Universidad del Cauca

Facultad de ingeniera civil

Programa ingeniera ambiental
Determinacin cualitativa de carbohidratos
Pastrana L, Camilde T, Calvache F.
Resumen
En esta prctica se realizaron distintas pruebas bioqumicas para determinar carbohidratos
reductores o no reductores , como la prueba de Benedict , el reconocimiento de carbohidratos
reductores , el ensayo de Molish para el reconocimiento general de carbohidratos en el que los
polisacridos y disacridos se hidrolizan con cido sulfrico concentrado , y el ensayo con
lugol que contiene una mezcla de yodo y yoduro potsico que permite polisacridos
particularmente el almidn por la formacin de una coloracin violeta intensa. Las sustancias
utilizadas fueron: almidn, sacarosa, galactosa, lactosa, fructosa, y maltosa. A estos
compuestos tambin se le realizaron la prueba de Bial (positivo para hexosas y pentosas cada
una con una coloracin distinta; la prueba de Seliwanoff indica sacarosas y pentosas, por
ltimo la de Bradfoed reconoce monosacridos.
Introduccin
Los carbohidratos son los compuestos
orgnicos ms abundantes de la biosfera.
La mayora pueden ser representados con
la formula general (CH2O)n por lo que son
literalmente, hidratos de carbono. gran
parte de sus funciones biolgicas
dependen de esta estructura qumica tan
particular y verstil. Qumicamente se
definen como polihidroxialdehidos o
polihidroxi acetonas cclicas o sustancias
que luego de hidrolizarse dan origen a las
mismas. Un carbohidrato que no pueda ser
hidrolizado en uno ms simple es llamado
monosacrido, los monosacridos ms
conocidos son la glucosa, la fructosa, la
galactosa y la manosa. Un carbohidrato
que pueda ser hidrolizado en dos
molculas de monosacridos es llamado
disacrido. Los ms importantes son la
lactosa (presente en la leche), la sacarosa
(presente en la azcar comn) y la maltosa,
por su parte aquellos carbohidratos que
pueden ser hidrolizados en varias
molculas de monosacridos son llamados
polisacridos, los ms comunes son el
almidn y la celulosa, este ltimo es un
componente estructural de las plantas.
Objetivos
- Realizar ensayos cualitativos para el
reconocimiento de carbohidratos
especficos.
- diferencias carbohidratos reductores o no
reductores por su comportamiento frente
a cada prueba.
Datos
Tabla N 1: Resultados de cada Prueba
Carbo
hidrat
o
M
oli
sh
Seli
wan
off
B
i
a
l
Ben
edi
ct
Polisa
crid
os
Bar
foe
d
Almid
n
+ - - + -
Sacar
osa
+ + + + - -
Galac
tosa
+ - + - -
Fruct
osa
+ + + + - +
Malto
sa
+ - + + - -
lactos
a
+ - + + - +

Discusin de resultados.
Prueba de Molish
La prueba de Molish est basada en la
formacin de furfural o derivados de este a
partir de los carbohidratos, que se
condensa con el - naftol, dando un
producto violeta. Es una reaccin muy
sensible puesto que las reacciones de
glucosa al 0.001% y sacarosa al 0,0001%
dan positiva para la prueba.
Esta prueba tambin es positiva para
aldehdos y cetonas. Tambin sirve para el
reconocimiento general de carbohidratos
donde polisacridos y disacridos se
hidrolizan formando monosacridos,
formando un color purpura violeta.
En la reaccin de los carbohidratos con el
reactivo de Molish el cido sulfrico
cataliza la hidrolisis de los enlaces
glucosidicos de la muestra y la
deshidratacin a furfural (en las pentosas)
o hidroximetil furfural (en las hexosas) .
estos furfurales se condensan con el -
naftol del reactivo de Molish , dando un
producto coloreado. Por lo tanto para
todos los casos dio positivo.
Prueba de Seliwanoff.
La prueba de Seliwanoff es una reaccin
para diferenciar cetosas de aldosas ;
aunque ambas dan la reaccin , las cetosas
la dan rpidamente y las aldosas
lentamente. Est basada en la formacin
de durfural o en un derivado de ste y su
posterior condensacin con el resorcinol
dando un color fuego para cetosas y rosas
para aldosas.
Las cetosas en el carbono 2 tienen una
funcin cetona , que en presencia de un
cido fuerte , producen rpidamente
derivados furfuricos que reaccionan con un
dufenol llamado resorcina que esta
contenido en el reactivo de Seliwanoff. La
sacarosa da positiva la reaccin, ya que el
HCl del reactivo provoca en caliente la
hidrolisis del compuesto liberando fructosa
(responsable de la reaccin positiva).
Al reaccionar la fructosa, con cido
clorhdrico , el carbohidrato pierde
molculas de agua , dando como resultado
el 5- hidroximetilfurfural . Esta molcula
reacciona con el resorcinol , dando un
complejo rojo intenso , que ser signo de
presencia de la cetohexosa-
Reaccin de Bial.
Identifica carbohidratos aldopentosas . al
reaccionar una aldopentosa con cido
clorhdrico , pierde molculas de agua , y
produce la sustancia conocida con el
nombre de furfural . El furfural puede
reaccionar en medio acido con el orcinol .
Si en estas condiciones se agrega una
pequea cantidad de cloruro frrico , se
formara un complejo verde .
Las cetopentosas , en estas condiciones
dan un complejo de color rojo. Las
cetohexosas y las metilpentosas dan un
complejo color naranja , que al reposar
producen un precipitado de color verde
oscuro.
De acuerdo a los resultados obtenidos en la
practica los resultados fueron satisfactorios
debido a que todos los carbhidratos
clasificados como hexosas ( fructosa,
galactosa, maltosa , lactosa) dieron
positivo y otro negativo , pero de acuerdo a
la teora se toma el dato positivo porque la
galactosa es una hexosa.
Reaccin de Benedict.
Es una reaccin anloga a la reaccin de
Fehling, el ion Cu 2+ est estabilizado en
medio alcalino por formar un quelato con
citrato de sodio. El reactivo de Benedict
contiene una disolucin de CuSO4, agua ,
citrato de sodio y Na2CO3 anhdrido.
Muchos monosacridos, como la glucosa y
la fructosa, y algunos disacridos , se
conocen como disacridos , se conocen
como azucares reductores porque poseen
un aldehdo libre (no enlazado a los otros
grupos de la molcula). La prueba de
Benedict se usa para detectar la presencia
de azucares reductores porque el reactivo
de Benedict contiene Cu este se reduce en
presencia de azucares reductores, durante
esta reaccin el azcar se oxida , la
reaccin antes mencionada se conoce
como una reaccin redox porque la
oxidacin del azcar sucede
simultneamente con la reaccin de
reduccin del cobre.
Cuando se aade el reactivo de Benedict al
azcar reductor , y se aplica calor , el color
de la mezcla cambia a naranja o ladrillo
intenso , mientras mayor sea la abundancia
de azucares reductoras , como es el caso
de la glucosa, las azucares que no reducen
como la sacarosa no producen cambios en
color y la solucin se mantiene azul , esto
debido a que la sacarosa es un disacrido
formado por glucosa y fructosa los cuales
se encuentran unidos a travs de un enlace
o- glucosidico , para que un azcar sea
reductor (que se oxide) debe poseer un
carbono anomerico libre en un extremo ,
en el caso de la sacarosa esto no sucede
porque ambos carbonos se encuentran
formando el enlace. Esta reaccin se basa
en la capacidad del carbohidrato de reducir
el Cu 2+ en un medio alcalino al Cu 1+ , se
oxida y precipita en forma de Cu2O , lo que
proporcionara la coloracin positiva de la
reaccin. La coloracin depender de la
concentracin de xido de cobre , va desde
verde , amarillo, anaranjado o rojizo.
Prueba de Yodo.
Los polisacridos son polmeros de
carbohidratos sencillos unidos entre si por
uniones glucosidicas normalmente
contienen un gran nmero de monmeros
que pueden ser de un tipo o de dos o ms
tipos distintos unidos siempre en forma
alternada, la molecula tiene un solo
termino reductor y muchos trminos no
reductores , por lo que en si la molcula no
muestra las caractersticas reductoras. las
uniones glucosidicas pueden hidrolizarse
sea con cido mineral o con enzimas.
Entre los homopolisacaridos importantes
existen dos , que pertenecen a los
vegetales , la celulosa y el almidn y uno
que es caracterstico de los animales , el
glucgeno.
La obtencin de una sustancia colorida al
reaccionar el yodo con el almidn se cree
que se debe a la formacin de un complejo
de coordinacin entre las micelas del
almidn y el yodo. Estas micelas estn
formadas por cadenas polisacridos
enrrolladas en hlice , el yodo se puede
colocar centralmente en estas hlices , el
color depende del largo de la seccin lineal
de la molcula del almidn, por eso la
amilosa pura que es el polisacrido
exclusivamente lineal dar con el yodo el
color ms intenso de un azul ms
profundo. La amilopepsina dar un color
azul violeta.
La coloracin azul violeta producida por el
lugar se debe a que el yodo se introduce
entre las espiras de las molculas de
almidn, esta no es una reaccin qumica
de verdad, si no que forma un compuesto
de inclusin que modifica las propiedades
fsicas de la molcula apareciendo la
coloracin caracterstica azul violeta, en
esta caso la prueba solo dio positiva para el
almidn ya que es una prueba especfica
para l, comprobando que es un
polisacrido.
Prueba de Barfoed.
Los monosacridos se diferencian de los
disacridos por medio de la reaccin de
Barfoed , ya que solo los monosacridos
dan un resultado positivo , esta prueba
sirve para distinguir monosacridos
reductores , basndose en la velocidad de
reaccin ; en los monosacridos la
formacin del xido cuproso es ms rpido
que el los disacridos , la reaccin consiste
en utilizar acetato cprico y cido actico
con el que solo los monosacridos son
capaces de reducir al cobre, en tanto que
los disacridos que tienen menor poder
reductor al tener comprometido uno de
sus carbonos anomericos en el
establecimiento del enlace glucosidico , no
reaccina y por lo tanto dan un resultado
negativo, por supuesto que al tener la
solucin un pH acido resulta necesario
controlar rigurosamente el tiempo de
reaccin, pues si este se prolonga se
producira la hidrolisis acida del enlace
glucosidico con la consiguiente liberacin
del carbono anomerico y la aparicin de
nuevos grupos reductores que falsearan el
resultado.
Hubo errores en la prueba para la
galactosa y la maltosa debido a que dieron
negativos para la prueba ya que
tericamente al ser monosacridos
reductores, debieron ser positivas , esto se
debe a que la reaccin no se lleva a cabo
por completo quedando en la etapa de
formacin de un complejo arrojando una
coloracin azul.
Conclusiones.
- Con la realizacin de las diferentes
pruebas se logr determinar la ausencia o
presencia de carbohidratos en las muestras
analizadas, para luego identificar y
clasificar cuales fueron los carbohidratos
encontrados en base a la reactividad
propia de cada clase frente a sustancias
qumicas particulares.
- Con esta prctica se logr identificar las
caractersticas generales de diferentes
carbohidratos empleando mtodos tiles
en la identificacin de cada uno de acuerdo
al subgrupo al que pertenece.
- algunas reacciones pueden dar un
resultado falsamente positivo , como el
caso de las que se someten a
calentamiento como la de Barfoed , ya que
un tiempo de calentamiento inadecuado
altera el proceso.
Preguntas preliminares.
- Que indica el termino azcar reductor?
R// Son azucares que poseen su grupo
carbonilo intacto para oxidar y reducir
otras sustancias.
- Que pruebas se esperan, sean positivas
para este tipo de carbohidratos?
R// Molish : Monosacrido
oligosacridos polisacridos.
Seliwanoff : - Pentosas aldohexosas-
sacarosa.
Bial: - hexosas Pentosas.
Yodo: Polisacaridos (almidon)
Barfoed: Monosacaridos reductores.
Preguntas complementarias.
- Por que se dice que la lactosa y la maltosa
tiene un grupo aldehdo potencial?.
R// Como los dos son disacridos , se
encuentran unidos por un enlace
glucosidico , y la forma en la que se
encuentran unidos es porque el carbono
anmerico de un monosacrido reacciona
con un OH alcohlico del otro, de esta
manera el segundo azcar presenta ibre
su carbono anomerico (grupo aldehdo) por
tanto tienen gran poder reductor.
- Explique por qu en la prueba de Barfoed,
los disacridos reaccionan mas lentamente
que los monosacridos?
R// Como es una prueba que se basa en la
velocidad de reaccin, en los
monosacridos la formacin de oxido
cuproso es mas rpido que en los
disacridos . los monoacaridos reducen el
cobre de manera mas rpida , ya que
tienen su carbono anomerico libre y los
disacridos son mas demorados ya que
tienen que esperan la liberacin del
carbono anomerico.
- Que se deduce de la solubilidad del acido
glucosacarido?.
R// Es un acido derivado de la glucosa y es
soluble en agua.
Bibliografia.
-Bioquimica, Armstrong Frank, editorial
revert , 1982.
-Bioquimica, Donald Voety Yudith G , 3
edicin Buenos Aires, editorial media
panamericano, 2006.
- Manual de experimentos de laboratorio
para bioqumica, Quesada M, Silvia,
editorial Universidad Estatal a distancia San
Jose Costa Rica, Zoot.