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TOXICOLOGIA.
Dr. Julio C. Almanza Prez
PRACTICA 4 ABSORCION. INFLUENCIA DE LA VI A DE
ADMINISTRACION EN LA CONCENTRACION PLASMATICA DE
UN FARMACO.
LICENCIATURA EN BIOLOGIA EXPERIMENTAL.
ALUMNOS:
CRUZ RODIGUEZ FRANCISCO
GMEZ ZIGA ANDREA
HERNANDEZ GARCIA GUADALUPE ELISA
DAZ ESCORCIA FREEDDY
DORANTES ARREOLA ARELY
ALCALA VARGAS FRANCISCO
FLORES VICENTE OMAR ANTONIO
09 DE JUNIO DEL 2014
Principios de Farmacologa y Toxicologa /Practica No. 4 Pgina 2
Introduccin
Las diferencias de magnitud de los procesos farmacocinticos (absorcin, distribucin y
biotransformacin) entre individuos y en el mismo individuo a lo largo de su vida, determinan que
tanto los niveles de concentracin plasmtica y la permanencia de un frmaco en el organismo,
sean la causa de la intensidad y duracin del efecto clnico obtenido. Para muchos frmacos se ha
determinado un margen o ventana o lmites (mnimo y mximo) de concentraciones plasmticas,
que en la mayora de los individuos de una poblacin permiten obtener el efecto teraputico
deseado con un mnimo riesgo de efectos indeseables dosis-dependientes (Flrez J, 1997).
La utilidad de la farmacocintica en la prctica clnica, reside en que permite calcular las dosis y el
intervalo de dosificacin de un frmaco a fin de poder lograr las concentraciones plasmticas que
se desean alcanzar para un individuo, en particular para lograr el efecto clnico deseado (Katsung B,
2010).
Para muchos frmacos como por ejemplo los antihipertensivos o los cardiotnicos como la
digoxina, no es necesario efectuar clculos farmacocinticos, porque para manipular el plan de
administracin (dosis e intervalo) a fin de obtener el efecto teraputico buscado se toma como
referencia la magnitud de un efecto farmacolgico observable que en el primer caso es la presin
arterial y en el segundo caso es el efecto de toxicidad extracardaca (Ritschel WA, 1985).
En cambio para otro tipo de frmacos como pueden ser los antiepilpticos o los antibiticos
aminoglucsidos, el mtodo anterior no da resultado. Esto se debe porque el efecto teraputico es
difcil de evaluar debido a que no disponemos de parmetros clnicos o efectos teraputicos
observables y no se puede saber si continuar con el rgimen de dosificacin, o si por el contrario,
este debe ser modificado. En estos casos, el esquema teraputico est orientado a lograr una
concentracin plasmtica predefinida (Rowland M, 1995).
Esta concentracin plasmtica se ubica entre la concentracin mxima (Cmax) y la concentracin
mnima (Cmin) de la ventana teraputica, y la misma ya es conocida de antemano para muchos
frmacos. El margen teraputico para frmacos que ejercen un efecto clnico se obtiene mediante
una valoracin clnica cuidadosa de la respuesta farmacolgica de un nmero suficiente de
individuos seleccionados de forma apropiada. Para los agentes antimicrobianos, el margen
teraputico se establece en base a un parmetro farmacodinmico esttico que es la
concentracin inhibitoria mnima (CIM) para las bacterias susceptibles (Zinsberg G, 2002).
Las variaciones especficas de la respuesta farmacolgica de muchos frmacos, pueden ser
atribuidas a diferencias en su biodisponibilidad sistmica (cantidad de medicamento absorbido y
velocidad del proceso de absorcin). ste fenmeno est asociado a la forma farmacutica y a la
va de administracin empleada cuando el medicamento se administran por va oral o parenteral
no intravenosa (Heinz L, 2000)
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Objetivos generales
Determinar la cantidad de sulfatizol sdico presente en el plasma sanguneo de ratas, a
diferentes intervalos de tiempo.
Comparar las cinticas de absorcin del sulfatiazol sdico suministrado por diferentes vas
de administracin (intragastrica e intraperitoneal).
Objetivos Particulares
Conocer el manejo de ratas, como modelo experimental dentro de la farmacologa.
Conocer la tcnica de puncin cardiaca en ratas, para la obtencin de sangre.
Conocer la concentracin del sulfatiazol sdico en el plasma sanguneo de rata por tcnica
foto colorimtrica.
Material y Mtodos
Se emplearon 2 ratas hembras de la cepa Wistar las cuales se marcaron para su identificacin, rata
1 (va intragastrica) y rata 2 (va intraperitoneal), cabe seala que la va de administracin de la
rata 2, fue una modificacin a lo dictado por el manual de prcticas, que manifestaba el uso de la
va subcutnea. A este equipo le correspondi el tiempo 60 (T
60
= 60 minutos) para la va
intragastrica y el tiempo cero (T
0
= 0 minutos) para la va intraperitoneal. El tiempo estuvo
distribuido en los diferentes equipos, como se muestra en la tabla 1.
Tabla 1. Intervalos de tiempo en la administracin de sulfatiazol sdico en ratas por la va
intragastrica e intraperitoneal.
Tiempo
(minutos)
Va Intragastrica Va intraperitoneal
T
0
3 2
T
15
1 3
T
30
6 5
T
45
5 1
T
60
2 6
En la tabla1 se muestran los diferentes tiempos de administracin del sulfatiazol sdico por las 2
vas empleadas, as como el nmero de equipo correspondiente a cada uno de los tiempos.
(Nuestro equipo fue el numero 2).
Ya distribuido los tiempos de administracin, el equipo preparo los carriles de dilucin, esto con
ayuda de una gradilla metlica y 8 tubos de ensayo, que fueron divididos en 2 lotes (4 tubos de
cada lote) etiquetando los tubos por nmero y va de administracin, agregando a los dos
primeros tubos de las diferentes vas, 9 ml de agua destilada con pipetas de 10 ml para mayor
precisin y exactitud. Se procedi a la administracin de 2ml de sulfatiazol sdico a la rata 2 (que
corresponda al tiempo cero y va intraperitoneal) e inmediatamente se le sacrifico con
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pentobarbital sdico va intraperitoneal, por puncin cardiaca se extrajo 1 ml de sangre
(empleando una jeringa de 5 ml de calibre) y se deposit en el tubo 1 del carril de dilucin, se
disecto y se extrajeron por completo hgado, corazn, cerebro y riones, mismos que fueron
colectados y envueltos en trozos de papel aluminio, y depositados dentro de un tubo de ensayo de
plstico para llevarlos al ultracongelador. Esto correspondi a la segunda modificacin hecha al
protocolo, pues se aprovech los rganos de ambas ratas, para evitar el sacrifico de otros
especmenes para su obtencin y procesado de rganos en la prxima prctica.
Despus se llev acabo la tcnica modificada Bratton-Marschall (ver ms adelante) tomando una
alcuota de 1 ml de la muestra del tubo 1, con ayuda de pipetas de 1ml para mayor precisin y
exactitud y depositado en un tubo 2 que se le aadi 15 ml de agua destilada y 4 ml de cido
tricloroacetico (CCl
3
COOH) al 15 % . Con ayuda de un embudo de vidrio y papel filtro, se filtr el
contenido del tubo 2, colectndolo en otro tubo (tubo 3) despus se procedi a realizar la tcnica
de coloracin, tomando una alcuota de 5 ml del tubo 3, tambin se le aadi 1 ml de nitrito de
sodio (NaNO
2
) al 1%, (esto fue el tubo 4) despus de transcurridos 3 minutos se aadi a ese
mismo tubo 1 ml de sulfamato de amonio ((NH
4
)
2
S0
4
) al 0.5 % Naftiletilendiamina al 1 %, despus
se filtr y con ayuda de una celda y un fotocolormetro se procedi a su lectura a 545 nm de
longitud de onda.
Se realiz exactamente para la rata 1 (correspondiente al tiempo 60 y va intragastrica) en esta
rata en particular se tuvieron dificultades en cuanto a la puncin cardiaca, ya que no se realiz
cuando el corazn aun bombeaba sangre, por lo cual se disecto de manera rpida y se extrajo la
sangre a corazn abierto, otra de las particulares que presento la rata, fue el que se encontr una
masa fibrosa (posiblemente un tumor benigno) que cubra casi en su totalidad al corazn de la
rata. De igual manera se procedi a la dilucin, coloracin y lectura de las muestras que en la rata
2.
Resultados
Por grupo obtuvimos las absorbancias a 545 nm para las dos vas administradas a diferentes
tiempos tal como se muestra en la tabla 1.
TABLA 1. ABSORBANCIA A DIFERENTES TIEMPOS; VIA INTRAGASTRICA E INTRAPERITONEAL
VIA
INTRAGASTRICA
Tiempo Abs 545 nm
15 0.026
30 0.028
45 0.025
60 0.016
VIA INTRAPERITONEAL
15 0.067
30 0.048
45 0.03
60 0.015
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Utilizando la curva de calibracin para sulfatiazol sdico (GRAFICA 1.) se determin la
concentracin plasmtica del sulfatiazol sdico administrado en g/5mL y usando un factor de
dilucin de 40 para obtener la concentracin en g/Ml, como se observa en la Tabla 2.
GRAFICA 1. CURVA DE CALIBRACIN PARA SULFATIAZOL SDICO
TABLA2. CONCENTRACION PLASMATICA DE SULFATIAZOL SODICO (g/mL) A DIFERENTES TIEMPOS
CURVA DE CALIBRACION PARA
SULFATIAZOL SODICO
y = 0.023x + 0.0074
R = 0.9998
0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
0.8
0.9
1
0 10 20 30 40 50
A
B
S
O
R
B
A
N
C
I
A
CONCENTRACIN g/5mL
CURVA PATRON
CURVA PATRON
Lineal (CURVA PATRON)
15 0.026 0.405405405 16.21621622
30 0.028 0.675675676 27.02702703
45 0.025 0.27027027 10.81081081
60 0.016 -0.945945946 -37.83783784
15 0.067 5.945945946 237.8378378
30 0.048 3.378378378 135.1351351
45 0.03 0.945945946 37.83783784
60 0.015 -1.081081081 -43.24324324
Intraperitoneal
Intragastrica 40
40
Via de admon. Tiempo Abs 545 nm g/ 5ml Factor de dilucion g/ ml
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Discusin
Las sulfonamidas se administran por va oral, intravenosa, intraperitoneal y tpica. Se absorben en
el aparato digestivo y alcanzan una concentracin mayor en lquido extraplasmtico. Se
distribuyen fcilmente en todos los tejidos atravesando la barrera placentaria y hematoenceflica.
Se deben emplear al menos dos de estas vas para poder tener una comparacin de la absorcin
del compuesto con respecto de la otra va (Sumano L.H, Ocampo C., 1997).
El sulfatiazol se une alrededor del 60-70 % a las protenas plasmticas, la fraccin de sulfas libre es
la que est disponible para su distribucin en el organismo. En general el volumen de distribucin
de las sulfonamidas es de 0.3 0.8 l/ kg. Se acetilan en el hgado en mayor porcentaje y se
excretan principalmente por los riones. Ordinariamente las concentraciones en riones son
superiores a las plasmticas, mientras que en la piel, hgado y pulmones son ligeramente
inferiores. El Sulfatiazol Sdico se clasifica dentro del grupo de las sulfas de absorcin y excrecin
rpida (Flix B.G, 2005).
Habitualmente las sulfamidas se administran por va oral y ocasionalmente por va intravenosa
(sulfadiazina, cotrimoxazol o sulfatiazol sdico) y tpica como la sulfadiazina argntica. Las
sulfamidas que se absorben por va digestiva lo hacen con rapidez en el estmago e intestino
delgado alcanzando tras una dosis de 2 g una concentracin en la sangre de 50-100 g/ml tanto las
de accin corta o intermedia como las de accin prolongada (comparado con nuestros resultados
la concentracin fue, relativamente ms baja). Las sulfamidas tpicas se absorben parcialmente y
pueden ser detectadas en la sangre. La distribucin vara en funcin del comportamiento de cada
compuesto, dependiendo de su unin a las protenas y su metabolismo. En general, se distribuyen
bien por todo el organismo y alcanzan concentraciones cercanas al 80% de los niveles sricos en el
lquido sinovial, pleural o peritoneal. La concentracin en el lquido cefalorraqudeo (LCR) de las
sulfamidas de accin corta es del 30-80% de las correspondientes concentraciones plasmticas
(Skold O., 2000)
Conclusin
Se determin la cantidad de sulfatiazol sdico presente en el plasma de las ratas a diferentes
intervalos de tiempo.
Se compararon las cinticas de absorcin del sulfatiazol sdico suministrado por las vas de
administracin intrgastrica e intraperitoneal; y se observ que la va intraperitoneal tiene mayor
concentracin que la via intragastrica.
Cuestionario
1. Cul es la causa por la que se eligi tomar la muestra de sangre por puncin cardiaca?
Por qu de este modo, obtenemos una mayor cantidad de muestra de sangre que de cualquier
otra parte atmica de la rata. Como la puncin fue a diferentes tiempos nos permite conocer la
cantidad del frmaco que ha sido absorbido y transformado.
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2. Qu objetivo tiene adicionar a la muestra problema cido tricloroactico al 15%?
El metabolito inactivo del cido tricloroactico se une a las protenas plasmticas de un 71-88%
desplazando a otros frmacos cidos de su unin a protenas. Y adems si previamente se hidroliza
la sangre por calentamiento con un cido o una base, se comprueba al efectuar la administracin
que hay un aumento en la intensidad de la coloracin, de donde se infiere que la hidrolisis ha
liberado un producto conjugado. Precipita a las protenas presentes en la sangre (Goodman G.,
1981)
3. Investigue cual es el fundamento de la tcnica de Bratton- Marshall para sulfonamidas
Est basada en la disociacin en medio acido de la parte aminada libre con el cido nitroso yen la
copulacin subsiguiente del compuesto diazoico, resultante con la dimtilalfanaftilamina, el Naftol,
el timol o la naftil diclorhidrato de etilenodiamina, lo que da una coloracin roja purpurea
fcilmente valorable por colorimetra. Esta reaccin es tan sensible que segn Marshall se muestra
positiva en diluciones de una parte de sulfonamida en veinte millones de partes de agua.
Las aminas libres en los compuestos, reaccionan con el nitrito de sodio formndose una sal en un
medio acido, luego, este compuesto forma un complejo con N-1-napthylenediamine
dyhydrochloride (NEDA) dando como resultado una coloracin purpura (Goodman G. 1981)
4. Investigue como se determina el factor de dilucin para este mtodo analtico
El factor de disolucin para este mtodo es de 40, el cual proviene de la multiplicacin de los dos
factores de disolucin presentes en el mtodo analtico, es decir, en el paso nmero uno, nos
indican mezclar 1 ml de sangre con 9 ml de agua destilada para constituir la muestra, en este
punto tenemos un factor de dilucin de 1/10; en el paso dos nos indica que debemos tomar 1 ml
de la muestra anterior y se mezcl con 15 ml de agua destilada y 4 ml de cido tricloroacetico cuyo
factor de dilucin es de 1/20. Si multiplicamos ambos factores tenemos los factores de dilucin
manejados:
(1/10)*(1/20)=1/200
Si obtenemos el inverso del mismo:
(1/200)-1=200
Finalmente, lo dividimos entre los 5 ml pertenecientes a la curva de calibracin, tenemos:
200/5= 40
(Flores J.2007)
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Bibliografa
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