MICROBIOLOGA GENERAL UNIVERSIDAD DE PAMPLONA Pgina 1 de 11 VERSIN 2 - 1 - OBJETIVO GENERAL Reconocer los diferentes medios de cultivo existentes para el crecimiento de microorganismos aplicando los conceptos bsicos de nutricin ! preparacin de los mismos" OBJETIVOS ESPECIFICOS #nali$ar la definicin% clasificacin ! propiedades de los medios de cultivo" &iscutir la t'cnica ! los puntos esenciales (ue deben tenerse en cuenta en la preparacin de un medio de cultivo" Enunciar e)emplos ! fundamentos de los medios de cultivos simples% selectivos diferenciales% enri(uecidos% con a$*cares ! medios de transporte" +reparar en pe(ue,os grupos los medios de cultivo% l-(uido o slido asignados por el docente. siguiendo las instrucciones dadas en la eti(ueta del medio respectivo" #lmacenar los medios de cultivo /preparados o sint'ticos0 en el lugar adecuado" MARCO TEORICO 1omo todos los organismos vivos% los microorganismos re(uieren ciertos nutrientes bsicos ! factores f-sicos para el mantenimiento de su vida% estas necesidades var-an seg*n el tipo de microorganismo ! es necesario conocerlas para cultivarlos en el laboratorio" 2as necesidades nutricionales bsicas pueden suministrarse en el laboratorio por la variedad de medios de cultivo. estos en general suministran3 1" Una fuente de carbono3 el carbono es un componente esencial ! central para conformar la estructura celular ! permitir a la c'lula reali$ar todas sus funciones" Seg*n la fuente de carbono los microorganismos se encuentran en dos grupo3 auttrofos ! 4etertrofos" 2os organismos auttrofos pueden cultivarse en medios (ue contengan *nicamente compuestos inorgnicos. usan principalmente dixido de carbono como carbono inorgnico" 2os organismos 4etertrofos en su lugar necesitan un suministro de carbono orgnico por e)emplo glucosa" 2" Una fuente de Nitrgeno3 elemento esencial para (ue la c'lula constru!a macromol'culas como prote-nas ! cidos nucleicos" #lgunos microorganismos usan nitrgeno atmosf'rico% otros emplean sales de nitrato o de amonio como compuestos inorgnicos as- como otras re(uieren compuestos orgnicos (ue contengan nitrgeno como aminocidos" 5" Elementos no metlicos3 iones no metlicos como el #$ufre ! el 6sforo" El #$ufre puede encontrarse en prote-nas% sulfatos o #$ufre elemental% mientras el fsforo esta formando sales" 7" Elementos metlicos /1a% 8n% Na% 9% 1u% :n% :g% 6e ;2 ! 6e ;5 03 2lamados tambi'n micronutrientes% oligoelementos o elementos tra$a" Encontrados en sales inorgnicas ! tomados en ba)as concentraciones" <" Vitaminas3 los microorganismos puede tomarlas del medio% elaboradas o sinteti$arlas" #lgunos poseen una variedad de v-as para sinteti$ar vitaminas% mientras otros sinteti$an un n*mero mu! limitado de ellas a partir de componentes del medio. otros las re(uieren como suministro" =" Agua" >" Energa3 Existen dos tipos bioenerg'ticos de microorganismos% fottrofos ! (uimitrofos" 2os fottrofos emplean la energ-a radiante /lu$ solar0 como *nica fuente de energ-a" 2os (uimitrofos ELABORADO POR: DOCENTES DE MIROBIOLOGA GENERAL
PRACTICA N 3 PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO MICROBIOLOGA GENERAL UNIVERSIDAD DE PAMPLONA Pgina 2 de 11 VERSIN 2 - 2 - obtienen la energ-a por oxidacin de compuestos (u-micos los cuales pueden ser mol'culas orgnicas o inorgnicas 2as necesidades f-sicas involucran factores como3 temperatura% p? ! gases% los cuales se encuentran en un rango ptimo espec-ficos para cada microorganismo% por lo tanto su variacin puede acelerar o disminuir su crecimiento" El microbilogo busca satisfacer las necesidades nutricionales para recuperar ! crecer los microorganismos. de manera general estos medios pueden ser medios artificiales o medios (u-micamente definidos" +ara los (u-micamente definidos se conocen las cantidades exactas de compuestos (u-micos puros (ue los conforman !a sean de tipo orgnico como inorgnico" 2os medios artificiales estn compuestos de un n*mero limitado de sustancias comple)as% extractos de plantas% de animales% cu!a composicin (u-mica exacta no se conoce" 2os microorganismos en general pueden tomar los re(uerimientos nutricionales de los medios de cultivo% !a sean sustancias naturales o artificiales para multiplicarse" MEDIOS DE CULTIVO El conocimiento de la nutricin microbiana permite el cultivo de los microorganismos en el 2aboratorio" @n medio de cultivo es una solucin acuosa /bien como tal% o bien incorporada a un coloide en estado de gel0 en las (ue estn presentes todas las sustancias necesarias para el crecimiento de un /os0 determinado/s0 microorganismo/s0" PROPIEDADES DE LOS MEDIOS DE CULTIVO ?@:E&#&3 Indispensable para el crecimiento de microorganismos% su carencia /desecacin0 puede llevar a la muerte del microorganismo" 6ERAI2I&#&3 Se refieren a los elementos o compuestos bsicos (ue permiten el crecimiento bacteriano" p?3 Se refiere a los p? ptimos para el desarrollo bacteriano% indispensable para su aislamiento. variaciones cidas o alcalinas% pueden in4ibir su crecimiento" AR#NS+#REN1I#3 +ermite la observacin bacteriolgica% evidenciar morfolgica ! f-sicamente su crecimiento en medios de cultivo adecuado" CLASIFICACIN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO SEGN SU ESTADO FSICO S2I&BS 1"< a 2"C D de agar E agar SE:IS2I&BS C"< D de agar E agar 2FG@I&BS No contienen agar HI6#SI1B 1ontiene fase slida ! fase li(uida /listos para utili$ar0 N#A@R#2ES @tili$ados para cultivar microorganismos tal ! como se encuentran en la naturale$a" Se usan con base a la experiencia ! no a su composicin" E)3 Sangre diluida% lec4e% )ugos vegetales" ELABORADO POR: DOCENTES DE MIROBIOLOGA GENERAL
PRACTICA N 3 PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO MICROBIOLOGA GENERAL UNIVERSIDAD DE PAMPLONA Pgina 3 de 11 VERSIN 2 - 5 - SEGN SU NATURALEZA O COMPOSICIN SINAIAI1BS &e composicin exactamente conocida" 2os mas utili$ados son los medios comerciales des4idratados" VIVBS 1ontienen c'lulas u organismos vivos% como las c'lulas de ri,n de mono o 4uevos embrionados" SEGN SU PROPOSITO #SI2#:IENAB &E :I1RBBRJ#- NIS:BS :E&IBS ENRIG@E1I&BS 1on adicin de sangre% suero o extractos de te)idos de animales o plantas al caldo o agar% proporcionando sustancias nutritivas complementarias para el crecimiento de microorganismos exigentes :E&IBS SE2E1AIVBS K 1on adicin de algunas sustancias (ue no permiten el desarrollo de un grupo de microorganismos sin afectar el desarrollo de los grupos de inter's" En principio se pueden seleccionar los microorganismos (ue se desarrollan en medios orgnicos poco comunes% caso en el cual se omiten otros compuestos de carbono" :E&IBS &I6EREN1I#2ESK 1ontienen reactivos (u-micos (ue traen como resultado determinado tipo de crecimiento bacteriano despu's de la incubacin /observacin de 4emlisis ! coloraciones de las colonias0" :E&IBS +#R# I&ENAI6I1#1IN +ara determinar el tipo de crecimiento producido por los microorganismos% as- como la capacidad para producir cambias (u-micos% se utili$a de manera convencional una amplia variedad de medios de cultivo" K Existen medios (ue pueden cumplir funciones mixtas es decir permiten aislar organismos ! muestran una reaccin o cambio (u-mico especifico de metabolismo como coloraciones de colonias o cambios de color del medio% es decir selectivos ! diferenciales al tiempo" 2a presentacin comercial de los medios sint'ticos ! des4idratados pueden ser en polvo o granulados" En el mercado se pueden encontrar medios listos para fundir o medios servidos en placas petri o tubos Medios de !"#i$o %&'(!"'dos Son medios de cultivo elaborados a partir de materias primas sometidas a molienda% me$clado% pulveri$acin ! granulacin /#glutinacin de la me$cla polvorienta0 Este tipo de medios tienen algunas venta)as frente a los medios tradicionales en polvo% como lo es3 Reduce alergi$acin o respiracin de sustancias txicas por produccin de polvo" :enor ad4erencia a las paredes de los recipientes ELABORADO POR: DOCENTES DE MIROBIOLOGA GENERAL
PRACTICA N 3 PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO MICROBIOLOGA GENERAL UNIVERSIDAD DE PAMPLONA Pgina 4 de 11 VERSIN 2 - 7 - :a!or facilidad de pesa)e" :e)or 4umectabilidad /grumos fcilmente solubles0 No se produce desme$clamiento de todos los componentes% en el almacenamiento prolongado" :e)or conservacin" ALMACENAMIENTO ) CONSERVACIN 2os medios de cultivo des4idratados se deben conservar en lugar seco% protegidos contra la lu$% a una temperatura entre 1< a 5CL1 ! en envases bien cerrados" &espu's de 4aber sido retirada una cantidad de medio de los envases% estos deben cerrarse firmemente" 2os medios de cultivo preparados ! esterili$ados listos para su uso son utili$ables por tiempos cortos% mximo de una semana ! lo ms conveniente es almacenarlos a temperatura de refrigeracin /mximo 7L10% aun(ue algunos medios (ue contienen tioglicolato se conservan me)or a temperatura ambiente ! protegidos de la lu$ por un tiempo mximo de 7 d-as" Ha)o condiciones ptimas de almacenamiento los medios des4idratados conservan sus cualidades durante el tiempo indicado ! 4asta la caducidad impresa en la eti(ueta del recipiente" # los medio de cultivos se les reali$a Aest de esterilidad% !a sea cuando estn des4idratado /Ecom'trico0% o preparados" En el *ltimo caso se toma del lote una muestra no inferior al <D% incubndose estas muestra a 5>L1M274" 6inali$ado el tiempo de incubacin se observa si presenta crecimiento microbiano con el fin de descartar los medios contaminados" PREPARACIN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO Es un proceso clave en el traba)o de rutina e investigacin bacteriolgica" +ara obtener un producto final bien terminado /medio de cultivo0 deber contarse con la 4abilidad% destre$a% conocimientos bsicos en fisico(u-mica ! bacteriolog-a" 1" &ISB2@1IN &E2 :E&IB &E 1@2AIVB &ES?I&R#A#&B3 Se debe emplear agua limpia% reci'n destilada o desminerali$ada ! con p? lo ms cercano posible al neutro" 2os recipientes a usar deben ser lo suficientemente grandes para (ue el medio sea agitado con facilidad" Inicialmente se a,ade la mitad de agua ! se agita suficientemente para conseguir una suspensin 4omog'nea. despu's se incorpora la cantidad de agua restante" Aodo tipo de medio de cultivo es sensible al calentamiento% no debe calentarse ms de lo estrictamente necesario" 2eer siempre la eti(ueta del envase% en caso de (ue no deba ser sometido a ulterior esterili$acin en autoclave% es imprescindible prestar atencin en su disolucin completa% esto se confirma cuando al agitar no se ad4iere a la pared interna del recipiente ninguna part-cula de agar o medio ! la solucin resbala libremente" Si la preparacin es de ms de 2 litros% se recomienda desle-r el medio de cultivo en una d'cima aproximada a la cantidad prevista de agua ! de)arla remo)ar durante 1< minutos. calentar a ebullicin el agua restante% agregar 'sta agua con constante agitacin al medio remo)ado% ! calentar 4asta su completa disolucin" ELABORADO POR: DOCENTES DE MIROBIOLOGA GENERAL
PRACTICA N 3 PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO MICROBIOLOGA GENERAL UNIVERSIDAD DE PAMPLONA Pgina 5 de 11 VERSIN 2 - < - 2" ESAERI2I8#1IN3 #ntes de su esterili$acin ! despu's de su completa disolucin se debe repartir el medio de cultivo en los recipientes definitivos o en los (ue ulteriormente se lleve a cabo el traba)o de investigacin% E*e+#o si corresponde a ca)as de petri" 2a esterili$acin% si as- lo indica la eti(ueta% se lleva a cabo en el autoclave a 121L1 a 1< libras de presin por 1< minutos" Aras la esterili$acin ! despu's de 4aber alcan$ado el e(uilibrio de presiones /vlvula abierta0 ! para evitar la sobrecarga t'rmica del medio de cultivo% este debe sacarse enseguida del autoclave ! enfriar los recipientes rpidamente a temperatura de vertido entre 7< ! <CL 1% as- se evitar alterar el medio de cultivo" 5" VERAI&B EN +2#1#3 +reviamente remover el medio de cultivo oscilando el recipiente en sentido circular para entreme$clarlo de manera uniforme" Verter el medio a las ca)as de petri a la temperatura de vertido evitando la formacin de 4umedad en la tapa de la ca)a de petri" 2as burbu)as de aire en la superficie de la placa se eliminan abanicando brevemente con la llama no luminosa de un mec4ero de bunsen" 7" A@HBS &E #J#R IN12IN#&B N SIN IN12IN#1IBN3 2os tubos llenos de medio de cultivo esterili$ado% todav-a l-(uido% se colocan en una posicin inclinada de tal forma (ue se forme una placa de aproximadamente 5 cm" ! una superficie inclinada de iguales dimensiones" /#gar inclinado en pico de flauta0" En los casos en los cuales se re(uiere el medio sin inclinar% estos deben de)arse solidificar en posicin vertical sobre una gradilla" POSIBLES DEFECTOS EN LA MANIPULACIN ) PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO #pelma$amiento de los medios de cultivo des4idratados" Se debe a una conservacin en ambiente exclusivamente 4*medo% puede ser la causa de envase abierto por tiempo prolongado o de)ar mal cerrado el envase despu's de su uso o por ultimo (ue el medio de cultivo este pasado de fec4a" Se recomienda despu's de usarlos% cerrarlos mu! bien ! almacenarlos en posicin 4ori$ontal" &esviacin del p?" 1ausado por utili$acin de agua no neutra% envase mal cerrado% sobrecalentamientro del medio de cultivo durante su preparacin o medio pasado de fec4a" Aurbide$" +recipitacin causada por uso de recipientes incorrectamente limpios% sobrecalentamiento% perdida de agua por evaporacin del medio" Escasa estabilidad del gel" &ebido a la proporcin inadecuada del medio de cultivo des4idratado% mala disolucin% ineficiencia en la agitacin" :edios de cultivo contaminados3 por esterili$acin deficiente o contaminacin ulterior a su preparacin" 1olonias inconcretas o desle-das" 1ausada por superficie del medio 4*meda ! por demasiado inculo en la siembra" ELABORADO POR: DOCENTES DE MIROBIOLOGA GENERAL
PRACTICA N 3 PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO MICROBIOLOGA GENERAL UNIVERSIDAD DE PAMPLONA Pgina 6 de 11 VERSIN 2 - = - CLASES DE MEDIOS DE CULTIVO MEDIOS SIMPLES, #J#R N@ARIAIVB3 1ontiene extracto de carne% peptona% agar" 1#2&B N@ARIAIVB3 1ontiene extracto acuoso de carne adicionado de peptona al 1D ! cloruro de sodio al C"<D" E)m" H?I /brain ?eart infusion0% ASH /caldo se so!a tr!pticasa0% Nutrient brot4" H2BB& #J#R H#SE B ARN+AI1#S# SBN# #J#R3 :edio slido (ue contiene peptona% enri(uecido con sangre desfibrinada de cone)o al >D" @sado para el desarrollo de todo tipo de bacterias ! especialmente para observar la actividad 4emol-tica" MEDIOS ENRI-UECIDOS, #J#R S#NJRE3 #l medio blood agar sangre se le a,ade sangre de cone)o desfibrinada al >D est'ril cuando este tenga una temperatura de 7<L 1 luego de su esterili$acin" #J#R 1?B1B2#AE3 1onsiste en un agar sangre (ue antes de su solidificacin se lleva a 1CCL 1 por 1 minuto /ebullicin0% as- se rompen los glbulos ro)os tomando un color marrn" Se usa para el aislamiento de Haemophilus y Neisseria. :E&IB &E AIBJ2I1B2#AB3 +ermite el aislamiento de aerobios tolerante ! anaerobios" &ebe conservarse en la oscuridad% en tubos tapa rosca% de manera (ue la anaerobiosis se mantenga en el fondo ! la aerobiosis en la superficie" MEDIOS SELECTIVOS ) DIFERENCIALES, #J#R :#1 1BN9EN3 :edio selectivo para el crecimiento de enterobacterias" 1ontiene peptona% sales biliares% lactosa% ! ro)o neutro" #J#R SS3 1ontiene sales biliares en ma!or concentracin (ue el agar :ac 1onOe! ! verde brillante (ue impide el crecimiento de bacterias coliformes pero permite el crecimiento de Salmonella y Shigella. #J#R E:H /EBSIN# #8@2 &E :EAI2ENB03 1ontiene colorante (ue impide el crecimiento de bacterias Jram positivas" 2a E. coli crece dando colonias con brillo metlico caracter-stico" :E&IB &E AE2@RIAB3 +ermite el crecimiento de 1or!nebacterias% Staphylococcus !isterias" El telurito de potasio al 2D es reducido por las 1or!nebacterias reductoras apareciendo colonias de color gris-negro" :E&IB &E S#HB@R#@&3 1ontiene dextrosa peptona o maltosa agar% p? entre < - <"< in4ibiendo el desarrollo de microorganismos (ue no sean 4ongos" ELABORADO POR: DOCENTES DE MIROBIOLOGA GENERAL
PRACTICA N 3 PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO MICROBIOLOGA GENERAL UNIVERSIDAD DE PAMPLONA Pgina 7 de 11 VERSIN 2 - > - MEDIOS DE TRANSPORTE :antienen viables los microorganismos de una muestra antes de (ue se procesen% los conserva evitando su multiplicacin ! su muerte" :E&IB &E SA@#RA3 Se utili$a para transportar muestras de materiales purulentos recogidos con escobilln est'ril" :E&IB &E H@66ER J2I1ERIN#&B3 +ermite el transporte de muestras de materia fecal para coprocultivos manteniendo la viabilidad de la Shigella" MEDIOS BIO-UMICOS DIVERSOS, Son a(uellos (ue demuestran caracter-sticas bio(u-micas particulares de las bacterias" Son3 medios para fermentacin de a$ucares% algunos como3 ASI% 1itrato% SI:% 1aldo :R-V+% caldo malonato% etc" 1omercialmente pueden encontrarse sistemas multipruebas bio(u-micas con 1C o ms parmetros (ue permiten una ms rpida ! precisa identificacin de las propiedades metablicas del microorganismo ! su consiguiente identificacin" MATERIALES ) E-UIPOS 1a)as de petri Aubos de ensa!o +ipetas Erlenme!ers #utoclave 1inta de enmascarar Jasa #lgodn :edios de cultivo des4idratados :ec4ero de Hunsen Estufa el'ctrica Halan$a Esptulas #gua destilada 6rascos tapa a$ul de 2<C ml +robetas +apel filtro PROCEDIMIENTO PARA PREPARACIN MEDIOS DE CULTIVO 1" ?aga el clculo correspondiente para la preparacin del medio de acuerdo con las indicaciones del profesor" 2" :ida el volumen de agua destilada seg*n sus clculos" 5" Aeniendo en cuenta el volumen de agua (ue debe utili$ar% 4aga la relacin de medio a pesar de acuerdo a lo especificado por la eti(ueta del medio" 7" +ese la cantidad de medio necesaria de acuerdo a sus clculos <" :e$cle el medio des4idratado con la mitad del agua% agite suficientemente ! agregue el agua restante" 2leve a ebullicin si es necesario /en el caso de agares"0 =" Esterilice en autoclave seg*n las indicaciones (ue mencione la casa comercial" >" 6inali$ada la esterili$acin sirva as'pticamente aproximadamente 1< o 2C ml" del agar en la ca)a de petri o el volumen adecuado seg*n el tama,o de los tubos" ELABORADO POR: DOCENTES DE MIROBIOLOGA GENERAL
PRACTICA N 3 PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO MICROBIOLOGA GENERAL UNIVERSIDAD DE PAMPLONA Pgina 8 de 11 VERSIN 2 - P - CONSULTA 1omplete la informacin del siguiente cuadro MEDIO DE CULTIVO COMPOSICIN PREPARACIN USO INTERPRETACIN 1#2&B AEAR#AIBN#AB +eptona% carbonato de sodio% Sales biliares% Aiosulfato de sodio% Iodo% Ioduro de potasio% #gua Suspender 7= g del polvo en 1 litro de agua destilada" :e$clar vigorosamente ! llevar a ebullicin" Enfriar a 7<Q1 o menos" #gregar 2C ml de solucin iodurada" :e$clar ! distribuir 1C ml por tubo% en tubos est'riles" No debe calentarse luego de agregar la solucin iodada" El medio base puede mantenerse a 7Q1 % dura varios meses% pero una ve$ agregada la solucin iodada debe usarse en el mismo d-a +uede reali$arse la siembra partiendo de un caldo de pre enri(uecimiento o en forma directa conservando la proporcin 131C" HIS:@AB S@26IAB Extracto de carne% &igerido pancretico de case-na % &igerido p'ptico de te)ido animal % &extrosa % 6osfato de sodio % Sulfato ferroso % Indicador de sulfito de bismuto % #gar % Verde brillante %#gua destilada " Extracto de carne <%C g &igerido pancretico de case-na <%C g &igerido p'ptico de te)ido animal <%C g &extrosa <%C g 6osfato de sodio 7%C g Sulfato ferroso 5CC%C mg Indicador de sulfito de bismuto P%C g #gar 2C%C g Verde brillante 2<%C mg #gua destilada 1"CCC utili$ado para el aislamiento de Salmonella t!p4i ! otros bacilos ent'ricos. Sembrar finamente la superficie de las placas con el material ob)eto de prueba o con material +rocedente de un cultivo de enri(uecimiento" Incubacin3 4asta aprox" 7P 4oras a 5< Q1% ambiente aerobio :E&IB 2BRESAEIN -SENSEN fosfato monopotsico% sulfato de magnesio% citrato de magnesio% asparragina% 4arina de papa% glicerina% 4uevos frescos enteros% verde de mala(uita% agua purificada Re4idratar 5>"5 g del medio base en =CC ml de agua destilada" #dicionar 12 ml de glicerol" Reposar 1C a 1< minutos" 1alentar agitando frecuentemente 4asta el punto de ebullicin durante 1 minuto" 1ultivo ! diferenciacin de mico bacterias% fundamentalmente m!cobacterium tuberculosis Bbservar las caracter-sticas morfolgicas ! la presencia o ausencia de pigmento en las colonias" tener en cuenta el tiempo (ue 4a transcurrido desde la inoculacin 4asta la observacin de crecimiento" ELABORADO POR: DOCENTES DE MIROBIOLOGA GENERAL
PRACTICA N 3 PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO MICROBIOLOGA GENERAL UNIVERSIDAD DE PAMPLONA Pgina 9 de 11 VERSIN 2 - T - Esterili$ar en autoclave a 121L1 /1< lbs de presin0 durante 1< minutos" Enfriar aproximadamente a 7<L1" 1onservar en refrigeracin de 2L a PL1" El medio preparado debe conservarse bien tapado 4asta el momento de usarse" +reparar un litro de 4uevo completo obtenido as'pticamente ! me$clado sin formar burbu)as" :e$clar el 4uevo ! la base con suavidad" &istribuir en tubos de ensa!o est'riles con tapn de rosca" 1olocarlos en posicin inclinada% coagular ! espesar el medio de P<L a TCL1 durante 7< minutos" 2a superficie del medio tiene un color verde claro :E&IB A?#NER- :#RAIN +luripeptona% #lmidn soluble% 6osfato dipotsico% 6osfato monopotsico% 1loruro de sodio% #gar" :edio A4a!er :artin modificado listo para usar 6undir el contenido de un frasco de <C ml de #gar Hase J1 doble concentracin ! enfriarlo a <CQ1" Reconstituir el Hritalex ! el V1NA con 2%1 ml de solvente cada uno" #dicionar as'pticamente la solucin de 4emoglobina% 1 ml de V1NA ! 1 ml de HRIA#2EU a la base J1 doble Sembrar inicialmente el material con 4isopo o ansa sobre un tercio de la superficie de la placa% estriando el resto de la superficie para obtener colonias aisladas" Bbservar las caracter-sticas de las colonias" 2as colonias de gonococos ! meningococos obtenidas en este medio selectivo son usualmente opacas% grisceas% convexas% de 1-7 mm de dimetro" ELABORADO POR: DOCENTES DE MIROBIOLOGA GENERAL
PRACTICA N 3 PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO MICROBIOLOGA GENERAL UNIVERSIDAD DE PAMPLONA Pgina 10 de 11 VERSIN - 1C - concentracin" 1onservar el resto de V1NA ! Hritalex reci'n preparados en congelador /estable 1< d-as a -2CQ10" :e$clar para 4omogenei$ar" &istribuir unos 1C ml por placa ! de)ar solidificar" 2as placas pueden conservarse en 4eladera por 5 semanas% sin perder su potencia in4ibidora" H#IR& +#R9ER +eptona de case-na% Extracto de carne% 1loruro de litio% #gar% Jlicina% +iruvato de sodio" Suspender =C g del medio des4idratado en T7Cml de agua destilada" &e)ar en reposo < a 1C minutos" 1alentar agitando frecuentemente ! 4ervir durante 1 minuto" &istribuir ! esterili$ar en autoclave a 121Q1 /1< libras0 durante 1< minutos" Enfriar a 7<Q- <CQ1 ! agregar <C ml de la emulsin de !ema de 4uevo ! 1Cml de la solucin de telurito /1digo HC5- =C1-=10" ?omogenei$ar ! distribuir en ca)as de +etri" :edio de alta especificidad diagnstica% selectivo ! diferencial para el aislamiento ! recuento de estafilococos coagulasa positiva en alimentos ! otros materiales de importancia sanitaria" B'#e&i's /!e &ed!e( e" #e"!&i#o de +o#'sio3 colonias de color grisceo- negro" B'#e&i's /!e (o &ed!e( e" #e"!&i#o de +o#'sio3 colonias del color del medio% transparentes" B'#e&i's o( '#i$id'd "ei#i(0si'3 4alo claro en el medio de cultivo alrededor de la colonia" +uede existir tambi'n un 4alo opaco alrededor de la colonia con un 4alo claro externo" B'#e&i's si( '#i$id'd "ei#i(0si'3 ausencia de 4alo claro alrededor de la colonia" 2:UM62@BRB1@2A RE#&N1@2A 1psula" Ariptosa C%<. Sodio cloruro C%<. Sorbitol C%1. Ariptfano C%1. &i- ELABORADO POR: DOCENTES DE MIROBIOLOGA GENERAL
PRACTICA N 3 PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO MICROBIOLOGA GENERAL UNIVERSIDAD DE PAMPLONA Pgina 11 de 11 VERSIN - 11 - potasio 4idrgeno fosfato C%2>. +otasio di4idrgeno fosfato C%2. """ 1?RB:B1@2A #J#RM1#2&B H?I ELABORADO POR: DOCENTES DE MIROBIOLOGA GENERAL