Antimicrobianos

Pruebas de susceptibilidad
Pruebas de susceptibilidad
a antibiticos
Cundo?
No se puede predecir la susceptibilidad
Posibilidad de mecanismos de resistencia
Situaciones clnicas especiales (S. pyogenes en
pacientes alrgicos a penicilina)
Fines epidemiolgicos / investigacin

Por qu?
Elegir la terapia antibitica ms adecuada

Condicin imprescindible:
Cepa aislada (no directamente de material clnico)
Pruebas de susceptibilidad
a antibiticos
Cualitativas:
Antibiograma por ensayo de difusin por discos

Cuantitativas:
CIM (ensayo de dilucin en medio lquido o slido)
CBM
PIS
PBS
Mtodos comerciales:
E-Test
Automatizados
Antibiograma
Tcnica por difusin en agar
Kirby-Bauer
Tcnica estandarizada
Microorganismos de crecimiento rpido




Interpretacin
Sensible
Intermedio
Resistente
Tcnica estandarizada
1. Medio de cultivo: Agar Mueller Hinton
pH: 7,2 7,4
< 7,2: AG, M / bL
Adecuado para el crecimiento de muchos microorganismos
(patgenos)
No presenta inhibidores y estable lote a lote
Adecuada concentracin de cationes (Ca
2+
, Mg
2+
)
Tetraciclina, AG vs P. aeruginosa
Adecuada concentracin de timina/timidina
TMS
Espesor de la placa de 4 mm (25 ml)
Humedad adecuada
Aerbicas o anaerbicas facultativas (sin suplementar)
Tcnica estandarizada
2. Inculo: 10
8
UFC/ml (0,5
MacFarland)
(0.5ml BaCl
2
0.048M + 99.5ml H
2
SO
4
0.18M)
Hasta 15 min
Tcnica estandarizada
3. Discos de antibiticos
Cules?
Carga
Conservacin adecuada
Fecha de vencimiento
Hasta 6/placa (10 mm)
Hasta 15 min luego de la
inoculacin de la placa
Distancia ~ 24 mm

Tcnica estandarizada
4. Incubacin
Tcnica estandarizada
5. Lectura de resultados
Cmo medir?
AMC
2,5 cm
borde a borde
Tcnica estandarizada
Tcnica estandarizada
6. Inclusin de cepas patrn para microorganismos Gram negativos


Tcnica estandarizada
6. Inclusin de cepas patrn para microorganismos Gram
positivos
Tcnica estandarizada
7. Interpretacin de resultados
Tcnica estandarizada
Qu significa ?

Sensible: alta probabilidad de respuesta favorable frente al
tratamiento utilizado (dosis habituales o recomendadas)
Intermedio: dos situaciones probables:
Puede aumentarse la dosis y aumenta probabilidad de respuesta
favorable (concentracin en sitio de infeccin / baja toxicidad
intrnseca)
Zona de transicin entre S / R (toxicidad elevada / no puede
aumentarse la dosis)
Resistente: muy baja probabilidad de respuesta satisfactoria a
los esquemas teraputicos, independientemente de dosis y
localizacin. CIM no alcanzable in vivo
7. Interpretacin de resultados
Concentracin Inhibitoria Mnima
CIM

Cuantitativa
Mnima concentracin que inhibe el desarrollo
microbiano
Medio lquido o slido
Lquido: una cepa por vez
Slido: varias cepas a la vez (multi-inoculador)
Macrodilucin (tubos) o microdilucin (policubetas)
Turbidez (lectura a ojo desnudo)
Tcnica estandarizada (CLSI)
Relacin CIM / halo de inhibicin
CIM: macrodilucin
CIM: microdilucin
CIM
Tcnica estandarizada:
Para bacterias de fcil desarrollo, mesfilas y aerobias (18-24
hs, 37C, atm normal)
ATB:
Potencia valorada o conocida
Pesar y disolver en diluyente adecuado
Solucin madre 4X primera conc a ensayar
Inculo:
Lquido: 1/200 del 0,5 MacFarland = 5.10
5
UFC/ml
Slido: 1/10 del 0,5 MacFarland (1 ml/spot) = 104 UFC
Medio: Caldo o agar Mueller Hinton, pH 7,2-7,4
Metodologa segn CLSI
Inclusin de cepas control dem ATBgrama


Prueba Epsilomtrica: E- Test
Interpretacin CIM
Qu significa ?

Sensible: alta probabilidad de respuesta favorable frente al
tratamiento utilizado (dosis habituales o recomendadas)
Intermedio: dos situaciones probables:
Pueden inhibirse al aumentarse la dosis y aumenta
probabilidad de respuesta favorable (concentracin en sitio de
infeccin / baja toxicidad intrnseca)
Zona de transicin entre S / R (toxicidad elevada / no puede
aumentarse la dosis)
Resistente: muy baja probabilidad de inhibicin por
concentraciones normalmente alcanzables en sangre con
las dosis habituales, independientemente de la
localizacin.
Actividad bactericida
Casos particulares:
Inmunocompromiso, etc.
Tolerancia
Nuevos ATBs
Mtodos:
Curva de tiempo de muerte
Bactericidia concentracin dependiente: AG, M
Bactericidia tiempo dependiente: bL, GP
CBM: mnima concentracin capaz de matar al menos el
99.9% microorganismos viables
PIS / PBS

Mtodos automatizados