Determinacin de la actividad enzimtica de catalasa en

Solanum tuberosum
Determination of enzymatic activity of catalase in
Solanum tuberosum

Piero. A. Juarez. A
1

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Universidad Nacional Mayor de San Marcos, Facultad de Farmacia y Bioqumica,
Escuela de Ciencia de los Alimentos, Per


Resumen
En el presente trabajo se evalu la actividad especfica de la enzima catalasa en Solanum
tuberosum. Se hizo un procesamiento del material vegetal para luego utilizar la tcnica por
Hugo Aebi (1974), para luego mediante espectrofotometra medir la descomposicin del
perxido de hidrgeno y mediante el resultado obtener la actividad enzimtica de catalasa.
Es recomendable seguir este estudio ya que se le puede dar aplicacin en la industria
alimentaria.

Palabras clave: Catalasa, Solanum tuberosum, espectrofotometra, perxido de hidrgeno.

Abstract
In this work, the specific activity of the enzyme catalase in Solanum tuberosum was
evaluated. Processing the plant material and then using the technique by Hugo Aebi (1974),
and then spectrophotometrically measuring hydrogen peroxide decomposition and the
result obtained by the enzymatic activity of catalase was made. It is advisable to follow this
study because it can give you application in the food industry
Keywords: Catalase, Solanum tuberosum, spectrophotometry, hydrogen peroxide.
Introduccin

Muchos organismos pueden descomponer el perxido de hidrgeno (H2O2) por la accin
de las enzimas. Las enzimas son protenas globulares responsables de la mayor parte de la
actividad qumica de los organismos vivos. Actan como catalizadores, que son sustancias
que aceleran las reacciones qumicas sin ser destruidas o alteradas durante el proceso. Las
enzimas son extremadamente eficientes y se pueden utilizar una y otra vez repetidamente.
Una enzima puede catalizar miles de reacciones en cada segundo. Tanto los valores de pH
como de la temperatura a los que trabaja la enzima son extraordinariamente importantes. La
mayora de los organismos tienen un intervalo de temperatura preferente en el cual
sobreviven y sus enzimas funcionan mejor dentro de dicho intervalo de temperatura. Si el
ambiente donde se encuentra la enzima es demasiado cido o demasiado bsico, la enzima
puede desnaturalizarse de forma irreversible o transformarse de modo que su forma no le
permita ms realizar su funcionamiento apropiado.
El H2O2 es txico para la mayora de los organismos vivos. Muchos organismos son
capaces de destruir el H2O2 mediante la accin de enzimas antes de que pueda realizar
mucho dao. El H2O2 se convierte en oxgeno y agua segn la siguiente reaccin:
2 H2O2 2 H2O + O2

Aunque esta reaccin ocurre espontneamente, las enzimas incrementan la velocidad de
reaccin de forma considerable. Se conoce que al menos dos enzimas diferentes catalizan
esta reaccin:
a) Catalasa, que se encuentra en animales y protistas;
b) Peroxidasa, que se encuentra en las plantas.

Mucho se puede aprender sobre las enzimas mediante el estudio de la rapidez de reacciones
catalizadas por enzimas. La rapidez de una reaccin puede estudiarse de muy diversas
formas como:
Midiendo la presin de los productos que aparecen
Midiendo la velocidad de desaparicin del substrato
Midiendo la velocidad de aparicin del producto
La catalasa fue una de las primeras enzimas antioxidantes descritas, se halla prcticamente
en todas las clulas animales y plantas. Se trata de una enzima intracelular ferriporfirnica,
localizada principalmente en peroxisomas (80%) y citosol (20%). Se encuentra constituida
por 4 subunidades, cada una con un grupo hemo enlazado en su centro activo.
La catalaza presenta una afinidad por el H
2
O
2
baja, es decir necesita altas concentraciones
del mismo para poder trabajar rpido, aunque se ha observado una rpida inactivacin de la
actividad de la catalasa a concentraciones de H
2
O
2
superiores a 0.1 M por formacin de los
complejos inactivos II y III: tambin se ha observado la inactivacin de la catalasa por el
anin superxido.

Materiales y Mtodos

Materiales vegetales:
Se utiliz para los ensayos de las actividades enzimticas la variedad de Solanum
tuberosum o tambin conocida comnmente como papa.

Materiales de laboratorio:
Centrfuga, tubos de centrfuga, tubos de ensayo, pipetas graduadas, espectrofotmetro,
cubetas de cuarzo.

Procesamiento del material vegetal:
Se pes 1.163 g de la muestra de Solanum tuberosum, luego esta se homogeniz y se
suspendi en el tampn de lisis conteniendo tampn fosfato 50 mM, pH 7.4 y antiproteasas,
se homogeniza en bao de hielo. El homogenizado obtenido se centrifuga a 14 000g
durante 15 min a 4C, es importante mantener la cadena de frio, el sobrenadante se
recupera en un tubo limpio para luego realizar los ensayos de actividad enzimtica con el
sobrenadante obtenido.

Actividad enzimtica de catalasa (CAT):
La tcnica utilizada fue la descrita por Hugo Aebi (1974). Este mtodo se basa en el
seguimiento de la descomposicin de H
2
O
2
para dar H
2
O y O
2
mediante espectrofotometra
a 240nm en una solucin de trabajo de tampn fosfato 50 mM pH 7.4 y H
2
O
2
14 mM
preparado en de tampn fosfato 50 mM pH 7.4.

Calculo del KM y Vmax
La representacin grfica de la ecuacin de Michaelis-Menten (v0 frente a [S]0) es una
hiprbola (Figura 1). La Vmax (velocidad mxima) corresponde al valor mximo al que
tiende la curva experimental, y la KM corresponde a la concentracin de sustrato a la cual
la velocidad de la reaccin es la mitad de la Vmax.
Para determinar grficamente los valores de KM y Vmax es ms sencillo utilizar
la representacin doble recproca (1/v0 frente a 1/[S]0), ya que es una lnea recta. Esta
representacin doble recproca recibe el nombre de representacin de Lineweaver-
Burk (Figura 2). Es una recta en la cual:
La pendiente es KM/Vmax
La abscisa en el origen (1/v0 = 0) es -1/KM
La ordenada en el origen (1/[S]0 = 0) es 1/Vmax
De esta forma, a partir de los datos experimentales se puede calcular grficamente, los
valores de KM y Vmax de un enzima para diversos sustratos.

Resultados y Discusin

Con los datos obtenidos en el Cuadro 1, se realiz una grfica Sustrato mM vs UI/min.mg
prot (Figura 1) en la cual se puede observar la formacin de una hiprbola, la cual segn
nuestra teora representa la grfica de Michaelis-Menten.




Cuadro 1: Datos experimentales































La velocidad mxima en la curva de Michaelis-Menten es de 64 UI/min.mg y un km de
0.083 mM

Para calcular el KM y la Vmax opte por tambin utilizar la representacin de Lineweaver
Burk, en la cual se utilizan las inversas de los datos obtenidos en el Cuadro 1 para que de
esta manera la grfica sea una lnea recta.

















































Figura 1: Curva de Michaelis-Menten
Cuadro 2: Datos invertidos



















































Los datos de 1/Vmax y 1/Km se hallaron por regresin lineal dando como resultado una
0.0117 y 8.357142 respectivamente, hallando las inversas de estos resultados se obtuvo
85.47 UI/min.mg y 0.1196 mM


Conclusiones

La comparacin de ambas curvas difiere en sus resultados de velocidad mxima y Km, para
esto se debera hallar un factor de correccin, o en todo caso utilizar la curva de
Lineweaver Burk ya que se obtuvo un R muy cercano al 1 en el mtodo de regresin lineal
que se utiliz, por ende , concluyo que esta representacin grfica es ms precisa.

Se concluye que a un menor Km existe una mayor afinidad de enzima por el sustrato y
viceversa, a un mayor Km, menor afinidad de enzima por el sustrato


Figura 1: Curva de Lineweaver Burk
Referencias bibliogrficas

Lehninger A. , et al. 2009, Bioqumica, las bases moleculares de la estructura y funcin
celular. Ediciones Omega S.A. Barcelona