Algunos factores que influyen en la

actividad de las enzimas son:

Cofactores y coenzimas
Temperatura
pH
Concentracin del sustrato
Inhibidores
Mecanismos reguladores

Las enzimas que requieren cofactores
o coenzimas generalmente no se activan
hasta que esta molcula se une:
Apoenzima enzima a la cual no
se ha unido el cofactor (inactiva).
Holoenzima enzima a la cual se
uni el cofactor (activa).
Factores que afectan la actividad de las enzimas
Sustrato
Holoenzima
(activa)
Apoenzima
(inactiva)
Cofactor
Efecto de la temperatura
El efecto de la temperatura sobre la velocidad de una reaccin enzimtica generalmente
muestra dos etapas:
1) Aumento gradual de la velocidad de la reaccin hasta alcanzar un mximo local, que
se conoce como temperatura ptima.
2) Disminucin progresiva de la velocidad de reaccin debido a la inactivacin de la
enzima por desnaturalizacin trmica.








La temperatura ptima para la mayora de las enzimas humanas est en el rango entre
los 35 y 40
o
C, estas comienzan a desnaturalizarse por encima de los 40
o
C.
Temperatura (
o
C)
V
e
l
o
c
i
d
a
d

d
e

r
e
a
c
c
i

n

(
v
0
)

1
2
Efecto del pH
Los pHs extremos tambin pueden inactivar a la enzima por desnaturalizacin, por lo que
el efecto del pH es similar al efecto de la temperatura sobre la velocidad de reaccin.








Cada enzima opera en un rango relativamente corto de valores de pH, rango en el cual sus
grupos qumicos se encuentran ionizados, de manera que facilitan la catlisis.
Dentro de este rango, el pH para el cual se alcanza un mximo local de velocidad se
conoce como pH ptimo.
El pH ptimo para las enzimas humanas vara notablemente, alcanzando incluso
valores extremos (por ejemplo: pH
opt
= 2 para la pepsina, una enzima gstrica).
pH
V
e
l
o
c
i
d
a
d

d
e

r
e
a
c
c
i

n

(
v
0
)

Pepsina Tripsina
Fosfatasa
alcalina
Efecto de la concentracin de sustrato
El efecto de la concentracin de sustrato, [S], en la velocidad de una reaccin enzimtica
tambin muestra de dos etapas:
1) La velocidad de la reaccin aumenta gradualmente hasta acercarse a una velocidad
mxima (v
mx
).
2) La velocidad se mantiene constante pues todos los centros activos de las molculas
de enzima han sido ocupados por el sustrato, se dice entonces que se presenta un
comportamiento de saturacin.
[S]
1
2
Parmetros importantes:
v
mx

K
m
valor de concentracin
de sustrato para el cual se ha
alcanzado la mitad de la v
mx

v
0
v
mx
v
mx
K
m
K
m
es una medida de la afinidad
de la enzima por su sustrato
(a menor K
m
mayor afinidad).
K
m
baja refleja alta
afinidad de la enzima
por el sustrato.
K
m
alta refleja baja
afinidad de la enzima
por el sustrato.
[S]
Enzima 2
Enzima 1
Efecto de la concentracin de sustrato
La relacin entre v
0
y [S] para una reaccin
enzimtica fue descrita por Leonor Michaelis
y Maude Menten en 1913, dando lugar a la
conocida ecuacin de Michaelis-Menten:



La ecuacin de Michaelis-Menten:
Indica que la curva de v
0
vs [S] tiene
forma de hiprbola, con una asntota
en v
mx
.
Refleja que la velocidad de reaccin
es inversamente proporcional al valor
de K
m
(afinidad de la enzima por el
sustrato).
La principal desventaja de este
modelo es que no se cumple para todas
las enzimas.

A bajas concentraciones
de sustrato ([S] << K
m
),
v
0
es directamente
proporcional a [S].
A altas concentraciones
de sustrato ([S] >> K
m
),
v
0
se mantiene constante
e independiente de [S].
[S]
La inhibicin enzimtica ocurre cuando una molcula diferente al sustrato (denominada
inhibidor) interacta con la enzima, impidiendo el correcto funcionamiento de esta.
Hay muchos tipos de inhibidores, pero los ms representativos son:

Inhibicin enzimtica

Inhibidores competitivos
Tienen cierta afinidad con el centro
activo (anlogos estructurales del
sustrato).
Compiten con el sustrato, pero la
reaccin no procede tras la unin.


Inhibidores no competitivos
Generalmente se unen a un sitio
diferente al centro activo.
La unin ocurre tras la formacin
del complejo ES, afectando as la
ocurrencia de la reaccin.
Todos los inhibidores provocan una disminucin de la velocidad de la reaccin enzimtica
(afectan la eficiencia de la enzima).
No obstante, cada tipo de inhibidor afecta de manera diferente a los parmetros cinticos.

Inhibicin enzimtica
Inhibidores competitivos
Al competir con el sustrato, disminuyen
la afinidad de la enzima por este:
Aumentan el valor de K
m
.
No modifican la v
mx
, pero la
saturacin se alcanza a mayor
concentracin de sustrato.

Inhibidor
competitivo
Inhibidores no competitivos
Puesto que no compiten con el
sustrato:
No modifican el valor de K
m
.
Disminuyen directamente
el valor de v
mx
.

Inhibidor no
competitivo
Inhibidores como medicamentos
Ms de la mitad de los medicamentos de consumo aprobado y de venta en las farmacias
actuales son en realidad inhibidores enzimticos.
Inhibidor Enzima a la que inhiben Efecto
Antibiticos -lactmicos
(ej. Penicilina)
Enzimas de la sntesis de la
pared celular bacteriana
Reduccin de la poblacin de la
bacteria patgena en el husped.
Antivirales anlogos a
guanosina (ej. Aciclovir)
DNA polimerasa viral Bloquean la replicacin del ADN
viral y por ende, del propio virus.
Estatinas (ej. Lipitor)

HMG-CoA reductasa humana
(sntesis de colesterol)
Disminucin del nivel plasmtico
de colesterol.
Reductores de la presin
sangunea (ej. Captopril,
Enalapril)
Enzima convertidora de
angiotensina (ACE) humana
Bloquean la conversin de la
angiotensina I en angiotensina II
(potente vasoconstrictor).
Antifolatos (ej. Metotrexato,
Aminopterina)
Dihidrofolato reductasa Interfieren con la divisin celular,
por lo que puede usarse como
agentes antineoplsicos o como
antibiticos.
Citrato de sildenafil (Viagra) Fosfodiesterasa tipo 5 (PDE5) Promueve el flujo de sangre al
pene, por lo que se usa como
tratamiento de disfunciones
erctiles.
HMG-CoA
reductasa
HMG-CoA
(sustrato
natural)
Lovastatina
(anlogo)
cGMP
(sustrato natural
de la enzima PDE5)
Viagra
(inhibidor de la PDE5
por analoga con
el sustrato)
Enzimas en el diagnstico clnico
El hallazgo de concentraciones sanguneas elevadas para enzimas propias de los diferentes
tejidos permite diagnosticar la existencia de patologas en estos tejidos.
En condiciones normales:
La concentracin sangunea de las
enzimas tisulares es baja.
Estas pequeas concentraciones
basales se deben al recambio
celular normal.
En situaciones patolgicas los niveles
plasmticos de las enzimas exclusivas de
los tejidos afectados suele aumentar.
Esto puede ocurrir por:
La existencia de dao celular
(ruptura de clulas) en dichos
tejidos.
Un alto grado de proliferacin
celular, usualmente asociado a
formaciones tumorales.
Enzimas
Recambio celular
Proliferacin Dao tisular
Algunas enzimas importantes en el diagnstico clnico
Enzima Uso diagnstico
Alanina transaminasa
(transaminasa pirvica) (ALT)
Hgado (perfil heptico)
Aspartato transaminasa
(transaminasa oxaloactica) (AST)
Infarto del miocardio, hgado (en
menor grado que ALT)
Creatina quinasa (CK) Infarto del miocardio, msculo en
general
Amilasa intestinal Pncreas
Lipasa intestinal Pncreas

Lactato deshidrogenasa (LDH) Hemlisis
Fosfatasa cida Prstata
Fosfatasa alcalina Trastornos seos, hgado
(enfermedades obstructivas)
Mecanismos reguladores
La actividad de las enzimas in vivo est regulada por mltiples mecanismos, que pueden
tener un efecto positivo o negativo, segn las necesidades celulares.
Principales mecanismos reguladores:
Clivaje proteoltico Algunas enzimas se sintetizan como precursores inactivos
(proenzimas o zimgenos), que se activan luego por el corte de uno o ms segmentos
de cadena. Todas las proteasas digestivas se secretan en forma de zimgenos.






Alosterismo (prximas diapositivas).
Modulacin covalente (prximas diapositivas).
Regulacin de la expresin (sntesis) de la enzima a nivel de la transcripcin.
Degradacin de la propia enzima.
Proteasa
Zimgeno
(inactivo)
Enzima activa

El alosterismo es una forma de regulacin en la que una molcula endgena (conocida
como modulador alostrico) se une a la enzima y modula su actividad.
No todas las enzimas estn sujetas a este tipo de regulacin, las que lo estn se conocen
como enzimas alostricas o reguladoras.
Los moduladores alostricos:
Se unen siempre a sitios especficos
(sitios alostricos), diferentes al centro
activo de la enzima.
La unin media un cambio en la enzima
que puede ser favorable o desfavorable.
Pueden ser positivos (si aumentan
la actividad de la enzima) o negativos
(si la disminuyen).

Estos no se consideran como inhibidores,
pues son endgenos y actan de manera
diferente. Forman parte de la funcin
normal de la protena.

Alosterismo
Sustrato
Modulador alostrico positivo
Enzima menos activa
Enzima ms activa

A diferencia de los inhibidores, los moduladores alostricos modifican la manera en la que
la velocidad de reaccin depende de la concentracin de sustrato.









Para las enzimas alostricas:
No se cumple la ecuacin de Michaelis-Menten.
La curva de v
0
vs [S] no tiene forma hiperblica, sino sigmoidal (forma de S alargada).
La concentracin para la cual se alcanza la mitad de la v
mx
no se denota como K
m
,
sino como K
0.5
, aunque esta tiene una implicacin similar en cuando a la afinidad E-S.
Alosterismo
Enzima con una cintica
de tipo Michaelis-Menten.
Enzima alostrica.
[S]
v
0
[S]
v
0
MA+
MA
La enzimas alostricas se encuentran muchas veces ubicadas en puntos estratgicos en las
vas metablicas, regulando el flujo metablico de acuerdo a las necesidades de la clula.
La retroinhibicin o inhibicin feedback es una forma de regular el metabolismo, en la
que los productos finales de una va metablica son moduladores alostricos negativos de
una enzima reguladora ubicada al principio de la va.






De esta forma se evita:
Gastar energa y compuestos intermediarios cuando hay suficiente producto final.
Degradar los intermediarios iniciales cuando hay carencia de estos, por haber sido
usados en la produccin del producto final.
El alosterismo en el metabolismo: retroinhibicin
La modulacin covalente consiste en la unin covalente y temporal de grupos pequeos
a la enzima.
Esta unin puede tener un efecto positivo
o negativo, segn la enzima.
La ms comn es la unin de grupos fosfato,
denominada fosforilacin.
Sobre la fosforilacin:
El grupo fosfato se une generalmente a
residuos de Tyr, Ser, Thr His.

Este grupo es aportado por un nucletido
trifosfato (ATP, GTP).
La llevan a cabo enzimas conocidas
como quinasas o cinasas.
La reaccin inversa (eliminacin del grupo
fosfato) tiene efecto contrario en la enzima
y es llevada a cabo por otras enzimas
conocidas como fosfatasas.
Modulacin covalente
Enzima
inactiva
Enzima
activa
P
Regulacin hormonal
El mecanismo de modulacin covalente permite que la actividad de las enzimas pueda ser
regulada en respuesta a estmulos extracelulares.
La seal externa se trasmite al interior de la clula mediante un sistema de
transduccin de seales.
Un sistema de este tipo involucra:
Un primer mensajero extracelular,
usualmente una hormona.
Una protena integral de membrana,
conocida como receptor.
Este reconoce a la hormona
y trasmite el estimulo al interior.
Un sistema efector, encargado de
activar la respuesta intracelular.
Este puede ser activado por un
segundo mensajero intracelular
(diferente a la hormona).
La respuesta usualmente implica la
fosforilacin de mltiples protenas
intracelulares.
Receptor
Hormona
Membrana
EXT
INT
Sistema efector
E E
E
G
E
RECEPTORES
CON ACTIVIDAD
ENZIMTICA
RECEPTORES
ACOPLADOS A
PROTENA G
RECEPTORES SIN
ACTIVIDAD ENZIMTICA
INTRNSECA
Respuesta
Respuesta
Respuesta
E
R R
R
R
R
2 M
2 M
2 M
Receptores con actividad enzimtica
Estos receptores tienen dos dominios principales:
Dominio extracelular funcin receptora
Dominio intracelular funcin cataltica (quinasa)
La recepcin de la seal por el dominio extracelular hace que
se active la funcin enzimtica del dominio intracelular y este
pueda entonces trasmitirla al medio interno.
El ejemplo ms representativo es el del receptor de insulina.








El dominio intracelular tiene actividad tirosina quinasa
(puede autofosforilarse y fosforilar a otras protenas).
Insulina
E
E
Respuesta
2 M
R
R
Insulina
Citosol
Ncleo
Receptores acoplados a protena G (GPCRs)
Estos sistemas constan de tres componentes:
El receptor per se.
Una enzima de membrana que media la sntesis
del segundo mensajero intracelular (por ejemplo
la adenilato ciclasa, que convierte el ATP en AMP
cclico, cAMP).
Una protena que acta como nexo entre los dos
primeros, denominada protena G (porque puede
unir GDP y GTP).

Muchas hormonas y neurotransmisores funcionan
mediante GPCRs, por ejemplo:
Glucagn.
Epinefrina (adrenalina).
Corticotropina (ACTH).
Dopamina.
Prostaglandinas.
Serotonina.
G
E
R
Respuesta
2 M
()