PREPARACIN DE SOLUCIONES USO Y MANEJO DE MICROPIPETAS

OBJETIVOS
Preparar soluciones porcentuales, stock, simples y seriadas
Determinar las condiciones de exactitud y reproducibilidad de las micropipetas
MARCO TEORICO
2.1 PREPARACION DE SOLUCIONES
Las soluciones en qumica, son mezclas homogneas de sustancias en iguales o distintos estados
de agregacin. La concentracin de una solucin constituye una de sus principales caractersticas.
Bastantes propiedades de las soluciones dependen exclusivamente de la concentracin. Su estudio
resulta de inters tanto para la fsica como para la qumica. Algunos ejemplos de soluciones son:
agua salada, oxgeno y nitrgeno del aire, el gas carbnico en los refrescos y todas las
propiedades: color, sabor, densidad, punto de fusin y ebullicin dependen de las cantidades que
pongamos de las diferentes sustancias.
La sustancia presente en mayor cantidad suele recibir el nombre de solvente, y a la de menor
cantidad se le llama soluto y es la sustancia disuelta.
Al momento de preparar soluciones hay que tomar en cuenta varios aspectos, en el anlisis
qumico son de particular importancia las "unidades" de concentracin, y en particular dos de
ellas: la molaridad y la normalidad. Tambin punto de equivalencia, fraccin molar, la
concentracin decimal, entre otros.

2.2 CALCULO Y EXPRESIN DE DILUCIONES
Disoluciones Una disolucin es una mezcla homognea (los componentes no se pueden distinguir
a simple vista) de dos o ms sustancias en proporciones variables. Debemos distinguir entre:
Soluto: sustancia que se disuelve. Disolvente: sustancia en la que se disuelve el soluto.
Disolucin: conjunto formado por el disolvente y el soluto. Si hay dudas sobre quin es el soluto y
quin el disolvente, se consideradisolvente al componente que est en mayor
proporcin.Disolucin Molecular: partculas de soluto son molculas (azcar en H2O)Disolucin
Inica: las partculas de soluto son iones (NaCl en H2O)
y del disolvente:
(Recordar que la disolucin, suele presentar el mismo estado fsico que el estado disolvente).
Estado fsico Soluto Disolvente Disolucin Ejemplos Slido Slido Aleaciones metlicas (acero)
Lquido Slido Lquido Amalgama (Hg ms metal) Gas Slido Hidrgeno ocludo (Pd y Pt) Slido
Lquido Azcar en agua Lquido Lquido Lquido Alcohol en agua Gas Lquido Amoniaco en agua
Slido Gas Suspensiones (Humo) Lquido Gas Gas Suspensiones (aerosoles) Gas Gas Aire
Segn sea la proporcin de soluto respecto a la de disolvente:
Saturada: la disolucin no admite ms soluto, depositndose el exceso en el fondo del
recipiente.
Diluida: La cantidad de soluto es muy pequea respecto a la de disolvente.
Concentrada: la proporcin de soluto respecto a la del disolvente es grande. Slo son posibles si
el soluto es muy soluble. Solubilidad Mxima cantidad de soluto disuelto en una cantidad dada de
disolvente, a una temperatura fija. Depende de varios factores:
Naturaleza del soluto y del disolvente
Temperatura del proceso (por lo general, la solubilidad aumenta con la T)
Agitacin
Concentracin de disoluciones Cantidad de soluto Concentracin Cantidad de disolucin (o
disolvente)
Expresa la relacin o cociente entre la cantidad de soluto y la cantidadde disolucin o disolvente.
Existen varias formas de expresar la concentracin, segn sean lasunidades empleadas para
Concentracin en g L L disoluci
disolucin
Ejemplos:Una disolucin 1 M de HCl cede 1 H+, por lo tanto, es una disolucin 1 N.Una disolucin
1 M de Ca (OH)2 cede 2 OH, por lo tanto, es una disolucin 2 N.NORMALIDAD ACIDO-
BASEDonde:N es la normalidad de la disolucin.M es la molaridad de la disolucin.H+ es la
cantidad de protonescedidos por una molcula del cido.OH es la cantidad de hidroxilos cedidos
por una molcula de la base.
ALGUNOS EJEMPLOS DE SOLUCIONES SON:Agua salada, oxgeno y nitrgeno del aire, el gas
carbnico en los refrescos y todas las propiedades: color, sabor, densidad, punto de fusin y
ebullicin dependen de las cantidades que pongamos de las diferentes sustancias.

2.3 USO CORRECTO DE LAS MICROPIPETAS
Colocar el pulgar sobre el mando o mbolo de pipeteado. Oprimir el mbolo. Cuando el mbolo se
presiona sentir un punto de resistencia. ste es el primer alto o "tope". Si contina presionando
encontrar un punto donde el mbolo ya no se mueve hacia abajo, este corresponde al segundo
alto o "tope".
Oprimir el mbolo hasta el primer tope y colocar la punta dentro del lquido hasta una
profundidad de 2 a 3 mm. De una manera lenta y controlada, disminuya la presin del mbolo
para permitir que se desplace hacia arriba. No suelte el mbolo abruptamente, al permitirlo
causar que el lquido pueda salpicar dentro de la punta produciendo volmenes inexactos y
generando contaminacin de la pipeta. Una vez el mbolo se haya desplazado hasta arriba
mantenga la micropipeta en el lquido durante un segundo, esto evita que se aspire aire en la
parte final.
Expulsin de la muestra
Llevar la micropipeta al envase en el cul quiere aadir el lquido. Se apoya la punta en la pared del
recipiente sin evitar la salida de la muestra. Oprima el mbolo hasta el primer tope y luego hasta
el segundo tope. Haga este procedimiento a una velocidad moderada, hacerlo muy rpido har
que queden gotas de muestra en la punta. Si observa cuidadosamente, entonces notar que al
oprimir hasta el segundo alto se expele todo el lquido de la punta.
Lo anterior es cierto para la mayora de soluciones acuosas, excepto para las soluciones de alta
viscosidad. Para solventes orgnicos o para soluciones conteniendo grandes cantidades de
protena (plasma y suero), es difcil sacar todo el lquido de la punta. En estos casos, es mejor
pipetear una vez la solucin expelindola y luego llevando hacia arriba el lquido a medir en un
segundo tiempo. Para soluciones de alta viscosidad el llenado y la expulsin deben ser ms lentas

MATERIALES
Balanza analtica, pH metro, probetas, beakers, fiolas, micropipetas p10 p20 p200 p1000, puntas
azules y amarillas

PROCEDIMIENTO PARA PREPARAR LAS SOLUCIONES
Se preparo las soluciones: Tris-HCl pH 7.6 (1M) , MgCl2( 5mM), Ma-EDTA(1M),
Ma2EDTA(500Mm), NaCl(5M), SDS 20%, Isopropanol a 4 oC Etanol a 7% ,Buffer TE 10%
NH4Cl 1M.

PROCEDIMIENTO PARA EL AMEJO DE MICROPIPETAS
Para absorber el liquido se presiono el piston hasta una primera posicin, se puso el tip en
contacto con el liquido y luego lentamente se permiti que el piston vuelva a su posicin
original. Este paso permiti el llenado del tip con el volumen correspondiente. Se
describieron las instrucciones especificas para los modelos de micropipetas.
Se selecciono una micropipeta segun el volumen a dispensar, se aplicaron las reglas que se
utilizan para el manejo de pipetas
Se localizo el indicador de volumen compuesto de tres dgitos que se deben leer de arriba
hacia abajo, se ajusto el volumen de la pipeta con el tornillo botn pulsador por encima
del valor deseado
Se selecciono la punta o tip de plstico apropiado para la micropipeta, la punta de debi
ajustar al cono de la micropipeta, al insertar la punta de aplico una fuerte presin con un
movimiento giratorio para hermetizar
Se apret el botn pulsador hasta el primer toque para su absorcin, con la pipeta en
posicin vertical se sumergi entre 1mm y 3 mm en la muestra
Se aspiro lentamente el liquido cuando re relajo la presin del dedo sobre el boton
pulsador, se espero un segundo y se retiro la punta del liquido
Se coloco la parte inferior de la punta contra la pared interior del recipiente donde se
deposito el liquido,
Se apret el botn pulsador suavemente hasta el primer toque y se espero un segundo, se
apret el botn pulsador hasta el segunto toque y se vacio el resto del liquido
Se mantuvo apretado el botn pulsador en el segundo tope y se retiro la pipeta, se solto
luego el botn pulsador
Se expulso la punta apretando el botn pulsador

CONTROL GRAVIMETRICO DE LAS MICROPIPETAS
se atempero la pipeta y los materiales
se mantuvo la pipeta con sus accesorios por lo menos 1 hora en la sala de ensayo
se determino y anoto la temperatura del agua de ensayo
se ajusto el volumen nominal de la pipeta al mayor volumen
se coloco un beaker limpio sobre la balanza y se taro a cero
se coloco un tip nuevo sobre la punta de la pipeta a calibrar
se oprimi el pulsador hasta el primer toque
se sumergi la punta del tip en el embase con el agua destilada
se dejo retroceder el pulsador lentamente y de manera uniforme
se evito secar el exterior de la punta del tip
se expulso el agua en el interior del beaker a pesar
se apunto el valor obtenido en el display
se volvi a la balanza y se volvi a repetir hasta obtener 10 lecturas para valor
nominal
CALCULO DE LA EXACTITUD (E%) Y DEL DOEFICIENTE DE VARIACION (CV%)
comparar los resultados de los valores reales y los valores nominales
Nro de pesadas Volumen nominal al
100%
Volumen nominal al
50%
Volumen nominal al
35%
X1
X2
X3
X4
X5
X6
X7
X8
X9
X10

Valoracin del control gravimtrico
Valor Volumen nominal
100%
Volumen nominal al
50%
Volumen nominal 35%
E%
CV%

Comparar los resultados de los valores reales y los valores nominales
Nro de pesadas Volumen nominal al
100%
Volumen nominal al
50%
Volumen nominal al
35%
X1
X2
X3
X4
X5
X6
X7
X8
X9
X10

Valoracin del control gravimtrico
Valor Volumen nominal
100%
Volumen nominal al
50%
Volumen nominal 35%
E%
CV%
BIBLIOGRAFIA

http://www.slideshare.net/ginadamaris26/preparacin-de-soluciones
http://jorge-contreras.webs.com/guia-El%20uso%20de%20micropipeta-BM.pdf
file:///C:/Users/HP/Downloads/Uso%20correcto%20micropipetas.pdf
http://www.slideshare.net/ginadamaris26/preparacin-de-soluciones
http://es.scribd.com/doc/51194898/Preparacion-de-Soluciones
http://www.monografias.com/trabajos87/bioseguridad-laboratorio/bioseguridad-
laboratorio.shtml
http://www.cientificasenna.com/index.php?modulo=catalogo&accion=articulo&id=956
http://www.cientificasenna.com/index.php?modulo=catalogo&accion=articulo&id=1187
http://www.prolab.com.mx/home/index.php?option=com_content&view=article&id=959:termoci
clador-gradiente-touch&catid=19:termociclador&Itemid=6
http://www.clinicalascondes.cl/INFORMACION-AL-PACIENTE/Examenes-y-
procedimientos/Laboratorio/Biologia-Molecular.aspx
http://en.wikipedia.org/wiki/Shaker_(laboratory)