Estudio del Efecto de la Interferencias del fosfato en el Anlisis de Calcio

por Espectrometra de Emisin Atmica. Determinacin de Calcio en

Tabletas de Calcibon D por Espectrometra de Emisin Atmica.

Analio Dugarte, Sharol Goffin
Laboratorio de Anlisis Instrumental. Seccin 01.
Departamento de Quimica. Facultad de Ciencias. Universidad de los Andes
Mrida, Abril 2012.

Resumen

En esta prctica se utiliz la Espectrometra de Emisin Atmica de Llama, para estudiar el efecto de la
interferencia de fosfato en la determinacin de calcio, realizar una curva de calibracin sencilla y determinar la
concentracin de calcio en una tableta de calcibon D; mediante la preparacin de soluciones patrones y de referencia, la
medicin de la seal de emisin en un espectrofotmetro y el tratamiento estadstico de los datos por medio del programa
OriginPro 8 SR0. Se obtuvo una disminucin de la seal de calcio al aumentar la concentracin de fosfato, el EDTA tiene
un efecto protector sobre el ion calcio, la curva de calibracin posee un rango lineal entre 0,3570 ppm y 9,20 ppm, con una
sensibilidad de 0,1050,004, un corte de 00,004, un lmite de deteccin de 0,1191 ppm y un lmite de cuantificacin de
0,3570 ppm. La concentracin de calcio en la muestra es de 20,72 % comparado con el valor reportado es un resultado
exacto y preciso, indicando que el mtodo tiene alta sensibilidad y exactitud.

Introduccin

El calcio es el mineral ms abundante en
el cuerpo humano, forma parte de los huesos y
dientes. Existen diversos factores internos y
externos que desequilibran el control hormonal,
causando alteraciones en la concentracin de
calcio, ya sea un exceso o una deficiencia de
este mineral
1
. Por lo tanto, es de gran
importancia su anlisis en los fluidos biolgicos,
para determinar la concentracin de calcio y
evaluar se puede realizar por Fotometra de
Llama
2
, Espectrometra de Absorcion
3, 5
y
Emisin Atomica
4
, y precipitacin con oxalato
5
.
La espectrometra de emisin atmica de
llama se basa en principios de espectroscopia de
luz, donde primero la muestra liquida es
absorbida por un nebulizador, que la dispersa en
forma de gotas, las cuales llegan a la llama,
donde el analito es desolvatado, vaporizado,
atomizado y excitados electrnicamente, por lo
tanto al relajarse emite radiacin, que es
registrada por un detector y procesada por un
computador.
6
Esta espectrometra tiene poco uso, ya
que la llama alcanza un temperatura baja, lo
cual, limita esta tcnica a la determinacin de
metales alcalinos y ocasionalmente calcio.
7

En la determinacin de calcio existen
interferencias, causadas por la formacin de
enlaces con aniones, como fosfatos, sulfatos,
entre otros. El fosfato se une al calcio en fase
acuosa formando una especie poco voltil, que
hace decrecer la concentracin en la fase de
vapor de los tomos de calcio generando una
disminucin en la seal. Se puede eliminar esta
interferencia mediante la adicin de lantano,
estroncio o EDTA
8, 7
.
Otras interferencias son las variaciones
en la velocidad de aspiracin de la muestra,
cambios en el tamao de la gota, variaciones en
la viscosidad y tensin superficial y
fluctuaciones en la presin de los gases de la
llama
7
.
En este experimento se estudiara el
efecto sobre la seal de calcio, del fosfato a
diferentes concentraciones y en presencia de
EDTA y Estroncio por emisin atmica de
llama. Adems, se determinara la concentracin
de calcio en una tableta de Calcibon D.

Experimental

Reactivos:

Carbonato de calcio 99% Marca
Quimica RB, Fosfato dicido de sodio 99,5%,
EDTA 99% Marca IQE, Solucin 0,01 M de
Cloruro de Estroncio, Hidrxido de Amonio 28-
30% de NH
3
Marca Fisher Scientific, Cloruro
de Amonio 99,5% Marca Sigma Aldrich,
Tableta Calcibon D eta contenido de Calcio de
315 mg por Tableta, Acido Clorhdrico 37%
Marca Riedel de Han, Agua Ultra Pura.

Materiales:

10 Matraces de 25 mL, 12 matraces de
50 mL, 6 matraces de 100 mL, 2 matraces de
250 mL, Balanza Analtica Ohaus Analitical
Plus, Pipetas Volumtricas de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7,
8, 9, 10 mL, Pipetas Graduadas de 10 mL y 5
mL, Propipeta, Piseta Plstica,
Espectrofotmetro de Absorcin Atmica
Marca Varian SpecrtrAA, 2 Beacker de 50 mL,
Papel Filtro, Embudo Tallo Corto, Mortero,
Frascos mbar.

Procedimiento:

Estudio de las Interferencias de Fosfato en el
Anlisis de Calcio
Se prepar 50 mL de solucin de 1020
mg/L de Calcio. A partir de ella, se realiz una
dilucin para obtener 50 mL de solucin de
102,0 mg/L de Calcio. Tambin, se prepar 100
mL de solucin 0,0025 M de NaH
2
PO
3
. Luego,
se realiz una solucin de 0,4 M de EDTA en
25 mL, la cual, se diluy para obtener 100 mL
de solucin 0,01 M. Se prepar 100 mL de un
buffer a pH 10 mezclando 57 mL de NH
4
OH
concentrado y 7 g de NH
4
Cl.
En 8 matraces de 50 mL se realiz una
serie de soluciones de 0 M, 5,03*10
-05
M,
0,000101 M, 0,000151 M, 0,000201 M,
0,000251 M, 0,000352 M y 0,000503 M de
NaH
2
PO
4,
adems, en cada uno de ellos se
adicion 5 mL de solucin de 102,0 ppm de
Calcio para obtener 10,20 ppm de Calcio y 5
mL de Buffer pH 10
.

En otros 3 matraces de 50 mL se
prepararon una serie de soluciones con
concentraciones de 0,00024 M EDTA, 0,001 M
EDTA y 0,04 M EDTA, tambin adicion 5 mL
de solucin de 102,0 ppm de Calcio para
obtener 10,20 ppm de Calcio y 5 mL de Buffer
pH 10
.
En el ltimo matraz se prepar una
solucin de 10,20 ppm de Calcio, 0,000253 M
de NaH
2
PO
4
y 0,001 M de Estroncio.
Se midi la intensidad de emisin en el
espectrofotmetro de Absorcin Atmica con
una llama de aire-acetileno, ajuste las
condiciones del experimento y use la longitud
de onda 422,7 nm. Prepare una curva con la
intensidad de la seal en funcin de la
concentracin de NaH
2
PO
4
. Compare al EDTA
y el Estroncio sobre el efecto producido sobre la
interferencia de fosfato.
7


Determinacin de Calcio en tabletas de
Calcibon D.
Se prepara una solucin de 100 mL de
25,50 ppm a partir de una de 102,0 ppm y una
serie de patrones de calcio de 0 ppm, 1,02 ppm,
2,04 ppm, 3,06 ppm, 4,08 ppm, 5,10 ppm, 6,12
ppm, 7,14 ppm, 8,16 ppm, 9,18 ppm y 10,20
ppm.
Se tritura 1 o 2 tabletas de calcibon D en
un mortero, se pesa aproximadamente 0,2000 g,
se adiciona 20 mL de HCl concentrado y se
enraso a 100 mL. Se filtro por gravedad y se
tom 5 mL y se enras a 100 mL. En un matraz
de 50 mL se aadi 5 mL de la solucin anterior
y se enraso con agua. Se volvi a diluir la
solucin anterior tomando 25 mL y llevndolos
a 50 mL.
Mida en el espectrofotmetro para
analizar las soluciones patrones y la muestra.
Usando 422 nm y un ancho de rendija de 0,7
nm. Prepare una curva de calibracin y por
interpolacin determine la concentracin de las
muestra.
7

Anlisis Estadstico
Se utilizo el paquete estadstico
OriginPro 8 SR0, para calcular la regresin
lineal y la estadstica correspondiente a los datos
obtenidos.

Datos Experimentales

Tabla N 01. Efecto de la Interferencia de NaH
2
PO
4

sobre la Seal de Emisin.
Ca
(ppm)
pH NaH
2
PO
4

(M)
EDTA
(M)
Seal
10,20
*
10
0
0 0,9193
10,20 10
5,03*10
-05

0 0,6704
10,20 10
0,000101
0 0,5419
10,20 10
0,000151
0 0,5003
10,20 10
0,000201
0 0,4832
10,20 10
0,000251
0 0,4978
10,20 10
0,000352
0 0,4762
10,20 10
0,000503
0 0,4347
10,20 10
0,000251
0,00024 0,5158
10,20 10
0,000251
0,001 0,4946
10,20 10
0,000251
0,04 0,6018
10,20 10
0,000251
0,001 0,373
*Solucin de Referencia

Tabla N 02. Seales Obtenidas en la Calibracin de
Calcio, en la determinacin de Calcio en una Tableta
de Calcibon D por Espectrofotometra de Emisin
Atmica.
Ca
(ppm)
Seal
0
*
-0,0004
1,02 0,1767
2,04 0,3042
3,06 0,4226
4,08 0,5303
5,10 0,6143
6,12 0,7029
7,14 0,7842
8,16 0,8382
9,18 0,9015
10,20 0,9527
Muestra 0,6144
*Solucin Blanco.


Observaciones Experimentales

La presencia de fosfato en la solucin
disminuye la seal de emisin de calcio en el
espectrofotmetro, por lo cual, la seal de calcio
tiene una dependencia inversamente
proporcional con respecto a la concentracin de
fosfato. El EDTA contrarresta el efecto
producido por el fosfato, en cambio el Estroncio
no lo contrarresto sino aument el efecto de la
interferencia.
La seal de emisin de calcio se
incrementa con el aumento de concentracin de
este en la solucin.









Resultados Experimentales

Tabla N 03. Efecto de la Interferencia de NaH
2
PO
4

sobre la Seal de Emisin.

NaH
2
PO
4

(M)
Seal
0
0,9193
5,03*10
-05

0,6704
0,000101
0,5419
0,000151
0,5003
0,000201
0,4832
0,000251
0,4978
0,000352
0,4762
0,000503
0,4347


Tabla N 04. Resumen Estadstico de la Regresin
Lineal de la Grafica Seal de Emisin en Funcin de
la Concentracin de NaH
2
PO
4

Intercepto Pendiente Estadstica
Valor Error Valor Error R
2

0,70958 0,06638 -716,80173 261,55155 0,48189


Tabla N 05. Efecto de la Adicin de EDTA y
Estroncio en la interferencia de Fosfato.

EDTA (M) Seal de Emisin
0 0,9193
0,00024 0,5158
0,001 0,4946
0,04 0,6018
Estroncio (M) Seal de Emisin
0,001 0,373









Tabla N 06. Seales Corregidas en la Calibracin
de Calcio, en la determinacin de Calcio en una
Tableta de Calcibon D por Espectrofotometra de
Emisin Atmica.

Ca (ppm) Seal de
Emisin
Corregida
0 0
1,02 0,1771
2,04 0,3046
3,06 0,423
4,08 0,5307
5,10 0,6147
6,12 0,7033
7,14 0,7846
8,16 0,8386
9,18 0,9019
10,20 0,9531
Muestra 0,6148

Tabla N 07. Resumen Estadstico de la Regresin
Lineal de la Grafica de la Curva de calibracin.

Intercepto Pendiente Estadstica
Valor Error Valor Error R
2

0 -- 0,10521 0,00397 0,98457

Tabla N 08. Parmetros Analticos de la Curva de
Calibracin
Mtodo LOD
(ppm)
LOQ
(ppm)
Sensibilidad
(ppm
-1
)
Calibracin
Sencilla
0,1191 0,3570 0,1050,004

Tabla N 09. Determinacin de Calcio en las
Tabletas de Calcibon D
Muestra Concentracin de Calcio
Solucin
Test
(ppm)
Porcentaje
Tableta de
Calcibon
D (%)
Reportado
(%)
Calcibon
D
5,844

20,72

17,97


Ilustracin 1. Efecto de la Interferencia de Fosfato
sobre la Seal de Calcio

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
0,0
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
0,6
0,7
0,8
0,9
1,0
S
e

a
l

d
e

E
m
i
s
i
o
n
Ca (ppm)
Se al de Emision
Linear Fit of Se al de Emision
% (3)
Equatio y = a
Adj. R-S 0,984
Valu Standar
Se al de
Emision
Interc
ept
0 --
Se al de
Emision
Slope 0,10
521
0,00397

Ilustracin 2. Calibracin Sencilla de Calcio por
Espectrofotometria de Emision Atomica

Anlisis y Discusin de Resultados

Se puede observar que al aumentar la
concentracin de NaH
2
PO
4
en la solucin de
calcio, existe una disminucin en la seal de
emisin de calcio, demostrado por la pendiente
negativa en la regresin lineal. Esto ocurre ya
que en la solucin se forma una especie poco
voltil entre el calcio y el ion fosfato, en la fase
acuosa, que hace decrecer la concentracin de
tomos de calcio en la fase de vapor
8
, y por lo
tanto, la seal de emisin decrece. La especie
que se forma, es el CaHPO
4
, como consecuencia
del predominio a pH 10 del HPO
4
2-
.
La interferencia no tiene una relacin
lineal con respecto a la concentracin de
NaH
2
PO
4
, de acuerdo a la ilustracin N 01 y
Tabla N 04, ya que el valor de R
2
es 0,48189,
como el valor est muy alejado de 1, no existe
una dependencia lineal entre estos parmetros.
Luego, al adicionarle EDTA la seal de
calcio se increment, demostrando el efecto
protector, ya que se forma un complejo mucho
ms estable que con el ion fosfato, impidiendo
que se forme la especie menos voltil y la
concentracin de calcio en la fase de vapor sea
mayor. Se forma el complejo CaEDTA,
favorecido por efecto quelato.
Al aumentar la concentracin de EDTA,
se observa una mayor remocin de la
interferencia, indicando una dependencia
directamente proporcional entre la
concentracin de EDTA y la seal de emisin
en presencia de fosfato.
En cambio, al adicionarle estroncio no se
vio ninguna remocin de la interferencia sobre
la seal de calcio, por el contrario la seal
decreci aun mas.
Estos dos mtodos pueden eliminar gran
parte de la interferencia de fosfato, aunque no lo
suprimen totalmente. Para eliminar totalmente
esta interferencia se puede utilizar una llama
acetileno-oxido nitroso
8
, ya que las
temperaturas alcanzadas permiten vaporizar e
separar al calcio del fostato.
8

Tambin, se debe tener en cuenta que se
utiliz en este experimento una llama acetileno-
aire, y se corresponde usar una llama oxido
nitroso-aire, lo cual, introduce un error del
mtodo, en la vaporizacin de los tomos de
calcio, la temperatura alcanzada no es tan alta, y
no puede pasar a fase de vapor a todos los
tomos de calcio presentes en la solucin.
0,0000 0,0001 0,0002 0,0003 0,0004 0,0005
0,40
0,45
0,50
0,55
0,60
0,65
0,70
0,75
0,80
0,85
0,90
0,95
S
e

a
l

d
e

E
m
i
s
i
o
n
NaH2PO4
Se al de Emision
Linear Fit of Se al de Emision
Al realizar la curva de calibracin entre
la seal de emisin y concentracin de calcio, se
encontr una dependencia lineal con pendiente
positiva, demostrado por la Ilustracin N 02 y
Tabla N 07, en los cuales, se muestra un valor
de R
2
de 0,98457, indicando que el valor es muy
cercano a 1 y la relacin lineal se cumple para la
serie de datos estudiados. Adems, la seal de
emisin se incrementa con la concentracin de
calcio, lo cual se corresponde con la pendiente
positiva encontrada en la regresin. Se encontr
una pendiente o sensibilidad de 0,1050,004 y
un corte de 00,004, lo cual dice que es un
mtodo muy sensible y exacto en la
determinacin de calcio. El lmite de deteccin
y el lmite de cuantificacin fueron 0,1191 ppm y
0,3970 ppm, respectivamente; mostrando que el
rango lineal de la curva va de 0,3570 ppm a 9,20
ppm, por consiguiente se tiene un amplio rango de
trabajo en la determinacin de muestras, comparados
con absorcin atmica de llama.
En la tableta se encontr una concentracin
de 20,72 % de calcio, al compararlo con el valor
reportado, es un resultado exacto y preciso, con una
ligera diferencia debido a algunas interferencias en
la solucin test, ya que no se utiliz lantano como
agente liberador.

Conclusiones

El ion HPO
4
es un interferente en la
solucin de calcio, formando el complejo poco
voltil CaHPO
4
; la relacin entre la seal de
emisin de calcio y la concentracin de fosfato
es inversamente proporcional. El EDTA es un
agente protector, pudo remover la interferencia
de fosfato. El estroncio no tuvo efecto alguno.
En la calibracin de calcio se encontr
una dependencia lineal, entre el rango 0,3570
ppm a 9,20 ppm, con una sensibilidad de
0,1050,004 y un corte de 00,004. El lmite de
deteccin fue 0,1191 y el lmite de
cuantificacin fue de 0,3570 ppm. La
concentracin de calcio en la pastilla de
Calcibon D fue de 20,72 %.



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