Aportes de la biotecnologa al

control de plagas y malezas

Ctedra de Teraputica Vegetal
Ctedra de Gentica y Mejoramiento Vegetal y Animal
2013
OGM
Un organismo genticamente modificado (OGM)
o transgnico es un organismo cuyo material
gentico ha sido modificado de una manera que
no sucede en el apareamiento y/o no sucede en el apareamiento y/o
recombinacin naturales (trmino legal).
Contiene uno o ms genes que han sido
transferidos (transgenes) de otra planta no
emparentada o de una especie diferente.anismos
transgnicos o genticamente modificados.
Primera planta transgnica
Se obtiene la primera planta transgnica, una planta
de tabaco con el gen de la resistencia al antibitico
kanamicina
Para transformar una especie vegetal
Vector de Transformacin (gen de inters, gen
de seleccin, promotor, otras secuencias
regulatorias)
Protocolo de transformacin eficiente.
Ej: Agrobacteriumtumefasciens o Biobalstica
Sistema de cultivo de tejidos Eficiente y
reproducible, Descendencia frtil
Ej: Agrobacteriumtumefasciens o Biobalstica
Ensayos de transfeccin
Anlisis de las plantas obtenidas (presencia,
estabilidad y nivel de expresin del transgn)
Agrobacterium tumefaciens
Bacteria infecta la planta (base del tallo) tumor, denominado
agalla de la corona
La bacteria transfiere un fragmento de su plsmido (plsmido Ti)
a las clulas de la planta. Produce hormonas de proliferacin
celular y sntesis de opinas (alimentarse).
Fragmento se denomina ADN-T y termina integrndose en algn
lugar del genoma.
Transferencia de ADN basada en vectores biolgicos
lugar del genoma.
Por ingeniera gentica se inserta un gen de inters en la regin T
del plsmido Ti.
Luego de la infeccin, el nuevo gen ser tambin transferido a la
clula vegetal e insertado en el genoma de la planta
Trnsferencia de ADN basada en vectores biolgicos
Agrobacterium tumefasciens
Biobalstica
Bombardeo de micropartculas
1984. Sandford et al., describen la tcnica
de bombardeo de micropartculas para la
transferencia directa de ADN (Universidad
de Cornell, EEUU).
Como se obtiene
una planta
transgnica?
Que es Evento de transformacin
gentica?
Un evento es una insercin particular de ADN ocurrida
en el genoma de una clula vegetal a partir de la cual se
origin la planta transgnica.
La Comisin Nacional de Bioseguridad Agropecuaria
(CONABIA), define evento como la insercin en el
genoma vegetal, en forma estable, de uno o ms genes
que forman parte de una construccin definida.
Ej:
Importante:
Es importante notar que el evento de transformacin es un procesos
aleatorio. Es decir no es posible dirigir la transformacin. No es posible
controlar , donde se insertar el gen ni el nmero de veces que lo har .
Esto genera que cada clula transformada sea nica. Por lo tanto cada planta
regenerada a partir de ellas tambin los ser .
En los experimentos de transformacin con un gen determinado,se obtienen
en general muchas plantas transformadas con caractersticas diferenciales. en general muchas plantas transformadas con caractersticas diferenciales.
En muchas de ellas se observan problemas importantes ya que la insercin
puede provocar mutacines importantes al interrumpir genes fundamenteales.
En otras plantas transformadas el gen no funciona adecuadamente. Bajo nivel
de expresin,etc.
Tambin se encuentran individuos en los que exista mas de una insercin por
genoma. Esto no es deseado.
Los eventos buscados son aquellos que tienen una insercin completa del
gen. Que se hereda en forma mendeliana y que presenta un buen nivel de
expresin de la protena deseada a fin de cumplir con el objetivo del trabajo
o Son nicos
o Difieren en los elementos y genes insertados
o Difieren en los sitios de insercin en el genoma de la
planta
Caractersticas de los eventos
planta
o Difieren en el nmero de copias del inserto
o Difieren en los patrones y niveles de expresin de las
protenas de inters
o Estos eventos estn patentados por las distintas
empresas semilleras
Cultivos Bt
Bt - Bacillus thuringiensis
La denominacin Bt deriva de Bacillus
thuringiensis, una bacteria que normalmente habita
el suelo y cuyas esporas contienen protenas txicas
para ciertos insectos.
Es una bacteria Gram+ que forma esporas y se
distingue de otros bacilos porque produce cristales
compuestos de una o ms endotoxinas. - Existe una
gran variedad de toxinas pertenecientes a esta
familia y cada una de ellas posee actividad especfica
contra insectos lepidpteros, colepteros, dpteros e
himenpteros. Las endotoxinas se agrupan
teniendo en cuenta los ordenes de insectos sobre los
cuales actan.
Protenas con accin insecticida de
Bacillus thuringiensis
Protenas Cry: se producen durante la
esporulacin como inclusiones citoplasmticas.
Tienen estructura cristalina. Su nombre Cry
deriva de Crystal (cristal).
Estas protenas, se activan en el sistema digestivo
del insecto y se adhieren a su epitelio intestinal,
alterando el equilibrio osmtico del intestino.
Esto provoca la parlisis del sistema digestivo del
insecto el cual deja de alimentarse y muere a los
pocos das.
Las toxinas Cry son consideradas inocuas para
mamferos, pjaros e insectos no-blanco.Hay
varias protenas Cry (y por lo tanto diferentes
genes cry) y cada una es especfica para un
tipo o grupo de insectos.
Existen ms de 750 protenas Cry distintas,
caracterizadas hasta abril de 2013 .Esta lista caracterizadas hasta abril de 2013 .Esta lista
crece rpidamente.
Fuente: http://www.btnomenclature.info/
Protenas VIP (vegetative insecticidal proteins):
Las Vip son protenas insecticidas no relacionadas
con las Cry, no forman inclusiones cristalinas y que
se secretan al medio durante el crecimiento
Protenas con accin insecticida de
Bacillus thuringiensis
se secretan al medio durante el crecimiento
vegetativo de la bacteria.
Especificidad de accin de las
proteinas Cry
El rango de insectos blanco de una determinada toxina Cry
es muy estrecho. La especificidad est dada por la
interaccin de las protenas Cry con las proteasas y con los
receptores presentes en el intestino de los insectos.
Existe un considerable nmero de toxinas Cry con Existe un considerable nmero de toxinas Cry con
especificidad para distintos rdenes de insectos, lo cual
permite discriminar su uso para distintos insectos blanco.
Esta especificidad hace que estas protenas no tengan
toxicidad sobre otros organismos. En particular, las
protenas Cry resultan inocuas para los mamferos, incluso
en su forma procesada.
Las protenas Bt son de accin especfica
Bacillus thuringiensis: generalidades. Un acercamiento a su empleo en el biocontrol de insectos lepidpteros que son
plagas agrcolas . DIEGO H. SAUKA*, GRACIELA B. BENINTENDE. (2008)
Protena Cry Subespecies de Bt Insectos blanco principales
Orden
*
Nombres comunes
Cry1Aa kurstaki L gusano de seda, polilla del tabaco, barrenador europeo del maz
Cry1Ab berlineri L, D polilla del tabaco, polilla del repollo, mosquito
Cry1Ac kurstaki L
gusano cogollero del tabaco, gusano falso medidor del repollo,
isoca del algodn
Cry1Ad1 aizawai L varios Lepidpteros
Cry1Ae1 alesti L gusano cogollero del tabaco
Cry1Ba1 thuringiensis L gusano del repollo
Cry1Bc2 morrisoni L, D varios lepidpteros
Cry1Ca3 entomocidus L oruga de la hoja del algodonero, mosquito
Cry1Cb1 galleriae L oruga militar
Cry1Da1 aizawai L oruga militar, polilla del tabaco
Cry1E kenyae L oruga de la hoja del algodonero Cry1E kenyae L oruga de la hoja del algodonero
Cry1Eb1 aizawai L varios lepidpteros
Cry1Fa aizawai L barrenador europeo del maz, oruga militar
Cry2Aa kurstaki L, D lagarta peluda, mosquito
Cry2Ab kurstaki L lagarta peluda, gusano falso medidor del repollo, polilla del tabaco
Cry2Ac shangai L polilla del tabaco, lagarta peluda
Cry3Aa san diego C escarabajo de la papa del Colorado
Cry3Aa3 tenebrionis C escarabajo de la papa del Colorado
CryBa tolworthi C escarabajo de la papa del Colorado
Cry4Aa israelensis D mosquito (Aedes y Culex)
CryBa israelensis D mosquito (Aedes)
Cry9Aa galleriae L polilla de la cera o falsa tia
Cry9Ba galleriae L polilla de la cera o falsa tia
L lepidoptera; D- diptera; C- Coleoptera Fuente: Argenbio
Las protenas Cry no so toxicas para mamferos
Tomado de: Departamento
de Fisiologa, Biologa
Molecular y Celular Facultad
de Ciencias Exactas y
Naturales Universidad de
Buenos Aires -
Agrobiotecnologa Curso
2013 Biocontrol de
insectos plaga en la
agricultura. Marcelo Berretta
A que se llama cultivos Bt ?
Son cultivos genticamente modificados, que
tienen uno o ms eventos que expresan protenas
entomotxicas especificas (Cry principalmente y
recientemente Vip`s Viptera TM) provenientes de
Bacillus thuringiensis. Estas protenas les otorgan
resistencia a diferentes plagas generalmente del resistencia a diferentes plagas generalmente del
orden de los lepidpteros y tambin algunos
colepteros.
Estos cultivos has sido obtenidos con tcnicas de
ingeniera gentica.
Tomado de: Departamento de
Fisiologa, Biologa Molecular y
Celular Facultad de Ciencias Exactas y
Naturales Universidad de Buenos
Aires - Agrobiotecnologa Curso 2011
- Resistencia a insectos y nematodos -
Alejandro Mentaberry
1- Ingestin de los cristales por las larvas susceptibles.
2- Disolucin de los cristales y liberacin de la protoxina.
3- Activacin proteoltica de la protoxina, producindose un
fragmento altamente txico (d-endotoxina) resistente a
proteasas.
4- Paso de la d-endotoxina a travs de la membrana
MODO DE ACCIN
La accin insecticida de las d-endotoxinas conlleva a una serie de pasos:
4- Paso de la d-endotoxina a travs de la membrana
peritrfica.
5- Unin de la d-endotoxina a receptores de la membrana de
las clulas epiteliales del intestino medio de la larva.
6- Introduccin de una parte de la d-endotoxina al interior de
la membrana.
7- Formacin de poros inespecficos.
8- Lisis de las clulas del intestino medio.
9- Muerte de la larva por septisemia.
MODO DE ACCIN
Tomado de: Departamento de Fisiologa, Biologa Molecular y
Celular Facultad de Ciencias Exactas y Naturales Universidad de
Buenos Aires - Agrobiotecnologa Curso 2011 - Resistencia a
insectos y nematodos - Alejandro Mentaberry
B) Seccin transversal del tracto digestivo de la larva a las
48 h de alimentarse de una raz de planta control no
transgnica.
C) Seccin transversal del tracto digestivo de la larva a las
48 h de alimentarse de una raz transgnica que expresa
un gen cry.
MAIZ
En nuestro pas estn aprobados distintos eventos bt,
resistencias a glifosato y glufosinato. Adems existen lo que
se denominan eventos apilados, es decir tienen ms de un
evento incorporado.
Algunos ejemplos de eventos aprobados en el mundo:
http://www.isaaa.org/gmapprovaldatabase/
http://www.gmo-compass.org/eng/gmo/db/
Caracterstica
otorgada
Transgenes
introducidos Eventos
Nombre
Comercial Empresa Ao
RL Cry 1 Ab 176 * * 1998
RL Cry 1 Ab MON 810 Maz Gard (MG) Monsanto 1998
RL TH (Glufosinato) Cry 1 Ab , Pat Bt 11 Agrisure TD max Syngenta 2001
RL
TH( glufosinato) Cry 1 Fa2 , Pat TC 1507
Herculex (Hx) -
Liberty link (LL) Pioneer Dow 2005
RL
TH( glifosato)
Cry 1 Ab
cp4-epsps
NK 603 x MON
810 MG RR 2 Monsanto 2007
RL, TH( glifosato y
Glufosinato)
Cry 1 Fa2 , Pat,
cp4-epsps
TC 1507 x NK
603 Hx + LL + RR2 Pioneer Dow 2008
RL
TH( glifosato)
Cry 1 Ab
epsps modificado Bt 11 x GA 21 TD TG Syngenta 2009
Cry 3Bb1 ;Cry 1 A 105
RL RC TH (glifosato)
Cry 3Bb1 ;Cry 1 A 105
; Cry 2 Ab
cp4-epsps
MON 88017 x
MON 89034 VT triple PRO Monsanto 2010
RL Vip 3 Aa 20 MIR 162 Agrisure VIPTERA Syngenta 2011
RL
TH( glifosato y
Glufosinato)
Vip 3 Aa 20; Cry 1 Ab,
pat
epsps modificado
MIR 162 x Bt 11
x GA 21
Agrisure VIPTERA
3 Syngenta 2011
RL
TH( glifosato y
Glufosinato)
Vip 3 Aa 20; Cry 1 Ab,
mCry3A ,pat
epsps modificado
MIR 162 x Bt 11
x GA 21 x
MIR 604
Agrisure VIPTERA
4 Syngenta 2012
RL
TH( glifosato y
Glufosinato)
Cry 1 A 105;Cry 2 Ab;
cry 1 Fa2 ,
Pat, cp4-epsps
MON89034 x
TC1507 x
NK603 POWER CORE Dow / Monsanto 2012
Maz Bt
Denominacin del evento MON 810
Maz tolerante a lepidpteros
Organismo donante del gen: Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki
cepa HD-1 (Bt)
Gen insertado: cry1Ab (gen Bt)
Protena expresada: CRY1Ab
Funcin: Conferir tolerancia al ataque de insectos lepidpteros. La prteina Cry , se activa Funcin: Conferir tolerancia al ataque de insectos lepidpteros. La prteina Cry , se activa
en el sistema digestivo del insecto y se adhieren a su epitelio intestinal, alterando el
equilibrio osmtico del intestino provocndole la parlisis del sistema digestivo.
Mtodo de transformacin: biobalstica.
En Argentina el evento fue aprobado para su comercializacin en
2001 (Resolucin SAGPyA N 342/2001).
Buen control sobre Diatraea saccharalis .
Control pobre sobre Spodoptera frugiperda (Gusano cogollero),
en especial en momentos de altas poblaciones del insecto.
Ejemplo maces de segunda siembra.
Maz Bt
Denominacin del evento BT 11
Maz tolerante a lepidpteros, resistente a glusinato de amonio
Organismo donante del gen: Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki cepa HD-1
(Bt). Streptomyces viridochromogenes cepa Tu494
Gen insertado: cry1Ab (gen Bt) ; Gen Pat
Protena expresada: CRY1Ab ; Proteina PAT(fosfinotricina-acetil transferasa)
Funcin: Conferir tolerancia al ataque de insectos lepidpteros. La prteina Cry ,
se activa en el sistema digestivo del insecto y se adhieren a su epitelio se activa en el sistema digestivo del insecto y se adhieren a su epitelio
intestinal, alterando el equilibrio osmtico del intestino provocndole la
parlisis del sistema digestivo. Resistencia al herbicida Glufosianto.
Ubicacin: brazo largo del cromosoma 8
Mtodo de transformacin: biobalstica.
En Argentina el evento fue aprobado para su comercializacin en 2001
(Resolucin SAGPyA N 342/2001).
Buen control sobre Diatraea saccharalis .
Control pobre sobre Spodoptera frugiperda (Gusano cogollero), en especial en
momentos de altas poblaciones del insecto. Ejemplo maces de segunda
siembra.
Maz Bt
Denominacin del evento: TC1507.
Modificaciones introducidas
1. Resistencia a insectos Lepidpteros y tolerancia al herbicida
glufosinato de amonio.
Genes introducidos expresadas en la planta:
1. El gen cry1F (truncado) proveniente de la bacteria Bacillus thuringiensis var. aizawai, el
cual codifica para la protena CRY1F que confiere resistencia a insectos Lepidpteros.
2. El gen Pat proveniente de la bacteria Streptomyces viridochromogenes cepa T494, 2. El gen Pat proveniente de la bacteria Streptomyces viridochromogenes cepa T494,
que codifica para la enzima fosfinotricinaacetil transferasa, el cual confiere tolerancia al
herbicida glufosinato de amonio.
3. Estos genes se encuentran formando parte de un solo inserto, que se comporta como
un nico locus, constituido por dos cassettes, con los genes indicados arriba. La
expresin de cada uno de estos genes est controlada por sendos promotores
Mtodo de transformacin: biobalstica.
En Argentina el evento fue aprobado para su comercializacin en 2005
(SAGPyA N143(15-03-05))
Buen control sobre Spodoptera frugiperda (Gusano cogollero).
Denominacin del evento: MIR162
Modificaciones introducidas: Resistencia a insectos Lepidpteros
plaga dada por la introduccin del gen vip3Aa20.
Secuencias introducidas en el evento MIR162
Gen principal: El gen vip3Aa20 codifica para una protena denominada
Vip3Aa20, la cual es una variante de la protena insecticida Vip3Aa
proveniente de Bacillus thuringiensis cepa AB88, que confiere resistencia
Maz Bt
proveniente de Bacillus thuringiensis cepa AB88, que confiere resistencia
a insectos Lepidpteros plaga.
El maz GM MIR162 fue obtenido por transformacin con
Agrobacterium tumefaciens.
El maz MIR162 ha sido ensayado a campo en Argentina desde 2001
hasta 2010 .
En Argentina el evento fue aprobado para su comercializacin en
2001 (SAGPyA N266(19/05/11)).
Eventos APILADOS
2. Denominacin del evento: MON 89034 x MON 88017.
3. Modificaciones introducidas:
Resistencia a insectos Lepidpteros (cry1A.105 y cry2Ab2).
Resistencia a insectos Colepteros (cry3Bb1 modificado)
Tolerancia al herbicida glifosato (CP4-epsps).
2. Denominacin del evento: MON89034 x TC1507 x NK603
3. Modificaciones introducidas:
- Resistencia a insectos Lepidpteros plaga (genes cry1A.105 y cry2Ab2, aportados
por el evento MON 89034, y cry1F aportado por el evento TC1507)
- Tolerancia a los herbicidas glufosinato de amonio (gen pat, aportado por el
evento TC1507)
- Tolerancia a glifosato (gen CP4-epsps, aportado por el evento NK603).
FUENTE: Maces Bt: manejo de la resistencia de los insectos blanco y nuevos eventos disponibles. Flores, Fernando (1); Parodi, Betiana (2)
.(1)EEA INTA Marcos Juarez.
http://64.76.123.202/site/agregado_de_valor/biotecnologia/50-EVALUACIONES/___favorable/index.php
cry 1 Ab MON 810 Maz Gard (MG) Monsanto
cry 1 Fa2 , Pat TC 1507
Herculex (Hx) -
Liberty link (LL) Pioneer Dow
cry 1 Ab , Pat Bt 11 Agrisure TD max Syngenta
cry 3Bb1 ;cry 1 A 105 ; cry
2 Ab
cp4-epsps
MON 88017 x
MON 89034 VT triple PRO Monsanto
Vip 3 Aa 20; cry 1 Ab, pat
epsps modificado
MIR 162 x Bt 11
x GA 21
Agrisure VIPTERA
3 Syngenta
cry 1 A 105 ; cry 2 Ab;
cry 1 Fa2 ,
Pat, cp4-epsps
MON89034 x
TC1507 x
NK603 POWER CORE Dow
El Palenque , Entre Ros . Febrero de 2013
Soja
En nuestro pas estn aprobados eventos de resistencia a
glifosoto (RR) , glufosinato (LL) y recientemente bt. Tambin
un nuevo evento resistente a glifosato (RR2) y eventos
apilados RR2, bt.
Eventos APILADOS
Denominacin de los eventos: MON87701xMON89788
Modificaciones introducidas: La acumulacin de eventos MON87701xMON89788
aporta a la soja proteccin contra ciertos insectos Lepidpteros y tolerancia al herbicida
glifosato.
Mtodo de transformacin: Los eventos MON87701 y MON89788 han sido obtenidos
individualmente por transformacin de tejidos meristemticos de soja mediada por
Agrobacterium tumefaciens. La acumulacin de eventos MON87701xMON89788 es el resultado Agrobacterium tumefaciens. La acumulacin de eventos MON87701xMON89788 es el resultado
del cruzamiento tradicional de lneas conteniendo los eventos simples.
Secuencias introducidas en el evento MON87701: Gen cry1Ac de Bacillus thuringiensis (Bt)
subsp. kurstaki, codifica para la protena Cry1Ac. Es activa especficamente contra insectos
Lepidpteros y es eficaz en el control de plagas de Lepidpteros como Anticarsia gemmatalis,
Epinotia aporema, y Rachiplusia nu.
Secuencias introducidas en el evento MON89788: El gen cp4 epsps deriva del gen aroA de
Agrobacterium sp. Cepa CP4 que codifica para la protena CP4 EPSPS con una estructura similar
y funcionalmente idntica a la enzima EPSPS endgena de la planta; sin embargo, la CP4 EPSPS
posee una afinidad reducida por el glifosato por
lo cual le confiere a la soja GMMON87701xMON89788 tolerancia a este herbicida.
Existen tcnicas de manejo agronmico para retrasar el
desarrollo de resistencia en los insectos blanco
Uno de los problemas que puede presentar el uso de
plantas Bt es la aparicin de insectos resistentes a la
accin de las toxinas Cry.
Resistencia de los insectos a los derivados bt.
El manejo agronmico apropiado permite
retrasar la aparicin de resistencia en los
insectos, aunque no necesariamente impedirla
en forma definitiva.
desarrollo de resistencia en los insectos blanco
Idea directriz
Los genes de resistencia estn presentes en el pool
gentico de las poblaciones afectadas; se ha
reportado aparicin localizada de resistencia al uso de
Bt como insecticida convencional.
El mecanismo de resistencia puede ser variado:
Prdida o modificacin de los receptores Bt en la
Resistencia de los insectos a los derivados bt.
o Prdida o modificacin de los receptores Bt en la
membrana intestinal.
o Activacin proteoltica de la toxina disminuida
o Solubilizacin intestinal disminuida.
o Digestin proteoltica del fragmento activo aumentada.
o Generalmente se expresa en forma de mutaciones
recesivas o semidominantes.
-
Poblaciones de Lepidopteros resistentes seleccionados en laboratorio y referencias
Fuente : Tesis doctoral. Mara Mercedes Daz Mendoza- 2006
Evolucin de la resistencia
Tomado de: Departamento de
Fisiologa, Biologa Molecular y
Celular Facultad de Ciencias Exactas
y Naturales Universidad de Buenos
Aires - Agrobiotecnologa Curso
2011 - Resistencia a insectos y
nematodos - Alejandro Mentaberry
Estrategias para el manejo de resistencia a Bt
Uso de promotores inducibles o tejido-especficos.
Uso de refugios espaciales o temporales.
Combinacin altos nivel de expresin de protenas Cry
con refugios espaciales.
Uso de combinaciones mltiples de genes cry
(Piramidalizacin). Ej: Eventos apilados. (Piramidalizacin). Ej: Eventos apilados.

Riesgo:
Resistencia cruzada
G
e
n
e
r
a
c
i
o
n
e
s

h
a
s
t
a

e
l

d
e
s
a
r
r
o
l
l
o

d
e

r
e
s
i
s
t
e
n
c
i
a
Uso de combinaciones mltiples de genes cry
(Piramidalizacin). Ej: Eventos apilados.
% de refugio
G
e
n
e
r
a
c
i
o
n
e
s

h
a
s
t
a

e
l

d
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s
a
r
r
o
l
l
o

d
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r
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s
t
e
n
c
i
a
FUENTE: The design and implementation of insect resistance management programs for Bt crops. Graham P. Head and John Greenplate.2012
Tomado de: Departamento de Fisiologa, Biologa Molecular y Celular Facultad de Ciencias Exactas y
Naturales Universidad de Buenos Aires - Agrobiotecnologa Curso 2011 - Resistencia a insectos y
nematodos - Alejandro Mentaberry
La combinacin de cultivos que expresan altas dosis de la protena insecticida con la
adopcin de refugios espaciales, es la estrategia ms utilizada. Esta se fundamenta en
el hecho de que los cultivos Bt son capaces de controlar tanto a los insectos
susceptibles (SS) como a los heterocigotos (Ss). Si surgieran insectos homocigotas
resistentes (ss), los mismos podran cruzarse con los sensibles (SS) en la zona del
refugio (plantas susceptibles no transgnicas), dando origen a ms insectos Ss, los que
seran eliminados en el cultivo Bt.
Tomado de: Departamento de Fisiologa, Biologa Molecular y Celular Facultad de Ciencias Exactas y Naturales Universidad de Buenos Aires -
Agrobiotecnologa Curso 2011 - Resistencia a insectos y nematodos - Alejandro Mentaberry
Caractersticas del evento.
Caractersticas de la plaga.
Caractersticas delos genes de
resistencia.
Manejo de la zona del refugio
Riesgo de
resistencia
Caractersticas
del refugio
En algodn bt superficie de refugio 20%.
En soja bt superficie de refugio 20 %.
En maz pronto vendrn los refugios en bolsa. Es decir dentro de la
bolsa del hbrido bt comercial, vendr un porcentaje de semillas del
mismo material sin el evento.
Tolerancia a herbicidas
Soja
En nuestro pas estn aprobados eventos de resistencia a
glifosoto (RR) , glufosinato (LL) y recientemente bt. Tambin
un nuevo evento resistente a glifosato (RR2) y eventos
apilados RR2, bt.
Soja 40-3-2
Denominacin del evento 40-3-2
Soja tolerante al herbicida glifosato
Organismo donante del gen: bacteria del suelo Agrobacterium tumefaciens,
cepa CP4
Gen insertado: epsps
Protena expresada: EPSPS (5-enolpiruvilsikimato-3-fosfato-sintasa)
Mtodo transformacin de tejido de la planta utilizando el bombardeo con
micropartculas
La EPSPS es una enzima clave en la ruta del cido sikmico, implicado en la biosntesis de
los aminocidos aromticos (fenilalanina, tirosina y triptfano) y se encuentra los aminocidos aromticos (fenilalanina, tirosina y triptfano) y se encuentra
naturalmente en todas las plantas, hongos y bacterias, pero no en los animales. La
enzima EPSPS de Agrobacterium es altamente tolerante a herbicidas que contienen
glifosato.
La aplicacin del herbicida no afecta la sntesis de aminocidos aromticos y
por lo tanto tampoco el crecimiento de la planta
Soja tolerancia a imidazolinonas
Tolerancia a imidazolinonas: Soja Cultivance (BASF
Argentina S.A.) : contiene el evento CV127 que brinda
resistencia a imidazolinonas.
Secuencias introducidas en el evento CV127:
Gen principal: csr1-2. El gen csr1-2 de Arabidopsis thaliana, codifica para la
subunidad cataltica de la enzima acetohidroxicido sintasa denominada
AtAHASL, involucrada en la biosntesis de aminocidos de cadena AtAHASL, involucrada en la biosntesis de aminocidos de cadena
ramificada en plantas. El gen posee una mutacin puntual que da por
resultado una nica sustitucin de un aminocido que modifica el sitio de
unin a los herbicidas de la clase de las imidazolinonas de manera que tales
compuestos no pueden unirse a esta enzima, por lo que su funcin no
resultar afectada, confiriendo as a la planta tolerancia a estos herbicidas.
3.1. Mtodo de transformacin: El evento CV127 fue obtenido por
biobalstica.
SAGyP N 119 (07/03/13)
Soja tolerancia a Glufosinato de amonio
SAGPyA N516(23/08/11)
El gen Pat proveniente de la bacteria Streptomyces
viridochromogenes cepa T494, que codifica para la
enzima fosfinotricina acetil transferasa, el cual enzima fosfinotricina acetil transferasa, el cual
confiere tolerancia al herbicida glufosinato de
amonio
Tolerancia a Dicamba
Tolerancia a 2,4 -d
Dow AgroSciences Argentina S.A. Eventos DAS-44210-8, DAS-44406-6, DAS-
14536-7 Y DAS-14524-4. tolerancia a glufosinato de amonio, glifosato y
herbicidas de la familia de los fenxidos (2,4 d) .
Monsanto Argentina S.A.I.C. Eventos : MON-87708-9 Tolerancia a dicamba
Estado actual: Pruebas de campo ensayos regulados.
Transgen: dmo Origen: Stenotrophomonas maltophilia strain DI-6
Genuity Roundup Ready 2 Xtend
Tolerancia a HPPD
herbicidas de la familia de los fenxidos (2,4 d) .
Estado actual:Pruebas de campo ensayos regulados.
Transgen :aad-12 , Origen: Delftia acidovorans, Tolerancia a 2,4-d ,
Enlist Soybean.
Bayer S.A. Eventos : FG-72 Tolerancia a isoxaflutole.
Estado actual: Pruebas de campo ensayos regulados.
Transgen: hppd3fW336 Origen: Pseudomonas fluorescens strain A32
Evento NK603 (RR2)
2. Denominacin del evento: NK603.
3. Modificaciones introducidas: Tolerancia al herbicida glifosato.
3.1. Expresadas en la planta:
3.1.1. gen CP4 EPSPS (dos copias en tandem), proveniente de la bacteria
Agrobacteruim tumefaciens cepa CP4, el cual codifica para la protena CP4 EPSPS (la
enzima 5-enolpiruvil-shiquimato 3-fosfato sintetasa) que confiere tolerancia al
herbicida glifosato. herbicida glifosato.
3.1.2. Estos genes se encuentran formando parte de un solo inserto, que se comporta
como un nico locus, constituido por dos cassettes, con los genes indicados arriba. La
expresin de cada uno de estos genes est controlada por sendos promotores: el
correspondiente a la primer copia del gen es el P-ract1/ract1 (promotor del gen de
actina conteniendo el primer intrn) derivado de arroz; el correspondiente a la
segunda copia del gen es el e35S (promotor del virus del mosaico del coliflor con la
regin potenciadora duplicada).
Evento GA21
Evento GA21, maz que expresa un enzima mutada del maz: (mEPSPS).
Las plantas de maz transformadas con el gen mutado epsps (mepsps), sintetizan
la protena mEPSPS que confiere tolerancia a los herbicidas que contienen
glifosato. La mutacin ha sido introducida para conferir resistencia a los
herbicidas que contienen glifosato y se traduce en dos cambios especficos
respecto a la enzima EPSPS silvestre presente en el maz convencional.
Nombre Gen: mepsps Nombre Gen: mepsps
Protena expresada: mEPSPS
Funcin: Conferir tolerancia al herbicida Glifosato
En el evento GA21 el gen de maz fue modificado por mutagnesis dirigida para
originar una enzima mEPSPS idntica a la versin salvaje, salvo en dos
aminocidos.
Presenta una sustitucin treonina 102 por isoleucina y de prolina 106 por serina.
Esta diferencia hace que la mEPSPS sea tolerante a glifosato.
La aplicacin del herbicida no afecta la sntesis de aminocidos aromticos y por
lo tanto tampoco el crecimiento de la planta.
Resistencia a Glufosinato de amonio
Eventos: Bt 11 y TC 1507
Y sus derivados con genes apilados
El gen Pat proveniente de la bacteria Streptomyces
viridochromogenes cepa T494, que codifica para la enzima
fosfinotricinacetil transferasa, el cual confiere tolerancia al
herbicida glufosinato de amonio.
El gen pat fue utilizado como gen selector en la construccin
original de los vectores con los que se obtuvieron los eventos
Bt 11 y Tc1507, se heredan como un locus nico.
Tolerancia a 2,4 d y Ariloxifenoxi (Fops)
Dow AgroSciences Argentina S.A. Eventos DAS-40278-9.
Estado actual: Pruebas de campo ensayos regulados.
Transgen: forma sinttica del gen aad-12 , Origen: Sphingobium
herbicidovorans, Tolerancia a 2,4-d y ariloxifenoxi . Detoxifica 2,4 d por
degradacion. Degradacion de los enantiomeros R de los
ariloxifenoxipropionatos.
Tolerancia a Glifosato y inhibidores de ALS
Pionner . Evento: DP-098140-6 . OPTIMUN GAT Pionner . Evento: DP-098140-6 . OPTIMUN GAT
Modificaciones introducidas: Tolerancia a herbicidas con dos diferentes
modos de accin. Estado actual : autorizado para liberacin comercial
Genes introducidos: gat4621 y zm-hra . El gen gat4621 codifica para la
protena N-acetiltransferasa denominada GAT4621 que acetila al glifosato
confiriendo a la planta tolerancia a este herbicida. El gen es quimerico obtenido
por recombinacin entre variantes del miosmo de Bacillus licheniformis.
El gen zm-hra es una versin modificada de un gen als endgeno de maz s.
Esta versin modificada contiene dos cambios especficos en la secuencia de
aminocidos de la protena expresada ZM-HRA, las que le confieren tolerancia
a esos herbicidas
Tolerancias no transgnicas
Soja STS
La soja tolerante a sulfonilureas (STS ), fue lograda por
mutagnesis qumica sobre semillas seguida de seleccin.
Mutagnesis qumica
mutagnesis qumica sobre semillas seguida de seleccin.
Semillas de la variedad Willams fueran tratadas con el agente
mutagnico NMU. La lnea mutante W20 fue recuperada a
partir de estos trabajos y utilizada como donante de la
caracterstica en diversos programas de mejoramiento.
La tolerancia en W20 est dada por una mutacin puntual el
locus ALS 1, en el codn 197 con un cambio de una serna por
una prolina.
Tolerancias no transgnicas
Maz Clearfield
Los maces tolerantes a imidazolinoas se han obtenido a partir
de mutantes somaclonales. En cultivos celulares de maz en
Variantes somaclonales
de mutantes somaclonales. En cultivos celulares de maz en
medios conteniendo el herbicida se han encontrado clulas
tolerantes, a partir de las cuales se regeneran plantas
completas con la tolerancia.
Girasol Clearfield
Tolerancias no transgnicas
El desorrollo de los Girasoles clearfield comenzo en 1996
cuando se descubrieron materiales silvestres de girasol
tolerantes a imidazolinonas en Kansas EEUU. Se realizaron
Introgresin
tolerantes a imidazolinonas en Kansas EEUU. Se realizaron
cruzaminetos entre los materiales silvestres y cultivados y se
logro la introgresin de la caracterstica. Este carcter de
tolerancia a imidazolinanas ,se denomina IMISUN. La
herencia de IMISUN parece estar controlada de forma aditiva
por dos genes, (Imr1) y (Imr2).Para producir lneas de girasol
IMISUN que expresan los niveles de tolerancia a los herbicidas
comerciales, ambos factores deben ser homocigotos en la
variedad final (Imr1Imr1/Imr2Imr2)
Girasol Clearfield Plus
Tolerancias no transgnicas
Mutagnesis qumica
Tratamiento con el mutgeno qumico EMS sobre la lnea
BTK47 . Se analizarn unas 600000 desendencias y se logro BTK47 . Se analizarn unas 600000 desendencias y se logro
recuperar una lnea con altos niveles de tolerancia a
imidazolinonas . La lnea denominada GM40 posee una
mutacin puntual que produce una cambio aminoacdico en
el sitio activo de la ALS.
Cultivos GEN Orgen del transgen Objetivo Nombre comercial Pases
Alfalfa
cp4
EPSPS
Agrobacterium
tumefasciens CP4
Tolerancia herbicida
Glifosato - afinidad
reducida de la enzima
por el herbicida
Roundup Ready
Alfalfa
Canada, Japn,
Mexico, EE UU.
GAT 4621 Bacillus licheniformis
Detoxifica al herbicida
glifosato, otorgando
tolerancia almismo
Optimum Gly
canola
Canada
cp4
EPSPS
Agrobacterium
tumefasciens CP4
Tolerancia herbicida
Glifosato - afinidad
reducida de la enzima
por el herbicida
Roundup Ready
Canola Canada, Chile, Japn ,
EEUU
Algunos Ejemplos extras de OGM utilizados en agricultura
Canola
EPSPS tumefasciens CP4 por el herbicida EEUU
Pat
Streptomyces
hygroscopicus,
Streptomyces
viridochromogenes
strain Tu 494
Tolerancia al herbicida
glufosinato
Liberty Link
Independence,
InVigor Canola ,
Liberty Link
Innovator
Canada, Japn ,
EEUU,Australia,
Unnion Europea,
bxn
Klebsiella pneumoniae
subsp. Ozaenae
Tolerancia al herbicida
bromoxinil Navigator Canola Canada , Japn
Ejemplos tomados de http://www.isaaa.org/gmapprovaldatabase/
Actualizado a agosto de 2012
Algodn
S4-Hra Nicotiana tabacumcv. Xanthi Tolerancia a Sulfonilureas
Dupont (nombre comercial no
disponible) EEUU
Pat y Cry 1F
Streptomyces
viridochromogenes strain Tu 494,
Bacillus thuringiensis var. Aizawai
Tolerancia a Glufosinato,
Resistencia a lepidpteros
Dow agro (nombre comercial
no disponible) Mexico, EEUU
Pat, Cry 1 F,
Cry 1 Ac
Streptomyces
viridochromogenes strain Tu 494,
Bacillus thuringiensis var. Aizawai,
Bacillus thuringiensis subsp.
Kurstaki strain HD73
Tolerancia a Glufosinato,
Resistencia a lepidpteros
WideStrike Cotton
Australia, Brasil, Costa
Rica, Mexico, EEUU
Pat,CP4 ESPS,
Cry 1 F, Cry 1
Ac
Streptomyces
viridochromogenes strain Tu 494,
Agrobacteriumtumefaciens strain
CP4, Bacillus thuringiensis var.
Aizawai, Bacillus thuringiensis
subsp. Kurstaki strain HD73
Tolerancia a Glufosinato,
Tolerancia a glifosato,
Resistencia a lepidpteros
WideStrike Roundup Ready
Cotton Japon, mexico
Klebsiella pneumoniae subsp. Tolerancia al herbicida
Cultivos GEN Orgen del transgen Objetivo Nombre comercial Pases
Algodn
bxn , Cry 1 Ac
Klebsiella pneumoniae subsp.
Ozaenae, Bacillus thuringiensis
subsp. Kurstaki strain HD73
Tolerancia al herbicida
bromoxinil Resistencia a
lepidpteros BXN Plus Bollgard Cotton Japn , EEUU
vip 3A Bacillus thuringiensis strain AB88 Resistencia a lepidpteros VIPCOT Cotton Japon , EEUU
cp4 EPSPS Agrobacterium tumefasciens CP4
Tolerancia herbicida
Glifosato - afinidad
reducida de la enzima por
el herbicida Roundup Ready Cotton
Argentina, Australia,
Brasil, Colombia, Costa
Rica, Japn, Mexico,
Sudfrica, EEUU
Cry 1 Ac
Bacillus
thuringiensissubsp. Kurstaki strain
HD73 Resistencia a lepidpteros Bollgard Cotton
Argentina, Australia,
Brasil, Colombia, Costa
Rica, Japn,India, Mexico,
Sudfrica, EEUU,
Paraguay.
cp4
EPSPS,Cry 1
Ac
Agrobacterium tumefasciens CP4,
Bacillus
thuringiensissubsp. Kurstaki strain
HD73
Tolerancia a Glifosato,
resistencia a lepidpteros
Roundup Ready Bollgard
Cotton
Argentina, Australia,
Brasil, Colombia, Costa
Rica, Japn, Mexico,
Sudfrica
Ejemplos tomados de http://www.isaaa.org/gmapprovaldatabase/ Actualizado a agosto de 2012
Lino Als Arabidopsis thaliana Tolerancia a Sulfonilureas CDC Triffid Flax Canada, EEUU
Soja
Pat
Streptomyces
viridochromogenes strain Tu
494 Tolrancia a Glufosinato
Liberty Link
soybean
Argentina, Brasil, Canada,
Japn EEUU, Uruguay
aad-12 ,
pat
Delftia acidovorans,
Streptomyces
viridochromogenes strain Tu
494
Tolerancia a 2,4-d ,
tolerancia a Glufosinato Enlist Soybean Canada , Japn
gm-hra ,
gat4601
Glycine max (modificado),
Bacillus licheniformis
Tolerancia a Sulfonilureas,
Tolerancia a glifosato Optimum GAT Canada , Japn, EEEUU
2mepsps ,
hppd3fW3
36
Zea mays(modificado),
Pseudomonas fluorescens
strain A32
Tolerancia a glifosato,
Tolerancia a Isoxaflutole
Bayer CropSc
(nombre comercial
no disponible) Canada, Japn
Cultivos GEN Orgen del transgen Objetivo
Nombre
comercial Pases
36 strain A32 Tolerancia a Isoxaflutole no disponible) Canada, Japn
Cry 1 Ac,
CP4 epsps
Bacillus
thuringiensissubsp. Kurstaki
strain HD73, Agrobacterium
tumefaciens strain CP4
Tolerancia a Glifosato,
resistencia a lepidpteros
Intacta Roundup
Ready 2 Pro
Argentina, Brasil,
Paraguay, Uruguay
CP4 epsps ,
dmo
Agrobacterium
tumefaciensstrain CP4 ,
Stenotrophomonas
maltophilia strain DI-6
Tolerancia a Glifosato,
Tolerancia a Dicamba
Genuity Roundup
Ready 2 Xtend Canad, Japn
Trigo CP4 epsps
Agrobacterium
tumefaciensstrain CP4 Tolerancia a Glifosato
Roundup Ready
wheat
Ejemplos tomados de http://www.isaaa.org/gmapprovaldatabase/
Actualizado a agosto de 2012