PRUEBAS BIOQUMICAS

1. INTRODUCCIN Con frecuencia, la identidad de una especie requiere que se conozca de manera detallada su
actividad bioqumica, porque otras caractersticas no son suficientemente distintivas o diferenciales.
En el laboratorio disponemos de numerosas tcnicas para la caracterizacin bioqumica de una especie. Adems de
los productos finales de los procesos metablicos, tambin se necesita conocer con detalle como se producen estos
cambios, como ocurren paso a paso las reacciones qumicas, cules enzimas intervienen, cuales son los productos
intermediarios adems de que se deben reconstruir las secuencias de las reacciones bioqumicas que tienen lugar
dentro de la clula. En general el microorganismo se cultiva en medios que contienen una sustancia nutritiva
especfica o sustrato y despus de la incubacin del cultivo se examina para ver los cambios qumicos que hayan
ocurrido. Enterotube II
Kligler Hierro Agar Medio de cultivo frecuentemente usado en microbiologa de alimentos para la diferenciacin de
enterobacterias, en base a la fermentacin de glucosa y lactosa, y a la produccin de cido sulfhdrico. Frmula (en
gramos por litro) Instrucciones Peptona de carne 13.0 Cloruro de sodio 5.0 Suspender 54.8 g del polvo por litro de
Lactosa 10.0 agua destilada. Mezclar bien y calentar Tripteina 10.0 con agitacin frecuente, hervir 1 o 2 minutos
hasta disolucin total. Llenar Glucosa 1.0 hasta la tercera parte de los tubos de Citrato de hierro y amonio 0.5
ensayo. Esterilizar a 121 C por 15 Tiosulfato de sodio 0.3 minutos. Enfriar en pico de flauta profundo. Rojo de
fenol 0.025 Agar 15.0 pH final: 7.3 0.2
Fundamento En el medio de cultivo, la peptona de carne y la triptena, aportan los nutrientes adecuados para el
desarrollo bacteriano. La lactosa y la glucosa son los hidratos de carbono fermentables. El tiosulfato de sodio es el
sustrato necesario para la produccin de cido sulfhdrico, el citrato de hierro y amonio, es la fuente de iones Fe 3+,
los cuales se combinan con el cido sulfhdrico y producen sulfuro de hierro, de color negro. El rojo de fenol es el
indicador de pH, y el cloruro de sodio mantiene el balance osmtico. El agar es el agente solidificante. Por
fermentacin de azcares, se producen cidos, que se detectan por medio del indicador rojo de fenol, el cual vira al
color amarillo en medio cido. El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidrgeno el que reacciona luego con
una sal de hierro proporcionando el tpico sulfuro de hierro de color negro.
Resultados 1-Pico alcalino/fondo cido (pico rojo/fondo amarillo): el microorganismo solamente fermenta la
glucosa. 2-Pico cido/fondo cido (pico amarillo/fondo amarillo): el microorganismo fermenta glucosa, y lactosa.
3-Pico alcalino/fondo alcalino (pico rojo/fondo rojo): el microorganismo es no fermentador de azcares. 4-La
presencia de burbujas, o ruptura del medio de cultivo, indica que el microorganismo produce gas. 5-El
ennegrecimiento del medio indica que el microorganismo produce cido sulfhdrico.