125

Avaliao do efeito anticarcinognico do ltex do

avels (Euphorbia tirucalli), por meio do teste para
deteco de clones de tumor (warts) em
Drosophila melanogaster

Evaluation of the anticarcinogenic effect of the latex of avels
(Euphorbia tirucalli), through the test for detection
of tumor clones (warts) in Drosophila melanogaster


Elcio Moreira Alves
Graduando em Medicina pelo Centro Universitrio de Patos de Minas.
e-mail: jrelcio@hotmail.com

Jlio Csar Nepomuceno
Professor Associado do Instituto de Gentica e Bioqumica da Universidade Federal de
Uberlndia. Professor Titular do Centro Universitrio de Patos de Minas.
e-mails: nepomuceno@ufu.br; jcnepomuceno@unipam.edu.br

_____________________________________________________________________________________

Resumo: O avels (Euphorbia tirucalli) uma planta de origem africana amplamente utilizada
na medicina popular no tratamento de cnceres, lceras, inflamaes e verrugas. considera-
da uma planta txica, pois seu ltex corrosivo em contato com a pele e a mucosa. Nesta pes-
quisa, foi utilizado o teste para deteco de clones de tumor epitelial em Drosophila melano-
gaster, com o propsito de conhecer o potencial anticarcinognico do avels. Para tanto, lar-
vas wts+/+mwh, foram pr-tratadas com o quimioterpico mitomicina C (0,1mM), conhecida-
mente indutor de tumor e, posteriormente, com extrato aquoso do avels (0,33; 0,5 e
1L/mL). O avels no induziu aumento nas frequncias de tumores. Porm, na associao
com a mitomicina C foram verificadas redues, estatisticamente significativas, nos tumores
induzidos por este quimioterpico. O extrato aquoso de avels mostrou indicaes de dose
resposta na associao com a mitomicina C. Portanto, nas condies experimentais propostas
neste estudo, o ltex do avels foi capaz de reduzir tumor.
Palavras-chave: Euphorbia tirucalli. Avels. Warts.

Abstract: The avels (Euphorbia tirucalli) is a plant of African origin widely used in popular
medicine in the treatment of cancers, ulcers, inflammations and warts. It is considered a toxic
plant, because its latex is corrosive in contact with the skin and mucosa. In this research, we
used the test for detection of epithelial tumor clones in Drosophila melanogaster, with the
objective of knowing the anti-carcinogenic potential of the avels. This way, wts+/+mwh
larvae were pre-treated with the chemotherapy drug mitomycin C (0,1mM), known as a tumor
inductor, and afterwards with the aqueous extract of avels (0,33; 0,5 e 1L/mL). The
avels did not induce increase in the tumor frequency. However, in the association with
mitomycin C, we verified statistically significant reductions in the tumor induced by this chem-
otherapy drug. The aqueous extract of avels showed indications of answer dose in associa-
Perquirere, 9(2):125-140, dez. 2012
Centro Universitrio de Patos de Minas 2012
126

tion with mitomycin C. Therefore, in the experimental conditions proposed by this study, the
latex of avels was able to reduce tumor.
Keywords: Euphorbia tirucalli; avels; warts.


1. Introduo

A utilizao de plantas como medicamentos , provavelmente, to antiga quan-
to o prprio homem. As plantas, muitas vezes consideradas seres espirituais por suas
propriedades teraputicas ou txicas, adquiriram extrema importncia na medicina
popular (MARTINS et al., 1995). Embora a medicina moderna seja bastante desenvolvi-
da, a Organizao Mundial de Sade (2002) divulgou que 80% da populao dos pases
em desenvolvimento utilizam prticas tradicionais para os cuidados bsicos com a sa-
de, sendo que 85% destes o fazem por meio de plantas medicinais.
O Brasil detm de 15 a 20% da biodiversidade mundial. As plantas componen-
tes dessa biodiversidade so a base para a fabricao de fitoterpicos e de outros medi-
camentos. Com isso, o Brasil tem a oportunidade de desenvolvimento prprio e sobe-
rano na rea da sade e do uso de medicamentos naturais, que zele pela sustentabili-
dade dos componentes da biodiversidade (BRASIL, 2006).
O avels uma planta de origem africana levada a diversos pases tropicais,
dentre eles o Brasil, no qual se aclimatou melhor na regio Nordeste. O arbusto quase
sem folhas mede cerca de 7 a 8 metros de altura e conhecido pelo perigo que oferece,
j que produz um suco leitoso (ltex) acre e custico (CRUZ, 1979). Por isso, utilizado
nesta regio principalmente como cerca viva para afastar homens e animais (RIZZINI;
MORS, 1995).
Extratos da espcie Euphorbia tirucali (avels) so usados corriqueira e indiscri-
minadamente como automedicao complementar ao tratamento do cncer e de outras
doenas como AIDS, asma, artrite reumatoide e sfilis. Por isso, importante destacar o
risco toxicolgico dessa planta medicinal, muito debatido pelo meio cientfico (VARRIC-
CHIO et al., 2008b).
As clulas, por meio de sinais bioqumicos, se desenvolvem, crescem, diferenci-
am e morrem. As neoplasias so um conjunto de clulas que no respondem a estes
sinais e se proliferam inapropriadamente. A incidncia dessas alteraes est aumen-
tando devido, principalmente, ao envelhecimento da populao (JORDE et al., 2004). O
Instituto Nacional de Cncer (2011) estimava que em 2012 surgissem aproximadamente
518.510 novos casos dessa doena no pas, incluindo cncer de pele no melanoma.
O amplo emprego popular do avels a fim de regredir tumores estimulou Var-
ricchio et al. (2000), Granja (2003), Avelar (2010), Rezende et al. (2004) e Khaleghian et al.
(2010) a pesquisarem a espcie. Eles observaram indcios de que a ingesto da soluo
do ltex promove diminuio na concentrao de clulas tumorais, porm os estudos
no foram conclusivos. Avelar (2010) afirma que o avels estimula a produo de cito-
cinas que excitam o sistema imune a combater tumores. Entretanto, ela salienta que so
necessrias investigaes in vivo, utilizando modelos de desenvolvimento tumoral,
associados ao tratamento com a planta.
Rezende et al. (2004) encontraram potencial de antimutagenicidade na soluo
ELCIO MOREIRA ALVES & JLIO CSAR NEPOMUCENO

127

contendo ltex dessa Euforbicea; no entanto, afirmam que os resultados encontrados
por eles abrem caminho para o desenvolvimento de novas pesquisas que elucidaro os
efeitos da espcie. Granja (2003) encontrou conflitos na literatura: alguns trabalhos
apontam para um efeito pr-carcinognico, enquanto outros, para o antitumoral. Ali-
ando isso ao uso popular da espcie, consideraram fundamentais novos trabalhos que
explorem essas propriedades.
Ainda no h estudos cientficos que comprovem a atividade anticancergena
do avels, pelo contrrio existem alguns que revelam que o seu ltex pode reduzir a
imunidade celular, acarretando em um efeito pr-cancergeno (IMAI et al., 1994 apud
CAVALINI et al.,2005).
A presente pesquisa objetivou avaliar a frequncia de clones de tumor observa-
dos em Drosophila melanogaster, heterozigota para o gene supressor de tumor wts, pr-
tratada com Mitomicina C e posteriormente com extrato aquoso do avels.

2. Referencial terico

2.1. Avels (Euphorbia tirucalli)

A espcie Euphorbia tirucalli (Figura 1), popularmente conhecida como avels,
apresenta ampla distribuio, fcil propagao, pode ser obtida durante todo o ano, e o
processo para extrair sua substncia ativa simples (JURBERG; CABRAL NETO; SCHALL,
1985).
Esta ampla distribuio geogrfica deve-se sua grande capacidade de acli-
matao. Considerado tambm txico, porm, extratos de seu ltex em gua ou extra-
to total de seu caule demonstram atividade biolgica mista e instiga estudos sobre as
suas propriedades toxicolgicas e biolgicas. importante salientar que diversas es-
pcies da famlia Euphorbiaceae so conhecidas e utilizadas como avels no Brasil,
sem o serem, no entanto (VARRICCHIO et al., 2008b).



Figura 1. Avels (Euphorbia tirucalli)
AVALIAO DO EFEITO ANTICARCINOGNICO DO LTEX DO AVELS

128

Existem relatos de que esta espcie apresenta propriedades curativas para al-
gumas doenas (MWINE; DAMME; JUMBA, 2010), como carcinomas e epiteliomas benig-
nos; e de que tem propriedades contra picada de escorpio e de cobras, sendo ainda
purgativa. Alm disso, pode-se usar o ltex externamente contra verrugas, como rube-
faciente e antirreumtico (MARTINS et al., 1995). A E. tirucalli tambm tem atividade
moluscicida (AFONSO NETO; BESSA; SOARES, 2010; JURBERG; CABRAL NETO; SCHALL, 1985;
TIWARI; SINGH; SINGH, 2003) e antimicrobiana (NETZEL; ARAJO, 2009). Observamos ain-
da atividade larvicida em Aedes aegypti (VARRICCHIO et al., 2008b) em Escherichia coli
(GONALVES; ARAJO, 2009) e em Anopheles funestus e A. gambae (MWINE; DAMME; JUMBA,
2010). Existem tambm alguns estudos que relatam a capacidade da espcie de produ-
zir combustvel, j que esta possui genes que participam na biossntese de triterpenoi-
des e esteris (KAJIKAWA et al., 2004).
A anlise do tecido vegetal da planta demonstra que ela rica em clcio
(244,85 g/kg), potssio (13,74 g/kg) e magnsio (4,34 g/kg), apresenta tambm altas
concentraes de nitrognio (9,17 g/kg), fsforo (1,05 g/kg), mangans (102,67 mg/kg),
boro (20,28 mg/kg), ferro (62,73 mg/kg), zinco (20,30 mg/kg) e cobre (9,78 mg/kg)
(NETZEL; ARAJO, 2009).
O Sistema Nacional de Informaes Txico Farmacolgicas adverte que o con-
tato da seiva leitosa com a pele e mucosa causa leses. Alm disso, pode ocorrer ede-
ma de lbios, boca e lngua, dor em queimao e coceira. O contato com os olhos pro-
voca irritao, lacrimejamento, edema das plpebras e dificuldade de viso; a inges-
to pode causar nuseas, vmitos e diarreia (BRASIL, 2009).

2.2. Cncer

O cncer caracterizado como uma das principais causas de morte nos pases
desenvolvidos, sendo que um tero da populao ser vitima dessa doena durante a
vida (RANG et al., 2007). Branco (2005) ressalta que os tumores malignos no so impor-
tantes apenas pela sua frequncia e gravidade, mas pela evoluo dessa frequncia que
tem aumentado a nvel mundial.
O cncer definido como um conjunto de doenas que possuem a caracterstica
em comum de crescimento incontrolado, que desencadeia na formao de uma massa
de clulas denominada neoplasia ou tumor. Vrios eventos so necessrios para as
clulas escaparem das restries que evitam a proliferao descontrolada. Sinais que
induzem a proliferao devem ser produzidos e as clulas devem tornar-se resistentes
aos sinais que inibem o crescimento. Com isso, as clulas seriam levadas morte celu-
lar programada (apoptose), porm elas desenvolvem alguma forma de invalidar esse
processo. A crescente massa de clulas necessita de nutrio, com isso ocorre a angio-
gnese, na qual as clulas vizinhas se diferenciam em novos vasos sanguneos. Os si-
nais inibitrios adicionais devem ser superados para que o tumor seja maligno, haven-
do invaso de tecidos prximos e posterior alastramento da neoplasia (metstase) para
os locais mais distantes do corpo. A capacidade de invadir e formar metstase distin-
gue as neoplasias benignas das malignas (JORDE et al., 2004).
As alteraes genticas costumam afetar os genes responsveis pelo incio do
ciclo celular e pela apoptose das clulas. Os proto-oncogenes normalmente regulam a
ELCIO MOREIRA ALVES & JLIO CSAR NEPOMUCENO

129

multiplicao celular. Entretanto, vrios eventos podem transformar o proto-oncogene
em um oncogene, este por sua vez promove a multiplicao celular descontrolada, que
acarreta o crescimento excessivo de um grupo de clulas, denominado tumor, e a dis-
perso de clulas tumorais pelo corpo, metstase. Existem tambm os genes supresso-
res tumorais que codificam reguladores negativos do ciclo celular e positivos de apop-
tose. Os alelos mutantes iro inativar as protenas que eles codificam, assim, o ciclo
celular no ser inibido (GRIFFITHS et al., 2002).
Como j mencionado, as clulas possuem um mecanismo de reparo do DNA,
por isso no desenvolvemos cncer rapidamente. Diante disso, a existncia de clulas
alteradas significa que estas escaparam dos mecanismos homeostticos intracelulares,
que as levariam apoptose. Se estes mecanismos no forem capazes de reparar o DNA
ou de encaminhar a clula apoptose, ela resistir e se fixar na populao. medida
que estas clulas se duplicam, as mutaes se acumulam, acarretando a manifestao
do tumor (BELTRO-BRAGA; TEIXEIRA; CHAMMAS, 2006).
Embora o cncer parea ser intrinsecamente gentico, Jorde et al. (2004) afirmam
que os fatores ambientais podem alterar a frequncia das mutaes. Inmeras substn-
cias com propriedades carcinognicas j foram identificadas, como o cigarro que causa
cncer de pulmo e outros tipos de tumor. Portanto, o meio ambiente torna os genes de
predisposio menos penetrantes, ou seja, o risco de cncer uma composio dos fa-
tores genticos e ambientais.
Os frmacos antineoplsicos so utilizados para tratar mais de 100 diferentes ti-
pos de neoplasias, objetivando a destruio das clulas malignas. Outros frmacos
complementares fortalecem o sistema imune do indivduo; assim, as clulas tumorais
que no forem destrudas pelas drogas antineoplsicas sero erradicadas. A maioria
dos agentes antitumorais mais eficiente para destruir as clulas que esto com o ciclo
celular ativo do que aquelas que esto em repouso na fase G0. Porm, estas drogas no
so especficas, ento o processo de diviso das clulas normais, como as dos folculos
capilares, medula ssea e epitlio intestinal, interrompido. Essas clulas de diviso
rpida so muito sensveis a essas drogas, resultando nos principais efeitos adversos
da quimioterapia (LARNER; GROSH, 2006).

2.3. Mitomicina C

A mitomicina C (MMC) um antibitico isolado de Streptomyces caespitosus. Ela
apresenta na sua estrutura um grupo azauridina e outro quinona, bem como um anel
mitosano. Esta droga tem atividade clnica restringida e foi substituda por frmacos
menos txicos e mais efetivos em cnceres. Porm, continua apresentando relevncia
farmacolgica (CHABNER, 2006).
A MMC empregada, principalmente, no tratamento do cncer de clulas esca-
mosas do nus, na quimioterapia de associao em casos de carcinoma de clulas es-
camosas do colo uterino e adenocarcinomas do estmago, pncreas e pulmo, e espe-
cialmente utilizada no tratamento intravesical do cncer de bexiga superficial (CHU;
SARTORELLI, 2005).
Observa-se que esta droga pode se ligar de modo covalente ao DNA e apresentar
ligao cruzada. Acredita-se que ela inibe a sntese do material gentico por meio de
AVALIAO DO EFEITO ANTICARCINOGNICO DO LTEX DO AVELS

130

sua capacidade de alquil-lo e produzir ligao cruzada entre os filamentos duplos.
Existem evidncias sobre a necessidade de reduo enzimtica por uma redutase de-
pendente de nicotinamida-adenina dinucleotdio fosfato reduzido (NADPH) para ativar
o frmaco (SIKIC, 2005).
No interior das clulas a droga convertida em forma que atua como agente al-
quilante, matando clulas nas fases G1-M. Os principais alvos da toxicidade da mitomi-
cina so a medula ssea e o trato gastrointestinal. sempre infundida por via endove-
nosa em dose nica ou em cinco doses administrando-se uma por dia (TRIPATHI, 2006).
Sampaio Filho et al. (2006) advertem que ao administrar mitomicina deve-se evi-
tar exposio solar. A associao desta com alcaloides da vinca pode acarretar bronco-
espasmos intensos, e o O2 em cirurgia pode precipitar angstia respiratria. Chu e Sar-
torelli (2005) ressaltam a possibilidade de ocorrncia de nusea, em toxicidade aguda, e
tardiamente, trombocitopenia, anemia, leucopenia, mucosite. Relatam ainda outros
efeitos txicos comuns, como a ocorrncia de sndrome hemoltico-urmica, manifesta-
da como anemia hemoltica microangioptica, trombocitopenia e insuficincia renal,
bem como alguns casos de pneumonite intersticial.
Assim como todas as drogas antineoplsicas, a intoxicao por este frmaco
produz principalmente transtornos digestivos e hematolgicos. Como efeitos digesti-
vos, pode-se observar estomatite, vmitos e diarreia. As manifestaes hematolgicas
incluem a leucopenia, trombocitopenia e anemia. A apario destes sintomas deve
acarretar a suspeno imediata da administrao da droga. A transfuso sangunea
constitui a medida mais importante para os efeitos hemticos. Para prevenir, indicada
a realizao de exames hematolgicos semanalmente (LITTER, 1975). A droga em ques-
to teratognica, carcinognica e pode formar vesculas locais (SIKIC, 2005).
Em Drosophila melanogaster a mitomicina C utilizada como controle positivo,
induzindo significativamente a formao de tumores epiteliais (COSTA; OLIVEIRA; NE-
POMUCENO, 2011).

2.4. Teste para deteco de tumor epitelial em Drosophila melanogaster

A espcie Drosophila melanogaster (Figura 2), conhecida como mosca da fruta,
utilizada em pesquisas genticas desde 1909, depois das bactrias e fungos. Atual-
mente seu uso recorrente em estudos porque fcil mant-la em laboratrio, ela tem
um ciclo de vida relativamente curto, cerca de 10 dias a 25 C, e grande prognie. Na
forma adulta, possui cerca de 2 mm de comprimento, trs pares de pernas e apenas
um par de asas, porque o segundo par foi modificado e est dentro de pequenos
apndices chamados halteres, que ajudam na aerodinmica para o voo (SNUSTAD;
SIMMONS, 2006).

ELCIO MOREIRA ALVES & JLIO CSAR NEPOMUCENO

131


Figura 2. Casal de Drosophila melanogaster: o macho (esquerda) menor e
possui pente sexual e a fmea (direita) maior e no apresenta pente sexual


A conservao evolutiva de genes supressores tumorais entre Drosophila e
mamferos tem levado a estudos na induo e no desenvolvimento de tumores nessas
moscas. Diversos proto-oncogenes e supressores tumorais de mamferos se apresen-
tam tambm nesta espcie (EEKEN et al., 2002). Nishiyama et al., (1999) descreveram
homologias entre o gene supressor de tumor warts (wts) em Drosophila com o LATS1
em humanos. Quando deficiente, este gene mostrou desenvolvimento de sarcomas
em tecidos moles e tumores ovarianos.
Em homozigoze, o marcador wts uma mutao recessiva letal nos zigotos. Por
apresentar esta capacidade letal, mantido na linhagem estoque com a presena de um
balanceador cromossmico (
TM3
). O cruzamento entre linhagens wts/TM3 e multiple
wing hairs (mwh/mwh) resulta em larvas heterozigotas (wts/+) (
SIDOROV
et al., 2001).
A perda da heterozigoze nas clulas do disco imaginal ocasiona a formao de
clones homozigotos (que vivel em conjuntos de clulas isoladas) na larva, que se
manifestam como tumores na mosca adulta (
SIDOROV
et al., 2001).
O gene warts (wts) foi identificado por Nishiyama et al. (1999) com base na sua
habilidade de agir como um supressor de tumor em Drosophila. A deleo desse gene
acarreta a formao de clones de clulas que literalmente geram "verrugas" nas pernas
e no corpo. Assim, o gene warts considerado importante no controle da morfognese
e proliferao celular. Eeken et al. (2002) ressaltam ainda que a inativao de ambos os
alelos wts, em todas as clulas da Drosophila, resultam em letalidade embrionria. Mas
a mutao e recombinao mittica, nos indivdius heterozigotos, podem levar a clones
mutantes que induzem a formao dos tumores.

3. Metodologia

3.1. Obteno do ltex do avels

O avels foi obtido em um jardim privado da cidade de Patos de Minas-MG. O
Dr. Evandro Binotto Fagan, professor titular das disciplinas Morfologia e Sistemtica
Vegetal, do Centro Universitrio de Patos de Minas (UNIPAM) e coordenador do Ncleo
de Pesquisa em Fisiologia Vegetal, Agroclimatologia, Modelagem na Agricultura e
Irrigao (FAMI), realizou a identificao taxonmica da espcie, classificando-a como
AVALIAO DO EFEITO ANTICARCINOGNICO DO LTEX DO AVELS

132

Euphorbia tirucalli. Uma amostra dessa planta foi catalogada no Herbrio do curso de
Cincias Biolgicas desta instituio, sob o protocolo 00000010 supervisionado pelo
mesmo professor. As larvas de Drosophila melanogaster foram tratadas com solues de
diferentes concentraes do ltex, preparadas no momento anterior. Este trabalho pri-
mou por utilizar a posologia folclrica, tambm respeitada por Oliveira e Nepomuceno
(2004), de 2 gotas em 200 mL de gua, ou seja, 0,5 microlitros do ltex diludos em 1 mL
de gua destilada estril. A ttulo de comparao, assim como neste trabalho, foram
utilizadas tambm as solues de 0,33 e 1,0 microlitros de ltex diludos na mesma
quantidade de solvente.

3.2. Agente qumico

Como agente indutor de tumor utilizou-se a Mitomicina C (CAS 50-07-7), fabri-
cado por Kyowa Hakko Kirin Co. Ltd., Shizuoka, Japo e embalado por Bristol-Myers
Squibb S.r.l., Sermoneta, Latina, Itlia. Importado por Bristol-Myers Squibb Farmacu-
tica S.A. Rua Carlos Gomes, 924 Santo Amaro, So Paulo. Cada frasco contm 5 mg
de p liofilizado para soluo injetvel. Tem peso molecular 334,327 e frmula molecu-
lar C15H18N4O5 (Figura 3).



Figura 3. Frmula estrutural da Mitomicina C

3.3. Teste para deteco de tumores epiteliais em D. melanogaster

Para a realizao do teste foram utilizadas duas linhagens mutantes de Droso-
phila melanogaster, wts e mwh, portadoras dos marcadores genticos warts (wts, 3-100) e
multiple wing hairs (mwh, 3-03), respectivamente. A linhagem wts foi gentilmente cedida
pelo Bloomington Drosophila Stock Center, da Universidade de Indiana, USA, com o
nmero de registro: Bloomington/7052.
Mantiveram-se os estoques em frascos de de litro contendo o meio de cultura
da Drosophila melanogaster com 820 mL de gua; 25g de fermento (Saccharomyces cerevi-
siae); 11g de agar, 156g de banana e 1g de nipagin. A temperatura foi mantida em 25 C
e umidade a 60%.

3.3.1. Cruzamento

Para obteno de larvas heterozigotas wts +/+ mwh realizou-se o cruzamento en-
ELCIO MOREIRA ALVES & JLIO CSAR NEPOMUCENO

133

tre fmeas virgens wts/TM3, Sb
1
e machos mwh/mwh. Desse cruzamento, todas as larvas
foram tratadas com os agentes qumicos testados. No entanto, foram analisadas somen-
te as moscas adultas que no apresentavam o balanceador cromossmico (TM3, Sb
1
),
ou seja, aqueles que apresentavam, fenotipicamente, pelo longo.

3.4. Procedimento experimental

Aps o cruzamento, as moscas foram transferidas para recipientes contendo 1,5
g de meio de pur de batatas (meio alternativo para Drosophila) e 5 mL de extrato aquo-
so de avels nas diferentes concentraes: 0,33 l/mL, 0,5 l/mL e 1,0 l/mL. Para o
controle positivo utilizou-se a Mitomicina C, e para o controle negativo, gua destilada
estril. Para avaliar se a planta em questo induz a formao de tumores, as moscas
foram expostas ao ltex dessa substncia. O frmaco foi combinado ao Avels nas dife-
rentes concentraes para avaliar se a soluo reduziu a quantidade de tumores indu-
zidos.

3.5. Anlise das moscas

Aps sofrerem metamorfose, os organismos-testes adultos foram transferidos
para outros recipientes contendo etanol 70% e, posteriormente, foram analisados os
machos e as fmeas que apresentavam fentipos pelo longo. Para a anlise das moscas
foram utilizadas lupas estereoscpicas e pinas entomolgicas. A tabulao foi feita em
um laudo, que separava quantitativamente a incidncia de tumores nas regies do
olho, cabea, asa, corpo, perna, halteres e o total por mosca, em cada concentrao.

3.6. Anlise estatstica

As diferenas estatsticas entre a frequncia de tumor das concentraes testa-
das e dos controles foram calculadas usando o teste U, no paramtrico, de Mann-
Whitney.


4. Resultados e discusso

Os resultados encontrados demonstram a ao anticarcinognica do ltex do
avels nas concentraes 0,33L/mL; 0,5L/mL; 1L/mL. Os testes para carcinogenici-
dade da espcie no foram estatisticamente significativos em nenhuma dose. Podemos
observar a frequncia de clones de tumor por segmento da Drosophila melanogaster, ob-
tida neste trabalho, na Tabela 1.
Para o controle negativo utilizou-se gua osmose reversa, observando-se a fre-
quncia de 0,30 tumores por mosca. Esta discreta induo de tumores ocorre devido
predisposio gentica do organismo teste. J o controle positivo, 0,1 mM de Mitomici-
na C, induziu uma frequncia de 1,94 tumores por mosca. Isso demonstra que a linha-
gem responde induo tumoral.
A quimioterapia antineoplsica pretende alterar o DNA da clula tumoral a fim
de conter seu crescimento. No entanto, como a substncia age sistemicamente, as clu-
AVALIAO DO EFEITO ANTICARCINOGNICO DO LTEX DO AVELS

134

las saudveis tambm podem sofrer tais alteraes, ocorrendo efeito pr-tumoral. As-
sim, torna-se relevante a avaliao dos efeitos cancergenos da espcie.
As larvas que no foram submetidas ao pr-tratamento com MMC, mas somente
expostas soluo do ltex do avels, nas concentraes de 0,33L/mL; 0,5L/mL;
1L/mL, apresentaram uma frequncia de 0,2; 0,24 e 0,14 tumores por mosca, respecti-
vamente. Este resultado demonstra que o avels, quando comparado ao controle nega-
tivo, no induziu uma quantidade de tumores, estatisticamente significativa, para ser
considerado carcinognico; portanto, a utilizao do mesmo no agravaria o quadro de
pacientes oncolgicos quanto concentrao de clulas tumorais.
Oliveira e Nepomuceno (2004) encontraram resultados semelhantes, j que nas
doses testadas por eles, idnticas s deste trabalho, no houve efeito genotxico. Ao
testar o avels fitoterpico nas clulas procariticas, Lima et al. (2009) concluram que
ele no capaz de induzir agravos nas mesmas. Assim, como os mecanismos de reparo
do DNA dos eucariontes so mais sensveis e especficos, provvel o avels no dani-
fique o DNA de pacientes que recebem o composto.
J o tratamento com a associao da MMC (pr-tratamento) com o avels resul-
tou em frequncias distintas. No primeiro caso observou-se a frequncia de 0,66 tumo-
res por mosca, no segundo 0,61, e no terceiro 0,55. Podemos observar que estes trs
valores so significativamente menores, em comparao com o controle positivo. Dian-
te disso, evidencia-se que o extrato aquoso do ltex de avels capaz de reduzir tumo-
res.


Tabela 1. Frequncia de clones de tumor observados em Drosophila melanogaster, heterozigota
para o gene supressor de tumor wts, pr-tratada com Mitomicina C (6 horas) e posteriormente
tratada com extrato aquoso do Avels.


ELCIO MOREIRA ALVES & JLIO CSAR NEPOMUCENO

135

Outros estudiosos encontraram resultados similares e elaboraram hipteses ba-
seadas em seus resultados para explic-los. Avelar (2010) relatou em seus trabalhos um
aumento, estatisticamente significativo, no percentual de neutrfilos e linfcitos positi-
vos para as citocinas do tipo1, ao serem estimulados por ltex bruto do avels, mos-
trando-se relevante a estimulao imunolgica da espcie contra as clulas neoplsicas.
O ltex da espcie estudada rico em diterpenoides:, steres diterpnicos de
forbol, ingenanos, tiglianos, dafnanos e dafnanos aromticos (VARRICCHIO et al., 2008a).
Ao entrar no citoplasma das clulas, o ingenano interage com protenas citoplasmti-
cas. Neurnios expostos a esta substncia iniciam um processo que pode levar morte
celular, ou seja, o ingenano, constituinte do avels, induz a apoptose. No entanto, o
efeito txico do ingenano ainda no foi completamente elucidado (KHALEGHIAN et al.,
2010).
Os steres de ingenol se ligam tubulina, desestabilizando-a atravs de uma
mudana conformacional por meio de alteraes na posio do triptofano no sentido
da guanosina-5-difosfato (GTP). A tubulina uma protena com variadas funes como
transduo de sinais e, principalmente, sintetizao dos microtbulos, que do suporte
ao citoesqueleto (KHALEGHIAN et al., 2010).
As concluses de Khaleghian et al. (2010) auxiliam na compreenso dos efeitos
anticarcinognicos do avels, j que as clulas que sofrem a ao do ingenano apresen-
tam uma desestabilizao da tubulina que acarretar em alteraes dos microtbulos.
Estas alteraes impedem a diviso do centrmero e separao das cromtides irms,
realizada pelo mesmo no ciclo celular. A ausncia destas etapas ir parar o ciclo celular
na fase G, induzindo a formao de uma clula com microncleo, que possui menor
tempo hbil, ou ser direcionada apoptose. Assim, em casos de cncer, a polimeriza-
o da tubulina e a estabilidade de microtbulos inibem o crescimento celular.
As Euphorbiaceae so capazes de aumentar a expresso dos receptores Fc para
gama-globulina, que agem diretamente sobre a atividade funcional dos macrfagos.
Esses receptores para a poro Fc situados em neutrfilos, macrfagos e outros fagci-
tos mononucleares, facilitam o reconhecimento do antgeno, potencializando a eficin-
cia da fagocitose (GRANJA, 2003).
Ao estimular linfcitos com o ltex dessa Euphorbiaceae, in vitro, Avelar (2010)
evidenciou um aumento estatisticamente significativo no percentual de linfcitos T e T
CD4 positivos para as citocinas do tipo 1, TNF- e IFN-. So estas citocinas as respon-
sveis por ativar o sistema imune para respostas imunoprotetoras diante de processos
tumorais. Os neutrfilos e linfcitos T CD8 exibiram um perfil misto de produo de
citocinas do tipo 1 e 2. Observamos, assim, uma resposta imunolgica predominante-
mente do tipo 1 e uma provvel ativao de mecanismos moduladores, mediados por
linfcitos T CD8 e neutrfilos.
Avelar (2010) ressalta ainda que a resposta antitumoral dependente do acio-
namento da resposta imune celular. Diante disso, possvel que a sntese de IFN- em
linfcitos T helper, induzida pelo ltex de E. tirucalli, possa favorecer a apresentao de
antgenos, contribuindo para a eliminao de clulas tumorais, por intermdio da ao
antgeno especfica de linfcitos T CD8. Estes linfcitos aumentam a produo de cito-
cinas do tipo I, que favorece as funes secretoras, principalmente citotoxicidade. Alm
disso, libera protenas, tais como perforina, granzimas e granulisina que induzem apo-
AVALIAO DO EFEITO ANTICARCINOGNICO DO LTEX DO AVELS

136

ptose de clulas alvo. Existem ainda algumas evidncias da participao de princpios
ativos encontrados em Euphorbia, sobre diversos processos biolgicos mediados por
TNF-. importante salientar que o TNF- tambm pode ser efetor na apoptose de
clulas tumorais, atravs da unio aos receptores que apresentam domnios de morte
que sinalizaram os eventos apoptticos.
Outro constituinte da E. tirucalli o ster de forbol que ativa a protena quinase
C, as possveis vias para a produo de citocinas pr-inflamatrias que envolveriam os
fatores de transcrio NF-kB, Elk e a juno de Jun e Fos, conhecido como AP1. A res-
posta imune um grande aliado na imunoterapia de tumores, uma vez que tais citoci-
nas so importantes mediadores dos processos oncolgicos (AVELAR, 2010).
necessrio salientar ainda que a frequncia de tumores diminuiu discretamen-
te com o aumento da dose utilizada, indicando a possibilidade da eficcia do tratamen-
to ser dose dependente. Granja (2003) concluiu que a Euphorbia tirucalli confere uma
proteo dose-dependente contra a mielossupresso desencadeada pelo desenvolvi-
mento tumoral. Gonalves e Arajo (2009) observaram que medida que a concentra-
o do ltex da planta aumenta, a Escherichia coli se torna mais perceptvel. No entanto,
como o ltex dessa planta pode ser txico, a concentrao a ser utilizada deve ser con-
trolada.


5. Concluso

O amplo emprego do avels na medicina popular foi justificado, j que, neste
trabalho, ele diminuiu a concentrao de clulas tumorais na Drosophila melanogaster.
Em busca de explicaes para tal resultado, encontramos na literatura associaes entre
algumas substncias presentes nesta Euphorbiaceae, principalmente ingenano e steres
de forbol, e reaes bioqumicas que aumentam a imunidade celular e favorecem a
apoptose. Evidenciou-se ainda que os resultados so dose-dependentes. No entanto,
necessrio precauo ao administrar este composto, j que apresenta alta toxicidade e
ainda no existem estudos cientficos que comprovem a posologia segura para a me-
lhoria dos efeitos.
O potencial carcinognico da E. tirucalli no foi comprovado nas doses testadas.
Assim, a utilizao desta no comprometeria o quadro de pacientes oncolgicos. Este
estudo abre caminhos para demais pesquisas que envolvam a planta em questo, j
que por meio deles poderemos comprovar quais compostos so realmente capazes de
produzir tais efeitos. Por esse meio, poderemos promover a sade e a qualidade de
vida dos pacientes oncolgicos, alm de melhorias no prognstico.


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