duchenne.

Junes de ocluso

Fecham o espao intercelular e impede que haja passagem. Localizam-se na zona apical das
clulas.
Tm uma importante funo nas clulas do epitlio intestinal na absoro da glucose
porque limitam as protenas transportadoras a determinados locais da clula.
A movimentao fica restringida.
As protenas transmembranares confluem umas com as outras e fecham o espao. Estas
protenas pertencem ao grupo das claudinas e das ocludinas, sendo as primeiras essenciais
estrutura da juno.

Estas junes s funcionam em clulas animais porque nas clulas vegetais, a parede celular
impede as junes.

Junes de comunicao

As protenas transmembranares (conexinas) associam-se em grupo de 6 formando canais/
conexes entre duas clulas adjacentes.
Mantm-se o espao intercelular e h passagem de material entre as clulas.
So permeveis a ies, aminocidos e acares.

Plasmodsmios

Existem em clulas vegetais
A parece celular no contnua, tem canais em que a parede interrompida e onde h passagem
de substncias entre duas clulas.
Um desmotbulo uma cisterna de retculo que atravessa o plasmodsmio.
No h rutura da membrana a nvel do plasmodsmios ela forra-o (continua pelo canal e forma
continuidade com a membrana da clula adjacente).
As vesculas provenientes do Golgi que levam os percursores da parede fundem-se e a membrana
forma-se mas a fuso das vesculas no total, deixando espao para formar plasmodsmios.

Biosinalizao
(slides)
Clula tumoral
A formao de tumores depende da proliferao celular ou de deficiente morte celular.

Formao de metstases:
- Clulas crescem como tumor no epitlio
- Tornam-se invasivas e entram nos capilares
- Aderem aos vasos sanguneos no fgado
- Escapam dos vasos sanguneos para formar micrometstases
- Colonizam o fgado formando metstases

(A) Overactivity mutao (ganho de funo)
A ativao da mutao permite que o oncogene promova a transformao da clula
(B) Underactivity mutao (perda de funo)
Eliminam os genes supressores de tumores promovendo a transformao da clula

Vrus de induo de tumores
1 A clula normal infetada com retrovrus
2 A clula tem o genoma do retrovrus incorporado prximo do proto-oncogene
3 O vrus em formao encapsula o proto-oncogene e o genoma do retrovrus
4 A mutao cria oncogene
5 O retrovrus com o oncogene invade a clula normal