Inf Micro Nº1 Gram

UNIVERSIDAD NACIONAL DE CHIMBORAZO
FACULTAD CIENCIAS DE LA SALUD

CARRERA DE LABORATORIO CLNICO E HISTOPATOLGICO

Asignatura:
Microbiologa I

Informe de investigacin basado en la prctica de laboratorio

Tema:

Reconocimiento de las bacterias bucales por medio de la tincin de Gram.

Elaborado por:

Vernica Cerda

Tercer semestre

Docente: Ing. Flix Falcon O.

Fecha de la prctica: 1 de Abril del 2014

Fecha de entrega: 8 de abril del 2014

Perodo: Marzo 2014 - Julio 2014

Riobamba - Ecuador

Reconocimiento de bacterias bucales por medio de la Tincin de Grams Por: Vernica Cerda
Lab. Cln. e Histop. Microbiologa I pg. I
NDICE
RESUMEN ............................................................................................................... II
1. INTRODUCCIN .............................................................................................. 3
1.1. OBJETIVOS ...................................................................................................... 3
1.1.1. OBJETIVO GENERAL ................................................................................... 3
1.1.2. OBJETIVOS ESPECFICOS .......................................................................... 3
2. FUNDAMENTACIN TERICA. ...................................................................... 4
2.1. Las bacterias ..................................................................................................... 4
2.2. Bacterias presentes en la cavidad bucal ........................................................... 4
2.3. Tcnica de la Tincin de Gram .......................................................................... 5
3. MATERIALES Y MTODOS ............................................................................ 6
3.1. Obtencin de muestra bucal ............................................................................. 6
3.2. Preparacin del frotis de bacterias bucales ....................................................... 6
3.3. Tincin de placas con la Tcnica de Gram ....................................................... 7
3.4. Diferenciacin de las bacterias observadas ...................................................... 7
4. RESULTADOS Y DISCUSIONES .................................................................... 8
4.1. Muestras bucales obtenidas .............................................................................. 8
4.2. Frotis de bacterias bucales preparadas ............................................................ 8
4.3. Placas con la tcnica de Gram teidas ............................................................. 8
4.4. Bacterias observadas y diferenciadas ............................................................... 8
5. CONCLUSIONES ............................................................................................. 8
6. Bibliografa.......................................................................................................... 8

Lab. Cln. e Histop. Microbiologa I pg. II
RESUMEN
El presente trabajo comprendi el reconocimiento de las bacterias bucales por medio
de la tincin de Gram, para lo cual se tom una muestra de bacterias bucales con la
ayuda de un hisopo esterilizado previamente. Se coloc una gota de suero fisiolgico
en el portaobjetos y se procedi a realizar un extendido con el isopo, luego con el
mechero se fij la muestra, teniendo mucho cuidado de no quemarse o mucho peor
sobrecalentar la muestra, ya que las bacterias podran perder su estructura inicial. Se
realiz la Tincin de Gram, para lo cual con el colorante cristal violeta se ti toda la
placa y se dej por un minuto, se lav el exceso de colorante bajo un chorro delgado de
agua, despus se coloc de igual forma sobre toda la placa yodo, para que se fije la
tincin, luego se lav el sobrante bajo un corro delgado de agua, se decolor la
muestra con alcohol-acetona, por diez segundos, y se retir el exceso bajo un chorro
de agua, por ltimo se coloc sobre la placa safranina por un minuto, para luego lavar
el exceso. Se dej secar la placa, para lo cual utilizamos el mechero nuevamente.
Todos los frotis terminados se los lev al microscopio para su observacin, y lo q se vio
fueron bacterias gram positivas, estreptococos.

Lab. Cln. e Histop. Microbiologa I pg. 3
1. INTRODUCCIN
Existen gran diversidad de bacterias que se pueden encontrar en el medio donde se
vive, las mismas que ha simple vista es imposible observarlas, por lo tanto no se
puede hacer una determinacin de las bacterias. Nuestra cavidad bucal est llena de
estos microorganismos, los mismos que pueden provocar enfermedades tales como
las caries o enfermedades sistemticas que van a acertar la salud en general sino se
tiene un correcto aseo en esta zona. Si se presenta alguna patologa ocasionada por
alguna bacteria es menester reconocer a qu grupo de bacterias se va a tratar, por lo
que el propsito de este trabajo es reconocer bacterias bucales por medio de la
Tincin de Gram.
1.1. OBJETIVOS
1.1.1. OBJETIVO GENERAL
Reconocer bacterias bucales por medio de la tincin de Gram.
1.1.2. OBJETIVOS ESPECFICOS
Obtener muestra bucal.
Preparar frotis de bacterias bucales.
Teir placas utilizando la tcnica de Gram.
Diferenciar las bacterias observadas.

2. FUNDAMENTACIN TERICA.
2.1. Las bacterias
Las bacterias son microorganismos unicelulares que presentan diversos tamaos y
diversas formas tales como: esferas, barras y hlices. Las bacterias son procariotas
por lo tanto no poseen un ncleo verdadero, generalmente poseen una pared formada
por peptidoglicanos. Muchas bacterias disponen de flagelos u otro mecanismo de
transporte por lo que les hace ser mviles (1).
Son los organismos ms abundantes del planeta, encontrndose en todo hbitat de la
tierra, creciendo en el suelo, en manantiales calientes y cidos, en las profundidades
del mar y en la superficie terrestre. Las bacterias son imprescindibles para el reciclaje
de los elementos, pues muchos pasos importantes de los ciclos biogeoqumicos
dependes de estas (2).
En el cuerpo humano hay aproximadamente diez veces tantas clulas bacterianas
como clulas humanas, una gran cantidad de bacterias en la piel y en el tracto
digestivo. Aunque el efecto protector del sistema inmune hace que la gran mayora de
estas bacterias sea inofensiva o beneficiosa, algunas bacterias patgenas pueden
causar enfermedades infecciosas. Las enfermedades bacterianas mortales ms
comunes son las infecciones respiratorias. En todo el mundo se utilizan antibiticos
para tratar infecciones bacterianas. Los antibiticos son efectivos contra las bacterias
ya que inhiben la formacin de la pared celular o detienen otros procesos de su ciclo
de vida (3).
2.2. Bacterias presentes en la cavidad bucal
La flora bacteriana oral es condicin personal, no es igual el tipo ni nmero de
bacterias entre cada persona.
Una flora normal es un mecanismo de defensa contra otras bacterias. Adems cumple
un rol en el desarrollo del sistema inmunolgico.
En la boca se pueden encontrar:
Bacterias aerobias y anaerobias, ambos Gram positivas y negativas.
Hongos como cndida albicans.
Parsitos intracelulares.
Virus de la familia herpes.
Bacterias anaerobias alojadas en la cavidad bucal
Bacilos Gram +: lactobacillus.
Bacilos Gram -: actinobacillus, fusobacterium, leptotrichia, porphyromonas.
Cocos Gram +: peptostreptococcus
Cocos Gram -: veillonella.
Spirochetas: treponema (por s sola no produce infeccin, el T. Vicentii asocia con una
fusobacteria produce necrosis de enca.

Bacterias aerobias.
Cocos Gram +:
Gnero staphylococcus: flora normal: S. Epidermidis, S. Saprophyticus, S.
Hemoliticus.
Gnero streptococcus: S. Mutans (ms importante), S. Salivarius, S. Mitis, S. Oralis,
S. Sanguis.
Cocos Gram -:
Gnero Neisseria: N. sicca, N. flava, N. mucosa.
Gnero Branhamella: B. Catarnarls (4).
2.3. Tcnica de la Tincin de Gram
Es un tipo de tincin diferencial, se utiliza tanto para poder referirse a la morfologa
celular bacteriana como para poder realizar una primera aproximacin a la
diferenciacin bacteriana, considerndose Gram positivas a las que se teirn de
color morado, y Gram negativas a las que se visualizan de color rosa.
La tincin de Gram requiere de 4 soluciones:
El primer colorante es un colorante bsico que en contacto con las clulas cargadas
negativamente reacciona con ellas colorendoles.
La solucin mordiente es la que va a fijar las tinciones y aumenta la afinidad entre el
colorante y las clulas.
El agente decolorante es un disolvente orgnico.
Colorante de contraste es un colorante bsico distinto al primero (5).

3. MATERIALES Y MTODOS
3.1. Obtencin de muestra bucal
Para esta prctica se comenz tomando una muestra de la cavidad bucal, con la
ayuda de un hisopo previamente esterilizado. Con mucho cuidado y sin lastimar la
mucosa de la boca se fue pasando por todos los rincones de la cavidad bucal.

Fig. 1 Muestra de sangre que se coloc
en el tubo de 15ml para extraer ADN.
Fig. 2 Muestras listas para centrifugarlas
y eliminar el sobrenadante.

Fig. 3 Muestra centrifugada, lista para
mezclar con la papayina y la lgrima.
Fig. 4 Muestras listas para entrar al Bao
Mara.

3.2. Preparacin del frotis de bacterias bucales
Tomada la muestra bucal con el hisopo se procedi a extender la muestra sobre el
portaobjetos que previamente se le coloc una gota de suero fisiolgico y a la muestra
se la dispers sobre sta. Luego se pasa a la placa sobre el mechero para fijar a la
muestra y que sta no pierda las caractersticas morfolgicas de cuando estaba viva,
sin sobrecalentar la muestra ya que tambin se perdera sus caractersticas.

Fig. 5 Pesando la agarosa para preparar
el gel de electroforesis.
Fig. 6 disolviendo la agarosa en agua.

3.3. Tincin de placas con la Tcnica de Gram
Para teir las placas se utiliz la Coloracin de Gram, la misma que consista en
colocar el primer colorante que era el cristal violeta, sobre toda la placa haciendo que
cubra por completo la muestra, se dej por un minuto, y el exceso se retir bajo un
chorro de agua. Despus e coloc la solucin mordiente, el yodo, para que se fijen los
colores, de la misma manera que cubran toda la muestra, para despus de un minuto
retirar el sobrante bajo un chorro de agua. El siguiente paso fue decolorar nuestra
muestra el que se lo coloc alcohol acetona slo por diez segundos, de la misma
manera el exceso se retir bajo un chorro de agua. Por ltimo paso se coloc el ltimo
colorante que fue la safranina, y el exceso bajo un chorro de agua se lo retir. Luego
se acerc al mechero a la placa para que se secara y posteriormente se la llev al
microscopio para su observacin.
3.4. Diferenciacin de las bacteri as observadas
Se enfocaron las muestras que pasaron anteriormente por minuciosos pasos, primera
mente con el lente ms pequeo hasta llegar a observar con el lente que necesita
aceite de inmersin para ser observado. Se trat de observar las diferentes bacterias.

4. RESULTADOS Y DISCUSIONES
4.1. Muestras bucales obtenidas
La obtencin de las muestras bucales fue muy exitosa, ya que se tom de toda la
cavidad bucal y de los dientes, esto ayud a que se adhieran muchas bacterias al
hisopo.
4.2. Frotis de bacterias bucales preparadas
El frotis con la muestra de bacterias bucales se prepar correctamente, ya que se
sigui el procedimiento, y todas las indicaciones. Se tom una buena muestra y la
fijacin fue exitosa.
4.3. Placas con la tcnica de Gram teidas
Las placas que se tieron con la Tcnica de Gram fueron satisfactorias, ya que se
cumplieron todos los tiempos que fueron necesarios para que se fijen los colores en la
muestra.
4.4. Bacterias observadas y diferenciadas
Las bacterias que se pudieron observar y diferenciar en el microscopio fueron el
resultado de una buena prctica, que desde los primero pasos se los sigui
provocando as una buena visualizacin de bacterias. Se pudo reconocer que eran
Gram positivas ya que se tieron de morado, y por su forma se pudo decir que era un
estreptococo.
5. CONCLUSIONES
Se pudo obtener una buena muestra bucal, ya que desde un principio se
escucharon con atencin las indicaciones del docente.
La preparacin del frotis se realiz muy bien ya se fij correctamente con el
calor la placa, esto ayud que se fije bien y que permanezcan sus estructuras
morfolgicas intactas.
Los tiempos utilizados en la tincin de Gram fueron los correctos, esto facilit
que las bacterias puedan diferenciarse.
Cuando se observaron las bacterias al microscopio fue posible diferenciar
estructura, morfologa y a qu grupo perteneca, y se pudo ver que eran Gram
positivas, estreptococos.
6. Bibliografa
1. Bacteria. [En lnea] [Citado el: 5 de Abril de 2014.]
http://biologialiga.files.wordpress.com/2008/08/bacteria2010.pdf.
2. Bacterias . [En lnea] [Citado el: 5 de Abril de 2014.]
http://es.wikipedia.org/wiki/Bacteria.
3. Bacterias, Organismos Unicelulares. [En lnea] [Citado el: 5 de Abril de 2014.]
http://www.unmsm.edu.pe/veterinaria/Aula%20Virtual/Microbiologia/CLASE_BACTERI
OLOGIA_MORFOLOGIA_Y_ESTRUCTURA_BACTERIANA%202.pdf.
4. Bacterias bucales. [En lnea] [Citado el: 5 de Abril de 2014.]
http://www.feriadelasciencias.unam.mx/anteriores/feria20/feria370_01_microflora_bact
eriana_de_la_cavidad_bucal_gram_neg.pdf.
5. Tincin de Gram. [En lnea] [Citado el: 5 de Abril de 2014.]
http://es.wikipedia.org/wiki/Tinci%C3%B3n_de_Gram.

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