Resistencia de Sinapis alba (Mostaza blanca) a inhibidores
de ALS y control herbicida alternativo en Espaa
J. M. ROSARIO, H. CRUZ-HIPOLITO y R. DE PRADO Boca Chica, Repblica Dominicana Julio, 2010. UNIVERSIDAD DE CORDOBA INSTITUTO DOMINICANO DE INVESTIGACIONES AGROPECUARIAS Introduccin La resistencia a herbicida es un carcter inherente a ciertos individuos en una poblacin de una especie maleza, que les permite sobrevivir y reproducirse despus de la aplicacin de la dosis recomendada de un herbicida, que en condiciones normales debi controlarla eficazmente. 1 2 3 4 5 6 7 xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx xxxxx Aplicaciones de herbicidas y aparicin de la resistencia Introduction La acetolactato sintasa (ALS) cataliza la biosintesis de los aminocidos de cadena ramificada valina, leucina e isoleucina, esenciales en el crecimiento y desarrollo de las plantas. Los herbicidas que se unen en algn sitio de la enzima acetolactato sintasa son conocidos como inhibidores de la ALS, causando deficiencia de estos aminocidos y la posible muerte en plantas susceptible . Los inhibidores de ALS es el grupo con mayor tasa anual de resistencia, 181 biotipos en 108 especies, 80 dicots y 28 monocots en 34 pases (Heap, 2010). Espaa, tiene 32 especies resistentes y de estas 4 son resistentes a inhibidores de ALS: Alisma plantago-aquatica, Cyperus difformis, Papaver rhoeas y Sinapis alba. S. alba L (Mostaza blanca): Origen Agresividad Control Objetivo General : Examinar la resistencia de S. alba a herbicidas inhibidores de ALS, elucidar mecanismos de resistencia y evaluar control herbicida alternativo en campo. Materiales y mtodos Material vegetal para ensayos de laboratorio e invernadero Fueron prospectadas semillas de 15 poblaciones de S. alba en el Suroeste de Espaa, controladas con tribenuron metil durante la ltima dcada en cultivo de cereales. Semillas de plantas cosechadas en reas nunca tratadas fueron consideradas como testigo susceptible. Las semillas fueron germinadas a 4C en oscuridad/luz. Las plntulas crecieron en macetas y sustrato 2:1:1 (suelo:turba:vermiculita) en invernadero a 18/14C da/noche, 65% HR y 10 h luz hasta el estado de 4-5 hojas. 10 plantas/poblacion Diseo Completamente al azar Evaluacin del peso fresco: 21 DDT Doses tribenuron : 20. g a.i. l/ha aplicacn: cmara de lab Screening con poblaciones de S. alba Ensayos Dosis-Respuesta Biotipos: AR 1 (S) y AR 8 (R) Arreglo Tratamiento : DCA Evaluacin peso fresco 21 DDT Datos ajustados a modelo de regresin no lineal log-logistic Se estim la ED 50 y se clculo el F.R. Plantas AR 1 y AR 8 en estado de 4-5 hojas Aplicacin de herbicida 12.8 6.4 12.8 6.4 160.0 128.0 80.0 80.0 64.0 64.0 40.0 40.0 32.0 28.0 16.0 16.0 8.0 0.0 0.0 R S Mesosulfuron 25.6 12.8 6.4 3.2 4.8 1.6 3.2 0.8 2.4 0.6 1.6 0.4 0.8 0.2 0.4 0.1 0.0 0.0 R S Iodosulfuron 20.0 7.5 15.0 5.0 10.0 2.5 5.75 1.25 3.75 0.625 2.5 0.3125 0.0 0.0 R S Florasulam 115.2 4.8 57.6 2.4 28.8 1.2 14.4 0.6 7.2 0.3 3.6 0.15 1.8 0.075 0.0 0.0 R S Imazamox 25.6 12.8 6.4 3.2 4.8 1.6 3.2 0.8 2.4 0.6 1.6 0.4 0.8 0.2 0.4 0.1 0.0 0.0 R S Tribenuron 4.0 4.0 2.0 2.0 1.0 1.0 0.5 0.5 0.25 0.25 0.125 0.125 0.0625 0.0625 0.0 0.0 R S Bispiribac sodium 224.0 84.0 168.0 56.0 112.0 42.0 84.0 28.0 56.0 21.0 28.0 14.0 14.0 7.0 0.0 0.0 R S Flucarbazone Dosis (g i. a. ha -1 ) Biotipo Herbicidas Ensayos Dosis-Respuesta: herbicidas y dosis Ensayos de inhibicin de la ALS 1.- Extracto Crudo de ALS : Corte 3 gramos tejido foliar de planta R y S Congelado y pulverizado tejido foliar en mortero Adicin de 0.5 g polivinilpirrolidona Adicin de 4 ml solucin Ext. Buffer/g tissue Agitado, filtrado y centrifugado del homogenado Precipitado de la fraccin de protena con (NH4) 2 SO 4 Centrifugado y suspendido del pelet en sol. extraccin buffer (700 L) Calibrado Col. sefadex con sol. Elucin Buffer. Agitado del pelet redisuelto a baja temperatura Paso del pelet redisuelto al traves de la col. Sefadex, adicionando 2 ml, 1 ml y otro ml de elucin buffer a la columna 2.-Medicin de la actividad ALS Mezcla de 0.05 ml de Extracto de ALS+0.1 ml de la sol. Buffer de ensayo Adicin de la concentracin de c/. herbicida en c/. eppendorf Agregado a cada eppendorf de 0.25 ml with PP Adicin de 0.05 ml H 2 SO4 3M solo al eppendorf del blanco para deterner la reaccin Incubacin a 37C/1h, despus de adicionar H 2 SO4 al resto Nueva incubacin a 60C/15 min Adicin de 0.25 ml de las soluciones de creatina y naftol Agitado y reincubado a 60C/15 min La acetoina fue detecteda como un complejo coloreadp a 520 nm La inhibicin de la ALS fue expresada en nmol de acetoina mg - 1 protein Concentraciones Herbicidas B Herbicida 25000 25000 15000 15000 10000 10000 300.0 50.0 50.0 1000.0 30000 30000 25000 25000 10000 10000 1000 500.0 500.0 250.0 250.0 100.0 50.0 50.0 0.0 0.0 R S Mesosulfuron (nM) 50000 25000 25000 10000 10000 5000 5000 2500 2500 1000 1000 500 500 0.0 0.0 R S Iodosulfuron (nM) 1000 250.0 500.0 200.0 300.0 100.0 200.0 50.0 100.0 25.0 50.0 12.5 25.0 6.25 0.0 0.0 R S Florasulam 30.0 30.0 10.0 10.0 5.0 5.0 2.50 2.50 1.0 1.0 0.50 0.50 0.25 0.25 0.0 0.0 R S Imazamox (M) 500.0 250.0 1.0 100.0 0.75 50.0 0.5 25.0 0.25 10.0 0.10 5.0 0.05 0.0 0.0 R S Tribenuron (mM) 40.0 40.0 25.0 25.0 10.0 10.0 5.0 5.0 2.50 2.50 1.25 1.25 0.0 0.0 R S Bispiribac sodium (nM) 30000 30000 5000 5000 2500 2500 1000 1000 500.0 500.0 250.0 250.0 100.0 100.0 50.0 50.0 0.0 0.0 R S Flucarbazone (nM) Ensayo inhibicin ALS: herbicidas y concentracin Ensayos de inhibicin de ALS 3 gramos tejido foliar planta R y S congelado y pulverizado tejido foliar Adicin de reactivos (E.B. and PVP) Cocktail: E.C.E (R&S) + A.B.+herbicidas Medicin de la actividad de ALS Ext. Buffer (PP+SP+MgCl 2 +TP+FAD+DTT+G Evaluacin de herbicidas posemergentes para control de S. alba resistente. Tratamiento herbicida: 7 Volumen aspersin: 140.25 l/ha poca aplicacin :112 DDS Evaluacin control visual (%): 33 DDT (escala 0-100%) Tratamientos herbicidas postemergentes 56.0 Tribenuron metil 50% (2) 8.4 + 168 Tribenuron metil+bromoxinil 28 + 600 Tribenuron metil+MCPA 14.0 Tribenuron metil 50% SG 800.0+0.1 Mecoprop-P+tribenuron metil (3+15)+0.5+(112.5+112.5+562.5) (Iodosulfuron+mesosulfuron)+mefenpyr diethyl+(ioxinil+bromoxinil+mecoprop-P) Control no tratado Rates (g a.i ha -1 ) Tratamiento herbicida Evaluacin rendimiento de trigo y biomasa seca area de S. alba Resultados y Discusiones Screening con poblaciones de S. alba 7.72.7fg 0.7 7.9 8.6 AR13 7.92.8fg 1.2 12.9 14.0 AR12 9.02.2ef 1.6 14.8 16.4 AR11 10.21.2de 1.8 14.9 16.7 AR10 10.92.7de 1.9 14.5 16.4 AR8 11.92.2cd 2.4 16.7 19.0 AR7 11.62.1cd 1.0 6.9 7.9 AR6 13.13.1c 2.0 11.9 13.9 AR5 30.02.3b 6.0 13.6 19.6 AR4 1.9675 LSD Fischer: alfa 0,05 5.71.8h 1.1 16.7 17.8 AR16 6.42.2gh 1.1 15.3 16.4 AR15 6.61.8gh 1.4 18.0 19.4 AR14 11.12.2d 2.2 16.8 19.0 AR9 91.31.8a 19.4 1.2 20.7 AR3 90.92.1a 14.1 1.3 15.4 AR2 90.92.3a 11.5 1.1 12.6 AR1 Reduccin peso fresco ( 21 DDT) Peso fresco 20 g i. a. ha -1 Peso fresco testigo Poblaciones S. alba Screening poblaciones S. alba Ensayos Respuesta a Dosis e Inhibition de ALS- <0.0001 <0.0001 <0.0001 <0.0001 <0.0001 <0.0001 <0.0001 <0.0001 <0.0001 <0.0001 <0.0001 <0.0001 <0.0001 <0.0001 Valor-P Ensayos Inhibicin-ALS (Lab) Ensayos Respuesta-Dosis (invernadero) <0.0001 0.93 5.73 0.883 0.66 S <0.0001 0.98 1.6 9.0 0.963 0.16 0.107 R Bispiribac s <0.0001 0.96 43.87 0.979 23.878 S <0.0001 0.98 86.0 3780.37 0.998 8.5 203.091 R Flucarbazone <0.0001 0.98 3.07 0.999 0.042 S <0.0001 0.97 24.0 72.10 0.989 65.2 2.771 R Florasulam <0.0001 0.97 4.39 0.987 0.423 S <0.0001 0.97 1.8 7.80 0.997 4.5 1.905 R Imazamox <0.0001 0.90 13.39 0.999 1.529 S <0.0001 0.99 900.0 11833.57 0.997 11.9 18.175 R Mesosulfuron <0.0001 0.996 0.51 0.997 0.141 S <0.0001 0.972 835.0 427.96 0.975 17.5 2.462 R Iodosulfuron <0.0001 0.89 0.22 0.993 0.180 S <0.0001 0.91 3,969.0 908.25 0.985 9.8 1.760 R Tribenuron Valor-P Rajust RF ED 50 Rajust RF ED 50 B Herbicida Ensayos Respuesta-Dosis Efecto de tribenuron Efecto de mesosulfuron Efecto de bispiribac Efecto de florasulam Herbicidas Alternativos para control de S. alba resistante a tribenuron. 157.18 17.818 7.1837 LSD (0.05) *(Iodosulfuron+mesosulfuron)+mefenpyr diethyl+(ioxinyl+bromoxinyl+mecoprop-P) ; Medias ensayo 2007-2008. 4752.056.0a 89.00.0a 14.01.0e *(I+m)+m-d+ (i+b+mecop-P) 2924.024.0d 28.72.8c 71.02.8b Tribenuron methyl 50% 3842.050.0c 66.0 0.0b 38.51.6d Tribenuron + bromoxinyl 3814.074.0c 70.37.5b 62.03.0c Tribenuron methyl 75% 3958.026.0c 88.719.3a 34.51.4d Mecoprop-P+tribenuron 4186.010.0b 92.312.8a 11.50.4e Tribenuron + MCPA 2856.012.0d 0.00.0d 138.51.4a Testigo no tratado Rendimiento trigo (kg ha -1 ) Eficacia Herbicida Peso seco tejidos areo (Gramos m -2 ) Herbicida Conclusiones Esta investigacin confirm la resistencia de S. alba a tribenuron metil y otros herbicides inhibidores de ALS Los ensayos in vitro sugieren que el mecanismo de resistencia es debido a la falta de afinidad de tribenuron en el sitio de accin (ALS). La retencin foliar y el ngulo de contact podran contribuir en la evolucin de resistencia de S. alba al tribenuron y otros herbicidas inhibidores de ALS. La mezcla de tribenuron con otros herbicidas de diferentes modos de accin (MCPA or bromoxinyl) puede ser aplicada para el control de mostaza blanca resistente. Viewof resistant S. alba. Arriate, Mlaga, Spain. 2009.