Estudo Gas Arraste

Passo a Passo para o Uso do
Cromatgrafo Gasoso Modelo

GC-CP3800 Varian para Anlises
de Gases de Efeito Estufa (GEEs)
ISSN 1983-0513
Maio,2014 403
Documentos 403
Juliana Feitosa Felizzola
Cristiane Formigosa Gadelha da Costa
Steel Silva Vasconcelos

Passo a Passo para o Uso do
Cromatgrafo Gasoso Modelo
GC-CP3800 Varian para
Anlises de Gases de Efeito
Estufa (GEEs)
ISSN 1983-0513
Maio, 2014
Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuria
Embrapa Amaznia Oriental
Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento
Belm, PA
2014
Exemplares desta publicao podem ser adquiridos na:
Tv. Dr. Enas Pinheiro, s/n.
Caixa Postal 48. CEP 66095-903 - Belm, PA.
Fone: (91) 3204-1000
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Superviso editorial: Luciane Chedid Melo Borges
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Normalizao bibliogrfca: Luiza de Marillac P. Braga Gonalves
Editorao eletrnica: Euclides Pereira dos Santos Filho
Foto da capa: Juliana Feitosa Felizzola
1 edio
Verso eletrnica (2014)
Todos os direitos reservados
A reproduo no autorizada desta publicao, no todo ou em
parte, constitui violao dos direitos autorais (Lei n
o
9.610).
Dados Internacionais de Catalogao na Publicao (CIP)
Felizzola, Juliana Feitoza
Passo a passo para uso do cromatgrafo gasoso modelo
GC-CP3800 varian para anlises de gases de efeito estufa (GEEs)
/ Juliana Feitoza Felizzola, Cristiane Formigosa Gadelha da Costa,
Steel Silva Vasconcelos. - Belm, PA: Embrapa Amaznia Oriental,
2014.
68 p. : il. color. ; 22 cm x 15 cm (Documentos / Embrapa
Amaznia Oriental, ISSN 1983-0513 ; 403)
1. Cromatografa gasosa. 2. Cromatgrafo gasoso Segurana.
3. Cromatgrafo GC-CP3800. 4. Equipamento de proteo individual
(EPI). I. Costa, Cristiane Formigosa Gadelha da. II. Vasconcelos,
Steel Silva. III. Ttulo. IV. Srie.
CDD 543.0896 21. ed.
Embrapa 2014
Nutricionista, doutora em Qumica Ambiental e
Analtica, pesquisadora da Embrapa Amaznia
Oriental, Belm, PA.
juliana.felizzola@embrapa.br
Engenheira-agrnoma, mestre em Cincias
Florestais, bolsista da Embrapa Amaznia Oriental,
Belm, PA.
cristianeformigosa@yahoo.com.br
Engenheiro-agrnomo, doutor em Recursos e
Conservao Florestais, pesquisador da Embrapa
Amaznia Oriental, Belm, PA.
steel.vasconcelos@embrapa.br
Autores
Apresentao
O documento apresentado tem o objetivo de mostrar detalhadamente
as etapas de anlise no cromatgrafo gasoso GC-CP3800 Varian, para
que pesquisadores, alunos e estagirios possam utilizar a metodologia
de anlise de forma rotineira e obtenham resultados precisos e de boa
qualidade para as pesquisas relacionadas a gases de efeito
estufa (GEEs).
Erros de rotina so mostrados neste trabalho e suas correes e
origens so discutidas para anlises de metano e xido nitroso, desde
a injeo das amostras gasosas at a obteno de cromatogramas e
interpretao de resultados.
Os autores lanaram esta publicao enfatizando todos os aspectos
tcnicos para o funcionamento perfeito do cromatgrafo gasoso
GC-CP3800 Varian.
,
Adriano Venturieri
Chefe-Geral da Embrapa Amaznia Oriental
Sumrio
Passo a Passo para o Uso do Cromatgrafo Gasoso
Modelo GC-CP3800 Varian para Anlises de Gases de
Efeito Estufa (GEEs) ........................................................................9
Introduo ........................................................................................9
Princpio da cromatografa gasosa (CG) com detector de
chama (FID) e detector de captura de eltrons (ECD) ..........10
O cromatgrafo GC-CP3800 Varian .........................................11
Sugesto de preparao de amostras .......................................16
Reviso do software Varian CP3800 ........................................16
Perigos em potencial .....................................................................19
Equipamentos de proteo individual (EPIs) ............................19
Procedimentos em caso de acidentes .......................................19
Protocolo de uso ............................................................................20
Resultados analticos .....................................................................47
Outras funes que podem ser alteradas ou
monitoradas .....................................................................................56
Clculos de concentrao no Excel ...........................................62
Possveis problemas .....................................................................64
Procedimentos de segurana importantes antes
da coleta ...........................................................................................65
Coleta de amostras em campo ...................................................68
Passo a Passo para o Uso
do Cromatgrafo Gasoso
Modelo GC-CP3800 Varian
para Anlises de Gases de
Efeito Estufa (GEEs)
Introduo
Este guia esclarece o uso da cromatografa gasosa no GC-CP3800
Varian para anlise de variveis associadas aos processos de emisso
de gases de efeito estufa (GEEs). Os procedimentos destinam-se
avaliao do fuxo de metano (CH
4
), xido nitroso (N
2
O) e gs
carbnico (CO
2
) nas diversas matrizes ambientais: gases emitidos pelo
solo, gases presentes na gua e no ar.
A descrio e os procedimentos a seguir englobam linhas de estudo
como a emisso de GEE em sistemas agropecurios, o balano das
emisses de GEE e a determinao de fatores de emisso, tambm
para as reas de produo de gros, sendo considerada a utilizao do
mesmo equipamento.
Neste documento estabelecido um procedimento de operao padro
(POP) que no considerado como um substituto do manual do
equipamento GC-CP3800. Estudantes e a equipe tcnica devem ser
treinados pelos supervisores de operao e as metodologias de uso
devem ser documentadas. Esse POP tem o objetivo de promover o uso
seguro do GC-CP3800 para fns de pesquisa, levando em considerao
cuidados como o uso de equipamentos de proteo individual (EPIs),
procedimentos em caso de acidentes e operao do Varian GC-CP3800.
10
Passo a Passo para o Uso do Cromatgrafo Gasoso Modelo GC-CP3800 Varian para
Anlises de Gases de Efeito Estufa (GEEs)
Princpio da cromatografa gasosa
(CG) com detector de chama
(FID) e detector de captura de
eltrons (ECD)
A cromatografa gasosa (CG) uma tcnica de separao e anlise
de misturas por interao dos seus componentes entre uma fase
estacionria e uma fase mvel. De forma geral a tcnica de CG
aplicvel para separao e anlise de misturas cujos constituintes sejam
volteis e que sejam termicamente estveis.
A fase mvel em CG no interage com a amostra, apenas a carrega
atravs da coluna, sendo assim usualmente referida como gs de
arraste. Este deve ser inerte e no deve reagir com a amostra, fase
estacionria ou superfcies do instrumento. Alm disso, deve ser isento
de impurezas que possam degradar a fase estacionria.
A amostra injetada (injetor de amostra) e arrastada pela fase mvel
(gs de arraste) atravs da coluna que contm a fase estacionria
(coluna CG aquecida), na qual ocorre a separao da mistura. As
substncias separadas saem da coluna carreadas pela fase mvel e
passam por um detector que gera um sinal eltrico proporcional
quantidade de substncias separadas na coluna.
A funo do detector situado na sada da coluna de separao medir
os componentes separados presentes no gs de arraste que efui da
coluna. O sinal de sada do detector entra num registrador que gera o
cromatograma. Os dois detectores de ionizao amplamente utilizados
so: o detector de ionizao de chama (FID) e o detector de captura
de eltrons (ECD). A base do detector de ionizao de chama a de
que o efuente da coluna, misturado com hidrognio e ar, produz uma
chama com energia sufciente para ionizar as molculas do composto
que tenham potenciais de ionizao baixos. Os ons assim produzidos
so coletados por eletrodos e a corrente inica resultante medida,
ou seja, a deteco envolve o monitoramento da corrente produzida
pela coleta desses portadores de carga. O FID til para anlises de
amostras orgnicas contaminadas com gua, xido de nitrognio e
11
enxofre e exibe sensibilidade alta (~ 10
-3
s. s
-1
), larga faixa linear de
resposta (~10
7
), alm de possuir baixo custo e baixo rudo. No ECD,
a amostra eluda da coluna passa sobre uma fonte radioativa emissora
B, geralmente Ni63. Um eltron do emissor causa a ionizao do gs
carreador (frequentemente nitrognio) e h produo de uma rajada de
eltrons. Na ausncia de espcies orgnicas, produz-se uma corrente
constante entre o par de eletrodos em decorrncia desse processo de
ionizao. Contudo, a corrente decresce na presena de molculas
orgnicas que contm grupos funcionais eletronegativos que tendem
a capturar eltrons, como os compostos halogenados, quinonas e
grupos nitro que so detectados com alta sensibilidade. Esse detector
insensvel a grupos funcionais como aminas, alcoois e hidrocarbonetos.
Desvios e oscilaes (identifcados por meio do rudo do cromatograma)
na linha base podem ser causados por problemas eletrnicos, impurezas
e sujeiras nos gases e no detector.
O cromatgrafo GC-CP3800 Varian
Os principais componentes de um GC incluem: gases de arraste e gases
para o detector, controladores de fuxos e vlvulas, porta de injeo,
coluna, forno, detector e um registrador de dados, como mostra a
Figura 1.
Gases de arraste e gases para detectores
A fase mvel composta por um gs inerte que passa pelo injetor e
transporta os componentes da amostra para a coluna. O gs carreador
frequentemente usado o hlio, entretanto nitrognio, argnio e
ainda hidrognio podem ser usados. A seleo do gs de arraste
depender do tipo de detector, das caractersticas da coluna, da
matriz da amostra, de condies de segurana e do custo. Se forem
usadas colunas capilares, os gases mais utilizados so o hlio e o
hidrognio, que proporcionam alta efcincia em diferentes fuxos de
gs programados. Se forem usadas colunas empacotadas, com o uso
de nitrognio possvel obter alta efcincia com baixos fuxos.
12
Figura 1. Cromatgrafo gasoso.
Injetores
Existem duas classes de injetores: os de vaporizao e os de injeo
direta na coluna, os chamados on-column. Os injetores de vaporizao
podem ser do tipo split, splitless ou direct, e os injetores on-column, os
do tipo injeo direta na coluna e injeo resfriada cooled. A funo dos
injetores depositar as amostras dentro da coluna de forma homognea
para que se obtenham bandas fnas e com uma boa discriminao entre
os componentes da amostra. Os injetores split e splitless so aquecidos
de forma que causam a vaporizao das amostras antes de entrar na
coluna. As temperaturas dos injetores so geralmente ajustadas para
50 C acima do ponto de ebulio do composto menos voltil da
mistura. Os modos split/splitless determinam a quantidade de amostra
que entra na coluna, de modo que o splitless tipicamente usado para
anlises trao e transfere toda a quantidade de amostra para coluna,
enquanto o split elimina para fora do injetor uma poro de amostra
pr-determinada atravs do split vent e a outra poro para dentro
13
da coluna. O injetor em modo split permite a entrada de amostras
em concentraes que variam de 0,1-10 g.L
-1
sem a saturao da
coluna. A velocidade de injeo dever ser rpida no modo split e lenta
no modo splitless.
Em injetores on-column, amostras lquidas entram diretamente na
coluna ou passam pela slica desativada chamada retention gap. As
amostras so vaporizadas de acordo com o aumento da temperatura
do injetor. Injetores on-column a frio so ideais para amostras sensveis
a calor ou amostras que tem grandes diferenas no processo de
vaporizao de injetores. Injees diretas so feitas em colunas com
grandes dimetros (0,45 mm a 0,53 mm).
A maioria dos injetores tem um aparato chamado liner, que fca dentro
do injetor e protege o corpo do injetor dos diversos tipos de amostras,
mistura amostras e afeta a quantidade de amostras a ser injetada
na coluna.
Colunas
As colunas mais utilizadas em cromatografa gasosa so as colunas
capilares de slica fundida, que contm dentro uma fna camada de
fase estacionria quimicamente ligada e poliamida na superfcie externa
para proteo. A escolha da coluna depender dos componentes da
amostra, do tempo de vida da coluna e do custo.
Os componentes das amostras so primeiramente separados pela
volatilidade do composto e temperatura estipulada. A fase estacionria
deve ser estvel acima de temperaturas requeridas para a separao.
A maioria das colunas pode ser operada a temperaturas acima de
350 C por um perodo curto ou a 325 C por perodo longo. Baixas
temperaturas promovem boa separao, mas proporcionam tempos
longos de corrida cromatogrfca e largos picos. A temperatura do
forno progressivamente aumentada para liberar os compostos menos
volteis.
14
A polaridade da coluna determina a capacidade de separar componentes
polares e apolares. Fases estacionrias mais polares retero compostos
mais polares e fases apolares so conhecidas como mais estveis e
de longa vida, como as de 100% de metilpolisiloxano. A seletividade
da coluna infuencia a separao baseada em foras intermoleculares
como as de disperso, dipolo e ligaes de hidrognio. As foras de
disperso so aquelas que infuenciam primeiramente em todas as fases
estacionrias: pequenas molculas e molculas com baixa solubilidade
tem baixa reteno em decorrncia da disperso.
Fases estacionrias so compostas de material constitudo de
polisiloxanos com metil, fenil, cianopropril ou triforopropil. Os
polisiloxanos que podem ser substitudos nas colunas so mais robustos
e geralmente tm tempo de vida til longo. Colunas constitudas de
polisiloxanos modifcados com arileno no so robustas, mas nelas
ocorrem menos sangramentos (danos na estrutura qumica das colunas)
e so ideais para serem usadas com espectrmetro de massas. Colunas
constitudas com polietileno glicol (PEG) so conhecidas por separarem
compostos em misturas difceis, mas so facilmente degradveis.
Colunas com abertura tubular e camadas porosas (Plot) so apropriadas
para anlises de gases na temperatura ambiente. Fases estacionrias
tambm podem ser ligadas ou no ligadas: as fases ligadas so mais
estveis e preferidas.
As colunas podem ter mais de 100 m de comprimento, com dimetro
entre 0,1 mm e 5 mm. Colunas longas com dimetro pequeno
proporcionam melhor resoluo com custo mais alto do que colunas
pequenas.
Todas as fases estacionrias so degradadas quando expostas ao
oxignio e a altas temperaturas, entretanto algumas so mais sensveis
que outras. A exposio mnima deve ser mantida, garantindo um fuxo
de alta pureza de gs hlio.
15
Detectores
O cromatgrafo gasoso pode ser equipado com diferentes detectores,
dois detectores ou mais com mais de uma coluna. Os diferentes
detectores utilizados em cromatografa gasosa esto listados na
Tabela abaixo.
Tabela 1. Tipos de detectores.
Detector Seletividade
Limite de
deteco
Faixa de
concentrao
Ionizao de
Chama (FID)
Compostos orgnicos 100 pg 10
7
Condutividade
Trmica (TCD)
Detector universal para
compostos no orgnicos
1 ng 10
7
Captura de
eltrons (ECD)
Haletos, nitratos, nitritos,
perxidos, anidros,
organometlicos
50 fg 10
5
Nitrognio-fsforo Nitrognio, fsforo 10 pg 10
6
Fotometria de
Chama (FPD)
Enxofre, fsforo, estanho,
boro, arsnico, germnio,
selnio, cromo
100 pg 10
3
Fotoionizao
(PID)
Alifticos, aromticos,
cetonas, steres, aldedos,
aminas, heterocclicos,
organosulfricos,
organometlicos
2 pg 10
7
Espectrmetro de
massa (MS)
Detector universal para
compostos ionizveis
fg levels 10
7
Fonte: Manual CP3800 Varian.
16
Sugesto de preparao de
amostras
Padres de calibrao
O sinal produzido pelo detector nico para cada composto e deve ser
comparado com padro conhecido para identifcao e quantifcao.
Padres de calibrao devem ser usados e injetados como as primeiras
injees do dia e antes de cada batelada de amostras. A menor
concentrao do padro deve ser injetada primeiro e dever ser igual ou
ligeiramente abaixo da menor concentrao esperada da amostra. O maior
padro deve ser igual ou maior do que o esperado para amostra de maior
concentrao. Os outros padres devem estar entre as concentraes de
menor valor e as de maior valor, devendo ser usado no mnimo 3 padres
(3 concentraes) para elaborao da curva de calibrao.
Padres internos
Se as amostras forem diludas e extradas antes da anlise, um conjunto
de amostras controle padro dever passar pelo mesmo processo
de extrao para determinar os efeitos (as perdas) de preparao da
amostra. Alternativamente, a cada amostra deve ser inserida uma
quantidade conhecida de padro e o clculo da concentrao fnal deve
ser normalizado com base na concentrao interna desse padro. O
uso de padro interno corrige erros relacionados a volumes de injeo e
altamente recomendado por anlises em cromatografa gasosa.
Reviso do software Varian
CP3800
O cromatgrafo gasoso acoplado com o detector FID e ECD
controlado pelo software 5.51 da Workstation, usado para desenvolver
e controlar mtodos em corrida nica ou para mltiplas injees, ver
resultados e modifc-los. As principais aplicaes so acessadas
via Star toolbar, mostradas na tabela abaixo. Esse toolbar tambm
tem botes para mtodos mais recentemente usados e resultados
recentemente vistos.
17
Todas as anlises de amostras e mtodos so controladas pelo System
Control Application e essa janela deve permanecer aberta durante
o funcionamento do mtodo e durante standby. O System Control
Toolbar est localizado abaixo do Star toolbar. A tabela abaixo mostra o
System Control Toolbar e descreve a funo de cada tecla.
Tabela 2. Descrio do Star Toolbar.
Aplicao dos cones Star Toolbar Objetivo
System Control
Controle do Sistema
Monitorar o status do
instrumento e controlar as
anlises de amostras. Essa
janela se mantm aberta
quando se est analisando
ou em standby
Method Editor Editor de
Mtodo
Ver os parmetros do mtodo,
aquisio e manipulao de
dados
Automated File Edition
Edio de Sequncias
Editar listas de amostras
e sequncias para injeo
enquanto o instrumento usa
outro mtodo
Interactive Graphics
Manipulao de
Cromatogramas
Ver o cromatograma da
amostra, fazer a integrao de
picos e recalcular resultados
GC Report Viewer
Relatrio
Ver resultados e modifcar
relatrios, incluindo
informaes do mtodo e
da corrida
GC Batch Reporting
Processamento de
Relatrios
Criar relatrio para um grupo
de resultados
Quick Start Incio
Rpido
Ativar o mtodo e correr uma
nica amostra sem
a necessidade de uma
Sample List
18
Tabela 3. System Control Tool Button.
System Control Tool Button Objetivo
Ilustrao do Toolbar
Criar um novo arquivo, selecionar
previamente um arquivo recm-criado
ou editar notas para um arquivo
Ver, editar ou reativar um mtodo
Ativar um mtodo
Editar a informao de um mdulo
on-line (autosampler ou outro
componente acoplado ao GC)
Injetar uma nica amostra
Iniciar o reclculo da lista, da lista de
amostras, da lista de sequncias (a
lista deve estar aberta)
Pausas na automao. A amostra que
est correndo ser completada e, aps
a automao, a lista de sequncia
ser suspensa. Quando o cone
Begin for pressionado, a sequncia
ser reiniciada do ponto no qual foi
suspensa
Inicia a sequncia de amostras
Imediatamente para a corrida e a
sequncia. Se o cone Begin for
ativado a corrida comea do incio da
lista de sequncia das amostras
19
Perigos em potencial
O cromatgrafo gasoso conectado a diversos cilindros que devem
ser mantidos em locais controlados e seguros. Quando os cilindros se
encontram vazios (200 psi), devem ser devidamente fechados
e lacrados.
O gs hlio que fui na coluna cromatogrfca purifcado e seco por
um tubo conversor que contm zircnio. Esse tubo pode explodir se
aquecido em presena de ar. Nunca desconecte o tubo conversor do
forno se estiver em funcionamento.
O forno do cromatgrafo, o injetor e o detector operam em altas
temperaturas, por isso no se deve abrir a porta do forno ou tentar
acessar o detector ou o injetor enquanto o instrumento estiver
em operao.
Equipamentos de proteo
individual (EPIs)
Equipamentos de proteo individual como jalecos, luvas de nitrila
ou ltex, sapatos e culos de proteo so obrigatrios para toda e
qualquer atividade laboratorial (Figura 2).
Figura 2. EPIs.
20
Procedimentos em caso de
acidentes
Em caso de algum procedimento no usual no equipamento (cheiros,
barulhos, etc.) contatar suporte tcnico. Todos os incidentes devem
ser comunicados ao tcnico de instrumentao e ao responsvel pelo
equipamento e laboratrio para que sejam tomadas aes e medidas
de segurana.
O usurio do cromatgrafo gasoso com detector ECD (captura de
eltrons) deve possuir um certifcado da Comisso Nacional de Energia
Nuclear (CNEN) e o laboratrio deve ser autorizado por essa comisso
para o uso de detectores com fontes radioativas. Qualquer incidente
com esse tipo de detector deve ser comunicado ao responsvel pelo
laboratrio, ao tcnico de instrumentao e CNEN. O monitoramento
com detector Geiger (detector para radiao ), nesse caso, deve ser
feito mensalmente.
Protocolo de uso
Procedimentos para ativao do cromatgrafo
1) Abertura dos gases de arraste (localizados na parte externa do
laboratrio).
Ar sinttico, hidrognio, nitrognio e hlio.
Girar para o sentido anti-horrio a vlvula de abertura marcada em
vermelho na Figura 3.

21
2) Ligar o compressor na tomada 220 V e ativar colocando para baixo a
chave vermelha em destaque na Figura 4.
3) Acionar as chaves internas dos gases de arraste do laboratrio
(Figura 5) colocando na mesma direo da linha do gs.
4) Ligar o computador conectado ao cromatgrafo e acionar a chave da
esquerda para direita para ligar o mdulo do cromatgrafo GC-CP3800
Varian (Figura 6). Obs.: Por segurana esperar 3 minutos para ligar
o mdulo
1
.
1
Existem flamentos dentro do cromatgrafo GC que so danifcados se o equipamento for aquecido
sem os gases de arraste.
Figura 3. Gases de arraste.
Figura 4. Compressor de
ar comprimido.
22
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.

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23
Observar na tela do mdulo a mensagem initializing e esperar a
mensagem Waiting for network connection (Figura 7). Aps essas
mensagens, a tela de controle do sistema (system control) pode ser
acionada no computador (Figura 8).
5) Acionamento do sistema de controle (conexo computador e mdulo
do cromatgrafo GC). Aps todos os procedimentos de conexo do
computador com o mdulo do aparelho, seguir os seguintes procedimentos:
Figura 6. Chave de acionamento
localizada na parte superior
do mdulo do cromatgrafo
GC-CP3800 Varian.
Figura 7. Painel de controle do
mdulo do cromatgrafo
GC-CP3800 Varian.
24
Criar ou copiar o mtodo que vai ser utilizado para anlise (Obs.: como
existem mtodos j confgurados no computador, deve-se fazer cpia de
um mtodo preexistente para manter as informaes de confgurao).
Clicar com boto direito do mouse no boto Iniciar do Windows e abrir o
Windows Explorer abrir a pastar Star selecionar o mtodo desejado
(se possvel um mtodo de uma curva padro com elevado R
2
), copiar
(CTRL + C) e colar (CTRL + V) na prpria pasta (pasta em que se
encontra todos os mtodos executados). Renomear o mtodo com as
informaes de local de coleta e data [extenso (*.MTH)] (Figura 8).
Figura 8. Efetuao da cpia do mtodo de analtico do cromatgrafo GC.
Abrir na tela do computador a janela (view) de controle do sistema (System
Control CP) de automao Star Chromatography Workstation para iniciar
a conexo do computador com o mdulo do cromatgrafo GC (Figura 9).
25
Figura 9. Tela de automao do software Star Chromatography Workstation no
computador.
Esperar a estabilizao das temperaturas do sistema do cromatgrafo GC
antes de ativar um mtodo. Verifcar ao lado esquerdo da tela do System
Control a cor do cone ao lado das indicaes Equilibrating e No fault.
Adota-se: verde para sistema equilibrado e vermelho para no equilibrado.
As temperaturas do forno da coluna, vlvulas e detectores precisam
atingir os padres de temperaturas confgurados no sistema
2
(Figura 10).
Iniciar os procedimento de limpeza da coluna necessrios para eliminao
de possveis impurezas
3
. Executar o mtodo de limpeza da coluna por
2 horas nas seguintes temperaturas: Front-FID = 200 C; Mid-FID =
250 C; Rear-ECD = 300 C.
2
A temperatura um dos fatores determinantes para a separao efciente dos compostos analisados.
Cada detector possui no manual do aparelho uma temperatura considerada efciente para uma boa
eluio das amostras.
3
Com o aquecimento do sistema em altas temperaturas (suportado pela coluna), resduos existentes
ao longo da coluna eluem e so eliminados em amostras de limpeza do aparelho (ar atmosfrico =
branco).
26
Figura 10. a) Sistema
de controle (System
Control CP) de
automao Star
Chromatography
Workstation com
as temperaturas do
forno da coluna,
detectores e vlvulas
no equilibradas para
anlise; b) Sistema
totalmente equilibrado
com destaque para os
cones de verifcao
das temperaturas.
27
Procedimento de limpeza da coluna
1) Aps a estabilizao das temperaturas, abrir o mtodo Limpeza
da Coluna; System Control File Activate Method Activate a
System Control Method File Selecionar o mtodo de Limpeza da
Coluna existente na pasta e clicar em Abrir (Figura 11).
Figura 11. a) Comandos para acionamento do mtodo de limpeza da coluna; b) Sistema do Star
Chromatography Workstation com mtodo de limpeza acionado. Detalhe para as temperaturas
e para a confrmao do acionamento do mtodo no lado direito superior da imagem.
28
Criar planilha e pasta de amostras a serem analisadas: System Control
File Activate Method New Samplelist Create A New System
Control Samplelist File Star Abrir a pasta Data Inserir o nome
da planilha com dados do local e data [extenso (
*
.SMP)] e Salvar
(Figura 12). Aparecer na tela a Generic Samplelist
4
e criar pasta
Data Files Data Files Generation New Folder (Inserir o mesmo
nome criado para a planilha *.SMP) Create A New Folder in the
Selected Diretory OK verifcar o nome da planilha para confrmar o
procedimento e OK (Figura 13).
Digitar na Sample List os padres em triplicata. Antes de passar o primeiro
padro, deve-se executar trs brancos (procedimento de limpeza da coluna
por segurana). Executar dois brancos entre cada padro analisado e,
antes de iniciar as amostras de campo, executar trs brancos
5
(Figura 14).
Figura 12. Comandos para criao da planilha de amostras a serem analisadas.
Obs.: importante fazer monitoramento dos brancos (ar atmosfrico
analisado no aparelho para servir de amostra de eliminao de resduo),
principalmente com a injeo de amostras muito concentradas, exigindo-
-se uma quantidade maior de brancos. Para amostras de baixa e mdia
concentrao, aps alguns testes em laboratrio, verifcou-se a necessidade
de dois brancos entre cada amostra para o CH
4
e um branco para o N
2
O.
4
A planilha *.SMP criada precisa ser colocada em uma pasta, pois o programa no cria pastas
automticas para armazenamento de dados, o que faz com as informaes salvas fquem espalhadas
na pasta central Star.
5
Considerando a concentrao elevada do ltimo padro aps alguns testes, verifcou-se a necessidade
de eliminao de resduo da coluna.
29
Figura 13. a) Generic Samplelist esquerda e comandos de criao da pasta para
armazenamento das amostras analisadas; b) Finalizao da criao da pasta analtica.
30
Etapa analtica
1) Ativao do mtodo de anlise.
Aps as 2 horas de limpeza da coluna, ativar o mtodo copiado segundo
os procedimentos de ativao de mtodo apresentado no tpico Limpeza
da Coluna (Utilizar os mesmos comandos, trocando apenas o mtodo de
anlise. Em lugar de limpeza da coluna.mth, ativar o mtodo desejado) e
esperar estabilizarem as temperaturas do sistema.
2) Ativao da planilha de amostras.
Samplelist (Figura 14): Begin OK; verifca local da pasta e nome OK;
no System Control aparecer a mensagem Not Ready e depois Waiting.
Injetar o primeiro branco quando aparecer a mensagem Waiting (Figura 15).
Figura 14. Comandos para ativao da Samplelist. Destaque para o nmero de brancos a
serem executados de acordo com tipo de amostra (padro e/ou amostra de campo)
6
.
6
Padres de calibrao de gases analticos N
2
O: A= 0,341; B=0,810; C=1,32 e CH
4
: A= 1,96;
B=0,984; C=3,07, valores em ppm.
31
Figura 15. Tela do System Control com detalhe para as mensagens not ready e waiting
direita na parte superior da tela do computador.
Obs: Entre uma injeo e outra somente introduzir amostras quando
aparecer a mensagem waiting.
3) Injeo manual (on-column) de amostras no cromatgrafo
GC-CP3800 Varian.
Injetar no aparelho todos os padres analticos com a intercalao dos
brancos necessrios para calibrao das curvas padro de anlise antes
da injeo das amostras de campo
7
(Figura 16).
Obs.: Os cilindros das misturas de padro analtico de referncia
devem ser armazenados em local de temperatura homognea e sem
interferncia de umidade. Todo o sistema da mistura padro deve ser
bem isolado em termos de septos e vlvulas, pois no pode ocorrer
entradas de ar nos cilindros por causa de contaminao. Por isso,
necessrio realizar vistoria e manuteno nos septos em que se
faz a introduo da seringa com agulha (ultra fne) para retirada do
gs padro. Os padres analticos devem ter alta pureza [Valores de
referncia para pureza de padres (ISO 6141:2000): Baixa= 99,995
(4.5); Mdia= 99,999 (5.0); Alta= 99,999 (6.0)].
7
Aps a introduo no aparelho de todos os padres analticos de alta pureza, pausar as injees e
calibrar a curva padro de anlise. A curva padro precisa ser calibrada todas as vezes que se iniciar
uma nova anlise, pois de acordo com cada momento analtico poder ocorrer variaes no sistema
(ex. corrente eltrica) o que vai interferir na acuraria dos dados analisados. importante deixar
sempre uma amostra a mais na Samplelist sem analisar, pois esta quando totalmente analisada fecha
automaticamente.
32
Figura 16. Cilindros de gases padro de calibrao do cromatgrafo GC e procedimento
de manuseio.
Introduzir a amostra no injetor manual (on-column) com auxlio de uma
seringa de polipropileno de 10 ml
8
que possui uma torneira de trs vias.
Para a injeo, deve-se abrir a torneira da seringa e, posteriormente, abrir
a torneira do injetor e apertar no boto Start do painel de controle do
mdulo do cromatgrafo GC-CP3800 Varian (Figura 17).
Obs.: Para eliminar umidade residual da amostra usa-se drierite no
injetor, que deve ser trocado periodicamente no incio de uma nova
anlise. Para isso, retira-se com uma chave inglesa a porca e a
conexo visualizada no ponto 1 e com o auxlio de um funil coloca-se
o dessecante no ponto 2 (Figura 17). O drierite um dessecante de
alta qualidade
9
feito a partir de 97% de sulfato de clcio (CaSO
4
) e 3%
cloreto de cobalto (CoCl
2
) anidro, quimicamente inerte, exceto para a
gua, e pode ser regenerado. A substituio deve ser feita quando a cor
padro (azul) fcar rosa por causa da absoro de traos de gua (H
2
O).
Recomenda-se regenerao a 235 C ou 450 F em mufa por 2 horas.
8
As amostras devem ser transferidas para as seringa 3 minutos antes das injees para evitar trocas
com o meio ambiente.
9
W.A. Hammond Drierite CO. LTD.
33
Figura 17. Injeo de amostras no cromatgrafo GC-CP3800 Varian.
Calibrao analtica
1) Executar a edio dos cromatogramas por meio dos procedimentos
de integrao cromatogrfca para clculo de rea em volts min
-1
ou
mvolts sec
-1
. Para isso, deve-se abrir o mtodo copiado para a execuo
da anlise de resultados e calibrao da curva padro segundo as
confguraes preexistentes no mtodo.
Clicar em View/Edit Chromatograms abrir Interative Grafc; aparecer a
view Open Mutiplus Data File Fechar Clicar em File e ir em Open
Method Star; selecionar o mtodo copiado [extenso. *mth] Open
para ativar Select Method Data Handing Section e escolher o canal de
identifcao detector (Front; Middle; Rear) OK; confrmar mtodo
ativado na parte superior da tela de automao
10
(Figura 18).
2) Integrao dos cromatogramas dos padres analticos.
Com o mtodo ativado, clicar em Open Chromatogram(s) Open Mutiple
Data Files Star Data; procurar a pasta de anlise, abrir e selecionar
7 padres do menos concentrado para o mais concentrado com duplo
clique clicar em Channel e escolher o identifcador de anlise de
resultados (Front=FID; Middle=FID; Rear=ECD) Open File(s)
Reintegrate Now
11
(Figura 19).
10
O mtodo precisa sempre estar ativado, pois o software precisa da curva padro como referncia
para o clculo de integrao. No caso de calibrao da curva padro o software vai utilizar a curva que
foi salva no mtodo copiado.
11
A linha de integrao cromatogrfca deve ser posicionada tangenciando a linha de base, para isso, deve-se
arrastar a barra amarela e a linha localizada na parte inferior da tela do computador. Deve-se integrar cada
pico antes de efetuar a calibrao, para isso o software permite a integrao de 7 picos por view de edio.
34
Figura 18. Comandos para ativao do mtodo de edio dos cromatogramas. Com
destaque inicialmente sem mtodo e posteriormente com o mtodo ativado no
procedimento de anlise de dados.
3) Calibrao da curva padro com 9 pontos.
Reintegration List Dialog ( ) clicar em Sample Type e selecionar
Calibration para todos os padres na coluna Cal. Level, ordenar os
padres em sequncia crescente (1; 2; 3) em calibration coeffcients,
selecionar Clear Coeffcients at Start of List
12
Calculate Results
aparecer a pergunta: All calibration coeffcients will be cleared - continue
reintegration? Selecionar Sim (Figura 20).
Clicar em Results View Calibration Curve no tpico origin clicar em
Ignore
13
Save Edit Calibration Curve Dialog; aparecer a pergunta:
Write changed record to the fle? Selecionar Sim e clicar em Fechar ( ).
Sem fechar a view Interactive Graphics, voltar para os comandos iniciais
do segundo tpico para incorporar os pontos restantes (Figura 21),
seguindo os procedimentos descritos a seguir.
12
Deve-se excluir a curva padro salva no mtodo copiado para poder confgurar a nova curva de
anlise que fcar salva e servir de parmetro tanto para s injees efetuadas no momento da
anlise quanto para s integraes de dados.
13
Anotar o coefciente de determinao R
2
e a curva linear da anlise estatstica (External Standard
Analysis) descrita na view calibration curve.
35
Figura 19. a) Comandos de edio dos cromatogramas para integrao cromatogrfca
dos pontos da curva padro; b) Detalhe para os procedimentos e parmetros de
integrao: Barra de simetria e linha de integrao, ponto inicial e fnal do pico, linha de
simetria para parmetro de saturao de coluna e cone de integrao (reintegration now).
36
Figura 20. Procedimentos para calibrao da curva padro analtica.
37
Figura 21. View de calibrao fnal de curva padro com sete pontos e com nove pontos.
Destaque para a curva linear e o valor de R2, referncia de acuraria dos pontos inseridos
na curva.
Incorporar os dois pontos restantes para completar a curva de calibrao.
Para acrescentar os dois pontos restantes, devem-se repetir os
procedimentos do segundo tpico Calibrao da curva padro (Integrao
dos cromatogramas dos padres analticos). Na view Open Mutiples Data
Files, clicar em Clear All, selecionar os padres restantes e continuar
conforme os procedimentos do segundo tpico. Em seguida, efetuar
a repetio do terceiro tpico da Calibrao da curva padro view
Reintegration List Dialog; clicar em calibration coeffcients, selecionar
Incorporate New Calibrations Into Data Set e continuar conforme os
procedimentos do terceiro tpico (Figura 22).
Aps a calibrao, anotar as reas dos pontos da curva. Na view
Calibration Curve, executar duplo clique em cima de cada ponto inserido
na curva de calibrao, aparecero dados de rea em mvolts sec
-1
e
concentrao em ppm. Para fnalizar e salvar a curva padro, clicar em
Fechar ( ) Interactive Graphics na janela Save Modifed Method clicar
em Save
14
(Figura 23).
14
Efetuar os mesmos procedimentos repetindo o processo desde o incio para todos os canais a serem
analisados (Front=FID; Middle=FID; Rear=ECD). A opo de troca do canal na view Select Method
Data Handing Section apresentada no primeiro tpico da Calibrao da curva padro.
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4) Confrmao da curva padro.
Aps a execuo das curvas padro para os canais de anlise, deve-se
confrmar se as curvas criadas foram salvas com sucesso.
Para iniciar a anlise das amostras de campo,clicar em View/Edit
Chromatograms abrir Interative Grafc; aparecer a view Open Mutiplus
Data File Fechar Clicar em File e ir em Open Method Star;
selecionar o mtodo copiado [extenso. *mth] Open para ativar
Select Method Data Handing Section e escolher o canal de identifcao
detector (Front; Middle; Rear) OK Results; clicar em View
Calibration Curve, verifcar curva criada e fechar ( ) sem salvar clicar
em Fechar ( ) Interactive Graphics. Repetir os mesmos procedimentos
para todos os canais em anlise.
Incio da injeo das amostras de campo
Aps a calibrao e confrmao das curvas padro, retornar planilha
de amostras que j deve estar com as amostras digitadas (a planilha
precisa ser sempre alimentada com uma amostra a mais para no fechar
automaticamente) e continuar o processo de anlise com as amostras
de campo.
Retirar as amostras do refrigerador (4 C), colocar na sequncia da
Samplelist e organizar prximo do aparelho em ordem de injeo. Dessa
forma, deve-se retirar todas as amostras a serem efetuadas na bateria de
anlise do dia. As amostras devem fcar em ambiente com ar refrigerado,
em temperatura estvel, sem interferncia de umidade.
Para prolongar a integridade dos septos dos frascos de coleta, utilizar
agulha de transferncia do tipo ultra fne, que deve ser empregada
somente para a passagem da amostra dos frascos de coleta para a
seringa. O furo no septo deve ser centralizado (Figura 24).
Cuidado com entupimento de agulhas. Devem-se fazer trocas e vistorias
peridicas no material de anlise: agulhas e septos dos frascos de campo.
Confrmar o mtodo e verifcar a mensagem Waiting no System Control
abrir a Samplelist e observar um (x) ao lado da amostra a ser injetada.
A amostra s deve ser introduzida no sistema se ao lado do nome estiver
aparecendo o cone de amostra atual (x). Quando forem selecionadas
duas ou mais repeties de injeo (ocorre nos brancos) na mesma
amostra, aparecer ao lado do nome a quantidade crescente em nmeros
at chegar na ltima repetio, na qual aparecer o (x) (Figura 25).
41
Figura 24. Organizao das amostras de campo.
Figura 25. Planilha de anlise cromatogrfca ativada para injeo de amostras. Destaque
para os procedimentos a serem verifcados antes da injeo.
42
Procedimentos para desligar o cromatgrafo GC ou
ativar Standy by
1) Ativao do mtodo desligar.
Fechar a Samplelist ( ). No System Control, ir em File Activate
Method Activate a System Control Method File. Selecionar o mtodo
Desligar existente na pasta Star e clicar em Abrir; esperar equilibrar as
temperatura para esfriamento do sistema (Figura 26).
2) Fechamento do sistema: software de automao, gases de arraste e
modulo cromatogrfco.
Fechar ( ) o software de automao Star Chromatography Workstation.
Aparecer a mensagem Shutting Down (Figura 27).
Na parte interna do laboratrio, fechar as chaves dos gases interno
e desligar o mdulo cromatogrfco. Na parte externa, desligar o
compressor e fechar as vlvulas de gases de arraste.
3) Ativao do mtodo Standy by.
Em baterias analticas extensas, adota-se o mtodo standy by. Tal
procedimento permite a utilizao e manuteno da curva padro
calibrao sem alterao das condies de anlise e sistema.
Fechar a Samplelist ( ). No System Control, ir em File Activate
Method Activate a System Control Method File. Selecionar o mtodo
Standy By Novo existente na pasta Star e clicar em Abrir; esperar
estabilizar as temperaturas para esfriamento do sistema (Figura 28).
Esperar esfriarem as temperaturas
15
, desligar as chaves internas do Ar
sinttico, Ar comprimido e Hidrognio e manter todo o sistema ligado
(mdulo cromatogrfco e computador). Na parte externa do laboratrio,
desligar o compressor e fechar os gases de arraste Ar sinttico e
Hidrognio.
15
No mtodo Stand by, como o cromatgrafo GC no vai fcar em anlise durante um tempo,
os detectores so confgurados com as temperaturas desligadas para no fcar aquecido sem
necessidade. Mantendo-se assim a precauo de no danifcar o aparelho por algum problema com os
gases de arraste.
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Procedimentos de segurana e possveis problemas
(troubleshooting)
1) Gases de arraste.
Os cilindros de gs devem ser mantidos na parte externa do laboratrio,
em local sem umidade e luz. Certifque-se de que os cilindros estejam
contidos frmes na posio vertical. Se ocorrer um acidente, o cilindro
for derrubado e danifcar a vlvula, acontecer uma exploso. Deve-se
monitorar os reguladores de presso para saber a quantidade de gs
dentro do cilindro.
Presso padro (entrada no aparelho cromatogrfco) verifcada nos
manmetros das chaves internas dos gases de arraste: Ar comprimido=
500 Kpa; Ar sinttico= 400 Kpa; Hidrognio= 300 Kpa; Nitrognio=
500 Kpa; Hlio= 600 Kpa.
No deixar o comatgrafo aquecer sem a passagem dos gases de arraste
por causa de degradao de componentes internos do aparelho. Na
Figura 29, pode ser visualizada uma indicao de no passagem de gs
de arraste no sistema. Os sinais de automao not ready (aparelho no
ativado para injeo da amostra), ready (aparelho ativado para injeo da
amostra) e run (amostra em anlise) fcam acionados ao mesmo tempo
e todo o sistema trava. Ocorrendo isso, deve-se acionar o mtodo Stand
by e verifcar, primeiramente, os gases de arraste e, posteriormente, o
mtodo confgurado.
Figura 27. Finalizao do software de automao Star Chromatography Workstation.
45
Figura 28. a) Mtodo Stand by ativado com as temperaturas fora do equilbrio;
b) Temperaturas em equilbrio do mtodo Stand by. Detalhe para a indicao off
dos detectores.
46
Figura 29. Sinais de automao not ready, ready e run acionados ao mesmo tempo
indicando algum problema no sistema.
2) Controle da temperatura.
No alterar as temperaturas da confgurao padro de anlise por causa
de risco de degradao da coluna, volatilizao da FE lquida, aumento
da viscosidade dos gases de arraste e consequentemente menor vazo,
no eluio da amostra. A temperatura deve ser mantida com exatido e
preciso de 0,1C.
A temperatura do forno da coluna tem que ser uniforme em seu interior e
no pode ser afetada pela temperatura do injetor e detector.
3) Controle de umidade do ambiente e das amostras.
Verifcar as datas de troca de pr-fltro e substituir em todas as anlises
o drierite do injetor. Os cilindros de padro analtico devem passar por
monitoramento e manuteno em vlvulas e septos para evitar entrada
de O
2
e traos de H
2
O em engates e conexes. Verifcar presso do
manmetro para controle de quantidade de gs interno.
47
4) Fontes de problemas.
As principais fontes de rudos so: erros do operador, contaminao nas
amostras por falta de limpeza nos frascos de coleta, entrada de ar ou
traos de H
2
O por inefcincia de septos, aterramento eltrico e sistema
defciente
16
, provocando alterao da linha de base, contaminao nos
gases de arraste, impurezas acumuladas no detector e no sistema de
fuxo de gases.
5) reas e itens a serem checados.
Gases presses, velocidade linear, fuxo (no detector e injetor).
Temperaturas coluna, injetor, detector, linhas de transferncia.
Linhas dos gases e fltros limpeza, vazamentos, expirao dos fltros.
Consumveis do injetor septos, liners, anilhas, drierite.
Integridade da amostra estocagem, limpeza do material de coleta, septo
do frasco de coleta, procedimentos de coleta.
Seringas tcnica de manuseio, vazamentos, limpeza, agulhas.
Sistema de dados ajustes e conexes.
Resultados analticos
Edio e anlise de cromatogramas view / edit
chromatograms ( )
Aps a fnalizao da etapa analtica no cromatgrafo GC-CP3800 Varian,
necessrio fazer a manipulao e edio dos cromatogramas gerados
para quantifcao da concentrao do analito (ppm) em identifcao.
Na edio e anlise de cromatogramas possvel:
Alterar o modo de integrao cromatogrfca.
Obteno do resultado de rea (volts min
-1
ou mvolts sec
-1
) do pico e
concentrao do analito (ppm).
Alterar parmetros do mtodo de integrao (inibio de solvente,
eventos de tempo, funo zoom, etc.).
Obter a relao sinal/rudo.
16
indicada a existncia de um circuito eltrico separado para o aparelho cromatogrfco para no
haver problemas de oscilao de corrente eltrica, amperagem e tenso do sistema.
48
Nmero de pratos tericos.
Comparar cromatogramas.
Verifcar simetria do pico: gaussian, tailing, leading.
1) Abrir os cromatogramas para anlise de resultados.
Para a execuo da anlise de resultados, segundo as confguraes
preexistentes no mtodo analtico salvo, deve-se fazer a alterao de
integrao cromatogrfca, funo presente na Star Toolbar (Figura 30),
com o mtodo ativado.
Figura 30. Barra de ferramentas da Workstation Varian - Verso 5.0.
A partir da Star Toolbar (pgina de apresentao da Workstation), com
o boto direito do mouse, selecionar Run Application (Figura 31) e View/
Edit Chromatograms ou clicar no cone ( ).
Figura 31. Comandos de entrada na view de edio de cromatogramas.
View/Edit Chromatograms abrir Interative Grafc. Aparecer a view
Open Mutiplus Data File Star Data; abrir a pasta de amostras
analisadas, selecionar os cromatogramas (sete no mximo) com um com
um duplo clique no nome da amostra ou clique no nome do arquivo
Add To List Open File(s) clicar em Channel e escolher o identifcador
de anlise de resultados (Front=FID; Middle=FID; Rear=ECD) Open
File(s) (Figura 32). Em seguida, abrir o mtodo.
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Obs.: Ocorrendo algum problema na seleo do cromatograma em
anlise, deve-se clicar em File Names Clear ou Clear All (Figura 33).
Figura 33. Comandos para desfazer a seleo de cromatogramas.
2) Abrir o mtodo de anlise de resultados.
Clicar em File e ir em Open Method Star; selecionar o mtodo criado
[extenso. *mth] Open para ativar Select Method Data Handing
Section e escolher o canal de identifcao - detector (Front; Middle;
Rear) OK; confrmar mtodo ativado na parte superior da tela de
automao

(Figura 34).
Clicar na barra de rolagem para mudar unidade de volts min
-1
para
mvolts sec
-1
para poder executar a integrao cromatogrfca. Com a
visualizao do pico, colocar o mouse no centro do pico em anlise e
observar um quadro de informao no lado direito inferior da tela do
computador (Figura 35).
3) Realizar integrao cromatogrfca
Para obter os resultados de rea e concentrao do analito analisado,
deve-se alterar as integraes cromatogrfcas. A linha de integrao dos
cromatogramas precisa ser posicionada tangenciando a linha de base.
51
Figura 34. Procedimentos de ativao do mtodo de anlise.
Figura 35. Procedimentos de mudana de grandeza para integrao e anlise de
resultados.
52
Aps abrir os cromatogramas a serem integrados e o mtodo para anlise
(o software precisa da curva padro como referncia para o clculo de
integrao), clicar na barra de simetria do pico ( ) e ajustar
colocando centralizada partindo do ponto inicial do sinal do pico ao ponto
fnal. Efetuar o mesmo procedimento com a linha de integrao
( ); em seguida, clicar no cone localizado na Star Toolbar
Reintegrate Now ( ) (Figura 36).
Figura 36. a)
Demonstrao do
ajuste da linha de
base para integrao;
b) Picos integrados.
53
Obteno do resultado
Clicar no centro do cromatograma com o boto direito do mouse
View Results Only Channel Front-Fid Results; escolher o canal de
identifcao detector (Front; Middle; Rear) em Channel. Anotar em
uma planilha a rea (mvolts sec
-1
) do pico e a concentrao do analito
(ppm) observada no relatrio de anlise (Figura 37).
Figura 37. a) Comandos para abrir a view de resultados; b) Relatrio de resultado
analtico da amostra.
54
Elaborao de relatrio de anlise (standard reports)
O relatrio de anlise contm informaes sobre o cromatograma
analisado, podendo ser alterado em funes bsicas de layout.
Clicar com o boto direito do mouse no Start Toolbar; selecionar Run
Application Standard Reports ou clicar no cone ( ) Open Data
File Star Data; abrir a pasta de amostras analisadas, selecionar os
cromatogramas com um com um duplo clique no nome da amostra
Open File. Aparecero duas views, uma referente ao cromatograma e
outra ao relatrio de anlise (Figura 38).
Para alteraes no relatrio de anlise (ttulo do relatrio de anlise,
opes do cromatograma e opes do resultado), clicar em Options na
barra de ferramentas, escolher as funes de opo de edio desejadas
do Standard Reports para alterar e fnalizar clicando em OK (Figura 38).
Descrio das funes de opo de edio do Standard Reports:
Report Title
Possibilita alterar o ttulo do cromatograma analisado.
Chromatogram Format
Start Time e End Time: permite selecionar o intervalo de tempo de
impresso do cromatograma.
Auto Scale: Enquadra automaticamente o maior pico do cromatograma na
escala do papel. A Workstation estabelece automaticamente o valor para
a Atenuao (Initial Attenuation) e para o Offset (Zero Offset). O valor de
atenuao e Offset tambm pode ser estabelecido manualmente.
Length in Pages: permite selecionar em quantas pginas o cromatograma
ser impresso. A Workstation estabelecer um valor automtico para
a velocidade do papel ou pode-se estabelecer um valor fxo para a
velocidade do papel por meio de lnitial Chart Speed, desabilitando a
funo Length in pages.
Chromatogram Annotations: possibilita selecionar o que ser visualizado
no cromatograma, como Tempo de Reteno, Eventos de Tempo,
Eventos do Cromatograma, Nome dos Picos e Linha de Base.
Results Format
Amount Units: permite dar nome unidade de medida dos picos.
Number of Decimal Digits: possibilita estabelecer o nmero de casas
decimais.
Run Documentation: admite selecionar o que ser impresso no relatrio,
como Histrico da Corrida, Histrico de Erros, Relatrio de Calibrao,
Histrico de Alteraes e Notas sobre a amostra.
55
Figura 38. Standard Reports e a funo de opes para edio de relatrio.
56
Para converter os resultados em Ascii, encaminhar os dados do relatrio
no Word ou em uma planilha Excel e imprimir, clicar em File na barra de
ferramentas (Figura 39).
Figura 39. Comandos para converso do arquivo gerado em outros formatos (word e
excel) e impresso.
Outras funes que podem ser
alteradas ou monitoradas
O programa de automao e anlise cromatogrfca Workstation Varian
- Verso 5.0 possibilita monitorar confguraes de acurcia de dados
ou alterar qualquer parmetro de anlise e, posteriormente, reintegrar
um ou mais cromatogramas.
1) Alterao de parmetros de confgurao.
Set password (Confgurar senha)
Method notes (Quadro de anotaes do mtodo)
57
Integration parameters (Parmetros de integrao)
Peak table (Quadro de pico)
Time events (Eventos de tempo)
Calibration setup (Confgurao de calibrao)
Verifcation setup (Confgurao de verifcao)
Fill peak table (Alterar o quadro de pico)
Interative Grafc clicar em Edit Method acesso s janelas da seo
Data Handling do Mtodo analtico. Depois de alterar qualquer parmetro
de anlise, clicar em Results e ir em Reintegration List, selecionar a
opo Clear Coeffcients At Start Of List Calculate Results Save
Changes (Figura 40) ou Reintegrate Now ( ) (modifcao de apenas um
cromatograma).
Figura 40. Procedimentos para efetivar as alteraes feitas nos parmetros de anlise.
2) Adicionar eventos de tempo (alterao de parmetro de integrao).
Alteraes de parmetros de anlise podem ser executadas para melhor
obteno dos resultados. Dessa forma, possvel incluir itens no
mtodo de integrao utilizado.
58
Interative Grafc clicar em Edit Method Add Method Item; selecionar
o evento a ser adicionado (Figura 41). Depois de alterar qualquer
parmetro de anlise, clicar em Results, ir em Reintegration List
selecionar a opo Clear Coeffcients at Start of List Calculate Results
Save Changes ou Reintegrate Now ( ) (modifcao de apenas um
cromatograma).
Figura 41. Comandos para adio de eventos de tempo no mtodo em anlise.
Descrio dos tipos de eventos:
Add Peak Table Entry (Adicionar Entrada da Tabela de Pico Barra de
simetria amarela) .
Add Width (Adicionar Barra de Largura de Pico).
Add Integration Inhibit (Adicionar Linha de Integrao de Inibio de
Pico).
Add Sovent Reject (Adicionar Linha de Rejeio de Solvente).
Add Group Peak (Adicionar Linha de Integrao de Pico Agrupado
Integrao nica).
59
Add Valley Baseline (Adicionar Linha de Base de Vale Cria uma janela
de tempo no qual todos os pontos de vale so forados a comportar-se
como pontos de referncia para a integrao do pico).
Add Forced Peak (Adicionar Linha de Integrao de Pico Linha
Vermelha) .
Add Split Peak (Adicionar Barra de Diviso de Pico).
Add Horizontal Forwards (Adicionar Linha Horizontal de Integrao para
Picos Adiantados).
Add Horizontal Backwards (Adicionar Linha Horizontal de Integrao para
Picos Atrasados).
Add Horizontal Minimum (Adicionar Linha Horizontal de Integrao para
Picos Mnima Deteco).
Add Signal to Noise Ratio (Adicionar Barra de Sinal-rudo).
Add Tangent Percent (Adicionar Barra de percentagem de um pico
referncia em relao a um pico tangente).
Add Peak Reject (Adicionar Barra de Pico Rejeitado Elimina picos muito
pequenos a partir do relatrio para garantir que os picos insignifcantes
no sejam confundidos com picos de interesse).
3) Parmetros de monitoramento.
Para monitoramento possvel: verifcar a simetria do pico; fazer
comparaes de cromatogramas [Verifcao de tempo de reteno,
linha de base, rudo, etc.] (Figura 42); verifcar detalhes de um
cromatograma por meio da funo zoom; conferir nmeros de pratos
tericos.
Para selecionar o zoom manter pressionado o boto esquerdo do
mouse e selecionar o cromatograma ou a parte onde vai ser feito o zoom
(Figura 43). Para sair da funo zoom, deve-se efetuar um duplo clique
no cromatograma. Para sair do zoom, dar um duplo clique no mouse.
Obs.: Para mudar a cor dos cromatogramas clicar em View e ir em
Preferences.
A verifcao de nmeros de pratos tericos feita na funo Produce
system suitability report. Clicar com o boto direito em cima do
cromatograma Produce System Suitability Report Open Method
Fechar ( ) System Suitability (Figura 44).
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Figura 42. a) Procedimentos para verifcao da simetria do pico; b) Comparao de
cromatogramas diferentes.
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3
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Figura 44. Comandos para abrir a funo Produce System Suitability Report.
Clculos de concentrao no Excel
Para calcular a concentrao das amostras no Excel, deve-se obter os
resultados de rea e os valores de concentrao dos padres analisados
na corrida de amostra. Os padres analticos possuem valores
conhecidos, o que permite o clculo de inclinao e interceptao
(coefcientes a e b) da reta de regresso.
63
Como funciona no Excel
Os coefcientes da reta de regresso (inclinao e interseo) so
utilizados para calcular a concentrao do analito (Figura 45).
Concentrao = (rea - ) /
* Onde: rea a rea do pico integrado; representa o coefciente
linear da reta de regresso (a interseo em y, ou seja, o valor que
y assume quando x for zero); representa o coefciente angular (
a inclinao da reta, mede o aumento ou reduo em y para cada
aumento de uma unidade em x) da reta de regresso.
Figura 45. Tabela para clculos dos coefcientes da reta de regresso.
64
Possveis problemas
Erro de integrao
Antes de integrar os cromatogramas preciso ativar o mtodo, pois dessa
forma o programa de automao vai se basear na curva padro, facilitando
para o operador a visualizao do incio do sinal. Recomenda-se ter um
parmetro para integrar todos os picos de uma anlise (Figura 46).
Figura 46. Procedimentos de integrao cromatogrfca.
Deriva na linha de bases (Drift)
Pode ocorrer em razo da volatilizao da FE lquida ou alternncia de
corrente eltrica (Figura 47). No interfere diretamente no resultado, porm
pode degradar componentes do aparelho, como a coluna cromatogrfca.
Rudos em cromatogramas
Os rudos podem ocorrer em decorrncia de vazamentos no sistema,
entrada de ar ou umidade no sistema, frascos de coleta contaminados
ou sujos, septos dos frascos com vazamento (Figuras 48 e 49).
Tais problemas levam ao descarte da amostra analisada por erro de
resultado de rea e, consequentemente, de concentrao.
65
Figura 47. Demonstrao de ocorrncia de Drift.
Procedimentos de segurana
importantes antes da coleta
Organizao e limpeza do material de coleta: o material de coleta (frascos
de coleta de amostras, septos, seringas, agulhas, bomba de vcuo,
termmetros, pilhas, rgua de mensurao, etc.) em laboratrio deve
passar por limpeza e monitoramento para substituio (se necessrio).
Pesagem dos frascos: efetuar pesagem em balana analtica em
laboratrio at a estabilizao (segurana de no entrada de ar e
integridade de septo).
Verifcao da bomba de vcuo: deve-se verifcar a efcincia da presso
da bomba de vcuo e possveis impurezas na mangueira e agulha.
Limpeza dos frascos e seringas: colocar os frascos em soluo no
eletroflica por 24 horas, posteriormente, efetuar dois enxagues de
lavagem e calcinao em mufa (500 C/ 6 horas) para eliminao de
compostos orgnicos.
Eliminao de fatores de umidade: deve-se manter os frascos em estufa
65 C at serem fechados e monitorados em estabilizao de peso.
66
Figura 48. Exemplos de cromatogramas com rudos.
67
Figura 49. Cromatogramas prejudicados por ocorrncia de impurezas e rudos.
68
Coleta de amostras em campo
Para a determinao do fuxo de gs, as cmaras devem ser instaladas
24 horas antes da coleta, com auxlio de um nvel de pedreiro, suporte
de madeira e porrete para fncar as bases no cho sem danifcar. Se
ocorrer presena de material vegetal vivo no local de instalao das
cmaras, deve-se cortar na base do coleto da plntula sem danifcar a
raiz o que for encontrado na parte interna da cmara com uma tesoura
(para no comprometer os espaos porosos do solo em avaliao).
necessrio vedar a parte externa da lateral das bases das cmaras com
solo compactado e no alterar o sistema instalado aps o
fnal do processo.
As coletas so realizadas 0, 10, 20 e 30 minutos aps colocao
da cpula sobre as bases em seringas de polipropileno de 20 ml.
Posteriormente, no momento da coleta, as amostras so transferidas
para frascos de borosilicato de 14 ml com septos vacutainer. Antes da
transferncia das amostras, em campo, deve ser feito vcuo com uma
bomba de vcuo manual em todos os frascos de coleta e o material
amostrado tem que ser colocado sobre presso nos frascos de coleta.
Os frascos precisam ser conduzidos refrigerados ( 4 C) ao
laboratrio em que os teores de concentrao dos gases sero
quantifcados.
Para monitoramento do experimento, necessrio coleta de dados
de pluviometria local, temperatura do solo com termmetros de solo
analgico, umidade e temperatura atmosfrica com psicrmetro e
umidade atual do solo (profundidade = 010 cm).
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