You are on page 1of 15

Rev. Med. HQsp.

Nal Nilos 5(2): \ 13-117, 1970


Determinacin de fibringeno plasmtico. Evaluacin
de tres mtodos l'pidos y valores nOl'males en
adultos de Costa Rica
Dr. Fernando Atmella':' Dr. German F. Senz'" Dr. Guido Arroyo"
INTRODUCCION
Para la determinacin ele fibnngeno sanguneo, se han aplicado con xi-
to variable (31), diferentes mtodos Lle valoracin de protenas: gravim'tricos,
precipitacin Sil na, c1ectroforesis, refractometra, turbidometra, Kjeldahl, nl-
tracentrifugacin y colorimetra.
Los mtodos cJuc se emplean con ms frecuencia en los hboratorjos eJe;
anlisis clnicos de nuestro pas, son el de PARFENTJEV el ,11. (27) Y el de
FO\VEL.r. (9), en los que se logra la precipit<lcin del fibringeno por medio de
diferentes sales y se reali;;:il lectura turbidomtrica. Hemos pod.ido constatar
que las tcnicas ms frecuentemente usa.das en otros paises, son las que uti]i;::ln
la preciFitacin del fibringctlo plasmtico como fibrina y ana.lizan posterwr-
mente el cogulo <-lue se forma (7). La cantidad de fibringeno se puede
medir con base en el peso exacto del cogulo, por dderminacin de la cantidad
de nitrgeno (K) ELDAHL) o utilizando mtodos calorimtricos para la medi-
cin de las protenJs, COmo en las reacciones del biuret, Wu, de la ninhidrina o
la de folinciocalteu (31).
De: los diferentes mtodos gue han sido sealados p"ra la medicin
cmntitativa del fibringeno en el plasma, solamenle unos pocos son adecua-
dos para uso rutinario en el laboratorio clnico y ninguno de eHos ('s totllmen-
te satisfactorio. Es interesante recalcar la enorme importancia que se ha dado
a todas las protenas plasmticas, desde que se entendi y comprendi el sig-
nificado biolgico y fisiolgico de hs mismas; sin embargo con respecto al
fibringeno, a despeche de la abundantt literatura, esta nces una determina
cin rutinaria en los laboratorios de diagnstico clnico. Indudablemente la
mayra de los mtodos que se han preconi;:ado son tediosos y complicados,
poco reproducibles e inexactos, lo que tal vez sea el motivo. para que no se
haya impuesto como un anlisis rutinario en el can1po de la Qumica-Clnica.
.;. Departalnento de Anlisis Clnicos, Facultad de Microbiologii, Universidad de
Costa Rica.
113
114
l(EVIST,\ DEL HOSPITAL '\(tONAL DE NIr'iOS
En el mtodo clsico para la Jeteminan de fibringcno, introducido por
CUL1EN y VAN SLYKE (5), se agrega un cxce:o de calcio al pla.sma oxalata-
do con lo que los iones de calcio y la tromboplastina ya existente en el plasma,
convierten la protrombioa en trombina, la que a su vez transforma el fibrin
geno en un cogulo de fibrina que precipita COJ1"IO sal insoluble ce fibrim.. Se
separa este cogulo y se mide cuantitativamenle con la tcnica de invc,tga
cin del nitrgeno del Kjeldalll. Este procedimiento y otros semejantes, tie-
nen el inconveniente de que son mtodos lentos, inadecuados para los laborato-
rios clnicos que requieren pruebas rutinarias y rpidas. Posteriormente apa-
recieron mtodos (30, los que el pla'ma se trata con trombina para
obtener un cogulo que, segn el mtodo, era tracado baj () difercntcs circuns-
tancias analticas para medir la concentracin indirecta del fibringeno plas-
mtico.
El fibringeno es la protena coagu ablc del plasma y el primer SU5-
trato especfico de la tcombina. Por lo tanto es lgico eSpCf;l[ CIllC los
dos ms especficos para e,tirnar la concentracin de fjbringeno en el plasma,
sean aCluellos en que se detcrmina la cantidad de fibrina que se ha fonm,ao
por la accin de la trombina (30). Sin embargo, se ban hecho varias obje-
ciones a los mtodos que utilizan dicha enzima protcoltica cspecifica para
estos efectos. Por ejemplo, en pruebas como la del ttulo de fibringeno, (IUC
es semicuantitativo o como la del tiempo de trombina, en cierta, circunstan-
cias patolgicas es posible que la prolongacin del tiempo de coagulacin ms
all del plasma control, sea debida a la presencia de altos niveles de antitmm-
binas, de hepatina o de sustancias circulantes semejantes a la heparina y no s-
lo a cambios cuali:ativos o cuantitativos del fibringeno (1). Asimismo es
imposible evitar la inclusin en el co;igulo, de fibrina de otras
protenas extraas al mismo (15). Otro factor a considerar es la kis espon-
tnea del cogulo de fibrina, que se puede producir a bastante velocidad, grao
cias a fenmenos cnzimticos, lo que aade una causa de error a la determi-
nacin ( 15) ,
En la formacin de fibrina hay un factor llamado estabilizmte de la
lmsma (Laki-Lorand; XIII), que primero es activado por la trombina en pre
sencia de iones de caIcio (J 9). Este factor as activ\do, puede entonces ejer-
Cr su efecto polimerizante sobre la fibrina, con lo cual se obtiene un cogulo
firme que es insoluble en cido monocloroactico al 1 o/e (21). Es obvio
que deficiencias marcada.'; de este factor XIlI e ausencia total del mismo, pue-
den ser motivo de error en la determinacin correcta del fibringeno a base
de mtodos que emplean trombina para recobrar un eo:i.gulo que va a ser me-
dido por diferentes procedimientos (21).
Un general, sin embargo, la mayora de los autores considera que P,Eil
la estimacin de los niveles de fibringeno, es prcierible medir cunto del
mismo coagula por tcombina o calcjo, que determinar su precipitacin l base
de sales, ya que al usar trombina p8.1"<1 separar el fibringeno de otr2.S protci-
'nas plasmticas, se obtiene una medida del fibr.ingeno funcional; en cam-
bio con los mtodos que deFenden de una precipitacin gul7lca, {sta puede
ser afectada en varios grados por los productos intermediarios de la fibrioo-
lisis (2), aunclue este fenmeno puede alterar pruebas como el tiempo de
/1l.\I/:U/f "! ,d,: IlliR11\(jENO. V.-\L(']'ESNOI\MI\JES
115
trombina, por h presencia en el plasma de productos de fibringeno menos
complejos, tIlle meden il1hiL ir o [a!<,car los rccultados (:?),
En mUd1()S proccd imientos de b.boriltorio se us;).n bisiG',lncnte los m-
todos turbidomtricos, [Jara la mayora de las Jetermin;lciones de {;bn;,>geno,
Su niGl ventaja es Lt rapidez, ya cue en cuanto a reproducir resultacj.ls y a la
precisin de 10\ mismos, comparan COn las tcnicas CJue
iocluyen una sCj)Jran del fibringeno antes de su medicin. Se han pro-
puesto muchos mtodos basados en d anlisis turbidomtrico, COlTI(j los de
PARF1KTJEV y Su grupo (27), FowF.i.l. (9), PQDMORE (2R, 37, 38) Y el de
l\1r\RTINEK y BERRY (23). En el fibringcno se precipita por medi.o de
I . ,. l l' J d 1 l' 1 '
s.'/..t:S worgilnlcas r a Wf,)]C l se compara cun a praUi.lCWJ [JD! O/1'i{: protel
nas, por ejemplo, las de plasma completo, suero o gama globu1ina. Estos m-
todos Jen:wnclan peco tiempo y sor: tiles para decidir si la proporcin del [i-
bringeno es normal o baja, pero f ueJen rcsultcr c<.]t1ivccados c:n las zunas
interrncdias y en fas muy bajas (7). EJIu ::c n parte, \
las muchas fueiVcs de error del an{d isis nefciol11ttrico en cond ordinil
ras (3l). Dcsgraciac"uncnte !J. luf ormacin '-)UC proporcionan estos
dos rpidos, es la menos decisiva en los casos de valores bajos en la lmi-
te, a los quC' precisamente corresponder las decisiones mdicas de ma-
yor trascendencia (3\).
El propsito del prc:;cntt trabajo es, Ca primer lugar, haccr ll11 anli-
sis crtico de la mctodolo,da que ha utilizado 1:<1':ra el presente r:l1'a In de-
termin.acin del fibringeno pJasrY1tico, haciendo hmcapi en la bondad de
los mtodos ms usados en nuestro mediD; asimismo Ull, mtodo,
al que le hemos encontrado varias de las condiciones exigibles a todo lnccc-
dimiento analtico !)ara liSO rutinario, com:J sun rapidez, c'x;c(tud y posiblii-
dad de reproducir re:,:ultados. F.n este lido hemos el mtodo de
GOOD\vJN (11), el cual consideramos Fuede ser un mtodo estndar para to-
dos nuestros labratorios. Y, por ltimo, scialar la bondad del ante-
(icrmente indicado al cornparado con el procedimiento tllrbidomftrico a b;,-
se de sulfato de amanio, <.k PARl'EKT.JEV el rll. (27), rnodifcado por FO\Xfi'LL
(9) Y con el n.:::fclomtrico de STH\LAND (.'36), que se cn la propiedad ni-
ca del fibringenc COJ1)() protena, dE coagular a '56"( en soluciones 1Jtutras.
TVIATEJUAL y METODOS
Todos J0S cspcdmcncs de l'J:nn,1 p;ra estr:: se ob-
tuvieron de estudian les universitario:; dc ambos sexos, cuyas ed::>.dcs c:;t"b:lD
pendidas entre 17 y 25 aos.
Las de s0.ngrt ,C ?ntic0agl,!laron de acuerdo con Jo prescrito
petra cada uoa de las tcnicas y los ptasrnas se an".1i/'1ron dcnL,[) de
lu:; prirneros od'\() dhlS siguiente:; a su rccoleccin, siendo preservados a 4(
tal}' como ,e recomienda (7, 15, 23).
Ninguna mncstr" presentaba signos evidentes de Jwmoglobina, ieteri-
c!,! o lipemia. Asimismo se hizo un doble control de nuc:;'ros valores con pa-
trones de fibngeno de la Casa Sigma, que se uti[jzgron fundamentalmente
en el procedimienlo de GOODWIN (12), al que nos referiremus ms adelante.
116
REVI:)TA DEL HOSPf'L-\L :\)\CIONAL DE
Para las c!ctcnninaciones clIilnti.tativits de fibringeno usaron tres
mtodos:
1) Mrtodo uf. precipitacin selectiva por calor (56
U
C) de STlRf.r\ND
(36) ligcraP1{?ntc modificado por LYNCH ('/ di. (22), 1"]) el cual se expresan
Ins resnlti'.dos en mp Sir aJ adof't'1f ]a est8.nd"rizacirl elr; !il.S unic\ac.ks OC tur-
bidez de timol con sulfato de bario de SHf\NK y HACLi\ND, de aClwrdo COil
LYNCH el al. (22).
Es pr.eciso sdi;, hr, qiJe r::l lnftL'do ele STlRLAND no da buenos
dos cuando usan citnltos. E:; .ind ifcrt:tlte utili:ar oxalatos, EnTA o hcpa-
tina. (11).
2) Mtodo tnrbidomtrico de Pf\J(FE,,"'lJEV el (d. (27) a base de wl-
fato de amonio, ligeram:=ntc modificadc por FO\VELL (9), en el qLlC se expre-
san los vaJol'cs en mp Si" ,.) <,.plioH t!11;1 frmula <) ecuacin emprica, gracas
a (]UC contamos con un Colcman JI. modelo 61I A, tal y
como lo enfatiza FOWEl.L (9).
Dicha ecuacin es:
P':o. _-+- 0,01,9 X l.OOO =------- mg j'(
0,509
Para csta trcniea se 11tili;':lJ citrato sodio Cn proporcin con
la sangre 1: 9, razn por la cual los resultados se mult pJ caran por 1,1.
3) M{t()(los de GODW[N (1;, de <.Id fibringeno a base de
sulf::<.lo de s()dio y cU;l.l1tificacin ulterior por la d(,\ biuret.
Tomanc;o en consideracin CjU(: este proc('dimiento es relativamente re-
ciente, que C.'i el q1 1(' prcCOniZalll()S para fiJ)I'nogcncmi<l y C]Lle le hemos introdu-
cido algunas vuiantcs, nos parece conveniente eYFonerlo en df'talle:
1) Toma ck la JIl1.lf'stra: en tubos de ce1
t
rifuga aforados 111P.Zd1. el
antico8.gl11alltc d" \X/jn:fobc con In s8!1grc, en pruporcin 1 :9. El result8.do
es el producto ,k m:
1
Jtiplicu los Vl:Ol"(:3 particulares por 1,". No existe CO)1-
train dicacin nara el. llSO (k: otro:; anticoil,fUdanles conocidos (lJ).
Reccti1JOJ
A mc"o.' que se especifique lo contrario tod.s las sustancias qumicas
deben ser gmdo reac..tivo.
1) Na"SO: 13 5, p/v
2) Reactivo cualiMivo de Bencdict (J 4)
Reaait,O ClIeJiitcltiM de B'Jledict:
Con ayuda del cdar se disuelven 17.) g de citrato de sodio y 100 g de
carbonato de sodie en 800 mi de agua. Se filtra con papel de filtro en un
vaso graduado y se completa con agua hasta 850 mI.
Se disue!w:n 17,3 1" de sulbto de en 100 mI de agua; se vierte
lentamente en un edenmeyet de un lirro, la solucin de citratocarbonato sobre
la de SUJf,lto de cobre, agitando constantemente. Se deja enfriar y luego se
,11/\IU.I./l ('/ ,d.: F1BHINCiENO, VALORES r-;OR.M\U;S 117
afora hasta un litro. La solucin as preparada se puede usar de inmediato y
se conserva por largo tiempo.
Solucin de urea al 30 p/v
NaO 0,8) o/r;, p/v
Acid ctrico J O p/\'
Hipoclorito de sodio (NaOCl) 5 ';k, p/"
NaOH ;) 'J(, p/v, libre de carbonato.. gue S(: prepara COn agua doble-
mente destilada en vidrio. Se debe descartar cualquier sedimento gue se observe
en este reactivo.
Biutet modificado: Se mezclan 50 mI de hidrxido de sodio al 3 %
con 5 mi de reactivo cualitativo de Benedict (o proporciones e<.Juivalentes J,
Este reactivo no es estable y se debe preparar diariamente antes de usarlo
Solucin "stock" estndar de protena al 1 5{, pv. Para estos efectos
Se pueden utilizar las soluciones controJes ti po tab-trol (Dade ) o patrones
proteicos de la Casa Sigma.
Soluciones diluidas del estndar oe protenas: Con una pipeta se cOlO-
can 1,0 - 2,0 - 4,0 y 8,0 de la solucin estndar "stock" de protena en .frascos
volumtricos de 10 mi, se diluye con NaCl 0,85 ji hasta el borde y r.c mezcla
bi.en. l'vfientras no se usaD, estas soluciones se deben l'nantentr en rdrigeracin.
Sin embargo no son estables y deb(;:n ser descartadas despus de 30 das.
PROCEDIMIENTOS
iHicrotcnftJ (de acuerdo al concepto analtico de NATELSON (25)
Con llna pipeta (olocan 0,2 mi <.3(; plasma no ictlco en un. tubo
13 x 1(lO mm, se aade 3,8 1111 de 1a solucin de sulfito de scdio, se mezcla hien
y se Fone en bale lVrara a 37
H
e por 10 minutos.
Se Jos tubos ('11 una centrfuga a 2.500-3.000 rpm por 5 - 10
minuto: y Se' dCGtnta todo el 50brena<iante por inversin. Se Ltva ci precipita-
de as obtenido con 4 m\ de la rniSl113 solucin de sulfito de sodio y se utiliza
ul mezclador vortex o la agitacin manual para romper el sedimento y homoge-
!1Clzar.
Se coloca nuevamente en Una centrfuga a 2.500 - 3.000 rptn durante
10 minutos. S{:' elimina cuJadosamcntc todo el sobrenadantc. Se agrega 0,5
mi de solucin de urea y se mezcla bien hasta lograr (lue desaparezca tXJ!npleta-
mente la tmbiedad. Se aaden luego 3 mI del reactivo modificado del bil1 et,
se mezcla y se dejan en reposo los tubos a temperatura ambiente por 15 minu-
tos para el desarrollo de color. Finalmente se lee en el cspectrofotmetro ;1
s4G mu, contra un blanco en qu(;' se mezclan 3 mI del biuret y 0,7 m! dI" la
solucin de urea.
Cal1bfticill (Mierotcnica)
Para la curva de calibracin utilizamos un patrn de protetl1as de 7,00
g % de la. Casa Dade (Lab-ttol), as como un patrn de fibringeno de la Ca-
sa Sigma con un 63 % de protena. Con ambas soluciones proteicas obtmrimos
excelentes calibraciones, entre las que hubo adems una estrecha correlacin.
11$
REVISTA DEL HOSPITAL DE 01IOS
Con 2,5 volmenes de La.b-trol y 1:5 volmenes de solucin salinli, se
prepara la solucin "stock" estndar de protena al 1 7(' (1 g/lOO mi).
La o.uva d calibracin se dise aadiendo en los respedivos tubos,
alcuotas de 0,2 mI de las soluciones diluidas (gue representan 100, 200, 400
Y 800 mg ele protena. por 100 mi de muestra) en los respectivos tubos, ms
O, S de solucin de urea y luego 3 mi del reactivo del biuret, dejando todo en
reposo pOI 15 minutos }' efectuando las lecturas respectivas contra un blanco,
en la misma forma que se indic en el micro procedimiento.
Macrotc11 fea (especialmente indicada p,ua plasma ictrico)
Con una pipeta se colocan 0,5 mi ele plasma y 0,5 mi de solucin en
un tubo 15 x 125 mi, se agrega,n 9 mI de la solucin ele sulfito de sodio y se
incub,1 por le minutos a 37C. S pone la mezcla en Ul'\'l centrfuga a 2.S00 -
3.000 rpm durante :5 - 10 miGulos. Se decanta todo el sobrenadante y se la-
va el precipitado con 9 m de la solucin de sulfito. Se vudve a colocar en
la centrfuga y se elimina el sobrcnadant'e y se tlej<l el tubo invertido sobre un
papel de filtro por unos 2 - 3 minutos. 1\ continuacin se aauen 0, ') mI de
la solucin de urea y se mezcla bien para disolver el precipitado. Se adicionan
0,5 1111 de cido ctrico al 10 j y se mezcla; luego 0,5 1nl ele solucin de hipo-
clorita de sodio al ') Y se mezcla. (Tanto el hipocIorito como el cido el
trico no son idndispensables si se trata de plasmas no ictricos; en estos casos la
diferencia de volumen se puede compensar agregando 1 m[ de agua destilada).
Fil1illmentc se mezc', con 5 111 de NaOH al 3 )';", seguido de 1 mi del
reactivo cualitativo de Benedict, se aaden 5,0 mJ de agua destilada, se deja
en reposo por 15 minutos y se mide el color resultante a 540 mu, contra Uf)
blancc preparado a partir de 0,5 mI de agua destilada y los otros reactivos eu
la cantidad y concentracin antes mencionada.
Calibrmin (Macrotcnica)
Para la calibracin se aaden alcuotas de 0,5 mI de las soluciones
tndares de protenas, ms 0, '5 m1 de urea, 0,5 mI de cido ctrico, O, S mI de
hipodorito, :5 mi de hidrxido de sodio y 1 mI del reactivo (le Benedict. Se
deja en reposo por 1'5 minutos y se: lee contra un blanco tal y como se especi-
fic en el macroprocedimiento.
RESULTADOS
Las mediciones fotorntricas para este trabajo, se hicicron en un cspcc
trofotmetro B&L, en los mtodo;,; de STlRL!\NTJ (36) Y GOODWIN (ll.); y en
un Cole.man Junior modelo 6A, para el procedimiento de FOWELL (9).
En el Cuadro 1 expresan los resultados numricos y estadsticos, ob.
tenidos con los tres mtodos en referencia. Para todos ellos se aplic un pero
centil aproximado de 2,5 %'
119
ct!ADR 1
VailJffJ dl: !ibiJl./JelJo (mg 0/(:)
Mtodo
Goodwin
Fwdl.
Stirl:,nd
No, Je Promedio Desviacin Valores margen
muestras estnd<lr
25') 422 76':5 27"'> -
')86
7') 23) 59 120
-
"72
252 187 51) 106 - 326
:En el estudio comparativo de los mtodos de GOO)WIN y FO'XtE[,L, y
GoOmX'fN y STtRLAND, es posible apreciar con mayor objetivldad,
marcadas con los valores de fibringeJ10 determinados por procedimieMos (ue
tienen una base analtica totalmente diferente. En el Cllitdro 1 .ce indican
tales comparaciones, illJntue es preciSe> acbrar gue la. estimacin de los
margen es poco precisa porque el nmero de J1luestrflS es relativamente pe(1ue
o (N'-=- 25).
CUADRO 2
Goodwin/Puwe11
Goodwil1/StirJand
Difw:nciil.
pwmedio
159
22)
Desviacin
C:5todnr
61
49
mugEn de
las ,ilfercncius
33 -- 21i5
125 - 328
DISCUSION
,
Lt cuantifican del fbringeoo, unO de los tantos componentes c!td
plasma sanguneo, ofrece varias difjcultades tcnicas, pues para su separacin
se tropieza con muchos de [os problemas ..1'"le se presentan en el ,lllisis de glo"
buljnas. Si se utilizan procedimientos de es posible guc durante
sta, gucden incluidas en parte las otras fracciones proteicas y si se recurre a
mtodos de precipitacin, nO slo es factible que se incluyan otras protenas,
sino tambin, que la precipitacin sea incompleta. Puesto que es sabido (l11e
las fracciones proteicas varan ampliamente en mltiples trastornos patolgicos, no
se ha int'1'otado introducir ninguoil correccin al respecto, pues un solo factor
no bastara para satisfacer todas las posibilidades (31),
Las diferencias en las condiciones durante la coagulacin o precipitacin
del fib
rin
6geno, as como el mtodo de anlisis in extensQ, exp[Gll1 en gran
parte la variedad en cuanto a valores normales que se ballaen la bibliografa.
En consecuencia, es conventente establecer defimitaciones de los valores norma-
les, sobre todo al aceptarse un mtodo analtico que sea lo ms preciso posible.
120
],EVrSTA DEL HOSPITAL NACIONAL DE NIOS
El reporte de los resultados obtenidos con los procedimientos canven-
cionales de laboratorio, para la determinacin cuantitativa del fibringeno plas-
mtico, generalmente requiere horas y en ocasiones puede sufrir todava mayo-
res retrasos, lo que hace que tales procedimientos resulten inadecuados en situa-
ciones de emergencia, ya que en los estados hemorrgicos de instalacin brus-
ca, producidos pOI disminucin del fibringeno plasmtico,)a cuantificacin
rpida y exacta esta protena es de enorme importancia para poder estable-
cer en corto tiempo el diagnstico y la teraputica adecuados (8, 31, 32, 33, 3S).
La mayora de los muchos procedimientos prolongados y laboriosos (]U
e
se han propuesto para la determinacin del fiblingeno plasmtico, compren-
den dos etapas: Primero se asla el fibringeno de otras protenas plasmticas
y luego se efecta la cuantificacin fsica o qumica de la protena as obteni-
da. La separacin del fibringcno de las o(ns protenas plasmticas, se puede
llevar a cabo por su interaccin COn la tcombina y/o el calcio para formar fi-
brina, por su co38ulacin a bajas temperaturas por su canKterstica. baja so-
lubilidad con diferentes sales y alcoholes (11). Otros reportes tcnicos inclu-
yen la interaccin de esta protena con protamina (11) Y con antifibringeno
(3, 6).
Las tcnicas para la cuantificacin de fibringeno inc1uyen, entre otras,
la de pesada, la estimacin del contenido de nitrgeno, la determinacin colo-
rimtrica por la reaccin del biuret, de la ninhidrina, de los fenoles y pOr la
absorcin ultravioleta de la fibrina disuelta en una solucin de urca al 40 9;'j
(ll) .
. Se han propuesto varios turbidomtricos para la estimacin del
fibringeno. Estos mtodos directos incluyen la precipitacin con sulfato de
amonio, clorure de sodio, sulfito de sodio y tambin la polimerizacin deLfi-
bringeno por trombina y calcio (7), O solamente tlcio (J 6). Existen adems
otros procedimientos gl1e utilizan trombi na para reacci one5 turbidomtriGts ('17,
32) Y a1cohoJ-trombioa (39).
Las tmicas de aislamiento del fibringcno usando twmbina, son de las
ms tediosas y que consumen 1Dis ti.cmpo; sin c:mbargo, algunos autores con-
sideran gllt este procedimiento es el ms exacto por cuanto lo que se mide es
fibril1geno fisiolgicamente activo (20, 30).
Con respecto a los procedimientos en que se logra la separacin del ti,
bringeno plasmtico, pOI precipitacin con diversas sales para la medicin fo"
tomtrica de la turbiedad, conviene seaLtr las ventajas y desventajas de di
chos mtodos. La turbidez provocada por el sulfato de amonio (7, 31), es
Llna tcnica rpida y fcil de realizar, pero es ms que nada un mtodo semi
cuantitativo. Por ejemplo, COn este procedimiento es imposible medir COn pre-
cisin niveles bajo los 90 miligramos (7), lo que nosotros hemos corro-
borado.
la coagulacin es la caracterstica especfica del fibringeno, por lo
(Iue aparentemente, los mtodos de anlisis del mismo gue dependen de su con-
versin en fibrina, ueben ser m.s fisiolgicos y especficos (jue los procedi-
mientos que se fundamentan en la precipitacin saILnadei fibringeno como
tal (15). Esta evidente ventaja sin embargo est contrarrestada entre otras co-
sas, por el hed)o de que no se puede evitar completamente la inclusin el
ATi1rnI/! rt ,j .. VAl.OIZES[\"ORJ.,{ALES
t21
cogulo de fibrina de otras protenas y la lisis espontnea del cogulo de fibri-
na (t)), circunstancias (1ue provocan error en e::;tc tipo de delerminacin, pe-
fO no en los procedimientos de fraccionamiento salino o Pa-
::cee ser que, cuando menos algunos de los mtodos directos
son en genera! meno.) sensibles Cjue: los pHKcdimi.entos de aislamiento y cuan
,ificacin posterior y estn sujetos a un alto grado de interferencia por parte
de constituyentes plasmticos normales y anormil.les (.11).
MARTl:t-:EK Y BEl\l<Y (23) al compar,u su mtodo, hasado en la preci-
pitacin Ulantilativa del fibringeno plasmtico por medio de un bfer de fos-
fatos, con el de el a!. (27), encuentran que en cuanto a SEnsibili-
dad su mtodo es mejor, permite Ull coptrol del pH de la mezcla de reaccin del
reactivo fibringeno, el cual en realitbd es un verdadero no re(lue-
re lJn control de temperatura y los de la tlllhicdad con las
111u:tras de plasma si,!:;l!en ms ntimamente la ley dc B.I'ER, J\ OeJ1l3s...la turbie;,
dad es ms estable gue cuando se precipita el fibringeno con sulfa-
to de amonio. Los mismos autores consideran que la prueba de turbiedad por
medio de las sales de fosfato, es tan exacta y precisa COmO el mtodo de REINER
y CHEUNC; (31), el cual es 11),15 elaborado y consume ms tiempo. No obstan-
te los reconocen gue este ltimo lJIOcedimiento es un excelente l11loc o
de referencia. Uno de nosotros (34) ha tenido una buena experiencia, con
Jos mtodos a base de sales de: fosfatos para la medicin ele pwtcnas fracciona-
das del suero, lo que nos lleva a creer que el mHodo de MARTlNFK y BJiRRl'
elcbe scr adcC1.,do y cuantitatinJ para fibrtngeno.
Despus de l/na exbausti"tl revisin de la literatura y en atencin a
los pnlctJilllientos que se USan en nuestro medio, nos propusimos hacer un cs-
tudio de tres indoJos para fibrin{geno plasmtico:' En vista de que tomamos
::omu referencj'l Ja tcnica de aislamiento y colorimetra de GOODWl:t>: (12),
creemos OportWlO mencionar, previamente a cualCJuier discusi6n sobre nuestrOs
hallazgos, las consioeraciones crticas CIUE sobre el tema nos ofrece el autor mcn-
ci.onado y eue nosotros hemos corroborado.
1.os mtodos turbidomtricos comparados por GOOOW'IN (13), fueron
su tcnica a base de sulfito de sodio, la modificacin de FOW'ELL (9) ,ti mto-
do del sulfato de amonio de P\RHNTJEV (:1 ,I!. (27) cIue emplea una solucin ele
sal al 13,33 el procedimiento de PODMORF (28) gue utiliza sulfato de sodio
al 10,) ;,( Y el ya citado mtodo de y BERHY (n), a base de sales
de fosfato al 1,20 mojar, Can concentraciones cC]l.Iimoleculares de fosfato cido
de potasio y fosfato disdico.
El fibringeno fraccionado por cada uno ele los agentes precipitantes
lltlizados, fue disuelta en solucin de urca, luego se agreg hid rxido de sodio
y reactivo cualitativo de BEN EmeT para el desarrollo ele color. Hubo gran co-
rrelacin entre la cantidad de fibringeno plasmico por suIfo y fosfatos, l
-Jifcrencia de lo obtenido con las otras d05 sales. En la experiencia del autor,
c1.,.grado de turbiedad producido por fraccionamiento salino, no es Hn ndice
confiable respecto a la cantidad de fibtin8cno presente. Por lo tanto, la me-
dida de Ja concentracin de fibringeno por turbiedad, a base de los diferen-
tes agentes [[aconadores (Lle se h:1Jl preconizado, 110 parece ser suficientemen.
te. preCIsa para la medicin cuantitativa de esta protena.
Se demostr entonces dararncnte la bOl1dad' de lus mtodos de fraccona-
122
\{EVISTA hn HOSPITAl. NACIONAL DE
miento del fibringeno, al observar Jos valores obtenidos COn el uso de fibrin-
geno bovino para la estandarizacin en los procedimientos <1ue se compararon.
En la tabla que s'igue se sealan los valores que obtuvo el autor.
Compmacin de IOJ ;alofeJ de ibringello
obtenidoJ P01" tcnicaJ de il'accioJlCllniel1t() Mlilto (Goodwin 13).
Fibringeno bovino mg/lOO mi
690
3(iD
180
Fibrin6;eno H;(obrado (rog %)
Na2S0S Fosfatos NH
4
(2)SO.(
665 535 355 380
360 315 250 200
180 180 165 150
El procedimiento descrito por GOODWIN (12) Y que nosotros hemos
aplicado con ligeras modificaciones, es comparativamente sencillo y rpido. A
diferencia de otros mtodos, no presenta dificultad para el establecimiento de
los patrones para comparacin. Asimismo y a diferencia dcotros mtodos co-
mo los que emplean el reactivo para renales (20, 26, 30), rJO utiliza factores
cromgenos para convertir los valores hallados en mg o/r', puesto que el reactivo
del biuret determina enlaces peptdicos en lugar de un amin'ocido concreto
(31). En otras palabras, con este mtodo se puede usar cualquier patrn pro.
tenico, ya que la curva de calibracin permite analizar cantidades equivalentes
de fibringeno, de albmina o de suero completo, en las proporciones estable.
cidas para cada procedimiento (12), gracias a la tcnica del biuret modificada,
CAMPBELL y HANNA, de acuerdo con HENRY (15), no recomiendan en su m-
todo original a base de sulfito de sod io, la determinacin cuantitativa del fibri-
ngeno con la reaccin del biuret, ya guc en esas condiciones se produce un
enturbamiento que no se puede eliminar ni siquiera mediante la extraccin COI1
ter. Esta aparente e insoslayable dificultad, fue obviada por GOODWIN (12),
cuando demostr6 que el fibringeno precipitado- por sulfito es muy soluble en
solucin de urea al 40 ;/(, , hecho tambin comprobado por GANS y KRIVIT (10).
Es importante indicar que e1 sulf.ito de sodio tiende a precipitar la bili.
rrubina, lo que hace difcil removerla aun lavando el precipitado que se obtie-
ne. La interferencia de tal pigmento por arriba de los 24 mg '% es especial-
mente notoria en el microprocedimiento, que es el que hemos utilizado en este
trabajo, en virtud de su reaccin con el biuret (12). La interferencia debida a
excesO de lpidos (ms de 2.000 mg 9'), es fundamentalmente turbiedad.
Este problema se puede corregir parcialmente, al sustraer al suero pro-
blema el grado de turbiedad. La concentracin de hemoglobina plasmtica ms
de 150 mg '/iJ, provoca falsos valores de fibringeno por su reaccin con
el reactivo de biurct, que es dos veces ms sensitivo que el biuret convencional
(11).
Al concretar jos resultados obtenidos, no nos queda sino concluir en que
los valores de fibngeno responden por lo general al mtodo que se ha se-
,-jT,lI.1iUA el </1,: FIJ3RINGE:-JO. VALORES NOR.MALES 123
guido) por lo que no puede sorprender a nadie que recomendemos con eoro-
sia.smo el procedimiento de GOODWIN (12).
Los valores margen y medios de las muestras de hombres y mujeres, in-
dican que na existen diferencias de los nivcIes de fibringeno plasmtico, en-
tre los sexos, hecho ampliamente aceptado por otros autores (1 I, 26, 3D). Asi-
mismo deseamos sealar una vez ms la bondad del mtodo de GOODWIN, citan-
do otro trabajo (23) en que se compar con xito este mtodo con otros gue
se aceptan como de referencia. En cuanto al m,todo turbi<lorottico d ~ STffiLAND
(36) nos parece que como procedimiento turbidomtrico que es, ya tiene im-
plcitas todas las desventajas e inexactitudes ))ropils de estos anlisis; adems,
estar contraindicado en presencia de piroglobulirias (11) Y an en presencia
de criofibringeno (15, IR).
Lo mismo podemos der de la modificaci6n de FOW'ELL (9) ni mtodo
turbdomtrico de PARJ;;ENTJfV el al, (27). Asimismo es preciso llamar la
atencio lUlcia el hecho de que algunos laboratorios aplican las ftmuras em-
pricas de P/\J{FPNTJEV o de FOWELL
j
us,ll1do fotmetros diferentes a los gue
sirvieron para/a obtencin de Las ecuaciones) lo cual introduce un enorme error"
gue invalida un mtod.o de por s scmiCllantitativo (7). Conviene recordar,
(J'IC con est(: mtodo se reportan valores margen de fibringeno de 113 a 380
mg ~ con valor me<1io de 246 mg % (5,27), 105 nlales Se relacionan es"
trech8.l11eD.tc con los encontntclos por nosotros con ei mismo procedimiento,
POI otra parte, al comparar los valores obtenidos en 25 muestras, se
aprecian las d{ereo,ts bsicas entre ul1 pwccdimiento colorimtrico Cjue as-
la seJcctivamcntc al fibringcno, Juego Jo nmntjfica por. medio de una reaccin
de color universalmente conocida por su bondad y que utiliza un binret modifi-
cado doblemente scnsibte (11), con dos mtodos que se basan en medir el
grado de turbiedad y qllC estn por ello sujetos a importantes variables, debi
do a las muchas fuentes de error del anlisis neftlomtco en condiciones or-
dinarias, tai y como 10 sealan REINER }' CHHJNG (31), Lltores de un mtodo
C1Lle se considera excelente referencia para anlisis del fibringeno (23).
Lil inexactitud de los mtodos de STIRI.AND y FOWBLL, se refleja en
nuestras experiencias COn el tlSO de soluciones patrn de fibringeno bovino y
en lils de otros autores (1 J, 13).
CllADRO 3
Valore.!' de fi/ltiltdgeIJ,j (.'/=2)
Concentracin de fibrin6gcno
en solucin patrn (mg %)
Valores obtenidos
C(ln 3 diferentes mtodos (l11g %)
Goodwin Strland FoweH
200
400
2G2
401
186
388
152
206
Estos resultados y los cjue Se indican en el anlisis estadstico, demues
tran gue ambos procedimientos turbidomlTicos no son ms que mtodos semi-
cuantitativos, que podran Jecdir si el fibringcno se halla en proporcin mllY
124
REVISTA DEL HOSPITAL NACIONAL DE NJr>iOS
haja O muy alta, pero que pueden resultar equvocos en las zonas intermedias,
con el agravante de que la informacin que proporcionan es menos definida en
los casos de valores bajos en la zona lmite (100 120 mg %), en los que
presamente hay que tomar las <:ecisiones de mayor trascendencia mdica (7, 31).
Se poLIca sospechar que con el mtodo de GOODW'IN (12) que nosotros
preconizamos, existe c1 problema de que se incluyan otras protenas en la (ase
de separacin o aislamiento del fibringeno con la olucin de sulfito de sodio,
'al como Jo supone MILLER (24), en vista de que los valores son ostensible-
mente ms altos que los obtenidos por mtodos de precipitacin o turbidom-
tricos. Sin embargo, el autor (13), ha demostrado excelentes recuperaciones,
factibilidad de reproducir resultados, exactitud y una estrecha correlacin de
sus hallazgos con los de mtodos ampliamente aceptados, aungue no de uso
rutinario, como el de interaccin con trombina (11). Los valores de GOODWIN
(12) con su mcropr<Kedimiento, CJue fue el que se utiliz en este trabajo, os-
cilaron entre 390 y 600 mg r., con un valor promedio de 484 mg j{, cifras
bastante semejantes a las 273 a 586 m.g 5;, con una media de /22
mg o/r-, incluidos un 95 de los casos aproximadamente.
RESUMEN
Se hacen determinaciones plasmticas de fbringeno por los mtodos de
GOODWIN (12), FOWELL (9) y STIRI.AND (36), en poblacin uoiversitaria de
uno y otto sexo, con edades comprendidas entre 17 y 25 aos.
Con el mtodo de GOODWIN, ligeramente modificado, que es el que
proponemos preconizar, se obtuvieron en un 95 (X aproximadamente de los ca-
sos estudados (n = 255), valores de 27.3 - 586 mg IJ{, con un valor promedio
de 422 mg o/c.. Se comparan los tres mtodos en referencia y se sealan las
diEerencias tan evidentes entre los valores hallados.
Por ltimo se hace un ligero anlisis critico de la mayora de los dife-
rentes mtodos analticos encontrados en la literatura.
BIBLIOGRAFIA
1. BAUER, J. D., PH. G. ACKF-RMANl\: & G. TORO
Bray's clnical laboratory methods. T' Ed., IX + 764 pp., C. v. Saint iOllis,
1J. S. A., 1968.
2. BURMESl'ER, H. B. c., K. AUI.TON 1'< G. r. HORSl'lEI.D
Evaluatioo of a rpid ll1ctbod Eor the detcrmnation of plasma fibrino.;en. J. (lin.
Patb. 23: 43, 1970.
3. CASTELAN D. ]., ]. HIRSH & M. MARTiN
Latex-bound antifhrinogen for plasma fibrinogcn assay. J. Clin. Patb 21; 53R,
1968.
4. COLES, M. &. '.'{l. ROAtAN
A .rapid mcthod fO[ estimating fibrinogen in plasma. ]. Clin. Path. lO: 2R2, 1957.
5. CeLLEN, G. E. &< D. b. VAN 5LYKE
Dtterminatjotl of tbe fihrin, globulin and albull1in nitrogen of blood scrum. ,l. BioL
Chell1, 41: 587, 1920.
."/TMELlA (:/ d.: FlBRINGENO. VAl.ORES NORMALtS
125
6. CH':N, TH. & C. H. LAI
Fibrinogen asSay by an inmunodiffusion pI ate. Amer. ]. of Clin. Path. 52: 629, 1969.
7. ELus,B. C. & A. STRAl\;SKY
A quick and accurate metbod foe the detcrnlination of fibrinogen m ple.Sllla. J. Lab.
aud Clin. Med. 58: 477, 1961.
8. FANTL, P.
Hypofibrinogcnaemia with a possible detective fibJ'inogcn associated with fibrinolysis
Austml Ann. Med. 18(1): 43, J%9.
9. FOWI'LL, A. H.
Turbidimctric method o fibrinogco assay. Resu(ts witb the Co!cman junior spectro,
photometer Amer.]. CIin. Path. 25: 340, 1955.
10. G ~ S H. & \X!. KR1VIT
Study of fibrinogen aud plasminogen eoncentrations In rabbits during anaphylactil'"
shock J. Lab. Clin. Md. 58: 259, 1961.
11. GOODWIN, J, F.
An tvaJuation (lf techntes fO( the scparation and estimltion uf plasma fibrinogr:n.
C/in. ClIem. 1/ (I).' 6), 1965.
12. GOODWIN,]. F.
Microcstimation of fib'inogen with a scmimicro modification applieable to ieterie
plasma. Clin. Chem. 13(11): 947, 1967.
13. GOOPWlN,]. F.
An evaluation of t ll'bic!im"tric tf(hnics fo[ estiU1ation f plaSma fbrinogc:n. Clin.
ChC'ffi. n(12): 1057, 1%7.
14. HAWK, P. B., B. L. OSl.ER & W. H. SUMMI'RSOi'-l
Qumica fisiolgica prctica. 1" Ed., xv + 1269 PP., Edit. Interam S. A., Mxico,
1949.
] 5. HHNRY, R. J.
Qumica Clnica. Principios y tcnic'15. Tomo f, Cap. 11, XIX + (,5R pp., Edil.
Jims, I3arcdQna, 1968.
16. INGRAM, G. 1. C. & t D. MA1'CH.Wf1'
A rapid "side-room" lIlcthod fOl' tbe determimtion oE plasma fibrioogeo concentration
aS fibrin. J. Clio. Patb. 13: 469, 1960.
17. JACOX, R. E.
A new method for analysis of pbS1l1, fibrinogt'n utiling a (ationie detergent. .1.
L1.b. Clo. Med. 44: 8R6, 1951.
lR. KORST, D. R. & C. H. KRATOCHVIL
Cryofibtinogea in a (ase o 11Ing neoplasia assoriated with thr0mbophlebitis migran,.
Blood 10 (9): 945, 1955.
19. LI\K1, K. & GLADN);R, J. A.
Chemistry and physiology of tile fbrioogen(jbrin transitioll. Physiol. Revic\v$ 41:
127, 1964.
20. I-A.Nf<I'0RD. P. B.
A quantitativf. method foc mcasurng fibrinrytic aetivity in humans. Am. J. .MeJ.
Tech. 1fayJnne, pp. 225, 1965.
126
REVISTA DEL IlOSPI.TAt DE '''iIJ'()S
21. tORM-';D, L. &; K KONlSHI
Activation of the [ibrin stabiling factor oE paSIl1:1 by tLrOfllbin. Arch. Biochem.
y Bophv., 105: 58, 19(,4.
22. LYNCH, M. J., s. S. R.-\l'HAEL, 1. D. lV1Jll.LOR, D. D. Sf'MU' , F. HIJ.l.S M. .l.
INwooD
Mtodos (k laboratorio 1" .EeI., XV + (,(jI PP" EJ:l. S. A.. Mi'xicl', 905.
:!3. MARTINEK, R. G. & R. E. BEflRY
Micromethod for tlJe estilllatiof1 of [ibrwo,(;e!1. C!;l. C11tcJl1. 11 ('1): (J, 19(;5.
21. MIL.LER, S. Ji.
A text book of Clioical Pathology, 7' Ed., XVI 1- 999 pp. The \XIilliall1s ,loel
\X'iJkins Campat1", Thltirnolc. 1966.
25. NATE1.S0N, S.
lVficrotcnicas de qUlmlla cJiniC'L PEd. Espaio1:l, XVI + (,'59 pp. Ediciot\(:;, ropl'.
S, A., Barcelona, 1964.
2(,. (;.c.TON, C. M. & D. OGSTO""
Plasma fibrinogen 3nd pl<1srninogm kvels in healrh amI in isci13tl11ic heart dis(';\se.
.J. (:Iin. Path., 19: 0,52, 1966.
27. PARI:EN1JEI'," 1. /l.., M. L ]OflNSO:-- I!< E. E. CLlFl'TON
The Jeterminatil1 of pbsm:l fibrinogcn by tmhidi.ty ',Clnm<ll1'C'11l Areh.
13iochcm. 46: 470, 1953.
2S. POlJMOHE, D. A.
Rapid turbidimetric mcthods for the dtterll1ination of plasma Clin. Cht:l!1.
Acta 4: 242, 1959.
29. PRYCE, J.' D.
SimplifiC'd. microtstimatioo of fibrioogen tmd sC\(llTluwid in plasma. Clin. Chl11.
1">: 650. 1967
30. RATONOFF.. O. D. "" e MEN7.fE
A ne\\' method for the detcrmination o fibrinogtn in small samplC's of plasma. ).
tab. Oin. Med. 37: 316, 1951.
3l. R!'INER.. M, &. HELJ:.t'oi L. CHEl.!I\'(;
Fibringeno. Cap. XI ('\1 Sdigoon, D. 'Mtodos :;ekcciunados de ;lnli,is c:!inicos,
Vol. III, XIX, +')14 pp.. Aguih1r, S. A. d(; Ediciones, Madrid, 1%2.
32. Rom 1E. N. G.
A rapie! and simple l11CthoJ for estimating fihrinogco. J. CEa. Path. 17: 319.1.964.
33. RUIZ, G. &; TERESA TIMENE%
Tcnica rpida de microprecipitacin tea tubo capilar pal'a determinacin de fibri
ngeoo. Rev. Mct:. Llb. Cln., XVll(6', 1%5.
34. SN'Z.. G. F. & FLOR SOLANO
Anlisis de protenas sriClS en nios sanos recin nacidos. Rev. Md. Hnspital Na
cional de Nios 3 (2): 113, 190B.
35. SCH'iEIDJiR, CH. 1.
RapiJ est!l11ation of pla.\ma fibrinogcn concentration ;ll1d jts use as a guide to thcrapy
of intravlSCullf ddibrnation. Am. J. Obst Gynec. 64: 14\, 1952.
ATAfEUA et "l.: FIBRINGEN. VALORES NORMALES
36. STtRLAND, R. M.
Rapid method far estimating fibrinogen. Lancet 1, 672.
37. VNCENT, D., G. SEGONZAC & M. R. LACROtx
Le dosage rapide du fibnogene. Amm. Biol. Clin. 20: 673, 1962.
127
38. VINCENT, D.
Determination rapide de la fibrinemie. Extrat de la Presse Medicale 53: 2580,
1962.
39.WYCOFF, H. D.
A micraassay far plasma fbrnogen. J. Lab. and Clin. Med. 47: 645, 195().

You might also like