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INTRODUCCION ................................................................................................................................... 2
I. TITULO ......................................................................................................................................... 3
2.1. OBJETIVOS GENERALES ....................................................................................................... 3
2.2. OBJETIVOS ESPECIFICOS ...................................................................................................... 3
III. MARCO TEORICO ..................................................................................................................... 3
3.1. Medio de cultivo.................................................................................................................. 3
3.2. De la esterilizacin .............................................................................................................. 3
3.3. Mtodos de aislamiento ......................................................................................................... 4
3.4. AUTOCLAVE ............................................................................................................................. 5
3.5. Materiales ............................................................................................................................... 5
IV. MATERIALES Y METODOS ........................................................................................................ 5
4.1. MATERIALES UTILIZADOS .................................................................................................... 5
4.2. METODOLOGIA .................................................................................................................... 5
V. PROCEDIMIENTO ......................................................................................................................... 6
VI. RESULTADOS ........................................................................................................................... 6
VII. CONCLUSIONES ....................................................................................................................... 7
VIII. DISCUSION ............................................................................................................................... 7
IX. RECOMENDACIN ................................................................................................................... 7
X. BIBLIOGRAFIA .............................................................................................................................. 8
XI. ANEXOS ................................................................................................................................... 9









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INTRODUCCION

Un medio de cultivo intenta el crecimiento y reproduccin in vitro de las bacterias, para observar
sus propiedades y conseguir un mejor estudio bioqumico e Inmunolgico, al contar con material
en cantidad suficiente. Por ello constare de algunas propiedades (pH adecuado, sales, nutrientes,
condiciones, que sern las mas idneas para las bacteria que deseamos estudiar y se citan en cada
una de ellas en particular.
Los medios de cultivo se dividen por su finalidad en : medios de enriquecimiento que tratan de
aumentar en nmero de bacterias existentes, si consideramos que se encuentran en cantidad muy
exigua, a la vez que inhiben la flora de asociacin acompaante ( y de aislamiento que tienen por
fin conseguir colonia o clon, es decir grupo de bacterias procedentes de una sola, con todas sus
propiedades).
Los medios selectivos son aquellos que poseen algn componente que permite crecimiento de una
especie bacteriana, carcter de importancias para su identificacin, y los diferenciales, aquellos
que las diversas especies que hay que testare alteran su forma distinta, por lo que suelen llevar
indicadores sustancias que varan su coloracin segn el pH del medio) u otros ndices de
reacciones qumicas definidas.
Por medio de este informe tambin se proceder hacer un anlisis de bacterias que existen en la
Regin de Moquegua, para saber en que condiciones existen, y por medio de este proceso, se
determinara su cuantificacin, y reconocimiento de que tipo es y sus caractersticas fsicas.












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PRACTICA N 02
I. TITULO
AISLAMIENTO DE MICROOGRANISMOS DEL MEDIO AMBIENTE
II. OBJETIVOS
2.1. OBJETIVOS GENERALES

Aislar al microorganismo en el medio ambiente de Moquegua.
2.2. OBJETIVOS ESPECIFICOS

Evaluar cualitativamente los microorganismos que se encuentran en el medio
ambiente.
Preparar los medios de cultivo para el desarrollo de los microorganismos.
III. MARCO TEORICO
3.1. Medio de cultivo
El medio de cultivo se emplea para tres fines principales:
Desarrollar y conservar cultivos
Estudiar la accin de los microorganismos sobre alguna sustancia del medio.
Facilitar la produccin por los microorganismos en algn producto
determinado o combinacin de productos.
Los medios de cultivo varan en complejidad, la cual va desde los tejidos hasta las simples
mezclas de sales orgnicas. Muchos microorganismos requieren slo los medios de cultivo
orgnico, dos meses otros necesitan medios especiales para su desarrollo o para ayudar a la
identificacin cuando las caractersticas del cultivo y la reaccin es especificas son los factores
determinantes.
En el medio de cultivo debe estar exento de sustancias que puedan inhibir el desarrollo de los
microorganismos que han de cultivarse.

3.2. De la esterilizacin
La autoclave es un instrumento para hervir el agua bajo presin y poder esterilizar
estos materiales de vidrio y los medios de cultivo, es decir eliminar todos los
microorganismos presentes.
Para el manejo de la autoclave el deben entender en cuenta lo siguiente:
Comprobar el nivel de agua y la carga
Cerrar hermticamente la tapa
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Abrir la vlvula vapor y encender
Una vez que salga el vapor por la vlvula, esperar al menos 5 minutos para
expulsar todo el aire y cerrar la vlvula.
Esperar que el manmetro de descienda a cero y abrir entonces la llave de
vapor.
Esperar uno cinco minutos y abrir la tapa, y despus de unos minutos quitar la
carga.

3.3. Mtodos de aislamiento
Mtodo francs (Estra compuesta)
Se flamea el asa y se toma la muestra del material a estudiar.
Coloque el inoculo en uno de los extremos de la caja de Petri con el medio de cultivo
indicado.
Extienda el cultivo haciendo 4 o 5 estras paralelas, sin romper el agar.
Flamee de nuevo el asa enfrela y sin tomar ms muestra, haga 4 o 5 estras paralelas
formando un ngulo recto con las anteriores. Este paso se repite hasta cubrir toda el
rea de la caja.
Mtodo clsico (estra simple)
Flamee el asa y se toma muestra del material a estudiar.
Extienda de un extremo a otro formando lneas en zigzag hasta cubrir toda el rea de
la caja.
Cultivo en agar inclinado
Rotule el tubo con su nombre, el nombre del germen que va inocular y la fecha en que
se hace el inoculo.
Con la mano derecha tome la aguja de inoculacin y flamela. Sin soltarla, djela
enfriar.
Sostenga el tubo con el cultivo en la mano izquierda, remueva el tapn con el meique
de la otra mano y sostngalo de tal manera que no toque ninguna superficie.
Flamee la boca del tubo.
Retire con el agua de inoculacin una porcin de la colonia. Flamee nuevamente la
boca del tubo. Tpelo y descrtelo.
Toma el tubo a inocular, destpelo, flamelo e inoclelo, haciendo una estra en su
superficie en lnea recta.
Flamee de nuevo la boca del tubo, tpelo y colquelo en la gradilla. Antes de descartar
la guja de inoculacin, esterilcela.
Incube a 37 grados centgrados por 24 a 48 horas.
Describa las caractersticas del crecimiento bacteriano en agar inclinado.

Cultivo en agar nutritivo
El crecimiento de las bacterias en medios lquidos se manifiesta por la aparicin de:
turbidez o sedimento, velo en la superficie del medio y olor caracterstico.
Para la siembra proceda de igual manera que en el caso anterior pero utilizando el asa
y agitndola en un medo lquido. Incube a 37 grados por 24 o 48 horas, interprete los
resultados.

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3.4. AUTOCLAVE

Una autoclave es un recipiente de presin metlico de paredes gruesas con un cierre
hermtico que permite trabajar a alta presin para realizar una reaccin industrial,
una coccin o una esterilizacin con vapor de agua.
Las autoclaves funcionan permitiendo la entrada o generacin de vapor de agua pero
restringiendo su salida, hasta obtener una presin interna de 103 kPa, lo cual provoca
que el vapor alcance una temperatura de 121 grados Celsius. Un tiempo tpico de
esterilizacin a esta temperatura y presin es de 15-20 minutos. Las autoclaves ms
modernas permiten realizar procesos a mayores temperaturas y presiones, con ciclos
estndar a 134 C a 200 kPa durante 5 min para esterilizar material metlico
3.5. Materiales
PLACA PETRI.-Son utilizadas en bioqumica para llevar a cabo cultivos de
microorganismos.
ERLENMEYER.-Son matraces de paredes rectas, muy usados para las valoraciones, se
pueden calentar directamente sobre la rejilla.
PROBETAS.-Tienen forma cilndrica, y suelen estar graduadas se utilizan para medir
lquidos cuando no es necesaria una gran precisin.
BAGUETA.-Varilla de Vidrio utilizada para agitar soluciones o lquidos, con el fin de
homogenizar
COCINA ELECRICA.- En el laboratorio, se utilizan generalmente para calentar el
material de vidrio o su contenido. Poseen un selector de potencia que permite ajustar
la emisin trmica y el tiempo necesario para calentar un determinado recipiente.

IV. MATERIALES Y METODOS

4.1. MATERIALES UTILIZADOS
La placa Petri
Matraz Erlenmeyer
Bagueta
Cocina elctrica
Algodn
Agar plate count
Agua destilada
4.2. METODOLOGIA

A) Preparacin del medio de cultivo
En un Matraz disolver el Agar en polvo con agua destilada, luego llevar al fuego
para su completa disolucin. Tapar la boca del Erlenmeyer con cierta cantidad de
algodn.
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B) Esterilizar el medio de cultivo y las placas Petri
C) Plaquear y fijar un lugar determinado del ambiente que se quiera analizar dejando
al descubierto las placas Petri en un espacio de 5 a 10 min. Cumplido el tiempo
necesario, anotar el lugar, fecha y nombres del estudiante, luego incubar a una
temperatura de 25 a 30 grados por un espacio de 4 5 das.
D) Observar el desarrollo de colonias y determinar:
Nmero de colonias.
Frecuencia de tipo de colonias.
Caractersticas particulares: color, aspecto general, etc.

V. PROCEDIMIENTO

Primero se lav el matraz Kimax de 350 mL, luego taramos el matraz, se pes para el
medio con 9.347 g, su nombre fue el Agar base Baird-Parker, se complet a 150 mL de
solucin de volumen en el matraz, con agua destilada.
Se calent en una cocinilla por 9 minutos y 32 segundos, terminando el medio, lo
tapamos con papel aluminio.
En seguido fuimos donde el otro laboratorio, para poder esterilizar en una autoclave,
lo que hicimos ah fue quitar los tornillos que mantienen cerrado a la autoclave,
Recordemos que para abrir o cerrar la autoclave tenemos que ajustar
intercaladamente sus tornillos, visualizamos y vimos que la temperatura y la presin
cumplen con las necesidades de nuestra practica as que se puso a las placas Petri
junto con el matraz, dentro de la autoclave y lo regulamos a 110C, esperamos hasta
que empiece a salir un poco de vapor para sellarlo con seguro y recin contar los 5
minutos.
Antes la autoclave no mostraba variacin de la presin debido a que vlvula estaba
abierta, esperamos los 5 minutos y la autoclave mostraba la unidad en MPa (mega
pascales) lo cual indicaba una presin de 0.025 MPa con una temperatura de 110C
final.
Finalmente sacamos la placa Petri y el matraz Erlenmeyer que contena el nutriente
para la bacteria, lo dejamos enfriar solo un poco para que sea manejable el matraz lo
pusimos encima de una cocinilla para poder verter el nutriente en las placas Petri y
echar aprox. 20 mL, esto fue con el fin de que no se contaminara la placa, luego nos
fuimos a cada lugar donde haya presencia de gran cantidad de microorganismos, en
este caso se escogi el bao de hombres de la Universidad Nacional de Moquegua,
para dar a final la presencia de microorganismos y hacer su conteo respectivo.

VI. RESULTADOS

No se encontr ninguna bacteria en todo el contorno de la placa Petri durante una
semana, entonces decimos que:
Au/20g de muestra.
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VII. CONCLUSIONES


Se prepar el medio de cultivo para desarrollar bacterias.
No se pudo aislar microorganismos del medio debido a factores externos que
imposibilitaron su realizacin.
No se pudo evaluar ninguna caracterstica cualitativa del microorganismo
debido a su ausencia.
VIII. DISCUSION

Segn la bibliografa investigada las condiciones generales de un microorganismo, las presentaba
el medio donde trabajamos es decir en el laboratorio, sus nutrientes, su pH, su temperatura,
entonces donde fue el posible el fallo es en el medio donde aislamos a las bacterias, que fue el
lugar de los baos de la UNAM , ya que para que no haya presencia de bacterias en un lugar
especfico debi haber sido desinfectado unos das antes por lo que an quedaba esa sustancia
que elimina alguna presencia de microorganismo a lo cual por esa misma razn an se halla
dejado por 5 minutos en ese medio nada se pudo adherir a la placa con el nutriente, ya que
despus de la semana el medio de cultivo, presentaba rigidez y buena consistencia en el gel de
Agar, se descarta que fue el medio la causa de que no halla presencia de bacterias, a la vez no
presentaba cambios de color por degradacin, la temperatura estaba acondicionada a 30 C
temperatura ptima para su crecimiento . Teniendo en cuenta esto se mantiene y concluye que el
medio estaba desinfectado en consecuencia no hubo mucho presencia de microorganismos para
aislar.

IX. RECOMENDACIN

Cada persona que est en laboratorio no debe de porque asomarse a la
ejecucin del equipo para observar ya que priva a los dems la vista del
equipo , para sus dems compaeros que tambin desean ver, en vez de
ponerse en distancias cortas, es preferible alejarse moderadamente.
Cada personal debe de tener sus mascara y sus guantes, con el fin de no
contaminarse, recordemos que estamos trabajando con microorganismos.
Que afectan la salud del hombre
Que cada persona empiece a portar su bitcora para profundizar esta parte de
prctica en clases.



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X. BIBLIOGRAFIA

Besednjak Dietrich, Alejandro (2005). 9. Autoclave. Materiales compuestos: procesos de
fabricacin de embarcaciones. Ediciones UPC. p. 132.
Clinica, M. (2012). Medios de cultivo. Recuperado el 19 de Mayo de 2014, de
http://asignatura.us.es/mbclinica/docs/recursos/12/medios-de-cultivo.pdf
elizabethivon123. (Noviembre de 2012). buenas tareas, ensayos. Recuperado el 20 de mayo de
2014, de Caracteristicas Bacterias Aerobias Mesofilas:
http://www.buenastareas.com/ensayos/Caracteristicas-Bacterias-Aerobias-
Mesofilas/6624241.html
Jaifran, A. V. (22 de Abril de 2010). Cultivo y aislamiento de bacterias. Recuperado el 2014 de
Mayo de 21, de http://www.monografias.com/trabajos-pdf4/cultivo-y-aislamiento-
bacterias/cultivo-y-aislamiento-bacterias.pdf
vsquez, I. (19 de Marzo de 2009). Bacterias patgenas en alimentos. Recuperado el 20 de Mayo
de 2014, de http://contaminacionalimentaria.blogspot.com/.
Grant W. D., 1989. Microbiologa Ambiental. Ambientes extremos. Ed. ACRIBIA Capitulo 3.
Atlas Bertha, 2004 Ecologa microbiana y microbiologa ambiental e: eDadisson wesley.
Atlas, R. M. y bartha, R. 2002 Ecologa microbiana y ambiental. Person Educacin. S:A:, Madrid,











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XI. ANEXOS

11.1. Definir y dar ejemplos:
a) Bacterias mesfilas
Son bacterias que se multiplican en aerobiosis, que pueden ser patgenas o saprofitas e incuban
en temperaturas de 15 y 30 C a menudo indican materias primas contaminadas o tratamientos no
satisfactorios desde el punto de vista sanitario.

b) Bacterias termfilas
Las bacterias termfilas son aquellas que se desarrollan a temperaturas superiores a 45C,
pudiendo superar incluso los 100C (hipertermfilos) siempre que exista agua en estado lquido, lo
que se consigue si la presin es elevada como ocurre en las profundidades ocenicas.
c) Bacterias psicrfilas
Psicrfilos, son organismos capaces de vivir a temperaturas por debajo de los 5 C. A veces se los
llama crifilos (amantes del hielo). Sus temperaturas mnimas de desarrollo van de -5 a +5 C, sus
temperaturas ptimas de desarrollo se encuentran entre 12-15 C y sus temperaturas de
desarrollo mximas son de 15-20 C
Hay dos tipos de psicrfilos:
Psicrfilos obligados. Su temperatura ptima est en torno a los 15-18 C, aunque viven
perfectamente a cero grados e incluso a temperaturas ms bajas; un ejemplo es Flavobacterium.
Hay algunos cuya temperatura ptima todava es ms baja, los llamamos psicrfilos extremos, un
ejemplo es Polaromonas vacuolata, que vive en las aguas de la Antrtida; su temperatura ptima
es de 4 C y la mxima que resiste es de 14 C (no sobreviven por encima de esta temperatura).
Psicrfilos facultativos. Como su nombre indica tienen la facultad de resistir el fro, pero su
temperatura ptima es ms alta, en torno a los 20-30 C. Estos organismos son los culpables de
que los alimentos se estropeen en los frigorficos.ces de vivir a temperaturas por debajo de los 5
C. A veces se los llama crifilos (amantes del hielo). Sus temperaturas mnimas de desarrollo van
de -5 a +5 C, sus temperaturas ptimas de desarrollo se encuentran entre 12-15 C y sus
temperaturas de desarrollo mximas son de 15-20 C
4.2 Indicar las diferencias entre mohos y hongos. Ponga ejemplos
MOHO
El moho es un hongo que se encuentra tanto al aire libre como en lugares hmedos y con baja
luminosidad. Existen muchas especies de mohos que son especies microscpicas del reino fungi,
que crecen en formas de filamentos pluricelulares o unicelulares. El moho crece mejor en
condiciones clidas y hmedas; se reproducen y propagan mediante esporas. Las esporas del
moho pueden sobrevivir en variadas condiciones ambientales, incluso en extrema sequedad, si
bien sta no favorece su crecimiento normal. En este micelio se producen elementos de
propagacin o propgulas que pueden ser: esporas, conidios, fragmentos de micelio, esclerocio,
etc.
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Los ms representativos son Epidermophyton, Microsporum y Trichophyton.
HONGOS
Son organismos sin clorofila, compuestos generalmente por unidades denominadas hifas, y que se
reproducen fcilmente mediante tipos diferentes de esporas. La ausencia de clorofila en sus
clulas (lo que les imposibilita para sintetizar compuestos orgnicos) los separa de los organismos
vegetales, la presencia de esporas como unidades reproductoras, los separa de los animales.
Ejemplos de hongos: Ascomycetes y Basidiomycetes [Aphyllophorales), Boletales ,Gasterales,
Russulales.

4.3 Dibujar las diferentes estructuras bacterianas



















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Fig1. Solucin-Medio Agar Parker-Baird fig3. Graduacin de la autoclave.







Fig2. Placas y matraz esterilizado