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FISIOLOGIA VEGETAL
INTRODUCCION AL CURSO
Durante la dcada de los '80 las Ciencias Biolgicas experimentaron un perodo de progreso sin precedentes. En particular,
las innovaciones tales como el patch-clamp que est mostrando los misterios del transporte de membrana. Las tcnicas de
ADN-recombinante estn dando nuevas informaciones para el entendimiento de cmo la luz y las hormonas regulan la
expresin gnica y el desarrollo. El anlisis cristalogrfico por rayos x es clave en el estudio de protenas y complejos de
protenas-pigmento tales como la Rubisco y el centro fotosinttico de reaccin. Nosotros trataremos de proveerlos de una
buena base en los tpicos tradicionales de la fisiologa vegetal y tambin les presentaremos los principales conceptos en el
contexto de la biologa contempornea.
Es til ubicar el lugar e interfase del campo de la fisiologa Vegetal, reconociendo que hay un gran solapamiento entre
disciplinas relacionadas.
Qu es la Fisiologa Vegetal
Podemos definirla ampliamente como el estudio de la funcin vegetal que acompaa a los procesos dinmicos del
crecimiento, metabolismo y reproduccin de las plantas.
En qu difiere la Fisiologa Vegetal de las disciplinas cercanas como la bioqumica, biofsica y biologa molecular?
Se puede explicar considerando el proceso de fotosntesis:
- Los bioqumicos purifican las enzimas fotosintticas y determinan las propiedades espectroscpicas en cubetas.
- Los bilogos moleculares clonan los genes que codifican las protenas fotosintticas y estudian la regulacin durante
el desarrollo.
- Pero los fisilogos vegetales estudian la fotosntesis en accin a diferentes niveles de organizacin, incluyendo el
cloroplasto, la clula, la hoja y la planta entera.
Visto de otro modo, los bioqumicos, biofsicos y bilogos moleculares estudian los componentes celulares ms o menos
en estado de aislamiento, mientras que los fisilogos vegetales investigan la manera en la cual los componentes
interactan entre ellos para llevar a cabo procesos biolgicos y funciones. Por supuesto, los fisilogos vegetales
frecuentemente usan los instrumentos de la bioqumica, biofsica, y de la biologa molecular y los especialistas de otras
disciplinas conducen tambin experimentos fisiolgicos. Ocurre que todas estas disciplinas forman un contnuo de manera
que los lmites entre ellos estn definidos algo arbitrariamente.
El nfasis actual en la biologa molecular y otros recursos de la biotecnologa se basa en particular en las aplicaciones
potenciales de la ingeniera gentica y otros procesos biotecnolgicos para un mejoramiento de los cultivos. Pero, significa
ello que la fisiologa vegetal no es ms una disciplina central en las ciencias vegetales? No es as. El entendimiento
enriquecido de la regulacin gnica, por ejemplo, generar una cantidad de nuevas preguntas concernientes a la funcin
vegetal.
Leyes fsicas
Los organismos vivos, incluyendo a las plantas verdes, son gobernados por las mismas leyes del flujo de energa que se
aplica en cualquier parte del universo. Estas leyes del flujo de energa han sido encasilladas en las leyes de la
termodinmica.
La energa es definida como la capacidad de realizar trabajo, el cual puede ser mecnico, elctrico, osmtico o qumico.
La primera ley de la termodinmica establece el principio de conservacin de la energa: La energa puede
convertirse de una forma a otra, pero el total de energa del universo permanece constante.
La segunda ley de la termodinmica establece la direccin de un proceso espontneo. Un proceso espontneo es el
que resulta en un incremento neto en la entropa total, o desorden, del sistema ms su medio ambiente. Los procesos que
involucran transferencia de calor, tal como el enfriamiento producido por evaporacin de agua desde las hojas, se
describen en trminos de cambio en el contenido calrico o cambio en entalpa, definido como la cantidad de energa que
evoluciona -cedida o absorbida- como calor a presin constante.
Qp = H
Desde un punto de vista del equilibrio termodinmico cada sistema tiene una cantidad intrnseca de energa a una dada
temperatura llamada energa interna E y, si ocurre algn cambio en el estado del sistema entonces el cambio de energa
esta dado por:
E + Ef - Ei
Ef: energa interna final
Ei: energa interna inicial
Si las condiciones son para presin y temperatura constantes, entonces algo de energa ser ganada o perdida por el medio
ambiente. Si en tal cambio no ha habido otro trabajo que no fuera uno de expansin, entonces el cambio entlpico est
dado por:
E = Q - W Q = H = E + W = E + PV
con V, cambio de volumen en el sistema.
En bioqumica V 0, luego H = E
Para la mayora de los cambios de estado bioqumicos, el trmino P x V es despreciable y el cambio entlpico es usado
para hacer un trabajo til. Pero la pregunta es: todo ese calor est disponible? NO! Slo una parte, pues una cierta
cantidad de energa es consumida por el sistema mismo durante el cambio de estado. La cantidad no til es funcin del
cambio de entropa (S) que acompaa la evolucin termodinmica. El trabajo til est dado por el cambio en la funcin
energa libre G.
G H G = H - X, X = TS
G = H - TS
G = E + PV - TS
2
G = E + PV - TS
El cambio en energa libre es un parmetro conveniente para determinar la direccin de procesos espontneos en sistemas
fsicos, qumicos o biolgicos sin hacer referencia a su entorno. A temperatura y presin constantes, el valor deG es
negativo para todos los procesos espontneos. El cambio de energa libre estndar Go de una reaccin es el cambio de
energa libre cuando todos los reactantes y productos estn en una concentracin 1 M. En bioqumica es usual usar el valor
Go' que es Go a pH 7. El valor presente de G de una reaccin es funcin de su desplazamiento del equilibrio. A mayor
desplazamiento del equilibrio, mayor ser el trabajo que se har. Los seres vivos han evolucionado para mantener sus
reacciones bioqumicas tan lejos del equilibrio como sea posible.
El establecimiento de gradientes inicos a travs de membranas es un aspecto del trabajo llevado a cabo por los seres
vivos. El potencial de membrana es una medida del trabajo requerido para transportar un in a travs de una membrana.
La diferencia de potencial electroqumico incluye potenciales de concentracin y elctrico.
El transporte a travs de membranas est mejor descripto por el potencial agua, el cual es el potencial qumico del agua
expresado en unidades de presin.
w =
w - w w, pot. qco. agua en el sistema
Vw
s =
S
+ R T ln CS
=
A
-
B
=
R T ln CA/CB
A
=
B
y el movimiento de un soluto por difusin es dependiente de la existencia de un gradiente qumico.
La ecuacin anterior para un gas, entre dos zonas de difusin A y B, es:
=
R T ln
p
A/
p
B con p =presin parcial
Si ahora consideramos una membrana semipermeable, luego este gradiente de potencial qumico puede usarse para realizar
trabajo. Habr un movimiento de agua por smosis que tiende a equilibrar las concentraciones en A y B, y llegado al
equilibrio se habr construdo una columna de agua, la cual pudiera haberse usado para realizar trabajo til, por ejemplo
empujando un mbolo. La presin que debe aplicarse para evitar la formacin de la columna equivale a la presin
osmtica.
Es conocido que la clula vegetal tiene mayor concentracin de solutos en su interior que en el medio que la rodea. Si no
fuera as, el agua fluira siguiendo el gradiente favorable de difusin de agua y esto causara la deshidratacin y muerte
celular. De manera que el potencial agua celular debe ser menor que el potencial agua exterior y entonces el agua entra al
protoplasto desarrollndose una presin de turgencia; la clula no revienta debido a la relativa rigidez de la pared celular.
Aqu es til comparar un osmmetro con la clula.
Cuando la clula no est turgente, su protoplasto se contrae y se dice que la clula est plasmolizada.
Para su tratamiento terico, si consideramos que tenemos en un momento inicial dos vasos conteniendo uno de ellos agua
pura y el otro una solucin y que ambos estn a la misma presin atmosfrica y temperatura encerrados en una campana,
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entonces la mayor energa libre por mol de agua pura, esto es su potencial qumico, en el recipiente de agua pura
favorecer el paso de agua por difusin a travs de la membrana gaseosa de aire para diluir la solucin contenida en el
segundo vaso. Las correspondientes presin de vapor son po para el agua pura y p para el agua de la solucin. De
acuerdo a la ley de Raoult, el agregado de soluto a un solvente disminuye su presin de vapor, en forma tal que el
descenso relativo de la presin de vapor es igual a la fraccin molar del soluto (N2). Siguiendo el concepto de que la
presin del vapor es proporcional a su concentracin se puede sustituir estas presiones en la ecuacin dada de la diferencia
de potenciales qumicos. En este caso para el agua ser:
agua pura solucin
=
w soluc - wpura
=
R T ln p/p
o
p
o -
p
N2 N2 = fraccin molar del soluto
po
Una consecuencia de la ley de Raoult es que la presin de la solucin relativa a la presin del solvente es igual a la
fraccin molar del solvente (N1). De manera que reemplazando este concepto en la ecuacin anterior resulta:
1
-
p/po =
N2
=
1- N1
N
1 = fraccin molar del solvente
p/po =
N1
N
1 +
N
2 = 1 ;
N
2 = 1 -
N
1
w
=
R T ln RT ln
y que incluyendo el concepto dehumedad relativa (presin de vapor actual en relacin a la correspondiente a saturacin,
a la misma temperatura) se transforma en la siguiente:
po 100% HR
p 100 x p
HR HR
p
w
=
R T ln % HR
po
100
po
100
Si adems transformamos la expresin anterior a unidades de presin, dividiendo por el volumen molar del agua (0.018 l
/mol) entonces la diferencia de potencial qumico del agua en la solucin del vaso - o de la clula - se transforma en el
denominado potencial agua: .
w - w
RT ln % HR RT ln N1
Vw Vw 100 Vw
Para considerar la composicin del potencial agua en la clula, debemos considerar los factores que puedan hacer variar su
energa a una temperatura dada. Ellos son como acabamos de ver en el sistema del osmmetro, la presencia de solutos y la
presin ejercida en ella, de manera que la diferencia de potencial agua en la clula en relacin al agua pura en estado de
referencia tendr que considerar estos dos componentes. La energizacin del agua por mol de agua debida a un exceso de
presin sobre la atmosfrica ser:
TN = V P considerando P =Presin hidrulica
- P atmosfrica
P = P TN = V P
P: presin en exceso de la atmosfrica
Por otro lado vimos que la adicin de soluto al agua pura promova un cambio en su potencial qumico que estaba dado
por:
TN = RT ln p/p
o
De manera que la diferencia total en el potencial qumico del agua en la clula (o el osmmetro) resulta ser:
Total = P Vw = RT ln p/p
o
y si adems incorporamos el volumen molar del agua, obtenemos el potencial agua:
w PVw +
RT RT ln p/p
o
Vw Vw Vw
w
0
P
+
RT
RT ln p/po
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Vw
Pero en el equilibrio, tal diferencia en el potencial qumico no existe, de manera que la situacin tambin representa el
caso en que P es la presin osmtica -como definimos anteriormente- y entonces por rearreglo de las ecuaciones se obtiene
lo siguiente:
P = (por definicin) = -
RT
RT ln p/po
Vw
-
=
RT
RT ln p/po
Vw
De manera que el potencial agua se puede expresar como P-:
w = P -
o en funcin del significado de sus trminos es usual encontrar la siguiente definicin:
w =
P -
La ecuacin antes encontrada en la condicin P=TT puede transformarse en la ecuacin de VantHoff para solutos no
disociados. En el caso de compuestos ionizables debe introducirse el coeficiente de disociacin i:
=
RT
RT ln p/po =
RT
RT ln (1 - N2)
Vw Vw
propiedad ln (1-x) x
RT N2 ; N2 Csoluto
Vw Vw
=
R T C ;
=
i R T C
En la tabla 3.2 encontramos distintos valores de RT para distintas temperaturas y los correspondientes valores de la
presin osmtica de soluciones 0,01 M; 0,1 M y 1,00 M -calculados con la ecuacin anterior- en MPa para un soluto no
disociado y a las mismas temperaturas los valores de la presin osmtica de un agua de mar.
En los estudios de potencial agua, como en el caso de la presin de columna del osmmetro de la representacin grfica,
recordemos que el termino P se refiere a la presin en exceso de la atmosfrica, entonces de acuerdo a esto la presin
ambiente es P =0. La unidad de presin que se usa es el Pascal. Las equivalencias correspondientes son:
1 bar = 0,987 atm = 10
5
Pa = 0,1 MPa
En este punto es interesante destacar que tanto la presin de vapor y la presin osmtica que hemos visto recientemente
como el ascenso ebulloscpico y el descenso crioscpico son un conjunto de caractersticas fsicas de las soluciones que se
han conocido con el nombre de propiedades coligativas y que se caracterizan porque su magnitud depende de la cantidad
de partculas - iones, molculas - y no de su naturaleza intrnseca. As ocurre que una solucin 1 molar de un soluto no
disociado como sacarosa, glucosa, manitol u otro a 0 C es 2,27 MPa (tabla 3.2) mientras que si se trata de un electrolito
su valor depender de su grado de disociacin, siendo por ejemplo para 1 M de ClK cerca de 4,54 MPa, ya que su i es
cercano a 2.
Por otro lado el efecto de la gravedad sobre el potencial agua depende de la altura del agua por encima del agua del estado
de referencia, la densidad del agua y la aceleracin de la gravedad:
f (gravedad) = gh, valiendo 0,01 MPa /metro.
Conclumos entonces que el potencial agua del agua en el sistema bajo consideracin - suelo, planta, aire - se puede
expresar a partir de la ecuacin:
=
*
- + P + gh
El estado de referencia para el agua pura * es 0 MPa, de manera que puede omitirse:
= P - + gh
Para un transporte en una corta distancia vertical (5-10 m) o entre clulas adyacentes gh puede omitirse ya que es
pequeo (ver la fig. 3.9). Ntese que la presin osmtica se define como una cantidad positiva, mientras que si se usase el
trmino potencial osmtico se trata de una cantidad negativa.
En este punto conviene mencionar que el potencial agua disminuye entonces por
la adicin de solutos,
por las fuerzas mtricas que adsorben o retienen agua,
por presiones negativas o tensiones como las presentes en xilema de plantas que se hallan transpirando y
por una reduccin de la temperatura.
Las fuerzas mtricas toman importancia cuando el grado de hidratacin del sistema es bajo y la matriz que lo conforma
retiene agua con mayor avidez. Tales matrices la constituyen el material coloidal del suelo y las paredes celulares, y el
sistema de membranas. Tpicamente, una dispersin coloidal consiste en una fase dispersante o medio en el que se
encuentra la fase dispersa o micela coloidal, cuyas dimensiones oscilan entre los 10
-7
y 10
-4
cm.
El potencial agua aumenta por
la presin ejercida por las paredes en las clulas total o parcialmente turgentes y
por el incremento de temperatura. (ver tabla 3.2)
Se puede plantear un caso hipottico para ver cmo en un caso ideal se comportan los componentes del potencial agua,
partiendo de una clula plasmolizada, es decir con potencial de presin nulo y un volumen relativo igual a la unidad
despus de colocarla en contacto con agua pura. Los fisilogos vegetales han definido el concepto de plasmlisis
incipiente para definir el estado de un tejido en el cual el 50% de las clulas presenta una retraccin del protoplasto.
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En el Diagrama se puede ver cmo evolucionan el potencial osmtico, el de presin y en funcin de ellos (
= P -
) el
potencial agua. En el caso real, la pared tiene cierta elasticidad, de manera que el potencial de presin puede cambiar
abruptamente, dependiendo de su mdulo de elasticidad, que est definido por el cambio que experimenta la presin ante
un cambio en el volumen relativo de la clula { E = P/(V /V) }. Este mdulo de elasticidad puede tomar tpicamente
valores de 10 MPa, de manera que si se opera un incremento de volumen del 1%, esto es
V /V = 0,01, entonces de la ecuacin anterior se deduce que el incremento en P = 0,1 MPa. Si inicialmente la clula
tuviera una
P= 0,5 MPa, entonces aquel incremento en el volumen relativo producir un incremento del 20% en P ( 0,1 MPa). Sin
embargo si se considera que en soluciones diludas es vlida la ley de Boyle Mariotte, esto es que a temperatura constante
el producto
P V = cte o que V = cte, entonces para un incremento en un 1% del volumen slo resulta en una disminucin en del
1% (o un aumento en el
del 1%). De manera que cuando el potencial agua de las clulas turgentes incrementa, la
mayor parte de este cambio es efectuado por el incremento en el potencial de presin ms que por el aumento en el
potencial osmtico (o disminucin de la presin osmtica).
El potencial agua es un concepto til para evaluar el estado hdrico de una planta. El primer uso del potencial agua de una
planta es que gobierna la direccin del flujo de agua a travs de membranas. Especficamente, la diferencia en el potencial
agua es la fuerza impulsora que conduce el transporte de agua por smosis y con algunas limitaciones que impone la
resistencia del camino del agua; tambin la diferencia de potencial agua es la fuerza impulsora para el movimiento del
agua a travs de distintos tejidos. En efecto el flujo del agua es directamente proporcional a la diferencia de potencial
agua y la constante de proporcionalidad corresponde a la recproca de la resistencia del camino, conocida como la
permeabilidad hidrulica.
] = Lp
El otro uso del concepto de potencial agua es que proporciona una medida del estado hdrico de una planta. Los dficits
hdricos conducen a una inhibicin en el crecimiento vegetal y en la fotosntesis y afectan otros efectos como se seala en
la fig. 3.11. El proceso afectado en primer lugar es el crecimiento: un severo estrs hdrico conduce a:
una inhibicin de la divisin celular,
inhibicin en la sntesis de componentes de la pared y protenas,
acumulacin de solutos,
cierre estomtico e
inhibicin de la fotosntesis.
Las hojas de plantas bien regadas tienen potenciales agua que fluctan entre -0,2 y 0,6 MPa, mientras que las hojas de
plantas de climas ridos bajo condiciones extremas, tienen valores mucho ms bajos, p. ej. entre -2 y -5 MPa.
Como el transporte de agua es un proceso pasivo, las plantas slo pueden absorber agua cuando el potencial agua de sus
races es menor que el del suelo. A medida que el suelo se seca, es decir que se profundiza el potencial agua del suelo, el
de las races debiera seguirlo similarmente, de lo contrario el suelo comenzara a extraer el agua desde la planta.
w =
P
Si
w y
P > 0 entonces
wp
Como el potencial agua, los valores de varan considerablemente, dependiendo de las condiciones de crecimiento y del
tipo de planta. Las plantas de jardn bien regadas pueden presentar valores de dentro de sus clulas de alrededor de 0,5
MPa. El lmite inferior en la probablemente es colocado por una mnima concentracin de iones disueltos, metabolitos, y
protenas celulares. En estos casos podemos incluir como algunos ejemplos lechuga, pepino, hojas de poroto.
En el otro extremo las plantas pueden construir mucho ms altos. Tpicamente, una condicin de estrs hdrico puede
conducir a una acumulacin de solutos, lo cual permite el mantenimiento de la turgencia celular en presencia de bajos
potenciales agua, en un fenmeno de adaptacin conocido como osmorregulacin. Estos solutos pueden ser prolina,
azcares y iones.
Las clulas de plantas que almacenan sacarosa u otros azcares como remolacha y caas de azcar tienen necesariamente
altos , p. ej. 2,5MPa.
Las halfitas son plantas que crecen en suelos salinos y tpicamente presentan concentraciones internas de soluto muy
elevadas y por ello al reducir suficientemente su potencial agua ellas pueden extraer agua del agua salada.
Los valores para la P son normalmente inferiores a los de la , que se deduce de la ecuacin