INSTITUTO TECNOLGICO DE AGUASCALIENTES

LABORATORIO DE MICROBIOLOGA AMBIENTAL

PRCTICA No. 5
MICROBIOLOGA DEL SUELO

OBJETIVO

a) Aplicar una tcnica de muestreo de suelos.
b) Realizar el recuento de microorganismos mesoflicos aerobios,
mohos y levaduras de una muestra de suelo.
c) Investigar la capacidad de los microorganismos para desarrollarse en
medios de cultivo con diferentes requerimientos nutricionales.

INTRODUCCIN
Los microbios del suelo y la agricultura
En el suelo conviven numerosos tipos de organismos microscpicos como bacterias y hongos,
que pueden ofrecer grandes beneficios. Estos microorganismos contribuyen en la formacin
del suelo ya que participan en la degradacin de la materia orgnica y en los ciclos de
elementos como el carbono, nitrgeno, oxgeno, azufre, fsforo, hierro, entre otros. Estas
sustancias aportan a la fertilidad del suelo y son utilizados por los seres vivos en su
metabolismo. Adems, muchos de estos microorganismos viven alrededor de las races de las
plantas e influyen en su crecimiento, y tienen gran importancia para los cultivos agrcolas
como las leguminosas y algunos forestales. El crecimiento de las plantas es estimulado por
estos microorganismos del suelo que ayudan a absorber nutrientes y las protegen o evitan el
ataque de microorganismos patgenos .
En la actualidad, bilogos, microbilogos y eclogos estudian las comunidades microbianas
del suelo en busca de microorganismos beneficiosos que puedan ser utilizados en la
agricultura, para proteger los cultivos del ataque de plagas o enfermedades, como fertilizantes
amigos del medioambiente (biofertilizantes), para la limpieza de ambientes contaminados
(biorremediacin), en la alimentacin y otras industrias.

La importancia de los minerales y el ciclo de la materia

La materia que forma parte del planeta sufre numerosas transformaciones al ser utilizada por
los seres vivos. Algunos minerales son asimilados por los organismos fotosintetizadores
(como plantas y cianobacterias) que los incorporan a sus estructuras y rganos y utilizan para
cumplir distintas funciones metablicas. A su vez, cuando un ser vivo se alimenta de otro,
incorpora esos elementos qumicos a travs de la cadena alimentaria, y en algn momento
retornan al ambiente, ya sea al agua, suelo o aire como parte del ciclo de la materia. A travs
de estos ciclos y con el uso de energa, la materia se va transformando.
Cuando las plantas y animales cumplen sus ciclos vitales, o cuando eliminan desechos o
desprenden partes de su cuerpo (hojas, por ejemplo), estos componentes son descompuestos
por numerosos hongos y bacterias, y vuelven al ambiente en estructuras ms simples que
pueden ser reutilizados por los productores. As los descomponedores tienen importancia no
solo en la cadena alimentaria, sino en la produccin de materia orgnica frtil, es decir el
humus del suelo.
A medida que el hombre comenz a cultivar plantas para su consumo, estos elementos del
suelo se fueron extrayendo junto con las cosechas. Tras aos de agricultura, para mantener la
fertilidad de los suelos, se hace necesario reponer esos minerales. Es por ello que los
agricultores utilizan fertilizantes qumicos y de esa forma aseguran grandes rendimientos.

El ciclo del nitrgeno

El nitrgeno es uno de los minerales fundamentales para las plantas, y si bien el 80% de la
atmsfera est compuesta por N2, ste no es fcilmente asimilable por los organismos. Si
bien en la agricultura es costumbre utilizar fuentes de nitrgeno qumico, existen
microorganismos que son capaces de utilizar el nitrgeno atmosfrico. A travs de mtodos
biolgicos. Ciertas bacterias y cianobacterias tienen la capacidad de llevar a cabo una
reaccin qumica mediante la cual el nitrgeno atmosfrico es transformado en amonaco. En
el suelo, el amonaco es transformado en nitritos y posteriormente en nitratos por diferentes
tipos de bacterias que actan en cada paso.
Las plantas slo pueden absorber el nitrgeno del suelo disuelto en agua en forma de nitratos,
y lo utilizan para formar las protenas. Los animales en cambio, consumen nitrgeno al ingerir
las protenas de las plantas, cuyos aminocidos participan en la formacin de las propias
protenas. Cuando las plantas y animales mueren o eliminan desechos, los microorganismos
descomponedores transforman los compuestos nitrogenados en amonaco. En esta etapa las
bacterias convierten el amonaco en nitratos y una pequea parte en nitrgeno atmosfrico,
con lo cual se completa el ciclo.

Organismos que asimilan nitrgeno atmosfrico

Existen diferentes tipos de microorganismos procariotas que asimilan N2 atmosfrico y lo
convierten en compuestos nitrogenados fcilmente asimilables que devuelven al suelo su
fertilidad. Estos seres vivos pueden estar libres, asociados o constituyendo simbiosis.

Ciertas bacterias ampliamente distribuidas en suelos, aguas y heces y algunas especies de
algas verdeazules (cianobacterias) que se desarrollan independientemente sobre rocas y
sedimentos en las costas de los cursos de aguas, fijan N2 y lo liberan al medio y ste puede
entonces ser aprovechado por otros organismos.
Otros microorganismos, en cambio, viven asociados y pueden fijar N2 en lugares donde la
concentracin de oxgeno es muy baja. Un caso es el de bacterias asociadas a races de
gramneas o pastos, donde aprovechan azcares y otros compuestos exudados por la planta
para fijar ciertas cantidades de N2 que eventualmente son asimiladas por las plantas. Un
ejemplo de estas bacterias es Azospirillum que se asocia a races de trigo y maz.
Otras asociaciones se dan con bacterias endofitas que penetran y viven en el interior de
gramneas en los espacios intercelulares y se mueven por los vasos del xilema. Entre ellas
estn el Acetobacter y Herbaspirillum que se asocian con la caa de azcar y Azoarcus capaz
de asimilar N2 invadiendo las races de arroz.
Entre estos microorganismos algunas bacterias tienen gran importancia porque en
determinadas condiciones sintetizan sustancias estimuladoras del crecimiento vegetal, tales
como, vitaminas, cido indolactico, cido giberlico o citoquininas. Es por ello que se las
conoce como promotoras del crecimiento vegetal. Adems, son capaces de producir
sustancias fungistticas que inhiben el crecimiento de importantes hongos del suelo que
afectan a las plantas, como Fusarium, Alternaria, Penicillium y Rhizoctonia. Esto permite que
las bacterias sean usadas en planes de control biolgico de patgenos (biocontrol).
Finalmente, hay otros tipos de microorganismos capaces de utilizar el nitrgeno atmosfrico al
vivir en simbiosis con otros seres vivos:
1. Las bacterias Rhizobium que se asocian con un grupo muy grande de plantas leguminosas
(chaucha, arveja, poroto, man, lenteja, soja);
2. Las bacterias Frankia, capaces de asociarse con ms de 250 especies de plantas no
leguminosas, denominadas plantas actinorrcicas que colonizan suelos pobres en nitrgeno.
Existen otras asociaciones simbiticas como las formadas entre plantas vasculares y
cianobacterias (algas verdeazules).

El caso de simbiosis Rhizobium-leguminosas

En la mayora de los agroecosistemas el 80% del nitrgeno fijado biolgicamente ocurre a
travs de la simbiosis entre bacterias Rhizobium y plantas leguminosas. La asociacin se
inicia con el proceso de infeccin, cuando las bacterias reconocen las races de las plantas. La
bacteria atraviesa las paredes de las races llegando al interior de las clulas vegetales dnde
forma unas estructuras llamadas ndulos. Estos ndulos constituyen el hogar de las bacterias
y es donde se realiza la reaccin qumica a travs de la cual el N2 atmosfrico es convertido
en amonio que es luego exportado al tejido vegetal para la formacin de protenas y otros
compuestos nitrogenados. Por su parte, la glucosa fabricada por la planta durante la
fotosntesis es transportada a la raz donde las bacterias la usan como fuente de energa. De
esta relacin ambos organismos (planta y bacteria) se benefician.

Simbiosis Rhizobium-leguminosa. Fuente: http://web.educastur.princast.es/

Aplicaciones de las bacterias fijadoras de nitrgeno y promotoras del crecimiento

Con el avance del conocimiento, el hombre comenz a utilizar estos microorganismos y
asociaciones beneficiosas como la de las bacterias y leguminosas. En la actualidad, los
agricultores, adems de rotar los cultivos, emplean microorganismos como biofertilizantes, y
aplican mtodos de biocontrol para proteger a las plantas contra el ataque de patgenos,
plagas y malezas.
Biofertilizantes: La bacteria Rhizobium es una de las utilizadas como biofertilizante para
facilitar la asimilacin de nitrgeno en los cultivos de leguminosas. Esta bacteria es un
habitante comn en los suelos agrcolas. Sin embargo, para aumentar su poblacin y, en
consecuencia, la capacidad de fijacin de nitrgeno atmosfrico, los agricultores agregan a las
semillas, antes de la siembra, una mezcla de bacterias Rhizobium y otros ingredientes que
facilitan su crecimiento. Esta prctica tiene grandes beneficios ambientales ya que al favorecer
la fijacin simbitica de nitrgeno, disminuye la necesidad de aplicar fertilizantes nitrogenados
y la contaminacin por nitrgeno asociada al empleo de estos productos. En la Argentina
existen varias empresas e institutos pblicos que trabajan en investigacin y desarrollo de
estas bacterias beneficiosas, con el objetivo de mejorar la eficiencia de fijacin de nitrgeno.
Tambin se estudia la posibilidad de inducir simbiosis beneficiosas en otros cultivos como el
arroz y el maz a travs de tcnicas de ingeniera gentica.
Biocontrol: Los mtodos de control biolgico de plagas y enfermedades buscan proteger a
las plantas mediante el uso de microorganismos que compitan por los nutrientes con los
patgenos o directamente otorguen resistencia a las plantas, por ejemplo al producir
antibiticos. Desde hace ms de un siglo, la bacteria de la familia Azotobacter es usada con
este objetivo en agricultura, observndose notables incrementos en los rendimientos en
diferentes cultivos, principalmente en cereales. Tambin las bacterias del gnero Bacillus y
Streptomyces han resultado muy eficaces en el control de enfermedades. Estas bacterias
producen una amplia variedad de sustancias con capacidad antimicrobiana.
El Bacillus thuringiensis (BT) es un agente de biocontrol que representa el 90% del mercado
mundial de bioinsecticidas. Cuando forma esporas tambin produce unos cristales constituidos
por protenas que tienen propiedades insecticidas. Esas endotoxinas forman parte de
formulaciones comerciales de bioinsecticidas. Se han obtenido plantas transgnicas, como el
maz BT, que contienen el gen de estas protenas insecticidas, y en consecuencia resisten al
ataque de los insectos. Es decir que la misma planta produce el insecticida especfico, lo que
reduce la necesidad de empleo de productos qumicos insecticidas.
Actualmente, cerca de 40 productos estn disponibles en el comercio para el control de
organismos fitopatgenos. La mayora de estas bacterias producen antibiticos como
mecanismo de control de la enfermedad, pero se sigue investigando con el fin de disear
nuevos productos biotecnolgicos para el control biolgico de patgenos en la agricultura


Material y equipo

- Balanza
- Mechero Bunsen
- Bao Mara
- Asa bacteriolgica
- Estufa de incubacin
- Contador de Qubec
- Pipetas de 1 ml estriles
- Lpiz graso y masking tape
- Frascos de dilucin (con 99 ml de agua estril)
- Cajas de Petri estriles
- Tubo con tapn de baquelita
- Vasos de precipitado de 50 ml
- Muestra de suelo
- Medio Basal 50 ml

MTODO DE LA PLACA DE AGAR

1.- Preparacin y seleccin de la alcuota. Seleccione una alcuota de suelo
aplicando la tcnica de cuarteo. Pesar 1gr de tierra y mezclarlo en 9 ml de agua
estril (Solucin de trabajo, dilucin 10
-1
). Agitar bien, para separar el mayor
nmero posible de microbios de la capa coloidal que envuelve la partcula de
tierra.
2.- Mida con pipeta estril 1ml de la suspensin inicial y transfiralo a un frasco
con 99 ml de agua estril. La dilucin de la muestra en este frasco es, 1/1000
1x10
-3.

3.- Agite perfectamente el frasco de dilucin y mida 1ml para transferirlo a otro
frasco que contenga 99 ml de agua estril. La dilucin de la muestra en este
frasco es de 1/100000 1x10
-5
.
4.- Mida 1 ml de cada frasco de dilucin con pipeta estril y depostelo en placas
de Petri, previamente marcadas con la dilucin correspondiente y la fecha de la
siembra.
5.- Vace a cada placa 15 ml del Medio basal (con fuente de nitrgeno) fundido a
40-45 C, incubar las placas a 25C durante 5 das.
6.-Haga observacin del crecimiento microbiano cada 2 das.
7.-Haga el recuento de colonias en la placa utilizando el contador de Quebec.
8.-Reporte el nmero de Unidades Formadoras de Colonias por gramo de tierra.

II) REQUERIMIENTOS NUTRICIONALES DE MICROORGANISMOS DEL
SUELO

Material y equipo

- Estufa de incubacin
- Parrilla elctrica
- Mechero
- Asa bacteriolgica
- Lpiz graso y maskin tape
- Agar lavado (A)
- Agar sales de amonio (AS)
- Agar sales-glucosa (ASG)
- Agar sales-glucosa-peptona (ASGP)
- Agar Dextrosa Sabouraud
- 1 gr de suelo


Siembra de la muestra de suelo

1.- Con un lpiz graso marcar el fondo de cada una de las cajas de Petri, sealando
con una clave cada uno de los medios que se van a utilizar.
2.- Divida el agar de cada placa, en dos partes con el asa estril y caliente.
3.- En condiciones aspticas tomar con el asa previamente esterilizada y fra, una
pequea porcin (asada) de muestra de suelo, del tubo con la suspensin
preparada en la primera parte de la prctica, y sembrar en la mitad de la caja
marcada como (A). La siembra se har por estra (tenga cuidado de no romper el
agar). Una vez efectuada la siembra esterilice el asa.
4.- Repetir el mismo procedimiento en el resto de los medios indicados. (AS),
(ASG), (ASGP), y Agar Dextrosa Sabouraud.
5.- La mitad la placa quedar sin sembrar y servir como control de esterilidad del
medio de cultivo y control de contaminacin ambiental durante el tiempo de
incubacin.
6.- Incubar las placas invertidas 5 das a temperatura ambiente.
7.- Sembrar la placa de Dextrosa Sabouraud de la misma forma.
8.- Examinar el crecimiento que se presenta en cada uno de los medios de cultivo.

RESULTADOS

Requerimientos nutricionales de los microorganismos de la muestra de suelo

Muestra Agar Agar Sales AS-Glucosa ASG-Peptona ADS
Suelo X X XX XX XXX

Sin crecimiento microbiano = -
Escaso crecimiento = +
Moderado crecimiento =++
Abundante crecimiento =+++

RESULTADOS

- Describa las caractersticas coloniales de las colonias aisladas, comprelas con
las reportadas en la literatura.
- Discuta las desventajas y ventajas del mtodo de placa.
- Relacione los microorganismos que se desarrollaron en los medios de cultivo con
el tipo de nutrientes que se les proporcionaron.

CONCLUSIN

Relacione los objetivos de la prctica con los fundamentos tericos y los
resultados obtenidos.


CUESTIONARIO

1.- Cul es la clasificacin de los microorganismos de acuerdo a la fuente de
energa que utilicen y a su fuente de carbono?
2.- Qu microorganismos crecieron en mayor abundancia y a que lo atribuye?
3.- Qu microorganismos del suelo estn relacionados con el ciclo del
nitrgeno? La fijacin biolgica comienza con el proceso que realizan fas bacterias que
transforman el N2 hasta NH3. Las ms importantes son las del gnero Rizobium, que viven
en simbiosis en las races de las plantas leguminosas, cuyas clulas vegetales proporcionan la
energa necesaria para la reduccin de N2 a NH3, por parte de las bacterias. Se forman
compuestos orgnicos nitrogenados que quedan ya incorporados a la planta para formar
protenas y otras molculas orgnicas vegetales. Despus, el nitrgeno orgnico vegetal pasa
a los animales que se alimentan de estas plantas.
Otras bacterias que viven libres en el suelo (Azotobacter, Clostridium) fijan ef N2 hasta
amonaco (NH3) y ste se acumula en el suelo. Del mismo modo lo hacen las cianobactenas o
algas verde-azuladas en el agua.
Los cadveres y otros restos orgnicos son degradados por las bacterias descomponedoras
en distintas sustancias (CO2, H2O), y entre ellas el amonaco (NH3) y otros compuestos de
amonio (proceso de amonificacin), que quedan tambin en el suelo.


4.- Cul es el papel de los hongos en el suelo? Los hongos participan en un sinnmero
de procesos del suelo. Algunos son micorrizales, por lo que aumentan la capacidad de las races de las plantas
para absorber nutrientes. Los hongos, tambin, secretan compuestos qumicos que disuelven minerales, con lo
cual otros organismos pueden disponer de nutrientes. Los basidiomicetos, tambin, se asocian con la habilidad
del suelo para suprimir las enfermedades de las plantas. Algunos actinomicetos producen compuestos que
actan como antibiticos. Streptomycetes sp. fue la fuente original de la estreptomicina. Como grupo, los
hongos, tambin, ayudan a unirse las partculas de suelo creando la "esponjosa" tierra cultivable que resulta
tan deseable para el crecimiento de las races.

A menudo, creemos que los hongos son las "setas" que encontramos visibles sobre la tierra. stas son, slo,
estructuras reproductivas, anlogas a las manzanas. El cuerpo real de un hongo es una masa de filamentos
microscpicos en forma de hilos, llamada micelio. Cada hilo se llama hifa (pl. hifas). Las funciones diarias de
los hongos -secretar enzimas, y absorber nutrientes- son llevadas a cabo por las hifas. En algunos hongos, un
fragmento de hifa puede contener varios ncleos, por lo que una seccin de hifa no es lo mismo que una
clula. Una sola cucharadita de suelo de bosque del Pacfico Noroccidental, a menudo, contiene ms de cien
mil hifas.

Lectura sobre los hongos

Los hongos pueden ser beneficiosos o perjudiciales a las plantas dependiendo del tipo, y lo que emplean como
fuente de alimentacin. Aunque unos pocos hongos, tales como la levadura, son unicelulares, la mayora de
los hongos crecen en largos hilos de clulas microscpicas llamadas hifas. Cada una de las hifas tiene varias
milsimas de pulgada de grosor, y puede fluctuar, en longitud, de unas pocas clulas a muchas yardas.


BIBLIOGRAFA

BROCK, Tomas D., Madigan. M. T. (1991). Microbiologa. 6 de. Prentice Hall
HISPANOAMERICANA S.A. U.S.A.
MADIGAN Michael T.












INSTITUTO TECNOLGICO DE AGUASCALIENTES
LABORATORIO DE MICROBIOLOGA AMBIENTAL
PRCTICA No. 7
TCNICAS PARA RECUENTO MICROBIANO Y DETERMINACIN DE
BIOMASA EN UN SISTEMA BATCH

OBJETIVO

a) Aplicar diferentes tcnicas para determinar el crecimiento microbiano.
b) Demostrar experimentalmente y grficamente las distintas fases del
crecimiento de una poblacin bacteriana dada. utilizando dos mtodos
diferentes.

INTRODUCCIN

http://www.faciasuncoma.com.ar/Carreras/Saneamiento%20Ambiental/MicrobiologiaAmbi
ental/8%20RECUENTO.pdf

Material y equipo

- Estufa de incubacin
- Espectrofotmetro
- Bao de agua con agitacin
- Agitador bortex
- 2 pipetas estriles de l0 ml
- 1 pipeta de l0 ml
- 10 pipetas de l.0 ml
-10 tubos de ensaye de 15 ml
-1 matraz Erlenmeyer de 100 ml
-1 matraz Erlenmeyer de 250 ml
-1 gradilla para tubos de ensaye
- Papel parafilm
- Masking tape
- Marcadores

Reactivos

Jugo de pia 800 ml
H
2
SO
4
1N
BaCl
2
1%
H
2
SO
4
1%
Papel indicador de pH
Levadura de panadera

PROCEDIMIENTO

1.- Preparacin del iniciador. En un matraz Erlenmeyer de 100 ml adicionar 40
ml de jugo de pia y 4.0 gr de levadura de panadera, incubar 15
o
a 25C
(aireado o agitado constantemente mientras dure el periodo de incubacin),
durante 24 horas.
2.- Inoculacin del mosto. Adicionar 40 ml de la semilla preparada
anteriormente, a un matraz Erlenmeyer que contenga 800 ml de jugo de pia
esterilizado anticipadamente.
3.- Sustancias nutritivas. Para cubrir posibles deficiencias de fsforo y
nitrgeno adicionar 2 g de fosfato de amonio.
4.- Ajuste del pH del mosto. El pH se ajusta entre 4 y 4.5. Este pH favorece el
desarrollo de la levadura e inhibe el crecimiento de otros microorganismos.
Para realizar tal ajuste emplear cido sulfrico 1N.
5.- Incubar a una temperatura de 15 a 25
o
C. (airear o agitar constantemente
durante el periodo de incubacin).
Temperaturas por arriba de 30
o
C provocan la evaporacin del alcohol y el
desarrollo de bacterias.
6.- Tomar muestras a los tiempos: 0, 30, 60 y 90 minutos.
7.- Para la determinacin de biomasa aplique la tcnica turbidimtrica y peso
seco de masa bacteriana.
8.-Para la aplicacin de la tcnica turbidimtrica prepare una curva con los
valores turbidimtricos de la escala Mc Farland.

Si los valores turbidimtricos se interpretan en trminos de la escala Mc
Farland, es posible convertirlos en aproximaciones razonables del nmero de
bacterias, o bien levaduras, para esto es preciso construir una curva de
cuantificacin a partir de los tubos Mc Farland, como sigue:
Ponga 10 tubos de ensaye en una gradilla y mrquelos del 1 al 10. Adicione
a cada uno, los volmenes de BaCl
2
y H
2
SO
4
indicados en la tabla siguiente:

CURVA DE CUANTIFICACIN MICROBIANA PARTIR DE LOS TUBOS
MC FARLAND

Escala de
MCFARLAND (tubo)
BaCl
2
al 1%
(ml)
H
2
SO
4
al 1%
(ml)
No aprox. de bacterias
Representado por 10
6
/ml
1 0.1 9.9 300
2 0.2 9.8 600
3 0.3 9.7 900
4 0.4 9.6 1 200
5 0.5 9.5 1 500
6 0.6 9.4 1 800
7 0.7 9.3 2 100
8 0.8 9.2 2 400
9 0.9 9.1 2 700
10 1.0 9.0 3 000
*Esta escala de 3x10
8
a 3x10
9
bacterias por ml, es de gran utilidad en cuanto que,
en la mayora de los experimentos, los conteos quedarn dentro de estos lmites,
excepto en los conteos de muy bajo crecimiento.
La longitud de onda es de 600 nm. Usando agua destilada para el blanco.

600nm A

2.0



1.0



0.0

No aproximado de microorganismos. Representado por 10
6
/ml
ESCALA DE MC FARLAND

Nota: Como nota adicional, le recomendamos que en el mtodo de conteo de
colonias, nicamente se cuenten las bacterias viables (no las muertas), mientras
que el mtodo espectroscpico y el mtodo de Mc Farland cuantifican tanto las
bacterias vivas como las muertas. Estos dos mtodos de conteo son efectivos
cuando se trabaja con cultivos que todava no han alcanzado la parte final de su
fase logartmica, ya que antes de llegar a este punto el nmero de bacterias
muertas en el cultivo es despreciable. Sin embargo, estos mtodos se vuelven
inexactos conforme aumenta el nmero de microorganismos muertos durante la
fase crtica del cultivo. Por lo tanto para poder observar los cambios de poblacin
durante el ciclo, es necesario usar el mtodo de conteo de colonias.

MTODO ESPECTROFOTOMTRICO

Aplicacin de la tcnica turbidimtrica de la escala Mc Farland.

1.-Utilizar un espectrofotmetro. Se puede usar este equipo como turbidmetro
para tomar medidas directas del cultivo original.
2.-Utilizar una celda con jugo de pia para ajustar a cero el aparato.
3.- Leer los cultivos incubados a tiempo 0, 30, 60, 90 min y 24 hs a una longitud de
onda de 600 nm. Todas las lecturas que se tomen debern emplear el jugo de
pia como blanco. Tomar la lectura en absorbancia y % de transmitancia.

RESULTADOS

1.- Graficar la absorbancia y transmitancia en funcin del tiempo. Utilice papel
semilogartmico



A
o


2.0


600nm

1.0


0.0 TIEMPO Hrs.

Etapas de crecimiento de la levadura


Recuerde que a cada lectura de absorbancia corresponde a un No. aproximado de
bacterias por 10
6
/ml

2.- Dibuje la curva de crecimiento. Transforme las cifras obtenidas en las lecturas
a logaritmo base 10. Con los valores obtenidos construya una curva de tiempo
contra logaritmo base 10 cuya imagen dar la curva de crecimiento para un
proceso de una sola fase de la bacteria indicada.

3.- Grafique sus datos en papel milimtrico como se indica.
Eje de las Y = Log No. de bacterias viables contra eje de las X = tiempo en
horas.

4.- Seale en la curva las etapas de crecimiento detectadas durante el tiempo en
que se realizan las determinaciones.


DETERMINACIN DE LA MASA CELULAR NETA Y MASA SECA

Masa celular neta

1.- Seque en la estufa a 100
0
C durante una hora dos tubos de centrfuga.
2.- Enfre los tubos en un desecador y pselos en una balanza analtica (P
1
).
3.-Tome una alcuota de 10 ml del cultivo de levaduras y centrifugue los tubos,
durante 10 minutos a 3000 rpm.
4.- Decante los tubos y pselos en la balanza (P
2
).
Masa celular = P
2
P
1

5.- Determinar los cultivos incubados a tiempo 0, 30, 60, 90 min y 24 hs.

Masa seca

5.- Ponga los tubos centrifugados en una estufa a 105
0
C durante 24 horas.
6.- Pese los tubos (P
3
).
Masa seca = P
3

P
1

Nota: Masa seca de las clulas bacterianas es aproximadamente entre 10 y 20. 5
% de la masa hmeda.

CONCLUSIN

CUESTIONARIO

1.- Diga cul es la importancia de realizar una curva de crecimiento
bacteriano y qu nos indica sta?
2.- Esquematice la curva de crecimiento bacteriano (indicando las diferentes
fases del crecimiento).
3.- Por qu se efectan distintas diluciones de cada uno de los cultivos
incubados en tiempos diferentes?
4.- Calcule el tiempo de generacin y la tasa de crecimiento para la poblacin en
los 90 min de crecimiento.
5.- Calcule la poblacin despus de 24 horas de incubacin.

BIBLIOGRAFA

BROCK, T.D.; Smith, D. W. & Madigan, M.T.(1993) Microbiologa, Prentice Hall
Hispanoamericana S.A., Sexta Edicin,
PELCZAR Michael J. Y col.(1984). Elementos de Microbiologa. McGraw-Hill.
Mxico