UNIVERSIDAD

DEL CAUCA
FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES EXACTAS Y DE LA
EDUCACIN
DEPARTAMENTO DE BIOLOGA
REA DE MICROBIOLOGIA
Prcticas de Laboratorio de Microbiologa
CARACTERIZACION BIOQUIMICA DE
ENTEROBACTERIA
Gua No.
5
1. INTRODUCCIN
La !a"ilia de E#terobacteriaceae est co"$%esta $or bacilos &ra" #egati'os de ta"a(o
"edia#o) a#aerobios !ac%ltati'os) "*'iles o i#"*'iles) $ero #o es$or%lados+ Las
E#terobacterias crece# bie# e# "edios arti!iciales) tie#e# #ecesidades #%triti'as si"$les)
!er"e#ta# la gl%cosa co# $rod%cci*# de cido o cido , gas) red%ce# los #itratos a #itritos
, so# o-idasa #egati'os+ Las e#terobacterias so# orga#is"os %bic%os de distrib%ci*#)
e#co#tr#dose e# el s%elo) el ag%a) la 'egetaci*# , !or"a#do $arte de la !lora bacteria#a
#or"al de casi todos los a#i"ales) i#cl%ido el ser .%"a#o+
Alg%#os "ie"bros de esta !a"ilia se e#c%e#tra# asociados a c%adros i#!ecciosos del
tracto gastro i#testi#al) "ie#tras /%e otros $%ede# $rod%cir i#!eccio#es o$ort%#istas+ Las
i#!eccio#es $%ede# a!ectar a casi todas las locali0acio#es del c%er$o+
. OB!ETIVOS
Reali0ar $r%ebas bio/%"icas $ara la ide#ti!icaci*# de ce$as co#ocidas de
E#terobacterias $ara lograr %#a correcta ide#ti!icaci*# de g1#ero , es$ecie+

". CONSULTAS PRELIMINARES
Los est%dia#tes deber# co#s%ltar sobre las caractersticas de las E#terobacterias , s%
i"$orta#cia co"o bioi#dicadores de la calidad bacteriol*gica del ag%a+
#. MATERIALES
Por cada gr%$o de traba2o se te#dr3
MATERIAL CANTIDAD
Ca2as de Petri 4
T%bo de e#sa,o co# ta$a 56
Asa bacteriol*gica 5
Mec.ero 5
C%lti'o bacteria#o 5
5. REACTIVOS
SUSTANCIAS$ CANTIDAD
Agar Mc7o#8e, 9: "l
Agar TI 5: "l
Agar $ara Lisi#a descarbo-ilasa 5: "l
Agar citrato de i""o#ds 5: "l
Agar IM 5: "l
Caldo MR;P 4: "l
Agar 5: "l
Reacti'o de 7o'ac<s 5: "l
E%a&o'a(o )o'*
.
R+,-.a(o Po'*
!+/+ U0-(a( (+ '+a
P'+.-(+01+ Co2-13 (+ P%a0
Coo'(-0a(o' Co2-13
D+.a41-,a4-50 R+.-(uo.
6u2-4o.
A)'o&a(a )o'*
P'+.-(+01+ Co2-13
T340-4o A2&-+01a%
R+41o'
F+47a (+ A)'o&a4-50*
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CARACTERIZACION BIOQUIMICA DE
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Reacti'o de Barrit<s 5: "l
Ro2o de Metilo 5: "l
No .a, restricci*# de seg%ridad $or el %so de los "edios de c%lti'o+
Los reacti'os re/%eridos se e#trega# ,a $re$arados e# reci$ie#tes debida"e#te
"arcados $ara el %so de los est%dia#tes seg=# lo $re'isto e# la g%a de la $rctica+
8. E6UIPOS
E6UIPOS$ CANTIDAD
I#c%badora 5
El e/%i$o deber estar $re'ia"e#te calibrado a la te"$erat%ra re/%erida $or el A%-iliar de
Laboratorio+ >a'or #o "a#i$%lar el e/%i$o , "a#te#erlo cerrado+ Abrir sola"e#te $ara
i#cl%ir el c%lti'o a i#c%bar+
9. PROCEDIMIENTO
Desarrolle el sig%ie#te $rocedi"ie#to3
To"e %#a colo#ia aislada del "edio s*lido co# el c%lti'o del "icroorga#is"o
s%"i#istrado , $roceda a reali0ar %#a sie"bra $or estras e# agar Mc Co#8e,) "edio
di!ere#cial /%e #os se$ara las colo#ias !er"e#tadoras de lactosa de las /%e #o lo
.ace#+ I#c%bar a 9? @C $or 5A B 4C .+
Pasado el tie"$o de i#c%baci*# obser'ar "or!ologa) ta"a(o) as$ecto , color de las
colo#ias+ A/%ellas /%e $rese#ta# color rosado .abr# !er"e#tado la lactosa+
De las colo#ias aisladas) $rocede#tes del agar Mc Co#8e, se"brar e# t%bos de
e#sa,o co# di!ere#tes "edios de c%lti'o $ara reali0ar las sig%ie#tes $r%ebas
bio/%"icas3
TSI* Co#tie#e gl%cosa) D:+EB5F !e#olG) sacarosa , lactosa+ Ade"s ro2o de !e#ol) /%e
i#dica !er"e#taci*# , s%l!ato !erroso) $ara de"ostrar la $rod%cci*# de H4+ La sie"bra
se .ace $%#0a#do co# el asa recta e# $ro!%#didad , e# estra e# la s%$er!icie Dagar
i#cli#adoG+
E%a&o'a(o )o'*
.
R+,-.a(o Po'*
!+/+ U0-(a( (+ '+a
P'+.-(+01+ Co2-13 (+ P%a0
Coo'(-0a(o' Co2-13
D+.a41-,a4-50 R+.-(uo.
6u2-4o.
A)'o&a(a )o'*
P'+.-(+01+ Co2-13
T340-4o A2&-+01a%
R+41o'
F+47a (+ A)'o&a4-50*
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Reacci*# I#ter$retaci*#
>o#do cidoI s%$er!icie i#cli#ada alcali#a >er"e#taci*# a gl%cosa D7JAG
Todo el "edio cidoI >er"e#tador de gl%cosa) lactosa DAJAG
B%rb%2as Aer*ge#os
E##egreci"ie#to del !o#do H
4

Medio alcali#oII No !er"e#tador de a0=car D7J7G

II alcali#o K ro2o IAcidoBA"arillo
L-.-0a (+4a'&o:-%a.a* La decarbo-ilaci*# es el $roceso $or el c%al las bacterias /%e
$osee# la e#0i"a decarbo-ilasa es$ec!ica so# ca$aces de atacar a los a"i#ocidos
e# s% gr%$o carbo-ilo DBCOOHG) da#do %#a a"i#a o %#a dia"i#a , a#.drido
carb*#ico+ e sie"bra ig%al /%e el TI+
I#ter$retaci*#3 La $r%eba es $ositi'a c%a#do .a, ca"bio de color del $=r$%ra a
a"arillo a$agado D$rod%cido $or la cada'eri#aGL la $r%eba es #egati'a c%a#do #o .a,
ca"bio de color+ e re$orta co# las "is"as co#'e#cio#es /%e el TI+
C-1'a1o (+ S-22o0.* Co#tie#e citrato co"o =#ica !%e#te de carbo#o , sales de
a"o#io co"o !%e#te de #itr*ge#o) #o co#tie#e a"i#ocidos+ Las bacterias /%e
$%ede# %tili0ar el citrato ta"bi1# e-trae# #itr*ge#o co# la $rod%cci*# de a"o#io /%e
alcali#i0a el "edio de c%lti'o+ El i#dicador de $H es a0%l de bro"oti"ol+ e sie"bra
sola"e#te e# s%$er!icie+
I#ter$retaci*#3 La $r%eba es $ositi'a c%a#do se obser'a creci"ie#to co# %# color a0%l
i#te#so+ La $r%eba es #egati'a c%a#do #o se obser'a creci"ie#to #i ca"bio de color+
U'+a (+ C7'-.1+0.+0* i la bacteria $osee la e#0i"a %reasa) .idroli0a %rea del "edio
libera#do a"o#io , CO
4
) el i#dicador %tili0ado es ro2o de !e#ol+ e sie"bra sola"e#te
e# s%$er!icie+
I#ter$retaci*#3 La $r%eba es $ositi'a c%a#do se obser'a ca"bio de color a"arillo a
rosado+ La $r%eba es #egati'a c%a#do #o .a, ca"bio de color+
P'u+&a (+ I0(o% ; 2o,-%-(a(* La "o'ilidad se obser'a e# el "edio IM $or
des$la0a"ie#to alrededor de la l#ea de i#oc%laci*#) reali0ada e# $ro!%#didad , e# el
ce#tro del agar+ Las bacterias /%e $osee# la e#0i"a tri$to!a#asa) so# ca$aces de
.idroli0ar , desa"i#ar el tri$t*!a#o co# la $rod%cci*# de i#dol) cido $ir='ico , a"o#io+
e sie"bra co# el asa recta) $%#0a#do el agar e# $ro!%#didad) co# c%idado de sacar
el asa $or el "is"o sitio de e#trada+
I#ter$retaci*#3 Des$%1s de la i#c%baci*# $or 5AB4C .oras adicio#e 4 a 9 gotas del
reacti'o de 7o'ac<s a los t%bos co# "edio IM) la $rese#cia de i#dol se destaca $or la
!or"aci*# de %# a#illo ro2i0o e# la s%$er!icie del t%bo+ La "o'ilidad se obser'a $or
des$la0a"ie#to del creci"ie#to alrededor de la l#ea de i#oc%laci*#+ Alg%#os
E%a&o'a(o )o'*
.
R+,-.a(o Po'*
!+/+ U0-(a( (+ '+a
P'+.-(+01+ Co2-13 (+ P%a0
Coo'(-0a(o' Co2-13
D+.a41-,a4-50 R+.-(uo.
6u2-4o.
A)'o&a(a )o'*
P'+.-(+01+ Co2-13
T340-4o A2&-+01a%
R+41o'
F+47a (+ A)'o&a4-50*
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"icroorga#is"os $rod%ce# e##egreci"ie#to del "edio $or !or"aci*# de s%l!%ro de
.idroge#o+
R+a44-50 (+% 'o<o (+ M+1-%o* e"brar co# el asa %# t%bo co# caldo MR;P) i#c%bar
$or 4CBCA .oras) $asado este tie"$o adicio#ar E gotas de la sol%ci*# ro2o de "etilo+
Alg%#as bacterias %tili0a# la gl%cosa co# gra# !or"aci*# de cido) de !or"a /%e el
'alor del $H del "edio descie#de a "e#os de C+C+ Otras bacterias $rod%ce# "e#os
cido) red%cie#do e# "e#or ca#tidad el $H del "edio+ Esta disti#ci*# $%ede .acerse a
tra'1s del ro2o de "etilo) /%e $rese#ta color a"arillo $or e#ci"a del $H E+5 , color ro2o
c%a#do el $H descie#de a C+C+
E0.a;o (+ Vo=+. P'o.4a,+'* e"brar co# el asa %# t%bo co# caldo MR;P) i#c%bar
$or 4CBCA .oras) $asado este tie"$o adicio#ar CB6 gotas de la sol%ci*# de s%l!ato de
cobre+ E# caso $ositi'o se $rese#ta %# 'ira2e a ro2o des$%1s de alg%#os "i#%tos+
A $artir de la gl%cosa) #%"erosos "icroorga#is"os !or"a# aceto#a
Dacetil"etilcarbi#olG) 4)9 b%ta#odiol * diacetilo+ La de"ostraci*# de estos $rod%ctos
"etab*licos se lle'a a cabo co# los reacti'os de O<MEARA) "e2orado $or Le'i#e , col
D5M94G co# s%l!ato de cobre * co# el reacti'o de BARRIT D5M96G+
C%lti'o e# "edio Agar al"o#ella K .igella+ e"brar co# el asa bacteriol*gica e#
"edio c%lti'o Agar $ara al"o#ella K .igella+ I#c%bar 4C K CA .oras a 9E NC+
Obser'ar , describir el creci"ie#to des$%1s del $erodo de i#c%baci*#+
I#ter$retaci*#3 Las bacterias lactosa #egati'as !or"a# colo#ias i#coloras+ Las
bacterias lactosa $ositi'as !or"a# colo#ias e# to#os rosados a ro2os+ Los orga#is"os
tie#e# la ca$acidad de !or"ar H4 !or"a# colo#ias co# %# ce#tro #egro+
>. OBSERVACIONES? CLCULOS Y RESULTADOS
A#ote las obser'acio#es) disc=talas , co#cl%,a de ac%erdo co# los $ar"etros de
i#ter$retaci*# "e#cio#ados+
@. PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS
OC%les so# las caractersticas) co"$osici*# , %so del "edio de los "edios de c%lti'o
e"$leados e# la $rcticaP
1A. RECUPERACIN? DESACTIVACIN YBO ALMACENAMIENTO TEMPORAL DE
LOS RESIDUOS
Los resid%os res%lta#tes corres$o#de# a c%lti'os bacteria#os) los c%ales se i#acti'a# ,
esterili0a# e# a%tocla'e+ U#a 'e0 ter"i#ado el $roceso de esterili0aci*#) los resid%os se
dis$o#e# e# bolsas ter"oresiste#tes) se de2a# e#!riar .asta solidi!icaci*# , se al"ace#a#
E%a&o'a(o )o'*
.
R+,-.a(o Po'*
!+/+ U0-(a( (+ '+a
P'+.-(+01+ Co2-13 (+ P%a0
Coo'(-0a(o' Co2-13
D+.a41-,a4-50 R+.-(uo.
6u2-4o.
A)'o&a(a )o'*
P'+.-(+01+ Co2-13
T340-4o A2&-+01a%
R+41o'
F+47a (+ A)'o&a4-50*
UNIVERSIDAD
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te"$oral"e#te ba2o co#gelaci*#) La dis$osici*# !i#al se .ace "edia#te el ser'icio de
recolecci*# de resid%os biol*gicos co#tratado $or la U#i'ersidad co# la Ad"i#istraci*#
M%#ici$al+
11. BIBLIOGRAFA
MADI&AN M+ T+) MARTIN7O Q+M+ , PAR7ER Q+ BROC7+ Biologa de los
"icroorga#is"os+ Octa'a edici*#+ Pearso# Pre#tice Hall) Madrid)4::C+
E%a&o'a(o )o'*
.
R+,-.a(o Po'*
!+/+ U0-(a( (+ '+a
P'+.-(+01+ Co2-13 (+ P%a0
Coo'(-0a(o' Co2-13
D+.a41-,a4-50 R+.-(uo.
6u2-4o.
A)'o&a(a )o'*
P'+.-(+01+ Co2-13
T340-4o A2&-+01a%
R+41o'
F+47a (+ A)'o&a4-50*