INTRODUCCIN

En la cromatografa lquida, la fase mvil es un lquido que fluye a travs de una

columna que contiene a la fase fija. La separacin cromatogrfica en HPLC es el
resultado de las interacciones especficas entre las molculas de la muestra en
ambas fases, mvil y estacionaria
A diferencia de la cromatografa de gases, la cromatografa de lquidos de alto
rendimiento (HPLC, de high-performance liquid chromatography) no est limitada
por la volatilidad o la estabilidad trmica de la muestra.
La HPLC es capaz de separar macromolculas y especies inicas, productos
naturales lbiles, materiales polimricos y una gran variedad de otros grupos poli
funcionales de alto peso molecular. Con una fase mvil lquida interactiva, otro
parmetro se encuentra disponible para la selectividad, en adicin a una fase
estacionaria activa.
La HPLC ofrece una mayor variedad de fases estacionarias, lo que permite una
mayor gama de estas interacciones selectivas y ms posibilidades para la
separacin.
La cromatografa lquida de alto rendimiento se utiliza en las ramas de la
bioqumica para separar e identificar compuestos en base a su polaridad. El
dispositivo emplea una bomba que acta para crear una presin lo
suficientemente alta como para forzar al compuesto a separarse en partculas
polarizadas a travs del dispositivo.
Ventajas:
El HPLC es un proceso automtico que toma slo unos pocos minutos para
producir resultados. Esta es una marcada diferencia en la cromatografa lquida
que utiliza la gravedad en lugar de una bomba de alta velocidad para forzar
compuestos a travs de un tubo densamente empaquetado. Los resultados
obtenidos son de una alta resolucin y son fciles de leer, y las pruebas se
reproducen con facilidad a travs del proceso automatizado
Desventajas:
Es difcil de detectar coelucin (dos compuestos que escapan de la tubera a la
vez) con HPLC, lo que puede dar a la categorizacin de compuesto incorrecto.
Existe un alto costo para el equipo necesario para llevar a cabo HPLC. Su
funcionamiento puede ser complejo y requiere un tcnico entrenado para operar.
Debido a la velocidad del proceso, el equipo tiene una baja sensibilidad a algunos
compuestos.








FUNDAMENTO


La cromatografa de lquidos de alta resolucin (HPLC) es un proceso analtico
que utiliza un instrumento especialmente diseado para separar, cuantificar y
analizar los componentes de una mezcla qumica. La muestra de inters se hace
pasar mediante un flujo de disolvente hasta una columna rellena del material
especial para llevar a cabo la separacin de los componentes, posteriormente
dichos componentes pasan a un sistema de deteccin acoplado con un sistema de
grabacin de datos. Los componentes bsicos del sistema HPLC incluyen:
contenedor de disolventes, inyector automtico, bomba cuaternaria, columna
analtica, detector/es y el registrador de datos. Los detectores de los que se
dispone son 2: (a) detector ultravioleta-visible de longitud de onda variable y (b)
detector LSD (evaporative light-scattering detector). Posee un ordenador donde se
incluye el programa Chemstation para controlar tanto los instrumentos como los
datos obtenidos.

Campos de Aplicacin de HPLC

Frmacos: Antibiticos, sedantes esteroides, analgsicos
Bioqumica: Aminocidos, protenas, carbohidratos, lpidos
Productos de alimentacin: Edulcorantes artificiales, antioxidantes, aflatoxinas,
aditivos
Productos de la industria qumica: Aromticos condensados, tensoactivos,
propulsores, colorantes
Contaminantes: fenoles, Pesticidas, herbicidas, PCB
Qumica forense: Drogas, venenos, alcohol en sangre, narcticos
Medicina clnica: cidos biliares, metabolitos de drogas, extractos de orina,
estrgenos.
Se realizan anlisis cualitativos y cuantitativos de polifenoles y carotenos en
una amplia variedad de matrices alimentarias y biolgicas (ctricos, uvas, vinos,
orina, plasma, entre otros).











OBJETIVOS
Aprender y dar a conocer el proceso de una cromatografa liquida de alta
resolucin y sus diferentes tipos
Conocer la funcional del equipo y las diferentes partes que se compone.

























INSTRUMENTACIN
Bomba


Las bombas para HPLC deben cumplir ciertos requisitos fundamentales:
- Deben producir presiones estables hasta 6000psi.
- Deben mantener el flujo libre de pulsaciones
- Deben generar intervalos de caudales de flujo (0,1 a 10 ml/min)
- Deben permitir un control y reproducibilidad del flujo de solvente
- Sus componentes deben ser resistentes a la corrosin

Detector

La eficiencia de un detector cromatogrfico depende de la relacin entre la
cantidad fsica medida y la composicin del efluente, as como tambin de las
caractersticas de las seal de transferida. Los tipos de detectores en HPLC se
clasifican en: Detectores basados en una propiedad de la fase mvil .
Ejemplo:
Detector de Indice de Refraccin
Detectores basados en una propiedad de la sustancia a separar. Ejemplo:
Detector de Fluorescencia, Detector Ultravioleta

Integrador


Fase mvil
Alta pureza (calidad HPLC).
Inactividad frente a la fase estacionaria.
Baja viscosidad.
Compatibles con la muestra.
Facilitar la recuperacin de la muestra.
Compatibilidad con el sistema de deteccin.
Segn su composicin vare o no con el tiempo: Elucin isocrtica y
Elucin en gradiente

Inyector
Inyeccin
Se emplean vlvulas inyectoras de volumen (loop) constante
Pueden ser manuales o automticas
Para variar el volumen de inyeccin se debe cambiar el
loop correspondiente
Se debe evitar la entrada de burbujas en el sistema de Inyeccin

PROCEDIMIENTO PARA UN ANALISIS CROMATOGRAFICO HPLC
Parmetros a seguir:
Naturaleza de la fase estacionaria
Interaccin de la fase mvil y estacionaria
Tamao de partcula
Composicin del flujo
Detector


1. El compuesto pasa por la columna cromagrafica a travs de la fase
estacionaria mediante el bombeo de lquido (fase mvil) a alta presin a
travs de la columna.
2. La muestra a analizar es introducida en pequeas cantidades y sus
componentes se retrasan diferencialmente dependiendo de las
interacciones qumicas o fsicas con la fase estacionaria a medida que
adelantan por la columna. (El grado de retencin de los componentes de la
muestra depende de la naturaleza del compuesto, de la composicin de la
fase estacionaria y de la fase mvil)
3. Despus los componentes pasan por un detector que genera una seal
(dependiendo de la concentracin y del tipo de compuesto)
4. Se utiliza una bomba para impulsar a la fase mvil con velocidad y presin
contante.
5. Luego llegan a las columnas en donde hay unos detectores que no hacen
ms que indicar el momento de aparicin de los distintos componentes
que constituyen la muestra.
Caractersticas Que Debe Tener Una Fase Mvil (Solvente)
Tener Baja Viscosidad Para Reducir Las Cadas De Presin
Ser Compatible Con El Detector Utilizado
No Debe Disolver La Fase Estacionaria
Bajo Contenido De Impurezas


CONCLUSIN
Con esta prctica pudimos observar que funcin cumple el cromatografo de
lquidos de alta resolucin el cual se encarga cuantificar y determinar el contenido
de cada solucin mediante la separacin de compuestos y su anlisis digital que
nos ayuda a calcular el contenido de cada solucin mediante grficas y reas bajo
la curva que nos dan como resultado una exactitud de compuestos que contiene
cada muestra liquida. Tambin se pudo observar mediante esta prctica que
elementos componen un cromatografo de lquidos de alta resolucin.




BIBLIOGRAFIA
http://www.quiminet.com/articulos/que-es-la-cromatografia-liquida-de-alta-
eficiencia-hplc-14764.htm
http://www.slideshare.net/jmramos1978/cromatografa-lquida-de-alta-presin
http://www.slideshare.net/vegabner/cromatografa-lquida-de-alta-resolucin-2






































INSTITUTO TECNOLGICO SUPERIOR DE TIERRA
BLANCA

INGENIERA EN INDUSTRIAS ALIMENTARIAS
TEMA: PRCTICA 13
Cromatografa de HPLC (alta resolucin)
ALUMNOS(A):
Gonzlez Vera Ftima
Krauss Benites Jessica
Lpez Silva Amrica
Martnez Rodrguez Karina Yamilet


DOCENTE:
Ing. Laura Ins Elvira Torales


SEMESTRE Y GRUPO:
401-A



Tierra Blanca Veracruz a 06 de junio del 2014